首页 > 文献资料
-
滑菇多糖对K562白血病细胞增殖的抑制及Caspase-3基因表达的影响
目的:研究滑菇多糖(PNP)的抗肿瘤作用及诱导K562细胞凋亡的机制.方法:采用MTT法检测PNP对K562细胞增殖的抑制作用;绘制生长曲线;Hochest 33258染色计算凋亡率;RT-PCR法、Western Blot方法检测凋亡相关基因Caspase-3的表达.结果:MTT分析表明,PNP作用48 h后可明显抑制K562细胞的增殖;Hochest染色结果显示,PNP能诱导K562细胞出现典型的凋亡形态,且凋亡率随多糖浓度增加而增大,经PNP 100,200,400 mg/L的处理后,凋亡率分别是对照组的3.15,6.55和8.62倍.PNP能诱导凋亡相关基因Caspase-3在mRNA水平上的表达;Western Blot显示PNP能诱导Caspase-3编码蛋白的表达,且随多糖浓度的增加表达量增加.结论:PNP对K562细胞增殖有抑制作用, 并能促进其凋亡;PNP通过诱导凋亡相关基因Caspase-3表达促进细胞凋亡.
-
槲皮素诱导人白血病细胞K562的凋亡
目的:研究槲皮素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用. 方法:四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果:槲皮素在(1～8)×10-5 mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,8×10-5 mol/L槲皮素作用72 h的K562细胞株A值低;彗星分析法显示经槲皮素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期. 结论:槲皮素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.
-
Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡
目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.
-
K562细胞分泌的exosome的免疫电镜研究
目的:通过免疫电镜方法观察K562细胞分泌的exosome,探讨其潜在的临床应用价值. 方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度离心等方法分离出K562细胞释放的exosome,经透射电镜观察其超微结构. 采用固相免疫电镜法(SPIEM)制备exosome的HSP70,ICAM-1及ABL免疫电镜标本. 结果:K562细胞分泌的exosome为直径50～100 nm的膜性微囊结构,圆形或椭圆形,腔内为低电子密度成分. 经抗HSP70,ICAM-1和ABL抗体-胶体金免疫电镜标记,囊外膜及腔内可见点状﹑颗粒状电子致密物沉积. 结论:离心超滤和蔗糖密度梯度离心法纯化小量exosome方法可行,K562细胞分泌的exosome表达HSP70,ICAM-1和ABL蛋白,具备免疫原性.
-
活血化瘀中药复方诱导K562细胞凋亡
目的: 研究活血化瘀复方对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖、凋亡的影响. 方法: 通过台盼蓝拒染法活细胞计数,绘制细胞生长曲线. 光镜、透射电镜观察细胞形态学变化. 流式细胞检测定量观察细胞凋亡及其与药物的关系. 结果: 活血化瘀复方对K562细胞生长具有抑制作用,并且细胞呈现典型的凋亡形态学改变. 流式细胞检测显示药物血清作用6 h,K562细胞即已出现凋亡,100 mL*L-1含药血清组细胞凋亡率较50 mL*L-1含药血清组高(13.4±1.3)% vs (7.6±0.9)%, P<0.01. 结论: 活血化瘀复方具有抑制白血病细胞生长,诱导白血病细胞凋亡的作用,从而为其临床应用提供了理论依据.
-
雄黄对K562细胞端粒酶活性和凋亡的作用
目的: 探讨雄黄对慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞端粒酶活性及凋亡的调节作用和机制. 方法: MTT法检测细胞增殖力;PCR-ELISA法测定端粒酶活性;流式细胞仪测量细胞周期和细胞凋亡. 结果:0.3, 0.6, 1.5和3.0 mg*L-1雄黄(72 h)在诱导K562细胞凋亡的同时可显著抑制细胞端粒酶活性和细胞增殖,并呈剂量相关;1.5, 3.0 mg*L-1雄黄(72 h)可诱导K562细胞G2/M期阻滞. 结论: 雄黄诱导K562细胞凋亡达到抑制细胞生长的作用,端粒酶活性下降是雄黄诱导K562细胞凋亡的机制之一. 由大剂量雄黄诱导的K562细胞G2/M期阻滞可能与端粒酶活性显著下降有关.
-
N-乙酰氨基葡萄糖诱导白血病细胞K562向巨噬细胞分化
目的: 研究N-乙酰氨基葡萄糖对白血病细胞K562的诱导分化效果. 方法: 利用hexamethylene bisacetamide (HMBA)和N-乙酰氨基葡萄糖,分别用不同浓度对白血病K562细胞进行诱导分化实验,通过联苯胺、萘酚AS-D氯醋酸酯酶及吉姆萨-瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪证实其分化方向. 结果: 化学诱导剂N-乙酰氨基葡萄糖对K562细胞在0.5 mmol*L-1浓度作用2 d后有良好的诱导分化效果,诱导K562向巨噬细胞分化. 与HMBA相比,N-乙酰氨基葡萄糖在作用浓度和作用时间上都有明显优势. 结论:N-乙酰氨基葡萄糖可能诱导K562细胞向巨噬细胞方向分化.
-
HMBA对K562巨噬细胞样分化过程中细胞周期的影响
0 引言K652细胞系建立于慢性髓性白血病患者胸水, 它可在多种分化诱导剂的诱导下向红细胞系[1]和巨核细胞系[2]分化. 近有人[3]报道K562细胞在诱导剂Hex amethylene bisacetamide (HMBA) 诱导下可向巨噬细胞样分化. 但在分化中HMBA对K562细胞增殖的影响如何,尚未见文献报道.
-
辛伐他汀裸鼠体内诱导K562细胞凋亡的分子机制
目的:探讨不同剂量的辛伐他汀处理裸鼠体内K562细胞的信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:体外培养K562细胞并经皮下接种Balb/c-nu/nu裸小鼠K562细胞,构建裸小鼠的K562细胞动物模型.采用缺口末端标记技术TUNEL法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化.采用RT-PCR检测K562细胞中Ras分子和PI3K-AKT信号通路的n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的表达差异(P＜0.01).结论:辛伐他汀能够引起参与K562细胞凋亡的Ras 分子和PI3K-AKT信号通路的基因变化,从一定的角度说明辛伐他汀在体内能够诱导K562细胞凋亡.
-
基因芯片研究苦参碱诱导K562细胞基因表达谱变化
0 引言苦参碱可影响白血病K562细胞增殖周期达到抑制肿瘤细胞增殖的作用[1],但具体机制不详. 我们拟用cDNA表达点阵研究苦参碱作用下的K562细胞周期基因表达变化情况,明确苦参碱导致K562细胞增殖周期变化的内部机制.
-
cDNA表达点阵研究苦参碱诱导K562细胞凋亡基因表达的改变
1 材料和方法1.1材料 Atlas Human Apotosis Array kit (Clotech 产品)由美国加州希望城国家医学中心Dr.
-
人参多糖对人白血病细胞株K562细胞信号转导的调控
目的:研究人参多糖(GPS)对人红白血病细胞株(K562)信号转导的调控.方法:采用细胞体外培养技术,免疫细胞化学、Western Blot检测GPS诱导后K562细胞蛋白酪氨酸激酶JAK2、核因子NF-κB p65和信号传导及转录激活因子5(STAT5)的表达,免疫沉淀法检测GPS对K562细胞JAK2磷酸化的影响,RT-PCB技术检测GPS诱导后K562细胞c-myc,p53表达的变化.结果:免疫细胞化学和Western Blot检测GPS诱导后K562细胞,JAK2蛋白表达明显增强,随着剂量的加大、时间的延长更加明显[(12.33±2.05)vs(88.18±13.57)];NF-κB p65[(79.48±9.56)vs(6.98±1.45)]和STAT5[(71.56±16.28)vs(10.23±2.16)]蛋白表达明显减弱;GPs(40 mg/L)作用K562细胞6 d后,加入GM-CSF继续刺激5～10 min,JAK2酪氨酸磷酸化增强,而刺激20 min后JAK2酪氨酸磷酸化明显减弱.GPS(40 mg/L)诱导K562细胞3,6 d后.c-myc mRNA明显减弱[(196±12)vs(136±11)],而p53 mRNA无明显变化[(202±16)vs(181±16)].结论:GPS激活了酪氨酸蛋白激酶JAK2,促进其磷酸化,同时抑制STAT5,NF-κB信号转导途径,下调原癌基因c-myc表达,促进K562细胞凋亡与分化.
-
萘乙酸抑制K562细胞增殖作用的初步研究
目的研究萘乙酸(NAA)对K562细胞增殖的抑制作用.方法应用MTT法、细胞计数法、流式细胞术、分裂指数分析、tunnel法以及姊妹染色单体交换(sister chromatid exchange, SCE)和微核制备,对NAA处理的K562细胞进行细胞增殖、细胞周期、凋亡以及染色体损伤检测.结果与对照组相比,NAA可以有效抑制K562细胞的生长,并将细胞阻滞在G1期,降低细胞分裂指数,促进细胞凋亡,提高K562细胞SCE频率以及微核形成率.结论 NAA具有抑制K562细胞增殖的作用.
-
K562细胞cDNA表达文库的构建和鉴定
目的构建K562细胞表达型cDNA文库.方法提取K562细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成双链cDNA,消平cDNA末端,连接EcoRⅠ适配子,磷酸化EcoR Ⅰ适配子5'端,Sephacryl-S400柱除去小于400 bp cDNA片段,与去磷酸化的λ gt11噬菌体连接,体外包装后建成cDNA文库.取出1 μL倍比稀释感染E.coli Y1090,测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小.结果构建成含1.02×106重组子的K562细胞cDNA文库,重组子平均插入外源片段长约1.3 kb.结论所建文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆.
-
血管内皮生长因子反义核酸增强华蟾素诱导K562细胞凋亡
目的 研究VEGF反义核酸(ASON)增强华蟾素对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应.方法 合成VEGF ASON转染入K562细胞,4种浓度的华蟾素(1、3、5、7mg/L)作用于K562细胞株24、48、72h,应用Western blot法检测VEGF蛋白的表达,原位细胞凋亡(TUNEL)、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡.结果 不同剂量华蟾素组对K562细胞株均有抑制作用,并具有时间和浓度依赖性.经VEGF ASON转染的K562细胞株对华蟾素的诱导凋亡作用更加明显.结论 华蟾素在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,VEGF ASON可增强华蟾素诱导K562细胞凋亡的作用.
-
aptamer-siRNA核酸复合物对K562细胞凋亡的促进作用
目的 观察aptamer-siRNA核酸复合物对人慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 使用不同浓度的aptamer-siRNA溶液转染K562细胞,噻唑蓝(MTT)法检测aptamer-siRNA对K562细胞增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测aptamer-siRNA对K562细胞凋亡的影响,Western blot和RT-PCR法检测aptamer-siRNA对K562细胞bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达的影响.结果 与对照组相比,转染aptamer-siRNA后K562细胞增殖受到明显抑制,K562细胞的早期凋亡率明显增加,细胞中bcl-2蛋白和mRNA的表达水平明显降低,Bax和caspase-3蛋白和mRNA的表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05).aptamer-siRNA核酸复合物浓度(50~250μmol/L)对bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA的影响具有明显的量效关系.结论aptamer-siRNA核酸复合物能够通过促使bcl-2基因减少和Bax、caspase-3基因增长,进而促进K562细胞凋亡.
-
重组人纤维连接蛋白对无血清培养的CIK细胞增殖及对K562细胞杀伤活性的影响
目的 探讨重组人纤维连接蛋白(RetroNectin,RN)诱导的细胞因子诱导的杀伤细胞CIK增殖、免疫特性及对人类K562细胞杀伤活性的影响.方法 密度梯度分离法分离外周血单个核细胞后分成两组,应用CD3单抗、IFN-γ、IL- 2培养CIK细胞,一组含RN(RN组),一组不含RN(Non-RN组).记录两组细胞增殖速度；用流式细胞术动态测定免疫细胞表型；用CBA细胞因子试剂盒检测IFN-γ、TNF-α及IL-4的分泌；用CFSE/PI双标法测定CIK细胞对人红白血病细胞株(K562)的体外杀伤活性.结果 RN组细胞生长明显快于Non-RN组(P＜0.05)；CD3+CD8+的细胞随着时间的延长逐渐增多,但两组间比较无统计学差异；CD3+ CD56+细胞所占百分比在第5天和第10天时两组间比较均无统计学差异(P＞0.05),在第15天时RN组有大幅度升高,第15、20、25天两组比较均有统计学差异(P＜0.05).细胞毒杀伤活性结果显示,RN组与Non-RN组对K562细胞毒活性亦有统计学差异.两组间细胞因子IFN-γ、TNF-α随着培养时间的延长,分泌量逐渐升高.结论 使用RN诱导的CIK细胞增殖速度快,杀伤肿瘤细胞活性高,是一种安全高效的细胞培养方法.
关键词： 纤维连接蛋白 细胞因子诱导的杀伤性细胞 无血清培养 K562细胞 -
辛伐他汀对人慢性粒细胞白血病细胞K562基因表达的影响
目的 应用基因芯片技术研究辛伐他汀对K562细胞基因表达的影响,初步探讨其作用机理.方法 辛伐他汀作用K562细胞48h后,提取细胞总RNA.纯化mRNA后再逆转录为cDNA,将cDNA在体外转录合成cRNA,用随机引物反转录为cDNA,用Klenow酶标记Cy3、Cy5,与定制的包含人全基因组的基因芯片杂交,扫描芯片荧光信号,用GenePix Pro 4.0图像分析软件对芯片图像进行分析.定量RT-PCR验证芯片结果中两个差异表达基因.结果 基因芯片检测发现共有176条基因表达发生明显改变,包括16条未知基因表达改变.其中151条基因表达上调, 25条基因表达下调.根据基因功能的不同,我们初步将其分为凋亡相关、信号转导相关、细胞周期相关等几大类.定量RT-PCR验证的基因表达变化趋势与表达谱芯片的结果相吻合.结论 辛伐他汀作用K562细胞后能引起多种基因表达改变,这为探讨其作用机制提供了新的依据.
-
萘乙酸对K562细胞和正常人外周血淋巴细胞遗传物质损伤效应的比较
目的 比较萘乙酸(naphthalene acetic acid, NAA)对K562细胞和正常人外周血淋巴细胞染色体损伤效应的差异.方法 常规方法制备姐妹染色单体互换(SCE)和微核,检测NAA对K562细胞与正常人外周血淋巴细胞SCE、微核形成率以及细胞分裂指数的影响.结果 NAA可诱导K562细胞和人正常淋巴细胞微核形成和提高SCE频率,与对照组相比均存在显著性差异;NAA诱导K562细胞微核形成率和SCE频率绝对增长值高于正常淋巴细胞组.NAA显著抑制K562细胞和人正常淋巴细胞分裂指数,绝对抑制率也表现为K562细胞高于正常淋巴细胞.结论 NAA具有诱导细胞染色体损伤的作用.
-
通过K562细胞铁缺失刺激非转铁蛋白铁摄取
通过人类红白血病K562细胞检测铁缺失对从柠檬酸铁中摄取铁的影响.在成分明确的无铁培养基中预孵育24 h后铁的摄入高于在含转铁蛋白培养基中孵育的2-3倍.将K562细胞在无铁培养基中预孵育再加有蛋白合成抑制剂-放线菌酮完全取消了对摄入铁的刺激.在无铁培养基中孵育导致二价金属载体1mRNA 水平下降20%.十二指肠细胞色b、膜转铁蛋白和肠铁转运蛋白mRNA 水平没有显著改变,也没有发现二价金属载体1、十二指肠细胞色b、膜转铁蛋白和肠铁转运蛋白蛋白水平改变.由此得出结论:铁缺失刺激K562细胞非转铁蛋白铁的摄入,并且这种刺激依赖于蛋白合成.
