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CD19基因过表达K562细胞株及NOD-SCID小鼠皮下移植瘤模型的建立
目的 建立人CD19基因过表达的K562细胞株(CD19-K562)NOD-SCID小鼠皮下移植瘤模型.方法 克隆人CD19基因构建MigR1-CD19反转录病毒载体,转入Plat-A包装细胞,病毒上清转染K562细胞,反转录聚合酶链反应(PCR)及流式细胞术检测转染细胞CD19基因和蛋白表达,体外反复传代获得CD19-K562稳定转染细胞株,锥虫蓝染色,细胞计数检测细胞增殖,Annexin V/碘化丙啶(PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡.CD19-K562细胞株皮下接种NOD-SCID小鼠并经体内外传代后建立移植瘤亚系CD19-K562-a,建立NOD-SCID小鼠皮下移植瘤模型.应用反转录PCR、瑞特染色、免疫组织化学等方法验证CD19-K562-a细胞性质.结果 成功建立了人CD19-K562细胞稳定株,CD19阳性率(99.80±0.17)％.CD19-K562细胞增殖、凋亡未受转染及传代影响.CD19-K562细胞稳定株皮下接种NOD-SCID小鼠后经体外结合体内传代建立移植瘤亚系CD19-K562-a,其CD19阳性率为(99.78±0.04)％,CD19-K562-a和CD19-K562细胞均呈未分化形态.CD19-K562-a皮下接种NOD-SCID小鼠成功建立移植瘤模型,CD19-K562-a瘤体CD19基因表达强阳性.结论 通过构建MigR1-CD19重组载体获得CD19基因过表达的K562稳定转染细胞株(CD19-K562),同时采用体外结合体内传代建立稳定成瘤的NOD-SCID小鼠移植瘤亚系CD 19-K562-a并成功建立NOD-SCID小鼠皮下移植瘤模型.
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泛素异肽酶抑制剂Ⅰ抑制人类白血病K562细胞增殖和诱导凋亡的研究
目的 探讨泛素异肽酶抑制剂Ⅰ对人类白血病K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 K562细胞经不同浓度的泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其对K562细胞增殖的抑制作用,AnnexinV FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录-定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax和凋亡特异性酶Caspase-3表达水平.结果 泛素异肽酶抑制剂Ⅰ能抑制K562细胞的增殖,随作用时间的延长和浓度的增加抑制作用增强.经100 nmol/L泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理72 h,K562细胞早期凋亡率为(15.4±1.3)％,与对照组的(4.1±0.9)％相比明显上升(P＜0.01).用100 nmol/L的泛素异肽酶抑制剂Ⅰ处理K562细胞72 h后,Caspase-3和bax mRNA表达增高,bcl-2表达降低,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 泛素异肽酶抑制剂Ⅰ对K562细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,提示其可能用于治疗白血病.
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FHL2基因表达改变对急性红白血病细胞生物学功能的影响
目的 探讨FHL2基因对人类急性红白血病细胞生物学功能的影响.方法 应用Western blot检测常见白血病细胞系(K562、HEK293T、U937、HL-60、Kasumi-1、SKNO-1、NB-4及Nalm-6)FHL2蛋白表达情况.采用RNA干扰技术设计并合成FHL2 mRNA特异性shRNA,构建pLKO.1-puro干扰载体,制备慢病毒并感染人类急性红白血病K562细胞;应用实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测干扰效率;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测干扰FHL2对细胞增殖能力的影响;用流式细胞术分析细胞凋亡的变化.结果 FHL2在K562、Kasumi-1和Nalm-6等白血病细胞系中表达,尤其在K562细胞中高表达.Western blot检测显示干扰FHL2的K562细胞FHL2蛋白相对表达水平较转染阴性对照序列的K562细胞明显下降(相对表达水平分别为1、0.284,t=8.872,P=0.0004),干扰K562细胞中FHL2基因表达能够抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡.结论 FHL2基因在多种白血病细胞系中表达升高.shRNA靶向干扰FHL2基因的表达可有效抑制K562细胞的增殖,促进其凋亡.
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增加细胞内三氧化二砷浓度恢复耐三氧化二砷的K562细胞对其敏感性的研究
目的 探讨耐受三氧化二砷(ATO)的白血病ATO耐药K562细胞(K562/AS2细胞)内砷浓度与耐药性的关系.方法 亲代敏感K562细胞(K562/S细胞)按照逐步增加ATO浓度诱导,建立K562/AS2细胞.采用原子荧光光谱法检测细胞内砷浓度.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度ATO对细胞的毒性作用.结果 1μg/ml ATO培养24、48、72h后,K562/S细胞内的砷浓度比K562/AS2细胞增高[(15.63±0.42) μg/L比0μg/L、(22.27±0.15) μg/L比(3.51±0.12) μg/L、(24.31±0.21) μg/L比(3.61±0.11) μg/L;均P＜0.05].随着ATO浓度的增加及培养时间的延长,K562/AS2细胞内砷浓度逐渐增加(P＜0.05),在1μg/ml和2μg/ml间砷浓度增加较快.K562/AS2细胞生长抑制率也逐渐增加(P＜0.05),在1μg/ml和2μg/ml间增加较快.直线相关分析显示,当K562/AS2细胞与ATO接触分别为24、48和72 h时,其细胞生长抑制率均与细胞内ATO浓度呈正相关.结论 增加ATO浓度或延长ATO作用时间均可增加耐药细胞内ATO浓度,细胞内ATO浓度与ATO对细胞的毒性呈正相关,增加细胞内ATO浓度能够增强耐ATO K562细胞对ATO的敏感性.
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以microRNA-17为靶点的反义核酸对白血病细胞K562的作用
目的 研究以microRNA-17(miR-17)为靶点的反义核酸对人类白血病K562细胞的生长抑制作用.方法 人工合成miR-17的反义核酸,硫代修饰,用Lipofectamine 2000转入K562细胞.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染反义核酸后K562细胞的增殖活性,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测反义核酸作用后K562细胞内miR-17的相对表达水平.结果 MTT结果显示,转染反义核酸后的24、48、72 h,K562细胞的增殖活性分别为0.872±0.001、0.710±0.002、0.551±0.001,与随机核酸序列组(随机对照组)(增殖活性分别为1.001±0.002、1.009±0.003、1.211±0.003；t值分别为182.58、269.77、660.40)、空白对照组(增殖活性分别为1.113±0.001、1.114±0.001、1.101±0.001；t值分别为537.98、571.20、1230.51)相比较差异有统计学意义(均P＜0.05)；FCM检测结果表明,在转染反义核酸48 h后细胞的凋亡率为(20.14±0.01)％,与随机对照组的(3.54±0.02)％及空白对照组的(1.98±0.01)％比较差异有统计学意义(t分别为2347.6、2568.2,均P＜ 0.01)；实时荧光定量PCR结果证实,在反义核酸作用后,K562细胞内miR-17的相对表达水平(0.07)明显下降,与随机组(1.00)、空白组(1.01)相比较差异有统计学意义(t值分别为148.63、147.04,均P＜0.05).结论 以miR-17为靶点的反义核酸可抑制K562细胞的增殖活性,并显著促进细胞的凋亡.
关键词： microRNA-17 反义核酸 K562细胞 凋亡 -
过表达热休克蛋白22抑制造血系统恶性肿瘤细胞生长的研究
目的 探讨过表达热休克蛋白22(HSP22)对造血系统恶性肿瘤细胞生长和凋亡的影响.方法 构建含HSP22或空载体的慢病毒表达载体,感染K562和Namalwa细胞;荧光显微镜及流式细胞术观察感染效率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot鉴定HSP22表达.采用细胞计数法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,甲基纤维素半固体集落形成实验测定集落数,Annexin VPE／7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡.在裸鼠皮下注射K562和Namalwa细胞进行成瘤实验以观察成瘤体积.结果 与转导空载体的对照细胞相比,HSP22过表达能抑制Namalwa和K562细胞集落形成,每孔平均集落数转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的K562细胞为108,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFPHSP22的K562细胞为72,两者差异有统计学意义(P=0.000 16);转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP空载体的Namalwa细胞为125,转导pCDH1-MCS1-EF1-copGFP-HSP22的Namalwa细胞为80,两者差异有统计学意义(P=0.000 37).HSP22还能抑制Namalwa细胞体外增殖(第5天,P=0.015;第6天,P=0.042;第7天,P=0.048),抑制K562细胞体内增殖(第21天,P=0.022).K562、Namalwa细胞HSP22转导组与对照组间G0～G1期、G2～M期及S期细胞所占百分比差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).结论 过表达HSP22能够抑制造血系统恶性肿瘤K562和Namalwa细胞的生长.
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重组人类核心蛋白聚糖对白血病K562细胞增殖的影响
目的 观察重组人类核心蛋白聚糖(rhDCN)对白血病K562细胞生长抑制、凋亡的影响,并探讨可能的作用机制.方法 通过Lipofectamine 2000脂质体介导转染对数生长期的白血病K562细胞,实验分组为0.9％NaCl溶液组、pcDNA3.1(+)/K562组、pcDNA3.1(+)-DCN/K562组和脂质体组.经瑞特染色观察转染后细胞形态的改变,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白bcl-xl、Mcl-1及Bax的表达.结果 pcDNA3.1(+)-DCN/K562组瑞特染色呈现典型的凋亡形态学改变.MTT结果显示,pcDNA3.1(+)-DCN/K562组转染24h细胞增殖抑制率为(16.14±1.08)％,转染48h为(14.07±1.01)％,转染72h为(20.29±1.19)％,明显高于对应时间点其他组增殖抑制率,差异均有统计学意义(均P＜0.05).FCM检测结果显示,pcDNA3.1(+)-DCN/K562组凋亡率为(20.15±1.31)％、细胞的G0/G1期细胞百分率为(51.15±0.57)％,与其他各组比较增加明显,差异有统计学意义(均P＜0.05).Western blot结果显示,pcDNA3.1(+)-DCN/K562组与其他各组比较bcl-xl、Mcl-1蛋白表达减低,Bax蛋白表达升高.结论 rhDCN重组质粒可有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,rhDCN对细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-xl、Mcl-1、Bax的影响可能是其发挥作用的机制.
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BH3模拟物S1诱导人类白血病细胞株K562凋亡的作用机制
目的 以人类白血病细胞株K562为研究对象,探讨BH3模拟物S1诱导人类白血病细胞凋亡的机制.方法 通过XTT法检测S1作用下K562细胞的生存率；S1作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率；分光光度法检测Caspase-3、-8、-9激活；免疫共沉淀检测S1作用后bax、bak释放情况.结果 与对照组相比S1能够以时间和浓度依赖的方式诱导K562细胞凋亡,24h的IC50值为13.5μmol/L；流式细胞术结果显示,S1处理12h后K562细胞出现大量早期凋亡,时间延长至24 h后,晚期凋亡比例显著增加；S1通过激活Caspase-3、-9而不是Caspase-8诱导K562细胞通过内源凋亡通路进行凋亡；免疫共沉淀实验检测5 μmol/L的S1处理8h后K562细胞中的抗凋亡蛋白bcl-2和mcl-1受到S1的拮抗,促凋亡蛋白bax和bak分别从抗凋亡蛋白bcl-2和mcl-1上得到释放.结论 S1可能通过拮抗bcl-2、mcl-1蛋白释放bax、bak诱导人类白血病细胞凋亡.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对白血病NB4和K562细胞的作用及与其受体表达的关系
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)对白血病NB4和K562细胞的作用及与其受体表达的关系.方法 以Jurkat细胞株为阳性对照,采用不同浓度的TRAIL分别作用于NB4和K562细胞,观察细胞形态；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况；用流式细胞术检测细胞表面TRAIL受体的表达情况.结果 TRAIL作用导致NB4细胞株生存率显著下降,但弱于Jurkat细胞株,其变化具有TRAIL作用时间和浓度依赖性；对K562细胞株生存率的影响不明显.NB4细胞表面死亡受体4( DR4)和DR5表达水平较高,同时诱骗受体1(DcR1)表达较高；K562细胞DR5表达水平较高,而DR4及DcR1微量表达；Jurkat细胞表面仅DR5低水平表达；DcR2在三株细胞表面均无表达.结论 NB4细胞对TRAIL中度敏感,K562细胞对TRAIL耐受；NB4细胞敏感性较低可能与DcR1表达有关,K562细胞耐受性与其表面TRAIL受体表达无关.
关键词： NB4细胞 K562细胞 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 欺骗受体 -
增强子结合蛋白C/EBPα对白血病BALB/c裸鼠的肿瘤抑制作用
目的 探讨增强子结合蛋白C/EBPα在白血病裸鼠体内的肿瘤抑制作用.方法 将30只BALB/c裸鼠随机分转染组(10只)、空载组(10只)、对照组(10只),建立皮下瘤模型,并将30只BALB/c裸鼠如上分组建立白血病模型,将C/EBPα稳定表达细胞株pEGFP-C/EBPα-K562、空载细胞株pEGFP-K562及白血病细胞株K562分别经皮下和尾静脉注射到相应组裸鼠体内,形成皮下瘤和血液病模型.观测皮下肿瘤的变化,应用TUNEL检测细胞的凋亡,瑞特-吉姆萨染色观察血液病模型裸鼠外周血和骨髓中白血病细胞增殖能力,RT-PCR检测增殖相关基因的表达.结果 皮下瘤模型中pEGFP-C/EBPα-K562组肿瘤质量及大直径为(24±0.1)g和(11±2)mm,空载组和对照组分别为(5.1±0.3)g、(19±3)mm和(5.7±0.4)g、(23±3)mm(均P＜0.05),TUNEL检测发现pEGFP-C/EBPα-K562组肿瘤细胞凋亡明显增加(P＜0.05);血液病模型鼠外周血可见白血病细胞,pEGFP-C/EBPα-K562组白血病细胞增殖能力明显低于空载组和对照组,可见明显细胞分化现象,RT-PCR检测发现p53基因上调和c-myc基因下调.结论 增强子结合蛋白C/EBPα在白血病小鼠体内具有促进肿瘤细胞凋亡和抑制白血病细胞增殖的能力,并能促进白血病细胞分化.C/EBPα的白血病抑制作用可能是通过对相应基因的调控来实现.
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低剂量地西他滨联合伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用
目的 研究低剂量地西他滨(DAC)联合伊马替尼(IM)对K562细胞株的增殖抑制作用及对bcr-abl表达的影响.方法 单药及两药联合后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对K562细胞株的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物对K562细胞株早期凋亡率及细胞周期,巢式反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测药物对K562细胞株bcr-abl mRNA表达.结果 DAC与IM单药对K562细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性.两药联合用药抑制作用较单药组明显(F=43.947、165.580、321.193、296.101,均P<0.05),24、48、72 h各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(F=202.759、168.457、417.538,均P<0.05).DAC及IM单药作用药物对K562细胞株均使G,期细胞明显增多,IM0.2μmol/L作用于K562细胞株48 h可见6.7%早期凋亡细胞,IM 0.2 μmol/L联合DAC 4μmol/L早期凋亡细胞增加至8.4%.bcr-abl mRNA表达水平降低,DAC 4 μmol/L作用48 h后可降低K562细胞中bcr-abl mRNA表达(约14%),IM 0.2 μmol/L降低约40%,联合用药表达量明显降低(约60%).联合用药组与单药组比较差异有统计学意义(F=71.981,P<0.05).结论 DAC对K562细胞的增殖抑制作用与细胞周期阻滞、诱导凋亡及降低bcr-abl mRNA表达有关,两药联合可显著抑制K562细胞增殖.
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K562细胞硫氧还蛋白还原酶活力测定及其抑制剂体外抗白血病的初步研究
目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562中硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的活力及其新型抑制剂乙烷硒啉(BBSKE)体外抗白血病作用.方法 应用胰岛素还原法检测K562细胞株及健康人骨髓单个核细胞中TrxR的活力.运用CCK-8法测定BBSKE对K562细胞的增殖抑制率.应用激光共聚焦显微镜、琼脂糖凝胶电泳以及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术观察BBSKE的抗白血病作用.结果 K562细胞中TrxR的活性明显高于健康人骨髓单个核细胞,10 μmol/L BBSKE与K562细胞作用24 h,激光共聚焦显微镜可见典型的细胞凋亡表现,琼脂糖凝胶电泳后可见典型的DNA"梯"条带出现,流式细胞术检测凋亡率为(10.28±2.74)%;10 μmol/LBBSKE对CML患者原代细胞有诱导凋亡的作用,凋亡率为(5.70±0.48)%.结论 慢性粒细胞白血病细胞株K562中TrxR活力高于健康人骨髓单个核细胞,BBSKE有抑制TrxR活力、抑制K562细胞增殖和诱导凋亡的作用,是治疗CML潜在的有效药物.
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葛根总黄酮诱导白血病细胞株凋亡及其分子机制的研究
目的 探讨葛根总黄酮(PR)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测PR对K562细胞、NB4细胞的增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;Hoechest33258荧光染色AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率;DNA PI染色法分析细胞周期及亚二倍体峰.Western blot分别检测NB4细胞JNK、PARP、bcl-2、Caspase3,K562细胞bcr-abl、p53、bcl-2、Fas/FasL蛋白表达的变化.结果 12.5～200 μg/ml PR均能抑制K562、NB4细胞增殖.光学显微镜及荧光显微镜下观察到核固缩、凋亡小体等典型的细胞凋亡改变;Annexin V+/PI-细胞呈时间-剂量依赖性增加;DNA PI染色法发现细胞亚二倍体比例增加,G1期比例下降、S期比例增加.PR呈时间-剂量依赖性抑制K562细胞、NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡.不同浓度PR干预后K562细胞bcr-abl蛋白水平呈浓度依赖性下调(F=18.74,P<0.05),而bcl-2则无明显变化;p53表达呈浓度依赖性上调;Fas/FasL表达无明显变化.NB4细胞JNK、PARP及Caspase 3蛋白表达与PR浓度呈正相关,与凋亡抑制蛋白bcl-2则呈负相关(F=42.32,P<0.05).结论 PR能有效抑制K562、NB4细胞增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,但分子机制不同.提示一定浓度PR具有较广谱的抗白血病效应.
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甲基化寡核苷酸灭活死亡相关蛋白激酶1基因对白血病K562细胞增殖的影响
目的 探讨互补甲基化寡核苷酸诱导灭活K562白血病细胞死亡相关蛋白激酶1基因(DAPK1)及对其增殖的影响.方法 应用Lipo2000将与DAPK1基因启动子序列互补的甲基化寡核苷酸转染进K562白血病细胞,分别应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和反转录PCR(RT-PCR)检测转染前后DAPK1基因启动子甲基化状态和mRNA表达改变.应用噻唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖变化.结果 正常组K562细胞的DAPK1基因启动子表现为未甲基化状态,可检测到相应mRNA表达;对照组寡核苷酸转染后,DAPK1基因启动子表现为未甲基化状态,mRNA表达和细胞增殖速度与正常组无明显差异;互补甲基化寡核苷酸转染后,DAPK1基因启动子呈甲基化状态,mRNA呈低表达状态,细胞增殖速度较正常组、甲基化对照寡核苷酸转染组显著增加.结论 互补甲基化寡核苷酸可诱导灭活K562白血病细胞DAPK1基因并抑制其mRNA表达,促进细胞增殖.
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腺病毒载体介导的发夹状RNA抑制三氧化二砷耐药的K562/AS2细胞MRP1基因表达的实验研究
目的 构建MRP1特异性发夹状RNA(shRNA)重组腺病毒载体,并研究其对耐三氧化二砷(ATO)的白血病K562/AS2细胞MRP1基因表达的抑制作用.方法 构建MRP1特异性shRNA重组腺病毒,并感染K562/AS2细胞;用荧光实时定量PCR法分析MRP1 mRNA的表达水平;流式细胞术检测MRP1蛋白表达;MTT法检测该细胞对ATO及依托泊苷(VP_(16))的细胞毒作用.结果 pAd-EGFP-U6.MRP1.shRNA重组腺病毒感染前后,K562/AS2细胞中MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别为(34.70±0.28)、(4.19±0.03)(P<0.05)和(26.40±0.16)、(10.85±0.37)(P<0.05);感染前后K562/AS2细胞对ATO及VP16耐药倍数分别为(11.4078±0.3183)、(1.6126±0.3015)和(5.9141±0.0149)、(1.7664±0.1038),逆转倍数分别为(7.2409±1.3668)和(3.3555±0.1886)(P<0.05).结论 成功构建了pAd-EGFP-U6-MRP1.shRNA重组腺病毒载体,该载体感染K562/AS2细胞后可抑制细胞MRP1基因表达以及逆转该细胞对ATO和VP16的耐药.
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白细胞介素-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用
目的 探索白细胞介素(IL)-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用.方法 用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7/IL-24及其选择性剪接体IL-24delE5的表达.构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细胞.通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-V/PI检测及动物实验,观察IL-24 delE5对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期、凋亡及体内致瘤性的影响;同时与mda-7/IL-24进行比较.结果 在TPA诱导分化的U937和HL-60细胞中发现IL-24 delE5的表达.稳定转染IL-24 delE5的K562增殖及集落形成明显下降,与空载体相比,G_0/G_1期细胞比例由(24.46±3.99)%增至(42.69±3.04)%,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,体内实验证实K562细胞移植瘤生长明显被抑制.与mda-7/IL-24相比,上述各实验结果差异均无统计学意义.结论 IL-24 delE5与mda-7/IL-24一样对人类白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用可能与IL-24 delE5所引起细胞周期G_0/G_1期阻滞有关.
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重组人核心蛋白聚糖基因增强多柔比星对白血病K562细胞抑制作用的实验研究
目的 探讨重组人核心蛋白聚糖(rhDCN)基因增强多柔比星(ADM)对人类白血病K562细胞的作用.方法 取对数生长期的K562细胞分为0.9%NaCl溶液组、pcDNA3.1(+)-DCN/K562组、ADM/K562组、pcDNA3.1(+)-DCN加ADM/K562组.瑞特染色观察细胞形态改变,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡,RT-PCR分析各组TGF-β_1mRNA含量.结果 pcDNA3.1(+)-DCN加ADM/K562组细胞比单独DCN和ADM组细胞,染色呈现更显著的凋亡形态学改变;MTT法结果显示联合组细胞增殖抑制率为(61±1.32)%,明显高于单独干预组[DCN组(20±1.90)%;ADM组(47±1.04)%](P<0.05);FCM检测结果显示联合组细胞凋亡指数为(61.30±0.9)%,较单独干预组[DCN组(28.25±1.3)%及ADM组(31.85±1.5)%]明显增加(P<0.05);RT-PCR结果显示,联合组细胞TGF-β_1mRNA的转录减少.结论 rhDCN可以明显增强ADM对K562细胞的杀伤作用,提高肿瘤细胞的凋亡率.rhDCN可能通过下调TGF-β_1mRNA的转录发挥其作用,其具体机制有待进一步研究.
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STI571诱导K562细胞红系分化及其机制的初步研究
目的:探讨STI571诱导K562细胞向红系分化的可能机制.方法:单用STI571及联用信号传导阻滞剂处理K562细胞,采用联苯胺染色法检测K562细胞向红系分化比例变化,流式细胞术检测细胞周期改变,Western blot检测Rb、p-Rb、Erk、p-Erk、p27蛋白改变,RT-PCR检测GATA1、GATA2、p27mRNA水平变化.结果:STI571诱导K562细胞向红系分化,呈时间剂量依赖性改变.K562细胞经STI571处理后12 h即可发生G1期阻滞,随时间延长趋于明显,伴随p27,p-Rb水平下降.p-Erk水平升高.STI571与信号传导阻滞剂U0126联合应用后,K562细胞联苯胺阳性率明显下降(P＜0.05).STI571作用后,GATA1、GATA2、mRNA水平未见明显变化.结论:STI571通过上调p27,降低p-Rb水平,诱导K562细胞发生G1期阻滞,活化Erk促使K562细胞向红系分化.
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反义hTERT对K562细胞端粒酶活性及细胞增生的影响
目的:观察反义hTERT表达质粒转染K562细胞后是否能够抑制端粒酶活性及K562细胞的增生.方法:质粒的构建与转染:将290 bp hTERT cDNA片段,反向连接于pLNCX-neo质粒上得到反义hTERT基因表达质粒.在体外转染中通过脂质体法将质粒导入K562细胞中,以G418进行筛选得到阳性克隆;以MTT法和形态学法检测反义hTERT表达质粒对K562细胞增生的抑制作用;以TRAP-PCR ELISA法来研究反义hTERT基因对K562细胞的端粒酶活性的抑制作用.结果:转染反义hTERT表达质粒组与对照组(空白对照及空质粒组)相比较,生长速率明显变慢,部分细胞出现凋亡等形态学改变.反义hTERT对K562细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用.结论:研究构建的端粒酶反义hTERT基因表达质粒转染到K562细胞中后,能够封闭K562细胞hTERT-mRNA的表达,在抑制端粒酶活性的同时,减慢了K562细胞的生长速度.
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p38丝裂原活化蛋白激酶阻滞剂SB203580对白血病K562细胞周期的作用及机制
目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)阻滞剂SB203580对K562细胞周期的作用及机制.方法 以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting方法检测SB203580处理K562细胞后p38、Cyclin D2、Cyclin E、p27 mRNA和蛋白的表达并以流式细胞术(FCM)检测其细胞周期的变化.结果 SB203580处理后K562细胞p38、Cyelin D2、Cyclin E mRNA和蛋白表达降低;p27 mRNA和蛋白表达增高.G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与用药前相比差异均有统计学意义.结论 SB203580可能通过p38途径,影响细胞周期调控蛋白,终抑制K562细胞的增生.
关键词： 白血病 细胞周期 p38丝裂原活化蛋白激酶类 K562细胞 SB203580
