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BDNF－TrkB 通路在苯并［ a］芘致大鼠学习记忆损伤中作用研究
目的：研究脑源性神经营养因子（BDNF）－酪氨酸激酶受体B（TrkB）通路在苯并[a]芘（B[a]P）致大鼠学习记忆损伤中的作用。方法将72只无特定病原体级健康雄性SD大鼠随机分为对照组、溶剂组和B[ a] P组，每组24只。对照组大鼠不予任何处理，溶剂组大鼠予剂量为1．00 mg／kg体质量橄榄油，B[ a] P组大鼠予剂量为2．50 mg／kg体质量B[ a] P（以橄榄油溶解），隔日腹腔注射，分别于染毒30、60和90 d，采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力，其后以免疫印迹法检测大鼠海马组织中BDNF和TrkB蛋白的相对表达水平。结果 B[a]P组大鼠的逃避潜伏期分别长于对照组和溶剂组（P＜0．01），3个时间点第1次穿越平台时间均长于同时间点对照组和溶剂组（P＜0．01），目标象限停留时间和穿越平台次数均少于对照组和溶剂组（P＜0．01）；B[a]P组大鼠的第1次穿越平台时间存在随染毒时间增加而增加的时间－效应关系（P＜0．05）。 B[a]P染毒组大鼠3个时间点海马组织BDNF蛋白相对表达水平均低于同时间点对照组和溶剂组（P＜0．01），60和90 d时间点BDNF蛋白相对表达水平均低于同组30 d时间点（P＜0．01）；B[a]P组大鼠海马组织TrkB蛋白分别低于对照组和溶剂组（P＜0．01）。结论 B[a]P致大鼠学习记忆能力损伤呈一定程度的时间－效应关系，可能与BDNF及其受体TrkB蛋白表达量下调有关。
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苯并[a]芘亚慢性染毒对大鼠海马组织突触可塑性影响研究
目的 研究苯并[a]芘亚慢性染毒对大鼠学习记忆及蛋白激酶 C ( PKC )、N-甲基-D-天冬氨酸受体( NMDAR)、钙调蛋白激酶Ⅱ( CaMKⅡ)的影响. 方法 无特定病原体级健康雄性SD大鼠50只随机分为空白对照组、溶剂对照组和低、中、高剂量组,每组10只. 空白对照组不作任何处理,后4组分别予剂量为0.00、1.00、2.50和6.25 mg/kg体质量的苯并[ a]芘橄榄油溶液,隔日腹腔注射染毒60 d后,采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,免疫印迹法检测大鼠海马组织中PKC、NMDAR和CaMKⅡ蛋白相对表达水平. 结果 Morris水迷宫实验结果显示:大鼠逃避潜伏期在染毒剂量与染毒时间存在交互作用( P<0.01 ). 中剂量组大鼠第1次穿越平台时间分别高于空白对照组、溶剂对照组和低剂量组( P<0.05 ) ,而目标象限停留时间低于空白对照组( P<0.05);高剂量组大鼠第1次穿越平台时间分别高于其余4组(P<0.05),目标象限停留时间分别低于空白对照组、溶剂对照组和低剂量组( P<0.05 ). 低、中剂量组NMDAR和 CaMKⅡ蛋白相对表达水平分别低于空白对照组(P<0.05);高剂量组PKC和CaMKⅡ蛋白的相对表达水平均分别低于其余4组(P<0.05),NMDAR蛋白的相对表达水平分别低于空白对照组、溶剂对照组和低剂量组(P<0.05). 结论 苯并[a]芘亚慢性染毒所致大鼠学习记忆功能损伤可能与PKC、NMDAR及CaMKⅡ的表达下调,进而影响突触可塑性有关.
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牛磺酸对染锰大鼠海马神经毒性的影响
目的 探讨牛磺酸对锰致大鼠海马神经毒性的影响.方法无特定病原体级SD雄性大鼠36只随机平均分成3个组:对照组、染锰组、牛磺酸预防性干预组(牛磺酸组).对照组腹腔注射0.9%的生理氯化钠溶液;染锰组每天腹腔注射氯化锰溶液15mg/kg,连续12周;牛磺酸组染锰的同时给予牛磺酸干预,染锰剂量和方法与染锰组一致,牛磺酸剂量为200mg/kg,每周3次,连续12周.后一次注射后24h处死大鼠,切取海马,透射电镜观察各组神经元超微结构并检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果①从第4周开始到实验结束,染锰组、牛磺酸组同期体重均比对照组低,差异具有统计学意义(P＜0.05);染锰组与牛磺酸组相比,从实验第10周后染锰组体重显著低于牛磺酸组(P＜0.05),各组动物同期平均进食量无明显差异;②透射电镜观察,对照组海马神经元形态规则,染锰组海马神经元发生凋亡的形态学变化,线粒体等细胞器严重受损.牛磺酸组接近正常海马神经元的形态,胞质内各细胞器形态、结构基本正常;③染锰组MDA含量比对照组明显增加(P＜0.05),SOD活力显著下降(P＜0.05).牛磺酸组MDA含量与对照组比差异无显著性.且比染锰组显著下降(P＜0.05);SOD活力比对照组低(P＜0.05),与染锰组相比有所恢复,但差异无统计学意义.结论牛磺酸可以抵抗锰致海马神经元的凋亡,降低MDA产量,并使SOD活力有所恢复.
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大鼠癫痫持续状态后海马TNF-α、IL-1β的动态变化
目的 观察大鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后海马组织各区细胞因子的动态变化,探讨炎症反应与癫痫发作的关系.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为致痫组(n=54)和对照组(n=6),致痫组再根据观察时间分为:SE-0 h组、1 h组、3 h组、12 h组、24 h组和10 d组.应用锂-匹罗卡品建立大鼠SE模型,观察大鼠行为学变化,采用尼氏染色检测海马组织神经元损伤情况,酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫组化法检测海马组织TNF-α、IL-1β的表达水平.结果 SE后,大鼠海马组织IL-1β、TNF-α蛋白含量显著升高,其中(3 h组、12 h组、24 h组、10 d组)IL-1β 和1h TNF-α蛋白含量均较对照组有统计学差异(P<0.05).免疫组化证实,海马各区IL-1β和TNF-α表达水平也均上调,其中(12 h组、24 h组)CA1、(12 h组、24 h组)CA3和12 h组DG区IL-1β表达水平均较对照组有统计学差异(P<0.05);3 h组CA1、(1 h组、3 h组、24 h组、10 d组)CA3和(0 h组、1 h组、3 h组、12 h组)DG区TNF-α表达水平均较对照组有统计学差异(P<0.05).结论 癫痫发作后海马组织TNF-α、IL-1β表达上调,且持续处于高表达水平,提示癫痫发作可能诱发炎症反应.
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大鼠染铝对脑神经细胞超微结构的影响
目的：研究亚慢性染铝对断乳大鼠海马神经元和神经突触的超微结构的影响，以明确铝对发育中的中枢神经系统中海马组织的毒性作用。方法予各剂量组大鼠染铝90 d，处死后取海马组织，经处理后固定切片，采用透射电镜技术观察大鼠海马组织神经元和神经突触超微结构。结果随着染铝剂量的增加，大鼠海马神经元和神经突触的超微结构损害程度随之增加。结论染铝可以损害大鼠海马神经元和神经突触的超微结构。
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大鼠染铝对中枢神经系统脂质过氧化的影响
目的：通过对大鼠海马组织MDA（丙二醛）、GSH（还原型谷胱甘肽）含量，GSH-Px（谷胱甘肽过氧化物酶）、GR（谷胱甘肽还原酶）和γ-GCS（γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶）酶活性的检测，从脂质过氧化角度来阐明染铝对中枢神经系统的损伤作用。方法取刚出生Wistar大鼠40只，分为对照组、低剂量染铝组（0.2%AlCl3）、中剂量染铝组（0.4%AlCl3）和高剂量染铝组（0.6%AlCl3）4组。对照组给予蒸馏水；各染铝组给予含AlCl3蒸馏水，亚慢性连续染铝90 d。将各剂量染铝组大鼠处死取海马组织后用脂质过氧化试剂盒法检测大鼠海马组织MDA、GSH含量及GSH-Px、GR和γ-GCS的酶活性。结果随着染铝剂量的增加，大鼠海马组织MDA含量逐渐升高而GSH水平逐渐下降，并均呈一定的剂量-效应关系（P＜0.05），而GSH-Px及GR酶活性下降，γ-GCS酶活性升高。结论染铝可以使大鼠海马组织中MDA含量升高，GSH水平降低，GSH-Px及GR活性降低，γ-GCS活性升高。染铝可以对中枢神经系统造成损伤。
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人参皂苷 R b1对癫痫大鼠的脑保护作用及机制
目的：通过动物实验分析人参皂苷Rb1对癫痫大鼠的脑保护作用及机制。方法选择健康性成年Wistar雄性大鼠60只，随机分为空白对照组（A组）（n＝20）、癫痫组（B组，n＝20）和人参皂苷Rb1干预癫痫组（C组，n＝20）。 C组大鼠腹腔注射1％人参皂苷Rb1注射液3 mL／kg（30 mg／kg），A组与B组大鼠则腹腔注射等量生理盐水；同时B组与C组大鼠腹腔注射80万U／mL青霉素注射液9.5 mL／kg（760万U／kg），对大鼠进行行为学、病理学观察，同时进行细胞凋亡与β－catenin阳性表达检测。结果 A组大鼠行为正常，未见癫痫发作；B组大鼠癫痫发作程度达Ⅲ～Ⅴ级；C组大鼠癫痫发作程度明显较轻。 HE染色显示A组大鼠海马组织结构正常，神经元细胞整齐排列；B组神经元细胞出现变性坏死损伤改变，细胞排列紊乱；C组大鼠海马神经元细胞损伤程度较B组轻，部分细胞出现空泡变性。 TUNEL法检测显示与A组比较， B组与C组海马区凋亡阳性细胞数明显增高（ P＜0.05）；不过与B组比较，C组海马区凋亡阳性细胞数明显减少（ P＜0.05）。同时与A组相比，B组与C组β－catenin蛋白阳性表达增高（P＜0.05），且C组的β－catenin蛋白阳性表达明显少于B组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论青霉素腹腔注射可成功复制大鼠急性癫痫模型，主要表现为神经元的变性和坏死，而人参皂苷Rb1能抑制β－catenin蛋白的表达，可缓解癫痫的发作，具有一定的脑保护作用。
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大鼠阻塞性睡眠呼吸暂停综合征海马组织细胞凋亡参与作用研究
目的:探讨大鼠阻塞性睡眠呼吸暂停综合征海马组织细胞凋亡参与作用.方法:采用大鼠咽腔多点注射医用透明质酸钠凝胶方法建立阻塞性睡眠呼吸综合征模型,分析大鼠海马组织中细胞凋亡蛋白Bax/Bcl2、Caspase3/9及P53和C-myc的表达.结果:与对照组相比,模型组大鼠平均血氧饱和度、低血氧饱和度均明显低于对照组大鼠,而睡眠呼吸暂停指数明显高于对照组大鼠,且海马组织细胞凋亡蛋白Bax、Caspase3/9的表达明显上调,Bcl2蛋白的表达明显下调,而P53蛋白和C-myc蛋白的表达无显著的统计学差异性.结论:细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl2及Caspase3/9的异常表达参与了点注射医用透明质酸钠凝胶方法建立阻塞性睡眠呼吸综合征的发病过程.
关键词： 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征 海马组织 细胞凋亡 透明质酸钠凝胶 -
氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白表达的影响
目的:分析氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白表达的影响.方法:取7～10日龄的SD幼鼠36只,随机分为A、B、C三组各12只.A组注射生理盐水50 mg/kg,B组注射氯胺酮25 mg/kg,C组注射氯胺酮50 mg/kg.24 h后处死小鼠取海马组织,分别采用免疫组化与Western Blotting检测海马GAP-43蛋白的表达情况.结果:经图像分析软件处理后得知,A组、B组、C组条带灰度值分别为187.43 ±7.98、164.87±8.35、154.31±6.98,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01).A组、B组、C组GAP-43阳性细胞计数分别为(87.45±14.98)个/mm2、(66.48±12.36)个/mm2、(35.32±9.93)个/mm2,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:氟胺酮可明显降低SD幼鼠海马GAP-43蛋白的表达水平,这可能与其影响幼鼠神经系统发育有关.
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左旋甲状腺素钠对甲状腺功能减退症模型大鼠神经系统的保护作用研究
目的:探讨左旋甲状腺素对甲状腺功能减退症模型大鼠神经系统的保护作用.方法:取大鼠随机分为正常对照组、模型组和药物组,除正常对照组灌胃给予三蒸水外,其余2组连续灌胃给予丙基硫氧嘧啶(PTU)8周建立甲状腺功能减退症模型.8周后模型组再分为模型A组(继续给予PTU)和模型B组(停止给予PTU)；药物组灌胃给予左旋甲状腺素钠60μg·kg-1,连续4周.检测首次建模给药后第3、6、8、10、12周各组大鼠(n=6)血清中促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平与海马组织中即早基因c-fos、c-jun表达,并在末次给药后电镜观察各组海马组织病理学变化.结果:与正常对照组比较,模型组和药物组大鼠3、6、8周FT3和FT4水平均明显降低(P＜0.01),且随病程延长呈递减趋势,TSH、c-fos、c-jun表达均明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型A、B组比较,药物组大鼠10、12周FT.和FT4水平均明显升高(P＜0.05),TSH、c-fos、c-jun表达均明显降低(P＜0.05).药物组与正常对照组同期相比无明显差异(P＞0.05).与模型A组比较,模型B组10、12周FT3和FT4水平均明显升高(P＜0.05),c-fos、c-jun表达均明显降低(P＜0.05),12周TSH水平明显降低(P＜0.05).电镜观察发现甲状腺功能减退症状严重程度模型A组＞模型B组＞药物组.结论:左旋甲状腺素钠可以减轻甲状腺功能减退症模型大鼠神经系统症状,可能与抑制c-fos、c-jun表达有关.
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松果菊苷对低压低氧环境下小鼠空间认知功能的改善作用及机制研究
目的:研究松果菊苷(ECH)对低压低氧环境下小鼠空间认知功能的改善作用及其作用机制.方法:将60只小鼠随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性组(银杏叶提取物片,100 mg/kg)和ECH低、中、高剂量组(50、75、100 mg/kg),每组10只.除空白组外,其余各组小鼠均饲养于低压氧仓模拟低压低氧,各组小鼠每天灌胃给药1次,连续给药7 d(给药后立即放入低压氧仓内);以2 min内小鼠水平与垂直活动次数为指标,评价其负面情绪与空间认知功能;苏木精-伊红染色后显微镜观察小鼠海马组织病理学变化;并检测小鼠海马组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的水平.结果:与空白组比较,模型组小鼠水平活动次数、MDA水平均显著增加/升高(P<0.05);垂直活动次数,SOD、CAT、GSH-Px水平均显著减少/降低(P<0.05);海马组织CA1区锥体细胞排列疏松,多数锥体细胞紧缩深染.与模型组比较,阳性组和ECH高剂量组小鼠水平活动次数、MDA水平显著减少/降低(P<0.05);垂直活动次数,SOD、CAT、GSH-Px水平显著增加/升高(P<0.05);海马组织CA1区锥体细胞数量丰富,排列紧密,少量锥体细胞紧缩深染.结论:ECH对低压低氧环境下小鼠空间认知功能障碍具有一定的改善作用,其机制可能与升高海马组织中SOD、CAT、GSH-Px水平及降低MDA水平有关.
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柱前衍生-HPLC测定大鼠海马组织中的谷氨酸和瓜氨酸
目的 采用HPLC法测定大鼠脑内海马组织中谷氨酸和瓜氨酸的浓度.方法 取20只大鼠的海马组织,经低温匀浆处理,利用邻苯二甲醛柱前衍生,采用Diamonsil RP-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.05mol· L-1乙酸钠(乙酸调pH6.0)水溶液进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,柱温30℃,荧光检测λex=334 nm、λem 456 nm,内标为β-丙氨酸.结果 0.5～100 μmol·L-1谷氨酸和瓜氨酸与峰面积的线性关系良好(r2分别为0.998、0.991),低检测限均为0.1μmol· L-,低、中、高浓度谷氨酸和瓜氨酸的加样回收率分别为90.6％、96.9％、98.8％和95.3％、97.9％、91.5％.日内和日间精密度的RSD ＜8.0％.结论 所用方法准确简便,可用于大鼠海马组织中谷氨酸和瓜氨酸的浓度分析.
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氟西汀作用于慢性温和不可预见性应激大鼠海马组织前后的差异蛋白质组学研究
目的：采用蛋白组学方法研究氟西汀对慢性温和不可预见性应激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）大鼠海马组织蛋白质表达的影响，以探讨氟西汀抗抑郁的作用机制。方法：采用 CUMS 建立大鼠抑郁模型。造模完成后，氟西汀组给予氟西汀（3 mg ／kg）灌胃给药，每天1次，连续21 d。行为学实验检测大鼠抑郁行为的变化。提取的大鼠海马组织蛋白质样品经同位素标记相对和绝对定量标记、强阳离子柱分离、反相液相色谱分离、质谱分析，获取的串联质谱数据通过 Protein． pilot 3．0软件鉴定蛋白质，运用生物信息学分析差异表达的蛋白质功能。结果：共鉴定出5109个蛋白质，41个差异表达的蛋白质，其中36个蛋白质表达上调，5个蛋白质表达下调，涉及氧化还原、信号传导、合成代谢、对外界刺激压力的反应等过程。结论：同时筛选到了四个可能与氟西汀抗抑郁作用密切相关的差异蛋白，分别是 Neuronal calcium sensor 1（NCS-1）、Re-ceptor-type tyrosine-protein phosphatase zeta、Neurocan core protein 和 Sodium-and chloride-dependent GABA transporter，但这些蛋白在抑郁症的发生、发展过程中的作用尚未完全清楚，需进一步深入研究。
关键词： 氟西汀 抑郁 蛋白质组学 海马组织 同位素标记相对和绝对定量 -
甲基苯丙胺对大鼠海马5-HT、IL-6及NF-κB表达的影响
目的 研究甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)对大鼠海马5-羟色胺(5-Hydroxytryptophan、5-HT)、白介素-6 (interleukin-6,IL-6)及核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的影响.方法 将30只SD大鼠随机分为正常对照组、METH 1d组、METH 3 d组、METH 5 d组、METH 7 d组、每组6只.分别在每天9:00和21:00腹腔注射METH[15 mg/(kg·次)];每次腹腔注射METH后,结合刻板行为观察,对各组进行评分;建立1d、3d、5d、7d组METH急性中毒大鼠模型.于末次给药24 h后分离海马组织,应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunoorbent assay,ELISA)检测实验大鼠海马5-HT、IL-6的含量;Western blot检测大鼠海马NF-κBp65的含量.结果 与正常对照组比较,METH 1d、3d、5d、7d组大鼠海马5-HT含量均逐渐减少,其中5d组(P＜0.05)和7d组(P＜0.01)差异具有统计学意义.与正常组对照组比较,METH 1d、3d、5d、7d组大鼠海马IL-6的表达含量逐渐升高,且5d组(P＜0.01)、7d组(P＜0.01)差异有统计学意义.NF-κB表达含量亦逐渐升高,与正常组比较,7d组差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 METH可使大鼠海马5-HT含量下降、IL-6和NF-κB蛋白表达明显增加.
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不同运动负荷对老龄大鼠认知能力及海马组织VEGF/VEGI表达的影响
目的:检测不同运动负荷对老龄大鼠认知能力的影响并探讨其可能的机制.方法:40只16月龄雄性Wistar大鼠随机分为4组:即对照组(不游泳)、小负荷组(游泳15 min)、中负荷组(游泳30 min)和大负荷组(游泳60 min).各负荷组大鼠经8周无负重游泳训练后,进行八臂迷宫实验观察各组大鼠的行为学表现;运用实时定量PCR和免疫组化实验检测各组大鼠海马神经组织(VEGF)、血管内皮生长抑制因子(VECI)的表达情况.结果:(1)与对照组相比,大负荷组大鼠的参考记忆错误次数和工作记忆错误次数均显著增多(P ＜0.05,P＜0.01);中负荷组大鼠各检测指标与对照组相比元统计学差异(P＞0.05);小负荷组大鼠的工作记忆错误次数和觅食完成时间均显著降低(P＜0.05).(2)与对照组相比,小负荷组大鼠海马组织VEGF mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P＜0.01),VEGI mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05,P＜0.001);大负荷组大鼠海马组织VEGF mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.01,P＜0.001),VEGI mRNA和蛋白表达水平均上调(P ＜0.01,P＜0.001);中等负荷组大鼠海马神经组织VEGF和VEGI mRNA和蛋白的表达水平与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论:小负荷运动有利于改善老龄大鼠的认知能力,中等负荷对此改变不大,而大负荷运动则对于老龄大鼠的认知能力具有损伤作用.其机制可能为小负荷运动能够上调老龄大鼠海马神经组织VEGF表达、下调VEGI表达,促进血管的新生,进而改善海马神经元的增殖;大负荷运动组则表现出了相反的影响趋势.
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SNP对神经干细胞增殖及分化的作用
以新生1～7天的SD新生鼠的海马神经干细胞和C17.2神经干细胞系为研究对象,加入不同浓度的硝普钠溶液,观察神经干细胞的数量和形态变化,并结合巢蛋白(Nestin)免疫组化染色鉴定以及MTT试验研究SNP对神经干细胞的增殖及分化的作用.结果 随着SNP的浓度升高,NSCs的数量依次减少,分化的比例依次增多.表明SNP对神经干细胞有明显的增殖抑制作用,同时还加大分化的比例.
