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石杉碱甲的分离纯化工艺
目的:研究一种石杉碱甲的工业化分离纯化工艺,以达到批量生产之目的.方法:通过对石杉碱甲理化性质的分析,以中性氧化铝为填料对石杉碱甲粗品进行柱色谱分离纯化,采用薄层色谱-柱色谱考察了各因素的影响,以石杉碱甲回收率和含量为考察指标,寻找佳工艺参数.结果:柱色谱佳分离条件为:洗脱剂体系为氯仿-甲醇(v/v)=100∶5,100∶10,流速为3mL·min-1,柱床体积比为25∶1,进料量为10mL,柱温为室温,在此条件下石杉碱甲回收率达97.6％,含量达99.2％.结论:该工艺条件能够在简单的条件下实现石杉碱甲批量分离纯化,具有工业应用价值.
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辐射灭菌对石杉碱甲注射微球药剂学性质的影响
目的:考察辐射剂量对石杉碱甲药剂学性质的影响.方法:石杉碱甲微球采用~(60)Co照射γ射线灭菌,采用高效液相色谱测定石杉碱甲微球的含量,通过透析释药法测定微球的体外释放度.采用扫描电镜观察微球的外观形态.结果:甘露醇按照其和微球0.5:1的比例加入,可以防止微球黏连,10,15,20 kGy的辐射剂量对微球的外观、含量及释放度无明显影响.结论:石杉碱甲微球采用辐射灭菌的方法可行.
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石杉碱甲对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力和胞浆钙离子的影响
目的:探讨石杉碱甲对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力和胞浆钙离子的影响.方法:连续皮下注射D-半乳糖(1 000 mg.kg-1·d-1)8周制备小鼠衰老模型,并于第3周开始灌胃给予石杉碱甲(0.8,0.4,0.2 mg·kg-1)和维生素E(100mg.kg-1)处理;8周后采用水迷宫测定小鼠学习记忆能力,并取脑组织测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,测定一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性及Fura-2/AM负载法测定胞浆钙离子浓度.结果:石杉碱甲能明显改善D-半乳糖诱致衰老小鼠学习记忆障碍,并明显降低脑组织NO含量,抑制NOS活性提高GSH-Px和SDH活性,降低胞浆钙离子水平(P＜0.01,P＜0.05).结论:石杉碱甲具有提高衰老小鼠脑抗氧化能力和调节胞浆钙离子稳态的作用,可能是其改善学习记忆障碍和脑神经细胞保护作用的基础.
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石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马NMDA受体及mRNA表达的影响
目的:观测石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经元N-甲基D-天门冬氨酸(NMDA)受体免疫组化和原位杂交变化的影响,探讨石杉碱甲干预作用的机制.方法:双侧颈总动脉线结,反复缺血-再灌注法制备模型,药物组用石杉碱甲溶液灌胃,跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,采用免疫组化和原位杂交技术观测小鼠海马神经元NMDA受体及其mRNA的表达变化.结果:在跳台试验中,模型组小鼠学习阶段的反应时间延长、错误次数增加,记忆阶段的潜伏时间缩短、错误次数增加;水迷宫试验中,其学习阶段的游全程时间延长和错误次数增加,记忆阶段的游全程时间延长和错误次数增加(与假手术组相比,P＜0.01).石杉碱甲明显改善了模型小鼠上述学习、记忆成绩(P＜0.01).同时,药物组海马的NMDA受体及其mRNA表达也较模型组的表达明显增高(P＜0.01),且海马两者的表达在药物组与假手术组间差异无显著性.结论:石杉碱甲改善血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩与其恢复海马低水平的NMDA受体及其mRNA有关.
关键词： 血管性痴呆 N-甲基D-天门冬氨酸 石杉碱甲 免疫组化 原位杂交 -
石杉碱甲乳酸-羟基醋酸共聚物微球的加速释放度试验研究
目的:建立石杉碱甲微球的加速释放度试验方法.方法:通过考察温度和释放介质的pH对石杉碱甲微球释药速度的影响,确定体外加速释放的条件.通过相关性评价建立加速与长期释放度数据的回归方程.结果:加速释放度与长期释放度数据之间具有良好的非线性相关(,=0.994 8),可以通过加速释放度数据较好地预测长期释放度数据.结论:加速释放度试验可用于快速评价石杉碱甲微球的释药特性.
关键词： 石杉碱甲 微球 乳酸-羟基醋酸共聚物 体外释放度 加速试验 -
高效液相色谱法测定石杉碱甲微球在大鼠体内的血药浓度及药物残留量
目的:建立石杉碱甲微球大鼠体内血药浓度及注射部位药物残留量的测定方法.方法:采用碱化后有机溶剂提取的方法处理样本,运用高效液相色谱法进行测定.色谱柱为Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),血样测定的流动相为乙腈-0.2%三乙胺水溶液(20:100),肌肉匀浆液样品测定的流动相为乙腈-0.2%三乙胺水溶液(25:75),检测波长为310 nm.结果:血浆样品测定的线性范围为2.5～500 μg·L-1,低定量浓度为2.5μg·L-1.肌肉匀浆液样本测定的线性范围为1.008～201.6 mg·L-1,低定量浓度为1.008 mg·L-1.两种方法的相对回收率均在85%～115%范围内,RSD小于12%.结论:该法可用于石杉碱甲微球体内缓释效果的评价.
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多奈哌齐改善血管性痴呆患者的认知功能
目的:评价多奈哌齐对轻、中度血管性痴呆(VaD)患者认知功能的影响.方法:将66例VaD患者随机分为多奈哌齐组(35例)和石杉碱甲组(31例),治疗8周.采用简易精神状态量表(MMSE)、长谷川智力量表(HDS)、日常生活能力量表(ADL)、临床疗效总评量表(CGI)等评定疗效;用不良反应量表(TESS)及有关实验室检查评定不良反应.结果:治疗4,8周后,两组MMSE、HDS和ADL总分评定与疗前比较差异有显著性(P＜0.05),但两组间比较差异无显著(P＞0.05).临床总体有效率:多奈哌齐组有效率为65%,石杉碱甲组为61%,差异无显著性(P＞0.05),说明两药疗效相近.治疗期间两药不良反应均轻微,患者易耐受.结论:多奈哌齐能改善轻、中度VaD患者的认知功能,且安全性高.
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高效液相色谱法测定石杉碱甲胶囊的含量及含量均匀度
目的:研究高效液相色谱法测定石杉碱甲的方法及条件.方法:色谱柱Alltima C18,流动相为甲醇-0.1 mol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 6.0)36:64,检测波长308 nm.结果:石杉碱甲在3.0～7.0 μg·ml-1范围内线性关系良好,其回归方程为Y=1 811.87X-234.90,r=0.999 9,平均回收率为99.9%.结论:本法快速,准确,重现性好.
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温阳益气化痰法联合石杉碱甲治疗老年痴呆肾虚痰瘀证的疗效观察
目的:探讨温阳益气化痰法联合石杉碱甲治疗肾虚痰瘀型老年痴呆的临床效果.方法:选择肾虚痰瘀型老年痴呆患者为本次研究对象,按照随机自愿的原则分为治疗组和对照组.两组均给予口服石杉碱甲,治疗组在此基础上给予口服自拟中药组方.经治疗后,观察两组患者治疗前后临床症状体征变化,评估患者治疗前后认知功能、痴呆严重程度以及日常生活自理能力改善状况.结果:治疗组治疗后总有效率为87.1％,对照组为71.0％,治疗组优于对照组(P＜0.05);治疗后,两组患者MMSE积分治疗后均有所升高(P＜0.05),在治疗后随访中,治疗组MMSE积分降低不明显(P＞0.05),而对照组出现显著降低(P＜0.05);组间不同时间点比较中,治疗组治疗后和随访中的MMSE积分均显著高于对照组(P＜0.05);两组治疗后ADL评分呈现升高(P＜0.05),治疗组治疗后ADL评分显著高于对照组(P＜0.05).结论:温阳益气化痰法联合石杉碱甲治疗老年痴呆能够有效改善患者精神行为症状,提高患者日常行为能力和认知功能.
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石杉碱甲及康复训练对帕金森病患者认知功能障碍的影响
目的通过对有高级认知功能障碍的帕金森病患者药物治疗,同时配合认知功能康复训练,在临床上探索有效改善帕金森病认知功能障碍的治疗方法.方法对2004年3月至2005年2月在昆明医学院就诊的帕金森病人66例,随机分为实验组和对照组,每组33人,实验组给予认知功能康复训练加石杉碱甲治疗;对照组给予认知功能康复训练.治疗前后两组各做一次事件相关电位检查(P300)及统一的帕金森病评分量表(UPDRS)、韦氏成人智力量表(WAIS-RC)和韦氏记忆量表(WMS)评定.结果实验组治疗前后潜伏期、记忆、总智商、言语智商和操作智商评分比较差异均有统计学意义;对照组人群除潜伏期N2Pz、N2Fz、P3Pz和N2Cz外,其余差异均有统计学意义.两组治疗前后评分差值结果比较,韦氏智商和UPDRS日常生活活动评分差值差异无统计学意义(P＞0.05),P300、记忆评分差异有统计学意义(P＜0.05).结论认知功能康复训练或认知功能康复训练配合石杉碱甲都有助于帕金森病患者认知功能损伤的恢复,两者配合使用效果更佳.
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石杉碱甲对D-半乳糖诱导老年性聋大鼠听觉功能的影响评估
目的 通过测试听性脑干反应和复合动作电位评估石杉碱甲对D-半乳糖致老年性聋大鼠听觉功能的改变.方法 出生后3～4W的Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,模型组用5％ D-半乳糖(200 mg/kg)行颈背部皮下连续注射8 W制备大鼠老年性聋模型；干预组用5％ D-半乳糖(200 mg/kg)和石杉碱甲(0.1 mg/kg)行大鼠颈背部皮下注射；空白组作为对照.用药前、后分别检测大鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)以检测听觉敏感性；复合动作电位(compound action potential,CAP)测试耳蜗输出幅度；以成对短声(pair clicks)为时间紧张性刺激,通过各CAP2/CAP2(20 ms)比值与短声间隔的关系函数反映耳蜗时间分辨能力.β-半乳糖苷酶染色下丘衰老细胞.结果 3组动物用药前后ABR阈值无明显改变(P＞0.05)；和模型组相比,干预组8kHz下80 dBSPL时ABRⅢ波潜伏期、I～V波间期缩短,提示听觉信号从外周到中枢的传入时间减少；以成对短声CAP响应所代表的耳蜗时间分辨力干预组高于模型组,但仍低于对照组；模型组下丘衰老细胞密度高,干预组次之,对照组少.结论 石杉碱甲可以提高D-半乳糖致老年性聋大鼠与言语识别相关的听觉处理能力,为临床寻找改善老年患者听觉功能药物提供实验支持.
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HPLC-MS -MS法测定人血浆中石杉碱甲的浓度及人体相对生物利用度研究
目的 建立人血浆中石杉碱甲浓度的HPLC-MS-MS测定法,研究2种石杉碱甲片在正常人体的相对生物利用度.方法 以盐酸伪麻黄碱为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取,汉邦 C18柱( 4.6 mm×150 mm, 5 μm)分离后,采用HPLC-MS-MS联用法检测,18名健康男性志愿者采用双周期随机交叉试验设计,分别单剂量口服石杉碱甲片(T或R)0.2 mg后测定两者的相对生物利用度.结果 石杉碱甲与内标分离度好,内源性杂质不干扰测定,在0.050 8～5.080 μg·L-1(r=0.999 8)石杉碱甲浓度与峰面积比的线性关系良好,定量限为0.050 8 μg·L-1,回收率为101.8%～109.8%(n=5),日内RSD为1.8%～3.9%(n=5);日间RSD为2.3%～8.7%(n=15).单次服用0.2 mg石杉碱甲片后T与R的AUC0～24分别为(16.35±3.42 )μg·h·L-1和(16.38±3.61)μg·h·L-1;AUC0～∞分别为(17.53±3.80)μg·h·L-1 和(17.70±3.97)μg·h·L-1;Cmax分别为(2.47±0.49) μg·L-1和(2.51±0.51)μg·L-1;tmax分别为(1.3±0.4)h和(1.2±0.3)h ;t1/2分别为(5.9±0.8)h和(6.2±0.7)h.与R相比,T的相对生物利用度为100.5%±10.1%.结论 该方法准确度高,灵敏度好,可用于石杉碱甲人体内过程研究.方差分析结果表明2种制剂的主要药动学参数之间无明显差异,双单侧t检验结果表明2种制剂为生物等效制剂.
关键词： 石杉碱甲 高效液相色谱质谱联用 相对生物利用度 -
正交试验法筛选石杉碱甲骨架片处方的研究
目的 优化石杉碱甲骨架片的处方.方法 以石杉碱甲骨架片的硬度、体外累积释放度为指标,采用3因素3水平正交设计法优化石杉碱甲骨架片的处方.结果 优化所得处方HPMCK15M用量为48%,PVPP用量为6%, CMCNa 用量为10%,硬度范围合适,体外溶出度符合缓释制剂要求.结论 该优化所得的石杉碱甲骨架片处方可行,合理稳定.
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影响石杉碱甲骨架片体外释放因素的研究
目的 自制石杉碱甲骨架缓释片(HA-MT),考察石杉碱甲骨架片中释放的体外释放特性.方法 考察通过释放度实验研究不同制片工艺、测定方法、释放介质的pH值、搅拌转速对骨架片释药的影响,并考察其释药机制.结果 制片方法、测定方法对释药行为影响不明显,但转速和溶出介质有明显影响.药物释放曲线符合HIGUCHI方程.结论 制备的HA-MT工艺简易,释药达到缓控释要求,释药机制为扩散和溶蚀机制协同作用.
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石杉碱甲大鼠在体肠吸收动力学研究
目的研究石杉碱甲在大鼠小肠及各肠段的吸收动力学特征.方法采用大鼠在体方式对石杉碱甲进行了大鼠小肠及各肠段的吸收动力学研究;采用HPLC法测定石杉碱甲在大鼠体内肠吸收循环液中的药物浓度;采用UV法测定循环液中酚红浓度.结果石杉碱甲在小肠中吸收较好且没有特定吸收部位,各肠段吸收速率按十二指肠、空肠、回肠、结肠依次为0.001 0、0.000 9、0.001 1、0.000 9 h-1.结论结肠的吸收速率常数与小肠段相近,药物在肠道的吸收呈现一级吸收动力学,吸收机制为被动吸收,提示适于制备日服一次(24 h)缓释给药制剂.
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薄层扫描法测定皱边石杉中石杉碱甲的含量
目的:采用薄层扫描法测定皱边石杉Huperzia crispata(Ching ex H. S. Kung)Ching中石杉碱甲的含量.方法:使用硅胶G薄层板,展开剂为氯仿-甲醇-氨水(6:1:0.1),0.1%高锰酸钾水溶液喷雾显色,于365 nm紫外光下检视,双波长锯齿扫描,检测波长301 nm,参比波长350 nm.结果:石杉碱甲的线性范围为0.63~1.89 μg,平均回收率99.14%,RSD=3.42%.结论:本方法简便、快速、准确,可用于石杉碱甲的含量测定及定性检测.
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千层塔的性状及组织显微鉴定
千层塔为石杉科石杉属植物蛇足石杉Huperzia serrata Thunb.(Trey.)的干燥全草,又名蛇足草、金不换、万年杉等,生于林荫湿地或沟谷石上,分布于东北、长江流域及华南、西南各地.民间全草治疗痈疖肿毒、毒蛇咬伤、烧伤烫伤等[1].据报道其中的石杉碱甲和乙具有很强的抑制胆碱酯酶的活性和提高学习记忆率,改善老年记忆功能的效果[2、3],临床表明该药物对记忆衰退、重症肌无力和多发梗死性痴呆均有显著疗效,是一种前景广阔的治疗老年痴呆症(AD)的临床有效药物.本文通过对千层塔的药材性状、显微特征等方面的生药学研究,以期为药材真伪鉴别、药物资源的开发利用提供科学依据.
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石杉碱甲的药理作用与临床研究进展
千层塔是我国沿用了上千年的中草药,其有效成分石杉碱甲具有增强记忆,抗老年性痴呆的作用.本文综述了石杉碱甲药理特点与临床研究进展.
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湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲分布及与LDC表达的关系
目的:测定湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量,分析石杉碱甲分布与赖氨酸脱羧酶基因(LDC)表达的关系.方法:采用HPLC测定蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量,HPLC条件:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.08 mol/L醋酸铵(32:68,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长为308nm.以肌动蛋白基因为内参物,通过半定量RT-PCR比较LDC在根、茎、叶中的表达量.结果:石杉碱甲在0.5～10.0 μg/mL线性关系良好,平均加样回收率为102％,RSD为0.32％;湘西蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量分别为(118.35 ±0.77) μg/g、(411.09±2.47) μg/g、(562.15±2.86) μg/g;半定量RT-PCR分析表明LDC在根、茎、叶中表达量无明显差异.结论:湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量差异显著;推测赖氨酸脱羧酶不是石杉碱甲生物合成中的关键酶.
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H2O2诱变蛇足石杉培养物的后代株系变化分析
目的: 探索H2O2胁迫诱导提高蛇足石杉叶状体积累石杉碱甲(huperzine A,HupA) 含量的作用.方法:对经H2O2诱变建立的蛇足石杉叶状体中筛选的13 个株系及出发株等14 份材料进行了相对增长率和HupA 含量比较及ISSR DNA 分子分析.结果: 3％ H2O2胁迫诱导处理16 min 的叶状体后代相对增长率和积累HupA 的含量与出发株差异显著(P<0. 05),变异叶状体株系SH042 相对增长率和积累HupA 含量大,分别为4 499. 28％和(261. 17±0. 19) μg/g DW,比出发株分别提高2. 35 和2. 43 倍; 20 个ISSR 随机引物中有9 个对14 份叶状体株系遗传分子显示了多态性,聚类分析可分为4 大类,说明诱变后代叶状体株系的DNA 分子存在显著差异.结论: 该研究结果表明H2O2用于诱导蛇足石杉培养物能提高HupA 含量和建立丰富的遗传资源.
