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Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究
目的:研究genistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探索使用genistein防治后发性白内障.方法:兔晶体上皮细胞培养,应用Casnetllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化;同位素掺入法检测genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化.结果:不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降,genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高,genistein对PKC活性无明显抑制作用,但可抑制bFGF诱导的PKC活性升高.结论:genistein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖.
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Genistein联合环孢素 A 对大鼠心脏移植排斥反应中 CXCR3表达的干预
目的：探讨Genistein联合环孢素A在大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应中对CXCR3的影响。方法：近交系Wistar大鼠为供者，SD大鼠为受者，行大鼠颈部心脏移植手术，移植后的大鼠随机分为3组，急性排斥反应( AR）组：心脏移植术后未采取任何治疗；环孢素A( CsA）组：术后接受CsA治疗；CsA+Genistein( C+G）组：术后接受CsA及Genistein的联合治疗。术后7 d，分别采集3组移植心脏，制备成组织切片，HE染色观察移植心脏的病理学改变，免疫组化及Western blot检测CXCR3受体的表达。结果：AR组CXCR3呈强阳性表达，C+G组炎性细胞浸润程度明显减轻，且CXCR3蛋白在心肌组织中呈低表达。结论：Genistein联合环孢素A能明显抑制大鼠心脏移植急性排斥反应中CXCR3的表达，减轻免疫排斥反应。
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三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞凋亡和功能的影响
目的 以APP695MT基因转染PC12细胞为细胞模型,研究三羟基异黄酮(GST)对模型细胞凋亡和功能的影响.方法 用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2 -EGFP/APP695 MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、APP695转染组、GST干预组.应用激光共聚焦显微技术检测PC12细胞凋亡率,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量.结果 APP695转染组与对照组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),CA分泌量明显降低(P＜0.01)；GST干预组与APP695转染组比较细胞凋亡率降低(P＜0.01),CA分泌量均明显增加(P＜0.01).结论 GST可降低A PP695 MT基因转染引起的PC12细胞凋亡率,同时也可提高CA的分泌量,对转染细胞有一定的保护作用,并能改善其生理功能.
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Genistein通过影响Ca2+/CaM/Cav1.2/CaMKⅡ信号通路抑制Aβ25-35诱导的海马神经元损伤
目的 探讨植物雌激素染料木素(Genistein,GST)对Aβ25-35引起海马神经元钙超载损伤的抑制作用及其机制.方法 本实验分为以下4组:正常对照组,A β 25-35组,Aβ25-35+Genistein组(Aβ25-35+GST组),Aβ25-35+ 17β-雌二醇组(Aβ25-35+E2组),通过MTT比色法测定细胞活性,选取Genistein的适浓度.采用Aβ25-35处理建立海马神经元损伤模型.利用Tuj1染色观察神经元生长状态,激光共聚焦扫描观察Genistein对[Ca2+]i的影响,通过Western blot技术检测CaM、Cav1.2、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达的变化.结果 0.3 μg/mlGenistein能明显抑制Aβ25-35引起细胞活性降低及[Ca2+]i增加,并能对抗Aβ25--5引起的CaM,Cav1.2蛋白水平增加及p-CaMKⅡ减少.结论 Genistein具有拮抗Aβ25-35所致海马神经元钙超载损伤的作用,其作用机制可能与Ca2 +/CaM/Cav1.2/CaMKⅡ信号通路有关,为Genistein进一步应用于临床治疗神经退变性疾病提供理论依据.
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大豆异黄酮及主要活性成分Genistein对大鼠卵巢LRH-1基因表达的影响
目的 观察大豆异黄酮(soy isoflavones,SI)及主要活性成分Genistein对初老大鼠卵巢及体外培养卵巢颗粒细胞中肝受体类似物-1(liver receptor homolog-1,LRH-1)基因表达的影响,初步探讨大豆异黄酮作用于卵巢的分子机制.方法 采用自然老化法建立围绝经期大鼠动物模型,分别给予低剂量(50mg/kg)、中剂量(158 mg/kg)、高剂量(500 mg/kg)的SI灌胃处理8 w.分别采用原位杂交和RT-PCR检测卵巢组织中LRH-1 mRNA的表达.采用大鼠孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)皮下注射法建立促卵泡发育模型,分离、培养颗粒细胞24 h后,给予大豆异黄酮主要活性成分Genistein (0、0.1、1、5、10、100 μmol/L)以及雌激素受体(estrogen receptor,ER)阻断剂ICI182、780(1μmol/L)继续处理细胞24 h,采用RT- PCR方法检测卵巢颗粒细胞中LRH-1 mRNA的表达情况.结果 各剂量SI处理组卵巢LRH-1 mRNA的表达(低剂量0.563±0.037,中剂量0.926±0.127和高剂量1.223±0.134),与围绝经期模型组(0.460±0.082)相比均显著增加(P＜0.05).1～10 μmol/L的Genistein作用卵巢颗粒细胞24 h,LRH-1 mRNA的表达(分别为0.844±0.042,0.879±0.056,0.882±0.079)与空白对照组(0.678±0.052)相比均增加,结果具有统计学意义(P＜0.05).ER阻断剂ICI182,780预处理细胞30 min后再给予Genistein继续处理细胞24 h后,发现1～10 μmol/L的Genistein上调LRH-1表达作用,并未受ER阻断剂的影响.结论 一定剂量的大豆异黄酮可明显上调衰老卵巢LRH-1 mRNA的表达,1～10 μmol/L的Genistein可上调体外培养大鼠卵巢颗粒细胞中LRH-1 mRNA的表达,可能并非通过经典ER介导的.
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Genistein对卵巢癌铂类耐药细胞株CP70增殖凋亡的影响及与细胞内ROS的相关性
目的:探讨Genistein对卵巢癌铂类耐药细胞CP70增殖、凋亡的影响及与细胞内活性氧水平的关系.方法:采用MTT法检测Genistein对CP70细胞增殖的影响；流式细胞仪分析不同药物处理后对细胞凋亡的影响,线粒体膜电位及细胞内ROS水平的变化情况.结果:Genistein对CP70细胞增殖表现出剂量和时间依赖性的抑制作用,并能诱导其凋亡；Genistein作用于CP70细胞后,可使其线粒体膜电位降低,并引发了细胞内ROS水平的显著升高；ROS抑制剂NAC预处理CP70细胞后,有效抑制了ROS的产生,并降低了细胞凋亡率,与未加NAC组相比差异有显著性(P＜0.05).结论:Genistein能抑制铂类耐药卵巢癌细胞CP70的增殖,并促进其凋亡,这与细胞内ROS水平的升高有关,可能是Genistein抗肿瘤诱导细胞凋亡的机制之一.
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Genistein抗肿瘤研究进展
Genistein是一种异黄酮类的植物雌激素,在体内可能通过抑制PTK活性而产生抗肿瘤作用.可与ATP竞争酪氨酸蛋白激酶上的结合位点,其特异性较强,对丝氨酸o和苏氨酸蛋白激酶无抑制作用,它在肿瘤的发生、发展阶段存在着多重抑制效应,其主要防癌机制为调节雌激素受体、增加抗氧化酶的活性、抑制热休克蛋白、诱导细胞分化、促进细胞凋亡、抑制细胞代谢关键酶活性、阻止某些因子的作用而抑制肿瘤细胞生长及抑制血管生成作用,与多种肿瘤发生的低风险有关.由于异黄酮是天然植物雌激素,并非真正意义上的雌激素,易于分解,不会在体内堆积.因此没有外源性雌激素的毒副作用是安全的.
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Genistein 对人卵巢癌细胞系3AO诱导内皮细胞迁移作用的研究
目的研究Genistein对人卵巢粘液性囊腺癌细胞系3AO诱导人内皮细胞系ECV-304迁移的作用,以探讨Genistein抑制血管生成作用的机理.方法采用微孔滤膜培养小室及双室联合细胞培养方法,观察在无血清培养条件下,3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移以及Genistein对3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移的影响;用免疫组化方法检测血管生长因子VEGF、bFGF及TGFβ-1蛋白的表达水平.结果3AO或其条件培养基对内皮细胞均有较强的趋化作用,Genistein不但对3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移有抑制,对ECV-304细胞本身的非定向性运动也有抑制,且这种作用呈Genistein剂量依赖性.20 μmol/L Genistein处理ECV-304细胞48 h后,VEGF、bFGF蛋白的表达水平降低,而TGFβ-1蛋白的表达水平升高.结论Genistein可明显抑制人卵巢粘液性囊腺癌细胞系3AO及其条件培养基对人内皮细胞系ECV-304细胞的诱导迁移作用;Genistein可能通过抑制促血管生成调节因子VEGF、bFGF的蛋白表达,增强血管生成的负性调节因子TGFβ-1的蛋白表达来抑制这种迁移诱导作用.这可能为其抗血管生成作用的机理之一.
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Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨
目的研究genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制.方法应用MTT法检测genistein对3AO的生长抑制作用,电镜观察凋亡细胞及凋亡小体,FCM分析细胞周期及凋亡率,免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达.结果 genistein可明显抑制3AO的增殖,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性.FCM分析发现genistein阻断3AO细胞生长于细胞周期的G2/M期,且24～72 h可见明显亚G1峰.电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征.免疫细胞化学结果显示,20μmol/L的genistein作用48h后,PCNA、bcl-2及Cyclin B1蛋白表达降低,而p21WAF1/CIP1和bax及CyclinB1蛋白表达增加.结论 genistein对卵巢癌细胞系3AO的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2/M期,且这种生长抑制作用与p21WAF1/CIP1蛋白水平表达增加及PCNA cy-lin B1蛋白表达降低有关,且可通过下调bcl-2蛋白表达,上调bax蛋白表达诱导卵巢癌细胞凋亡.
关键词： genistein 卵巢肿瘤 人卵巢瘤细胞系3AO 凋亡 -
Genistein对人尿道鳞癌细胞增殖和凋亡的影响
目的观察Genistein(GEN)对人尿道鳞癌细胞系HUS-98细胞增殖和凋亡的影响.方法MTT法检测细胞增殖,碘化丙啶(PI)和Annexin V-FITC双染色的流式细胞分析方法检测凋亡,台盼蓝拒染法测定淋巴细胞活力,免疫细胞化学检测雌激素受体(ER)蛋白的表达.结果低浓度(1×10-111～1×10-8mol/L)GEN促进HUS-98细胞的生长,处理3 d时,1×10-8mol/L组的细胞数比对照组的增加9%(P＜0.01);高浓度(1×10-7mol/L～5×10-4mol/L)GEN则浓度依赖性地引起HUS-98细胞数目逐日减少,但是除5×10-4mol/L外的其余浓度对正常淋巴细胞的生长没有影响.1×10-6mol/L GEN作用于HUS-98细胞24～48 h,凋亡细胞和坏死细胞的比率均增加,且有时间依赖性.HUS-98细胞表达ER蛋白.结论高浓度GEN具有抑制ER阳性的人尿道鳞癌细胞的生长和诱导凋亡及坏死的作用,为今后用于尿道鳞癌的治疗提供了实验依据.
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Genistein对腺样囊性癌细胞SACC-83中细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein诱导人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞凋亡的分子机制.方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用Western印迹技术检测bax、bcl-2和survivin蛋白的表达,并利用电泳凝胶成像分析软件,对其结果进行量化分析,采用SPSS11.5软件包对结果进行方差分析.结果:随着Genistein作用时间的延长和浓度的增加,bax蛋白的表达明显增加,bcl-2和survivin蛋白的表达明显减少.SACC-83细胞经220μmol、L Genistein作用3d,其bax蛋白的表达量是对照组的3.43倍(P＜0.01),而bcl-2和survivin蛋白的表达量分别是对照组的85%(P＜0.05)和35%(P＜0.01).结论:Genistein诱导SACC-83细胞凋亡,与其上调bax蛋白的表达,以及下调bcl-2和survivin蛋白的表达有关.
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Genistein对腺样囊性癌细胞SACC-83中细胞周期蛋白表达的影响
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein诱导人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞周期阻滞的分子机制.方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用Western印迹技术检测CyclinB1、Cdk1和CyclinD1、Cdk4蛋白的表达,并利用电泳凝胶成像分析软件,对其结果进行量化分析,采用SPSS11.5统计软件对结果进行方差分析.结果:随着Genistein作用时间的延长和浓度的增加,CyclinB1、Cdk1和CyclinD1、Cdk4蛋白的表达明显减少.SACC-83细胞经220μmo1/L Genistein作用3d,其CvclinB1、Cdk1和CyclinD1、Cdk4蛋白的表达量分别是对照组的58%、64%和46%、43%,差异非常显著(P＜0.01).结论:Genistein诱导SACC-83细胞周期阻滞于G2/M期,与其下调CyclinB1、Cdk1和CvclinD1、Cdk4蛋白的表达有关.
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Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用
目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein(4',5,7-三羟基异黄酮)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响.方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用MTT检测法计算细胞存活率,显微照相记录细胞生长状态及形态学的改变,流式细胞仪测定细胞周期,AnnexinV/PI法定量检测细胞凋亡,采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计方差分析.结果:Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间、达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;细胞形态发生改变,体积缩小,悬浮细胞逐渐增多;SACC-83细胞经220μmol/L Genistein作用3d,其生长受到明显抑制,阻断细胞生长于G2/M期,并明显诱导细胞凋亡(P＜0.01).结论:Genistein可以显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的生长,阻断细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡;提示酪氨酸蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展中起着重要作用.
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Genistein抑制肝细胞肝癌侵袭性生长的体外研究
目的研究genistein对肝癌细胞侵袭性生长的抑制作用及其作用机制.方法以体外培养的Bel 7402肝癌细胞株为研究对象,分别给予5靏/mL和10 靏/mL genistein干预,绘制细胞生长曲线,测定细胞活力和不同时间点细胞体外黏附能力变化,以Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力,同时行局部黏着斑激酶(FAK)表达、细胞DNA含量的双参数流式细胞仪检测和细胞凋亡的流式细胞仪检测.结果genistein显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的生长,其细胞活力显著下降,肿瘤细胞抑制率在G5组平均为26.71%,在G10组平均为42.64%;细胞体外黏附能力受到显著抑制,在genistein作用的前40 min内为明显,40 min时的黏附抑制率在G5组为43.52%,G10组为84.18%;细胞体外侵袭能力显著下降,G10组的侵袭抑制率可达28%;细胞凋亡显著增加;细胞周期分析显示S期细胞比率显著降低,细胞生长主要阻滞在G2/M期;信号转导分子FAK表达在G10组(12.89±0.36)%显著低于对照组(19.75±1.12)%(P＜0.05).结论genistein可以显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的体外侵袭性生长,FAK表达改变与genistein抑制作用的发挥相关.
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植物性雌激素genistein对哇巴因所致豚鼠乳头状肌迟后去极化及触发活动的效应
应用标准玻璃微电极技术, 研究了植物性雌激素genistein (GST) 对哇巴因所引起的豚鼠乳头状肌迟后去极化(DAD)及触发活动(TA)的效应.结果如下: (1)预先给予GST (10, 50, 100 μmol/L) 剂量依赖性地抑制哇巴因(1 μmol/L)所引起的豚鼠乳头状肌DAD及TA; (2)预先应用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME (1 mmol/L), 不影响GST (50 μmol/L)对DAD及TA的效应; (3)单独应用17β-雌二醇(E2, 5 μmol/L)或GST (10 μmol/L)对DAD及TA无明显影响, 而联合应用相同剂量的GST和E2 则产生明显抑制效应.以上结果提示, GST 可能通过抑制钙离子内流从而具有抗心律失常作用, 这对于心血管系统的保护有一定意义.
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Genistein对大鼠垂体前叶细胞增殖的抑制作用
应用细胞培养、 ～3H-TdR掺入、 流式细胞和电镜技术, 观察酪氨酸蛋白激酶(PTK)抑制剂genistein对正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20增殖的影响, 并探讨其可能的机制。结果显示: genistein作用48 h后可明显抑制正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20增殖。流式细胞仪检测发现, 50 和100 μmol/L genistein可将AtT-20细胞阻断于G0/G1期及G2/M期, 并出现凋亡峰, 凋亡率分别达19.9％和36.4%。电镜照片显示有凋亡细胞。结果表明, PTK抑制剂可以明显抑制正常大鼠垂体前叶细胞和垂体瘤细胞株AtT-20的增殖, 并诱导细胞凋亡, 说明PTK活性对细胞增殖和分化有重要作用。
关键词： genistein 垂体 增殖 凋亡 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 -
植物性雌激素genistein对豚鼠乳头肌的电生理效应
应用细胞内微电极技术,观察了genistein (GST)对豚鼠乳头肌的电生理效应.结果显示:(1) GST (10～100 μmol/L)浓度依赖地缩短正常乳头肌动作电位时程;(2)对部分去极化乳头肌,GST (50 μmol/L)除缩短动作电位时程外,还使动作电位幅值和超射值降低,零相大上升速度减慢;(3)预先应用一氧化氮合酶抑制剂L-NNA (5 mmol/L),不影响GST (50 μmol/L)的电生理效应;(4)单独应用17β-雌二醇(E2,5 μmol/L)或GST (10 μmol/L)时,动作电位各参数无明显变化,而预先应用同剂量的GST再加入E2,则动作电位时程缩短.结果提示,GST可能通过非NO途径抑制Ca2+内流,从而影响豚鼠乳头肌电生理效应,并与E2有加强或协同效应.
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Genistein对高钾和化学缺氧所致人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用
目的:研究Genistein(gen)对高钾和化学缺氧所致人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞损伤的保护作用.方法:采用体外培养人RPE细胞,MTT法测定细胞存活率以及在倒置相差显微镜下观察细胞形态改变.结果:200mmol/LKCl作用12 h可降低细胞存活率至(43.97±3.43)%,gen 50、100、200μmol/L可明显提高细胞存活率且呈浓度依赖性.相差显微镜观察细胞形态发现,200mmol/L KCl作用2 h细胞膜开始皱缩,4 h胞膜皱缩更加明显,胞核也开始浓缩,8 h后仅见细胞核和断裂呈絮状的细胞膜,12 h仅可见固缩的细胞核,而200μmol/L gen可以减轻细胞损伤,4 h后方见细胞膜开始皱缩;CoCl2损伤模型中,500μmol/L CoCl2作用12 h可降低细胞存活率至(57.81±17.19)%,gen 50、100、200μmol/L时也可浓度依赖性升高细胞存活率.结论:Gen对高钾和化学缺氧所致人RPE细胞损伤具有保护作用.
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缺血早期Genistein对海马CA1区神经元保护作用机制的研究
目的 探讨缺血早期Genistein对脑缺血/再灌注后大鼠海马CA1区神经元的保护作用及其可能的机制.方法 采用四动脉结扎建立大鼠全脑缺血模型.实验动物随机分为假手术组、缺血/再灌注组、溶剂对照组、Genistein处理组.缺血5 min时,溶剂对照组、Genistein处理组分别尾静脉注射二甲基亚砜(l ml/kg)和Genistein(1 mg/kg).Western blot和免疫荧光法检测大鼠海马CA1区HAX-1蛋白的表达,焦油紫染色法观察海马CA1区神经元的存活情况.结果 与对照组比较,Genistein处理组在再灌注3h时HAX-1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),免疫荧光实验结果与此一致.焦油紫染色结果显示,Genistein处理组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加(P＜0.05).结论 缺血早期Genistein对脑缺血造成的神经元损伤有明显的保护作用,这一作用可能是通过增加HAX-1蛋白表达水平来实现的.
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酪氨酸激酶抑制剂对hTrp3蛋白介导的α1B-AR引起的Ca2+内流的影响
目的探讨Trp3(transient receptor potential 3)蛋白是否参与α1B-AR引起的Ca2+内流以及酪氨酸激酶对其调控作用.方法采用脂质体转染,将hTrp3 cDNA分别转染到HEK293细胞和已有α1B受体稳定表达的HEK293细胞;Western blot方法检测Trp3蛋白表达情况;Fura-2/AM荧光分光光度法,测定胞浆游离Ca2+浓度.结果 HEK293细胞上可检测到hTrp3的内源性表达,转染后其表达增加.α1B-HEK293细胞转染hTrp3 cDNA后, α1B-AR引起的Ca2+内流显著增加(P<0.01);转染hTrp3 cDNA对thapsigargin诱导的Ca2+内流无作用.5～30 μmolL-1 genistein 对转染细胞α1B-AR诱发的Ca2+内流有抑制作用,大抑制率达(75.2±12.6)%.结论 Trp3 cDNA转染可能主要通过非CRAC(calcium release activated calcium)途径增加α1B-AR引起的Ca2+内流,这一过程很大程度上依赖酪氨酸激酶的调控.
关键词： α1B-AR 受体操纵性Ca2+通道 TRP 酪氨酸激酶 genistein
