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导数光谱法测定石杉碱甲片中的石杉碱甲的含量
采用一阶导数紫外光谱法中的峰-零法测定石杉碱甲片(双益平)中石杉碱的含量,测定波长为318nm.三组不同量样品的平均回收率为98.25%,平均RSD为2.4%(样品总数n=30).测定方法简便准确.
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高速逆流色谱技术制备石杉碱甲单体
目的 从千层塔植物提取物中分离制备石杉碱甲单体.方法 利用高速逆流色谱技术,通过寻找合适的两相溶剂体系及工艺参数,研究及讨论石杉碱甲分离制备的新方法.结果 以n-Hexane/n-BuOH/H2O (4:1:5,V/V/V)为两相溶剂体系,在优化的工艺参数条件下,利用高速逆流色谱技术,获得了单体纯度为98.6%(HPLC)的石杉碱甲单体.结论 利用高速逆流色谱技术成功地从千层塔植物提取物中分离制备了纯度高于98%的石杉碱甲单体.
关键词： 高速逆流色谱(HSCCC) 石杉碱甲 千层塔(蛇足石杉) 植物单体制备 -
石杉碱甲胶囊剂与片剂的溶出度研究
目的:测定石杉碱甲胶囊和片剂的体外溶出速率.方法:用中国药典95年版溶出度测定法第三法测定石杉碱甲胶囊与片剂的溶出度,在Weibull概率纸上求出参数,用t检验法进行比较;采用HPLC测定溶出液中石杉碱甲的含量.结果:片剂刚开始释放较快,胶囊有一滞后时间,胶囊与片剂的T50分别为5.5和4.4min,两者在10min后溶出百分数无显著性差异,20min时均达到90%以上.
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中压制备色谱法制备高纯度石杉碱甲
目的 采用中压制备色谱法从蛇足石杉浸膏中制备高纯度石杉碱甲.方法 分别使用聚合物反相填料和C18反相填料为分离介质,串联两步中压制备色谱,从蛇足石杉浸膏中分离石杉碱甲单体.结果 制备的石杉碱甲单体纯度为99.7％,总体回收率达到87.5％.结论 该法利用聚合物填料和C18填料的各自特点,通过合理的工艺衔接,为获得医药级石杉碱甲提供了一条高效、绿色和经济的途径.
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石杉碱甲、他克林及加兰他敏对小鼠记忆障碍的改善作用比较
目的采用水迷津法,分别测试灌胃(ig)石杉碱甲、他克林及加兰他敏对脑室内注射(icv)密胆碱所致的小鼠记忆障碍的作用.方法小鼠每天训练一次,2～3w达标后,icv密胆碱(4.4μg/4.4μl)引起其记忆障碍,随机分组,分别ig石杉碱甲、他克林及加兰他敏并与对照组比较.结果 ig石杉碱甲0.4mg/kg或他克林40mg/kg或加兰他敏4.0mg/kg均能使小鼠的记忆障碍得到显著的改善.结论石杉碱甲、他克林及加兰他敏均对密胆碱所致的小鼠记忆障碍有显著的改善作用,其中以石杉碱甲的改善作用佳.
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术前应用石杉碱甲对老年人全麻术后脑内胆碱能神经功能的影响
石杉碱甲等胆碱酯酶抑制剂(Chol inesterase inhibitors,CEI)作为益智药已广泛应用于轻度和中度老年痴呆患者的认知功能的临床治疗.新近的研究已经明确老年患者全麻术后认知障碍与中枢胆碱能神经功能暂时性的低下关系密切,发病机制与老年痴呆有共同之处[1].本研究根据石杉碱甲对老年人全麻的术前应用观察,探讨石杉碱甲对全麻术后胆碱能神经的影响.
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针药联合治疗血管性痴呆临床疗效观察
目的:研究针药联合在血管性痴呆治疗中的临床效果.方法:将我院2008年6月-2012年5月血管性痴呆患者80例随机分为治疗组43例、对照组37例,对照组口服石杉碱甲治疗,治疗组在口服石杉碱甲基础上予针灸加口服中药汤剂治疗.2个月为1个疗程并评定治疗效果.观察2组患者MMSE评分及血流变、血脂指标,进行对比.结果:①治疗组较对照组治疗有效率高(P＜0.05).②与对照组比较,治疗组经治疗MMSE与HDS评分,均显著提高,较对照组提高明显(P＜0.05).③治疗组治疗后血脂与血流变较治疗前改善显著(P＜0.05),对照组治疗前后血脂与血流变无明显变化(P＞0.05).结论:在口服石杉碱甲基础上,应用中药汤剂口服加针灸方法治疗血管性痴呆,较单纯应用石杉碱甲可收到更好的疗效,且可有效改善患者血脂和血流变,是血管性痴呆防治中值得推广的方法.
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石杉碱甲增强大鼠海马脑片CA1锥体神经元的兴奋性突触传递
目的:观察石杉碱甲(Hup-A)对海马CA1锥体神经元兴奋性突触传递的影响,以探讨其增强学习记忆功能的神经细胞电生理机制.方法:应用大鼠海马脑片CA1锥体神经元细胞内记录技术,观察Hup-A对大鼠海马CA1锥体神经元膜电性质和刺激Schaffer侧支诱发的兴奋性突触后电位( EPSP)的影响.结果:(1) Hup-A(1 μmol/L)灌流15 min对CA1锥体神经元的膜电性质没有显著性影响.(2) Hup-A (0.3～3.0 μmol/L)浓度依赖性使EPSP幅度升高、时程延长、曲线下面积增大,该作用可被阿托品(10μmol/L)预处理取消.(3)Hup-A对外源性谷氨酸诱导的去极化反应无明显影响.结论:Hup-A可增强CA1锥体神经元的兴奋性突触传递,其增强突触传递作用与M型乙酰胆碱受体激动有关.
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石杉碱甲对大鼠海马脑片CA1神经元θ节律及长时程增强的影响
目的:研究石杉碱甲(Hup-A)对大鼠海马脑片CA1锥体神经元θ节律、长时程增强的影响,以分析其增强学习记忆功能的神经细胞电生理机制.方法:应用大鼠海马脑片神经元细胞内记录技术,观察石杉碱甲对大鼠海马脑片的CA1锥体神经元θ节律、长时程增强的影响.结果:(1)未用药组出现膜电位振荡前后4～10 Hz(θ节律)功率分量之和无显著性差异,但在Hup-A(1 μmol·L-1)灌流15 min后出现膜电位振荡,与用药前没有膜电位振荡的4～10 Hz功率分量之和配对t检验比较有显著差异(n=3,P＜0.005).(2)在LTP期间,对照组EPSP幅度在强直刺激后30 min显著性的升高(P＜0.05),而Hup-A组在强直刺激后15 min即出现显著性升高(P＜0.01).结论:Hup-A可增加大海马锥体神经元在θ频率范围内的功率分量,并易化LTP的诱发,这可能是其增强学习记忆功能的细胞电生理机制之一.
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石杉碱甲联合艾司西酞普兰对抑郁症临床疗效及认知功能的影响
目的:探讨石杉碱甲联合艾司西酞普兰对抑郁症的临床疗效及认知功能的影响.方法:选取60例抑郁症患者随机分为研究组和对照组,各30例,研究组采用石杉碱甲联合艾司西酞普兰,对照组单用艾司西酞普兰,均治疗8周,在治疗前后采用17项汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)为疗效指标,以威斯康星卡片分类测验(WCST)、韦氏记忆量表中国修订版(WMS-RC)评定认知功能,用不良反应量表(TESS)评定不良反应.结果:(1)治疗后研究组治疗总有效率(90.0％)、痊愈率(50.0％)与对照组的(86.7％、46.7％)比较差异无统计学意义(P＞0.05),两组内HAMD-17、HAMA评分均低于治疗前(P＜0.05),两组间HAMD-17、HAMA评分比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)治疗后研究组WCST中总测验次数、持续错误数、随机错误数均低于治疗前(P＜0.05),对照组总测验次数低于治疗前(P＜0.05),研究组和对照组WMS-RC中长时记忆、短时记忆、即刻记忆及记忆商数均高于治疗前(P＜0.05).两组间比较,治疗后研究组WCST中随机错误数低于对照组,WMS-RC中长时记忆、短时记忆、记忆商数均高于对照组(P＜0.05).(3)两组治疗后各种不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:石杉碱甲联合艾司西酞普兰治疗抑郁症安全有效,与单用艾司西酞普兰者相当,能显著改善患者认知功能,明显优于单药治疗.
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天胡荽积雪草苷对SAMP8小鼠学习记忆功能的改善作用
目的 观察天胡荽积雪草苷(asiaticoside from Hydrocotyle sibthorpioides,AHS)对快速老化模型SAMP8小鼠学习记忆功能的影响及其可能机制.方法 选用6月龄SAMP8小鼠75只,随机分为SAMP8空白组、阳性药石杉碱甲对照组和AHS低、中、高剂量组,每组15只;另选用6月龄SAMR1小鼠15只作正常对照.各组分别灌胃相应药物3个月后,采用Morris水迷宫法检测小鼠的学习记忆能力,采用Western blot测定Aβ1-42蛋白和可塑性相关蛋白在海马组织的表达水平,采用实时荧光定量PCR测定Aβ相关基因的表达.结果 AHS能明显提高小鼠的学习记忆能力.其机制研究表明,AHS明显降低脑组织Aβ1-42蛋白的含量,抑制Aβ相关基因APP、BACE1和CatB的表达,但提高NEP和IDE的水平;另外,AHS能明显提高突触可塑性相关蛋白包括突触后密度蛋白-95、磷-N-甲基-D-天门冬氨酸受体1、磷酸-钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ、磷酸蛋白激酶A Cβ亚基、蛋白激酶Cγ亚单位、磷酸化CREB和脑源性神经营养因子的表达.结论 AHS能明显改善学习记忆功能,其机制可能与降低脑组织Aβ的形成与沉积、提高突触可塑性相关蛋白的表达有关.
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抗阿尔茨海默病天然产物及其药理学研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD),即老年性痴呆,是一种与年龄高度相关,以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。目前临床上常用的抗AD药物有多奈哌齐、加兰他敏及美金刚等,但其只能够改善中轻度AD患者的症状,并不能预防、终止和逆转AD进程的发展。因此,寻找有效预防、改善和治疗AD的药物迫在眉睫。我国运用中药治疗AD的历史悠久,且中药资源丰富,因此从天然产物中筛选和开发疗效确切、安全无毒的防治AD的药物具有得天独厚的优势。众多学者已经从中药及其有效成分着手进行了广泛的研究。该文将对石杉碱甲、银杏叶提取物、左旋丁基苯酞、二苯乙烯苷、人参皂苷等天然产物在AD治疗中的应用及已经完成的临床前研究进行综述。
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高效液相色谱法测定蛇足石杉中石杉碱甲的含量
目的建立了蛇足石杉中石杉碱甲含量的测定方法并比较植物不同药用部位石杉碱甲的含量.方法采用DiamonsilTm C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇:0.08 mol·L-1醋酸铵缓冲液(40:60,pH=6.0),检测波长为308 nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为室温.结果石杉碱甲在5～100 mg·L-1浓度范围线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为98.10%,RSD为2.44%(n=5),对蛇足石杉不同药用部位的进行了石杉碱甲含量测定,结果表明,叶中石杉碱甲含量高,茎次之,根低.结论本法简便、准确、重复性好.石杉碱甲集中分布在植物的地上部分中.
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UFLC法测定蛇足石杉不同部位的石杉碱甲含量
石杉碱甲是20世纪80年代我国学者从蛇足石杉中分离得到的一种新型石松类生物碱,被广泛用于治疗阿尔茨海默症、重症肌无力,同时又能促智、提高青春期学生的学习记忆功能[1].目前测定蛇足石杉不同部位提取物中生物碱含量的方法主要为反相高效液相色谱法(RP-HPLC)[2],尚无超高效液相或超快速液相检测蛇足石杉中石杉碱甲含量的报道.超快速液相色谱(ultra fast liquid chromatography,UFLC)是一种新型液相色谱技术,被广泛应用于快速分析生物制品和中药材中目标化合物的分离[3].我们用岛津超快速液相色谱仪,通过选用低浓度的乙酸铵缓冲盐溶液作为流动相,以建立一种快速定量分析石杉碱甲含量的方法.
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顶空气相色谱法测定石杉碱甲中有机溶剂的残留量
目的 建立了顶空气相色谱法测定石杉碱甲中丙酮和三氯甲烷的残留量.方法 采用DB-624毛细管柱(30m×0.53 mm,3μm)；FID检测器；程序升温:起始温度60℃,保持3min,以60℃/min的速率升温至180℃,再保持5min；进样口温度:180℃；检测器温度250℃；结果 2种残留溶剂达到完全分离,在各自的浓度范围内具有良好的线性关系,两种溶剂各个浓度的平均回收率分别为96.9％和89.4％,检出限分别为0.025和0.11mg·L-1,定量限分别为0.075和0.32mg·L-1.结论 本方法简单,结果准确,可用于石杉碱甲残留溶剂的测定.
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石杉碱甲对AD小鼠学习记忆能力的改善
目的 进一步验证石杉碱甲对学习记忆能力的改善.方法 用D-半乳糖和亚硝酸钠建立的小鼠模型,通过跳台实验来检验小鼠的学习记忆能力的变化.结果 模型组与空白组相比学习记忆能力显著降低,而用药组与模型组相比,学习记忆能力大大恢复.
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中草药蛇足石杉的研究概况
蛇足石杉含有石杉碱甲,已被证实对老年性痴呆、重症肌无力和记忆力减退具有较好的治疗效果,但蛇足石杉资源匮乏,保护性研究显得十分紧迫.近年来,对蛇足石杉资源及其主要有效成分石杉碱甲药效学等方面的研究取得新的进展,为蛇足石杉永续开发提供依据.
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石杉碱甲多克隆抗体纯化方法的研究
目的：根据石杉碱甲多克隆抗体的性质，采用不同的方法对其进行纯化及性质鉴定。方法本实验主要采用硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵沉淀法和Protein A亲和层析法分别对石杉碱甲多克隆抗体进行纯化，并分别对纯化后的抗体纯度、蛋白量和效价进行检测。结果电泳结果示Protein A亲和层析法纯化后仅出现两条色带，无明显杂带，纯度高。饱和硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵沉淀法和Protein A亲和层析法纯化后的抗体蛋白含量分别为4.67mg· mL －1、6.89mg· mL－1和13.44mg· mL －1。 Protein A亲和层析法纯化后抗体的效价大于1∶256000，其性质未发生变化。结论相较于硫酸铵沉淀法、辛酸-硫酸铵沉淀法，Protein A亲和层析法纯化石杉碱甲多克隆抗体的纯度、蛋白含量、抗体效价更高，纯化效果更优。
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原生质体诱变选育石杉碱甲高产菌株
目的 利用原生质体诱变方法从原始菌株炭团菌NX9 选育石杉碱甲高生产菌株. 方法 对菌株 NX9 进行原生质体紫外诱变,筛选到的正突变菌株进行原生质体NTG进行诱变;结果 通过对菌株NX9进行原生质体紫外诱变筛选到正突变株 U50 ,石杉碱甲产量达到19.89μg· L -1 ,比出发菌株高16.7倍. 对U50 进行原生质体NTG诱变,选育到正突变菌株N65,产量达32.56μg· L -1 ,比出发菌株U50 高出0.64 倍,比NX9的产量提高了28.07倍,经5次传代后,遗传稳定性良好,可供进一步研究和育种.
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闽浙马尾杉内生真菌分离纯化及产石杉碱甲菌株LC-MS／MS筛选
目的：通过组织块分离法从闽浙马尾杉中分离内生真菌，利用LC-MS/MS筛选产石杉碱甲的内生真菌。方法将采集到的新鲜植物闽浙马尾杉进行表面灭菌消毒及将植物的根际土壤稀释，接种于含有3％的链霉素的PDA平板培养基上，挑取尖端菌丝进行分离、纯化和保藏；通过石杉碱甲菌株LC-MS/MS法对分离到的内生真菌进行快速的筛选，筛选出产石杉碱甲的内生真菌。结论通过组织块及稀释平板法从闽浙马尾杉植物中分离到306株内生真菌，其中根（G）8株，茎（J）65株，叶（Y）173株，茎尖（M）60株。通过LC-MS/MS筛选法共筛选到产石杉碱甲菌株15株，其中根（G）0株，茎（J）2株，叶（Y）11株，茎尖（M）2株。
关键词： 闽浙马尾杉 石杉碱甲 内生真菌 LC-MS/MS筛选
