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硒化壳聚糖对K562细胞的作用及其与NF-КB信号分子的关系
目的: 研究硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的影响,并且探讨这种影响与NF-КB信号分子的关系.方法: MTT法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,AO/EB荧光染色用来观察药物对细胞的凋亡作用.Western blot的方法检测蛋白含量的变化.结果: 硒化壳聚糖对K562细胞抑制作用呈量效、时效关系, 硒化壳聚糖200mg/L作用48h对K562细胞的抑制率高达90.7±10%; 并使细胞出现明显的凋亡现象.Western blot的实验结果表明硒化壳聚糖使K562细胞NF-КB蛋白含量明显减少,且呈量效关系.结论: 硒化壳聚糖可减少进入细胞核内NF-КB的蛋白含量从而下调其下游基因表达,终抑制K562细胞增殖,诱导细胞发生凋亡.
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蟾蜍灵联合伊马替尼对K 562细胞的凋亡诱导作用
目的：探讨蟾蜍灵对K562细胞凋亡诱导作用及对伊马替尼的增敏作用。方法：用MTT法研究蟾蜍灵及蟾蜍灵＋伊马替尼不同浓度组对K562细胞凋亡诱导作用。结果：①蟾蜍灵对K562细胞有凋亡诱导作用，且为剂量依赖性；②蟾蜍灵和伊马替尼在低浓度具有协同作用，随着伊马替尼浓度增加，这种作用并不增加。结论：蟾蜍灵对K562细胞具有凋亡诱导作用，为剂量依赖性，低浓度时与伊马替尼具有协同作用。
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高三尖杉酯碱对K562细胞的影响
目的：探讨不同浓度及时间作用下高三尖杉酯碱对K562细胞的增殖和凋亡的影响。方法使用MTT法在不同时间点检测不同浓度的高三尖杉酯碱对K562细胞增殖的影响。使用流式细胞术在不同时间点检测不同浓度的高三尖杉酯碱对K562细胞凋亡的影响。结果各组浓度的高三尖杉酯碱对K562细胞增殖均有抑制作用,其差异与对照组相比具有统计学意义(<0.05),HHT 24 h的IC50浓度为0.48 ug/mL,48 h的IC50浓度为0.07 ug/mL,两组作用时间的IC50浓度有统计学差异(<0.05)。各组浓度的高三尖杉酯碱均可诱导K562细胞凋亡,其差异与对应的对照组比较具有统计学意义(<0.05)。结论①高三尖杉酯碱对K562细胞的增殖有抑制作用,呈时间及浓度依赖性；②高三尖杉酯碱亦可诱导K562细胞凋亡,但与浓度和作用时间不呈正相关性。
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臭灵丹抗K562和NB4细胞作用及黄酮成分研究
目的:研究臭灵丹对人白血病K562和NB4细胞的抑制作用及其黄酮类成分.方法:应用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT法)测臭灵丹对K562和NB4细胞生长的抑制率,采用PI/Annexin-V双染色方法考察臭灵丹对K562和NB4的凋亡作用;运用大孔树脂、Sephadex LH-20柱色谱进行化学成分的分离纯化,通过波谱分析鉴定化合物结构.结果:臭灵丹对K562和NB4细胞的抑制作用呈现剂量依赖性;臭灵丹能剂量依赖性地诱导K562和NB4细胞的凋亡;从臭灵丹中分离得到了6个黄酮类化合物,分别鉴定为洋艾素、金腰乙素、5-羟基-3',4',7-三甲氧基黄酮、雷杜辛黄酮醇、芹菜素-7-O-β-D-葡糖糖苷、槲皮素.结论:臭灵丹具有抗K562和NB4细胞的作用,首次从臭灵丹中分离得到雷杜辛黄酮醇.
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应用逆转录病毒载体转染K562细胞株的实验研究
目的:探讨多种细胞因子联合刺激下,逆转录病毒载体对K562细胞的基因转移效率.方法:以PA317-GCGPXSN细胞制备病毒上清,NIH3T3细胞测定病毒滴度后,取经过SCF、IL-3、IL-6预培养刺激后的K562细胞,实施基因转移,流式细胞仪及PCR方法测定基因转移效率.结果:①病毒滴度为1.9×105 CFU/ml;②对照组K562细胞测定的荧光强度数值为0.56%,实验组为77.16%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).PCR方法扩增到了NeoR基因的特异性片断.结论:细胞因子预刺激后实施基因转移,可有效地将外源基因转移进入K562细胞基因组中.
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丁酸盐诱导人类珠蛋白基因表达的实验研究
目的:研究丁酸盐对人类珠蛋白基因表达的影响.方法:选用K562细胞为体外模型,采用联苯胺染色和RT-PCR技术,比较丁酸盐诱导前后联苯胺染色阳性率和7种珠蛋白基因mRNA改变.结果:丁酸盐诱导后联苯胺染色阳性细胞率(BZ%)增加3～6倍;Gγ-mRNA增加2.26±0.22倍(P＜0.05),α、ζ、ε、δ、Aγ -mRNA均有增加但增加不显著(P＞0.05);诱导前后K562细胞均未检测到β-RNA.结论:丁酸盐可诱导珠蛋白基因表达并选择性地刺激γ基因转录增加,尤其是Gγ;丁酸盐具有与阳性对照羟基脲相似的诱导珠蛋白基因表达的作用.
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人类珠蛋白基因转录水平的定量研究
目的:研究人类珠蛋白基因转录水平的定量表达.方法:设计7种珠蛋白基因mRNA的特异性引物,采用RT-PCR技术,探索相同条件下同时扩增7种珠蛋白mRNA,并定量其表达水平.结果:正常胎儿脐血中同时扩增出7种珠蛋白基因,各片段分子量符合引物设计片段长度;K562细胞株检测有α、Gγ、Aγ、δ、ε、ζmRNA,无β-mRNA;阴性对照B淋巴细胞株XJH未扩增出任一珠蛋白基因mRNA.结论:应用RT-PCR技术同时扩增7种珠蛋白基因mRNA的定量方法是可行的,具有特异性.
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MRP1和XIAP基因在急性髓系白血病及细胞株中的表达及临床意义
目的 本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白1 (MRP1)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因在急性髓系白血病(AML)患者及K562、K562/ADM细胞株中的表达,探讨其在AML发生及多药耐药中的意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测81例AML患者与20例正常人骨髓细胞(对照组),以及K562、K562/ADM细胞株中MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达.结果 K562/ADM细胞MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白水平明显高于K562细胞(P＜0.05).AML患者初治组和复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05),复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平明显高于初治组(P＜0.05).结论 MRP1、XIAP基因的异常表达与白血病发病及复发密切相关,可能通过诱导白血病细胞耐药及抑制细胞凋亡的途径发挥作用,其表达水平的高低对评估AML患者预后及治疗效果有重要意义.
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正常骨髓基质细胞对K562细胞凋亡敏感性的影响
目的 观察正常人骨髓基质细胞对白血病敏感细胞株K562细胞凋亡易感性的影响,并研究其作用机制.方法 建立正常人骨髓基质细胞的体外培养体系及其与K562细胞共培养的体系;流式细胞仪检测Annexin V阳性的早期凋亡细胞;电镜下观察凋亡形态学改变;流式细胞仪检测bcl-2,活化的胱冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达变化.结果 与单独K562细胞培养相比,与正常人骨髓基质细胞共培养的K562细胞,分别经阿糖胞苷作用后,共培养体系下其凋亡率下降,电镜下细胞凋亡的形态改变减少或消失,而且bcl-2蛋白表达上调,活化的caspase-3表达减弱.结论 正常人骨髓基质细胞可促进白血病细胞株K562细胞的增殖,降低K562细胞对阿糖胞苷的凋亡易感性,其作用机制中包括影响凋亡相关蛋白bcl-2和caspase-3的表达.
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枸杞多糖对人白血病K562细胞株凋亡作用的基础研究
目的 探讨枸杞多糖(LBP-X)抑制人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖的作用机制,研究LBP-X对K562细胞凋亡的影响,探讨LBP-X与三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的剂量对应关系.方法 用LBP-X、As2O3处理K562细胞,四氮甲唑蓝(MTT)比色法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例.结果 LBP-X对K562细胞的IC50约为227.50 μg/ml,经LBP-X作用后,K562细胞呈现凋亡的形态学改变.流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为8.43%-57.92%.结论 LBP-X对K562细胞有抑制作用,并能诱导其发生凋亡.LBP-X对K562细胞的效能和效价强度约为As2O3的1/1 000.
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放线菌素D抑制沙尔威辛诱导K562细胞凋亡但不减弱其细胞毒性
目的:研究放线菌素D对沙尔威辛诱导K562细胞凋亡和细胞毒性的影响.方法:采用四氮唑盐(MTT)还原法测定药物对K562细胞的生长抑制作用;凋亡诱导作用采用荧光显微镜术、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术进行评价.结果:药物处理K562细胞24 h后检测发现,放线菌素D能在一定程度上增强沙尔威辛6.25μmol/L的细胞毒性作用,平均生长抑制率由沙尔威辛单独应用时8%上升到联合应用放线菌素D 0.04、0.4和4 μmol/L时的69%、71%和70%.在沙尔成辛浓度大于6.25 μmol/L时,未见同样的增强作用,却也不减弱其抑制细胞生长的作用.这显示放线菌素D可以增强或至少不减弱沙尔威辛的细胞毒性作用.但荧光显微镜术、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术却表明,在同等条件下,放线菌素D抑制沙尔威辛诱导K562细胞凋亡.结论:放线菌素D可增强沙尔威辛适当浓度范围内的细胞毒性作用,但却抑制其诱导的白血病细胞凋亡,提示该过程中存在着除凋亡以外的其它细胞死亡方式.
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姜黄素对K562细胞增殖的抑制作用与其下调p210bcr/abl激活的Ras信号途径有关
目的:研究姜黄素(Cur)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562增殖的影响,并且探讨这种影响与p210bcr/abl及其激活的Ras信号途径的关系.方法:以K562细胞为p210bcr/abl阳性表达细胞模型,以HL-60细胞为P21obcr/abl阴性表达细胞模型,以对p210bcr/abl无影响,并已知K562细胞对其有一定耐药性的足叶乙甙(Etoposide,VP-16)为抗癌药的对照,应用MTT法检测Cur对细胞增殖及凋亡的影响,应用Western blot及FCM方法检测蛋白含量的变化.结果:Cur对K562细胞及HL-60细胞增殖的抑制作用呈浓度和时间依赖性,并且Cur对二者的作用无差别(P＞0.05);相比之下,vP 16对HL-60细胞更敏感,对K562细胞较耐药(P＜0.01).Cur使K562细胞p210bcr/abl、MEK-1和c-JUN蛋白含量显著减少,且呈量效关系;而同样处理的HL-60细胞的MEK-1及c-JUN的含量减少不及K562细胞明显.结论:Cur抑制K562细胞增殖的作用与Cur下调p210bcr/abl含量从而阻断其激活的Ras信号途径有关.从新的角度证明了姜黄素具有治疗CML的潜在价值.
关键词： 姜黄素 K562细胞 信号传递 Bcr-Ab1 融合蛋白质类 -
重组L-门冬酰胺酶与其野生型在体外和体内的抗肿瘤作用比较
目的:研究重组L-门冬酰胺酶对肿瘤细胞体外生长及实验性肿瘤的抑制作用.方法:体外培养肿瘤细胞(K562、L1210和P815),分别用倒置显微镜和透射电镜观察肿瘤细胞的形态学,MTT比色法观察细胞增殖率及抑制率,流式细胞仪分析DNA含量.同时根据移植性肿瘤研究方法小鼠接种L1210、P388、Heps及S180瘤株,观察给药后小鼠存活天数和瘤重.结果:体外细胞培养实验证明,重组L-门冬酰胺酶对K562、L1210和P815细胞生长具有显著抑制作用(P＜0.01).体内实验表明,重组L-门冬酰胺酶ip能显著延长移植肿瘤小鼠(L1210和P388)的存活天数(P＜0.01),并对小鼠移植性肝癌实体瘤(Heps)生长有明显的抑制作用(P＜0.01).重组L-门冬酰胺酶iv对小鼠Heps和S180肿瘤生长有明显的抑制作用(P＜0.01).结论:重组L-门冬酰胺酶对肿瘤细胞体外生长及受试肿瘤有明显抑制作用.本结果对重组L-门冬酰胺酶的临床应用提供实验依据.
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以K562细胞为靶点的抗肿瘤药物筛选模型的建立
目的：建立以白血病细胞系K562为靶点的高通量抗肿瘤药物筛选模型.方法：在96孔细胞培养板上，运用四唑氮化合物(MTS)和电子耦联剂(PMS)连用的方法，对K562细胞增殖情况进行检测.对在化合物影响下K562细胞增殖变化的检测条件进行了优化.结果：采用这一细胞水平的高通量抗肿瘤药物筛选模型，完成了800个小分子有机化合物的筛选，每个化合物的用量是500 ng.11个化合物在浓度为5 mg/L时可抑制细胞增殖达80％以上，其中9个通过多浓度复筛得到了确认.抑制活性强的化合物的IC50为170 nmol/L，共有7个化合物显示IC50低于10μmol/L.结论：采用K562细胞系进行高通量筛选是快速、经济、有效、实用的发现新型抗肿瘤药物的方法.
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分枝石蕊多糖诱导人白血病K562细胞凋亡
目的：研究分枝石蕊多糖(CFP-1)是否能诱导K562细胞凋亡.方法：抑制细胞增殖的测定采用MTT法；用荧光显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化；采用琼脂糖凝胶电泳法观测DNA碎片；用流式细胞仪检测凋亡细胞数.结果：CFP-1(50-800mg/L)明显抑制K562细胞增殖，并且呈浓度依赖性.K562细胞与CFP-1 300 mg/L共同培养5 d后，观察到典型的凋亡形态变化，电泳呈现梯形条带.结论：CFP-1诱导人白血病K562细胞凋亡.
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四种砷拮抗剂对三氧化二砷诱导的三种粒系白血病细胞凋亡和端粒酶活性的减量调节作用
目的：研究巯基供体N-乙酰半胱氨酸(NAC)和二巯丁二钠(NDMS)、抗氧化剂过氧化氢酶(CAT)和Ca2+清除剂(Quin 2)对三氧化二砷诱导的三种粒系白血病细胞凋亡和端粒酶活性改变的调控作用.方法：用流式细胞仪和PCR ELISA法分别检测NAC、NDMS、CAT或Quin 2与三氧化二砷共同作用于三种粒系白血病细胞后其凋亡和端粒酶活性的变化.结果：三氧化二砷0.6、2.7和8.1μmol/L可分别诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4，慢性粒细胞白血病细胞株K562，急性粒细胞白血病细胞株H-L-60细胞发生40％-60％的凋亡，同时下调三种细胞的端粒酶活性.NAC 4 mmol/L，NDMS 200μmol/L，CAT 80kU/L，Quin 2 20μmol/L不同程度抑制这种凋亡作用.NAC和CAT既可独立降低三种细胞的端粒酶活性，也可促进三氧化二砷对端粒酶的下调作用，而Quin 2可抑制K562和HL-60细胞中的这种下调作用.结论：三氧化二砷诱导的三种细胞的凋亡过程涉及了疏基失活、自由基的改变、细胞内Ca2+浓度改变及端粒酶活性下降.NAC、NDMS、CAT及Quin 2可不同程度拮抗三氧化二砷对三种细胞的作用.
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磷酰肌醇-3激酶途径在慢性髓细胞白血病细胞增殖和抗凋亡中的作用
目的探讨磷酰肌醇-3激酶途径在K562和HL60细胞增殖中的作用.方法用磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K活性,观察K562细胞和HL60细胞增殖能力的变化.结果显示K562和HL60细胞在培养24小时、48小时、72小时的增殖抑制率分别为41.33%、57.46%、65.85%和32.14%、17.14%、13.14%.生长曲线显示Wortmannin可显著抑制K562细胞的增殖,而对HL60细胞增殖无明显影响.结论Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖.
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重楼皂苷D对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 探讨重楼皂苷D对人慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的抑制作用及其机制.方法 选用浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、2.4μmol/L重楼皂苷D作用于K562细胞24 h,用CCK-8法检测重楼皂苷D对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测重楼皂苷D对K562细胞凋亡以及细胞周期分布的影响;Western blot方法检测相关蛋白的表达.结果 重楼皂苷D可显著抑制K562细胞增殖,24 h的半数有效抑制浓度(IC50)为(0.9±0.1)μmol/L.流式细胞术检测结果显示,浓度为0.9μmol/L重楼皂苷D作用于K562细胞12、24 h后,细胞早期凋亡率较对照组的(2.05±0.45)%分别提高到(11.46±1.51)%、(28.87±2.35)%,差异有统计学意义(F=38.637,P<0.05).重楼皂苷D能够显著下调bcl-2、CDK1、cyclin B1、bcr-abl融合蛋白的表达,上调Bax、细胞色素C、活化的caspase-3以及p21的表达(均P<0.05).此外,重楼皂苷D能够将细胞周期阻滞在G2/M期(F=42.355,P<0.05).结论 重楼皂苷D能够明显抑制慢性粒细胞白血病K562细胞增殖,其作用机制可能是诱导细胞凋亡及促进细胞周期阻滞.
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淫羊藿苷促进白血病K562细胞凋亡的研究
目的：探讨淫羊藿苷对人慢性粒细胞白血病K562细胞的作用及其机制。方法将对数生长期K562细胞分成对照组和淫羊藿苷处理组。对照组细胞常规培养，淫羊藿苷处理组加入8μmol／L淫羊藿苷培养。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测K562细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞p85、Akt mRNA的表达，Western blot检测p85、Akt、p-p85、p-Akt、cleavage-caspase-3、caspase-3蛋白表达的变化。结果与对照组比较，淫羊藿苷处理组K562细胞增殖率明显下降（P＜0.05），K562细胞凋亡率和p85、Akt、cleavage-caspase-3蛋白表达均明显升高（均P＜0.05）， p85 mRNA、Akt mRNA、caspase-3蛋白表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论淫羊藿苷能抑制K562细胞增殖，促进其凋亡，其作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号转导通路实现的。
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PKF118-310对白血病K562细胞凋亡的影响及其机制
目的：探讨小分子化合物PKF118-310对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度PKF118-310处理K562细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测其对细胞增殖的抑制；免疫荧光法观察细胞核β-catenin／TCF转录复合物的形成；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测caspase-3、caspase-8、XIAP、bcl-2、β-catenin、TCF、C-myc及cyclin D1的表达。结果PKF118-310能够抑制K562细胞生长，其对K562细胞在24、48、72 h的半数抑制浓度（IC50）值分别为5.388、3.290、1.566μmol ／L。细胞核内形成β-catenin／TCF转录复合物。分别用1.6、3.2μmol／L的PKF118-310作用于K562细胞48 h后，经Annexin V-FITC／碘化丙啶（PI）双标检测细胞凋亡率分别为（48.0±0.9）%、（80.2±1.2）%，均高于对照组的（1.2±0.6）%（均P＜0.05）。不同浓度PKF118-310处理K562细胞72 h后，caspase-3及caspase-8蛋白表达均高于对照组（均P＜0.05），而XIAP、bcl-2、β-catenin、TCF、c-myc及cyclin D1蛋白表达均低于对照组（均P＜0.05）。结论PKF118-310可抑制K562细胞增殖，并诱导其凋亡。
关键词： 白血病 髓样 慢性 K562细胞 Wnt/β-catenin信号通路 PKF118-310 细胞凋亡
