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RP-HPLC法测定鸦胆子油中油酸和亚油酸的含量
目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定鸦胆子油中油酸和亚油酸含量的方法.方法:以ω-溴苯乙酮为衍生化试剂、碳酸钾为碱、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂进行提取分离,得到衍生化的脂肪酸.色谱柱为Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-水(30:20:50),检测波长为242 nm.结果:油酸和亚油酸的检测浓度分别在O.025～1.0、0.1～0.8 mg·mL~(-1)范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r分别为0.999 6、0.999 0);平均回收率分别为98.54%、98.50%,RSD分别为1.81%、1.90%(n均为6).结论:本方法准确、专属性强,可用于鸦胆子油的质量控制.
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七叶皂苷钠对急性肺损伤模型大鼠的保护作用
目的:研究七叶皂苷钠对急性肺损伤模型大鼠的保护作用.方法:45只SD大鼠随机均分为正常对照(等容生理盐水)组、模型(等容生理盐水)组、七叶皂苷钠(5 mg/kg)组.大鼠尾静脉缓慢注射油酸(0.1 ml/kg)以复制急性肺损伤模型,模型复制30 min后尾静脉给药.光镜下观察大鼠肺组织病理切片;称定大鼠肺湿质量、干质量,并计算肺湿/干质量比(W/D);ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;Western blot法检测大鼠肺组织水通道蛋白(AQP)1的表达.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织中肺泡腔内炎症细胞渗出增加,W/D升高,TNF-α含量增加,AQP1蛋白表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,七叶皂苷钠组大鼠肺组织水肿程度明显改善,W/D降低,TNF-α含量减少,AQP1蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:七叶皂苷钠可减轻油酸致大鼠急性肺损伤程度,其机制可能与降低W/D、减少TNF-α含量、下调AQP1蛋白表达有关.
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甲基尿石素A对油酸诱导的Huh-7细胞脂质累积的改善作用及其机制研究
目的:研究甲基尿石素A对油酸诱导的人肝癌Huh-7细胞脂质累积的改善作用及机制.方法:采用油酸诱导建立细胞脂质累积模型.取Huh-7细胞,分为对照组(培养基)和模型组(1 mmol/L油酸)、低剂量药物组(1 mmol/L油酸+10μmol/L甲基尿石素A)和高剂量药物组(1 mmol/L油酸+20μmol/L甲基尿石素A),采用油红O染色法观察细胞中脂质累积情况;采用三酰甘油(TG)酶法测定细胞内TG含量,采用聚合酶链式反应(PCR)法检测细胞中脂肪酸合成酶(FASN)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)、过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPAR-α)、PPAR-γ的mRNA表达水平;采用Western blotting法检测细胞中FASN的蛋白表达水平.结果:采用油酸诱导后,细胞膜周围出现大量脂滴累积;细胞内脂质及TG含量均显著升高,FASN、SREBP-1、PPAR-γ的mRNA表达水平及FASN的蛋白表达水平均显著升高,PPAR-α的mRNA表达水平显著降低(P<0.01).采用甲基尿石素A干预后,细胞膜周围的脂滴明显减少;细胞中脂质及TG含量均显著降低,FASN、SREBP-1、PPAR-γ的mRNA表达水平及FASN的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01).结论:甲基尿石素A对油酸诱导的Huh-7细胞脂肪累积有一定的改善作用,其机制可能与下调FASN、SREBP-1、PPAR-γ等相关因子的表达,抑制脂肪酸从头合成、促进脂质代谢有关.
关键词： 甲基尿石素A 油酸 人肝癌Huh-7细胞 脂质累积 机制 -
毛细管GC法同时测定鸦胆子油乳注射液中4种脂肪酸的含量
目的:建立同时测定鸦胆子油乳注射液中棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸含量的方法.方法:采用毛细管气相色谱法.色谱柱为DB-WAX弹性石英毛细管柱,检测器为氢火焰离子化检测器(FID),柱温为200℃恒温,保持11 min,进样口温度为250℃,检测器温度为250℃,流速为1.0 mL·min-1,分流比为20∶1,内标物为苯甲酸苯酯.结果:棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸检测浓度分别在0.084～0.839 mg·mL-1(r=0.999 6)、0.056～0.560 mg· mL-1 (r=0.999 7)、0.731～7.31 mg·mL-1(r=0.999 2)、0.241～2.41 mg·mL-1(r=0.999 1)范围内与内标峰面积积分值线性关系良好；各成分的平均加样回收率(n=9)分别为98.6％、97.8％、97.9％、99.5％.结论:该方法快速、准确、重复性好,可为鸦胆子油乳注射液的质量控制提供参考.
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气相色谱-质谱联用技术分析3种耳蕨根脂溶性成分
目的 研究革叶耳蕨、黑鳞耳蕨和三叉耳蕨根的脂溶性成分.方法 用索氏提取法提取3种耳蕨根的脂溶性成分,甲酯化处理后,采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS法)对3种蕨类根中脂溶性成分进行分析和鉴定.结果 3种耳蕨根主要的脂肪酸成分一致,有显著差异的成分是甾醇类化合物.结论 3种耳蕨根均具有药用价值.
关键词： 脂肪酸 气相色谱-质谱联用技术 油酸 亚油酸 -
水通道蛋白9在培养肝细胞脂肪变性模型中的表达及意义
目的:探讨油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型中水通道蛋白9(Aquaporin-9,AQP9)的表达及意义.方法:用油酸诱导正常肝细胞株L-02建立肝细胞脂肪变模型.采用油红O染色观察细胞内的脂滴,并检测细胞内甘油三脂,游离脂肪酸.甘油含量,RT-PCR法和Western blotting法分别检测AQP9 mRNA和蛋白的表达.结果:油红O染色显示24h开始出现脂肪变性,72h脂肪变性重;模型组TG、FFA、甘油含量均在各时相点较对照组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01);模型组AQP9 mRNA的表达上调,于24h开始增高,72h表达强,与对照组相比差异有统计学意义(P
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Beagle犬急性呼吸窘迫综合征模型的建立
目的:探讨用油酸建立Beagle犬急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型的可行性、稳定性.方法:25只Beagle犬麻醉保定后,通过颈静脉,按0.25±0.03ml/kg缓慢注射油酸,连续监测肺气体交换指标、氧代谢、组织病理学和胸片的改变,以及达到ARDS的诊断标准后各项指标的稳定性.结果:颈静脉泵入油酸后4.16±0.92h,25只Beagle犬达到ARDS诊断标准,其动脉血PaCO227.98±8.25mmHg、PaO2 65.40±11.48mmHg、PaO2/FiO2 182.3±29.6,经呼吸机机械通气治疗,PaO2/FiO2≤200.光镜下见肺间质及肺泡水肿、出血、萎陷和透明膜形成,同时伴炎症细胞浸润.胸片见双侧肺部有浓密或磨玻璃样阴影.结论:通过颈静脉注射油酸,可快速复制血流动力学、肺机械力学、组织病理学改变等均稳定的Beagle犬ARDS动物模型.
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尾加压素Ⅱ与中介素在牛磺酸减轻油酸所致大鼠肺损伤中的作用
目的 研究牛磺酸对油酸所致急性肺损伤大鼠的干预作用及其通过影响尾加压素Ⅱ(UⅡ)及中介素(intermedin,IMD)合成与分泌发挥肺保护作用的机制.方法 采用油酸性急性肺损伤大鼠模型.动物分为3组,对照组(C组)、油酸损伤组(A组)、牛磺酸治疗组(T组),分别于0、6、12、24 h4个时间抽动脉血2 mL并取肺泡灌洗液(BALF),测动脉血氧分压[p(O2)],血浆及BALF中UⅡ、IMD浓度,测定肺湿干质量比(W/D)并进行统计学分析；HE染色、免疫组化检查肺组织中UⅡ与IMD表达水平；电镜观察肺组织超微结构.结果 T组p(O2)在6、12、24h时高于A组(P＜0.05)；A组肺组织W/D在0h和6h高于T组(P＜0.05)；A组血浆UⅡ在24h高于T组(P＜0.05)；A、T组BALF UⅡ在0、6h差异显著(P＜0.05),0h时T组高于A组(P＜0.05),6h时A组高于T组(P＜0.05)；A组血浆IMD在0h时高于T组(P＜0.05).光镜观察:T组肺组织损伤减轻.免疫组化染色结果显示各组大鼠支气管黏膜上皮细胞、平滑肌细胞,肺内血管内皮细胞、平滑肌细胞细胞膜及细胞质均有UⅡ与IMD阳性表达,A组与T组间表达无明显差异.电镜观察:T组较A组损伤减轻,基底膜完整,未见明显胶原增生.结论 牛磺酸可减轻油酸致大鼠急性肺损伤,其机制可能与抑制UⅡ表达,减轻毛细血管基底膜损伤后肺泡渗出有关.
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肺上皮屏障在油酸致肺损伤后肺水肿发生中的作用
目的观察大鼠油酸型肺损伤时肺泡上皮通透性和肺泡上皮液体清除能力的变化,旨在阐明肺泡上皮屏障功能在渗透性肺水肿发生中的作用.方法Wistar大鼠35只,随机分为正常对照组和油酸致伤组.经股静脉注入油酸0.25 ml/kg复制急性肺损伤模型,分别于伤后3、6、12、24 h测定肺泡上皮通透性(AEP)、肺泡内液体清除率(ALCR)、总肺水量(TLW)和肺血管外肺水量(EVLW).结果静注油酸后,大鼠AEP进行性增高,ALCR呈现逐渐下降趋势;同时TLW及EVLW逐渐增加.上述指标均于24h时相点改变为显著.伤后24 h,AEP较对照组增高68.7%,TLW和EVLW分别增加44.6%和92.0%,ALCR降低49.4%.结论油酸致伤后,肺泡上皮屏障功能障碍与肺泡水肿形成密切相关,详细机制有待于进一步研究.
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油酸/脂多糖致伤老年大鼠MODS的Toll样受体4 mRNA表达变化及意义
目的观察油酸/脂多糖(OA/LPS)致伤的老年大鼠多器官功能障碍综合征(MODSE)主要脏器组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达变化,探讨TLR4在MODSE发生中的作用.方法80只SD大鼠分为老年组及青年组,予以油酸(OA,0.25ml/kg)和脂多糖(LPS,3.5 mg/kg)分次静脉注射(间隔4 h),建立二次打击MODSE和青年MODS模型.观察对照组及伤后2、6、24h,重要器官(肺、心、肝、肾)病理及功能的变化,分别检测肺、心、肝和肾组织中TLR4 mRNA表达变化.结果OA/LPS致伤后,肺脏损害出现早,PaO2于2 h降至低值,而心、肝、肾功能损害指标于6 h达峰值.在同一时相点,老年鼠脏器损害重于青年鼠(P＜0.05,P＜0.01).致伤后肺、心、肝和肾组织中TLR4mRNA表达均显著升高(P＜0.05,P＜0.01);其中以肺组织中高,升高幅度大,于2 h达峰值;心、肝、肾组织中于6 h达峰值.在相同时相点老年鼠各组织中TLR4 mRNA表达高于青年鼠(P＜0.05,P＜0.01).结论油酸+脂多糖所致老年鼠多器官功能障碍重于青年鼠,以肺损伤出现早,损伤重.致伤后大鼠肺、心、肝、肾组织中TLR4 mRNA表达升高,老年组高于青年组,以肺组织中高,升高幅度大,在MODSE发病机制中起重要作用,可能是MODSE发生过程中肺脏先且严重受损的原因之一.
关键词： 多器官功能障碍综合征 老年大鼠 油酸 脂多糖 Toll样受体4 -
油酸/脂多糖致伤老年大鼠多器官功能障碍综合征脏器损害规律及TNF-α作用的研究
目的观察油酸/脂多糖致老年大鼠多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome in the elderly rats, MODSE)脏器损伤的规律,探讨肺损伤在这一过程中的作用,以及TNF-α在MODSE发生、发展中的作用.方法 80只SD大鼠(20月龄和3月龄各40只)分为老年组及青年组,予油酸(OA,0.25 ml/kg)和脂多糖(LPS,3.5 mg/kg)分次静脉注射(间隔4 h),建立二次打击MODSE和青年MODS(MODSY)模型.观察对照组及伤后2、6、24 h,重要器官(肺、心、肝、肾)病理及功能的变化,同时检测血清及肺、心、肝和肾组织中TNF-α含量.结果相同剂量的OA+LPS均能导致青年及老年鼠发生MODS.OA+LPS致伤后2 h,老年组和青年组PaO2即显著降低[分别为(67.5±8.66)、(59.3±7.41) mmHg,P<0.01],提示肺脏损害出现早、程度重.伤后6 h,心、肝、肾生化指标达峰值(P<0.05),且老年组脏器损害较同时相点的青年组明显为重(P<0.05).伤后2 h,血清及肺、心、肝和肾组织中TNF-α含量即达峰值,且持续高于正常对照组(P<0.05),其中以肺脏中TNF-α升高幅度大.老年组TNF-α含量均显著高于同时相点的青年组(P<0.05).结论油酸+脂多糖所致老年鼠多器官功能障碍重于青年鼠,其中以肺损伤出现早、程度重.致伤早期肺组织TNF-α含量的迅速升高在MODSE的发病机制中可能起重要作用.
关键词： 多器官功能障碍综合征 肿瘤坏死因子 油酸 脂多糖 -
TRH与HSAD用对高原失血性休克合并肺水肿大鼠的治疗作用
目的研究促甲状腺素释放激素(thyrotropin-releasing hormone, TRH)与高渗氯化钠-醋酸钠-右旋糖酐40(hypertonic sodium acetate /dextran 40, HSAD)伍用对急进高原失血性休克合并肺水肿大鼠的治疗作用.方法实验在海拔 3 760 m的西藏拉萨市进行,急进高原大鼠49只,从股动脉放血至50 mmHg,静脉注射5 μl/kg油酸制造肺水肿,维持该血压1 h,复制失血性休克合并肺水肿模型.实验分为正常对照组(不放血、不给油酸)、单纯休克组、失血性休克合并肺水肿对照组、乳酸林格(4 ml/kg, LR)对照组、TRH(5 mg/kg)组,HSAD(4 ml/kg)单用组和TRH与HSAD合用组,每组7只动物.观察给药后15、30、60、120 min的血流动力学指标变化,30 min和120 min的血气指标变化和120 min肺脑含水量变化.结果 TRH(5 mg/kg)与HSAD(4 ml/kg)单用或伍用,给药后MAP升高,LVSP、±dp/dtmax改善,酸碱平衡紊乱减轻,肺湿干质量比减少,其中两药伍用疗效在众多方面都比单独给药为强.结论 TRH与HSAD单用及伍用对高原失血性休克合并肺水肿大鼠有良好的抗休克及减轻肺水肿的作用,其中两药伍用疗效更优.
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油酸-内毒素序贯致伤大鼠血浆和肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化
目的探讨促炎症细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平的变化,在全身炎症反应和急性肺损伤中的作用.方法采用油酸加内毒素脂多糖(LPS)序贯致伤大鼠,在油酸致伤后1、4、12和24h实施小剂量LPS第2次致伤,收集血浆和肺泡灌洗液,采用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量.以单油酸致伤和单小剂量LPS致伤作为对照组进行比较分析.结果 TNF-α和IL-1β在油酸致伤4 h LPS第2次致伤后水平高,IL-6的高水平在油酸12 h加LPS致伤组;2次序贯致伤后IL-1β水平变化大,增高显著,血浆浓度达到(1 526±39.69)pg/ml,肺泡灌洗液内浓度为(840.4±95.29)pg/ml.结合肺组织病理学研究,肺组织损伤严重大鼠,血浆和肺泡灌洗液TNC-α、IL-1β和IL-6水平高.结论 TNF-α和IL-1β是早期释放的促炎症细胞因子,其中IL-1β的血浆和肺泡灌洗液中水平高,它可能在全身炎症反应发生、发展和急性肺损伤中起非常重要的作用.肺组织损伤程度与这些促炎症细胞因子水平有密切关系.
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油酸和内毒素两次打击大鼠急性肺损伤动物模型研究
目的采用油酸和内毒素先后两次致伤大鼠,建立两次打击急性肺损伤动物模型.方法油酸(0.2 ml/kg)经尾静脉注入,伤后1、4、12和24 h给予小剂量大肠杆菌脂多糖(LPS,2 mg/kg)再次打击.结合动脉血气分析、外周血白细胞计数与分类变化及肺组织病理观察,评估两次打击大鼠急性肺损伤模型.结果油酸致伤4 h加LPS 2次打击大鼠,PaO2降低、外周血白细胞数增多和肺组织损伤严重,与对照组比较相差显著.结论油酸加LPS两次打击大鼠急性肺损伤模型,能较好地反映油酸致伤后第二次小剂量内毒素打击引发严重肺损伤的病理变化.
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油酸-内毒素序贯致伤引起大鼠急性肺损伤的特点
目的通过复制油酸-内毒素(OA-LPS)介导的大鼠急性肺损伤(ALI)模型并观察大鼠血浆IL-13含量等变化,探讨序贯致伤所引起的急性肺损伤特点.方法采用OA-LPS序贯致伤Wistar大鼠,观察伤后大鼠PaO2、肺含水量、血浆IL-13含量及病理学的变化.结果 OA-LPS组大鼠呼吸窘迫,PaO2早期低于8 kPa,死亡率升高,肺含水量显著增加,肺水肿、炎细胞浸润等病变严重,伴透明膜形成,血浆IL-13含量显著升高;尤其在间隔4 h两次致伤以后,上述各指标变化大.结论 OA-LPS序贯致伤大鼠,可以介导严重的ALI/ARDS,即在第一次致伤后,给予第二次低剂量致伤,可以引发ARDS,与机体抗炎细胞因子水平异常升高可能有关;并且,在两次致伤之间还存在一个"相对敏感期".
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辣椒素对体外肝细胞脂质代谢的影响研究
目的 探讨辣椒素对脂肪变肝细胞内脂质沉积的影响及自噬表达情况,为脂肪性肝病防治的研究提供新的思路和靶点.方法 用油酸(40 μg/mL)诱导肝原代细胞LO2细胞株建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型.实验分为空白对照组、油酸组、辣椒素组[油酸+辣椒素(100 μmol/L)].油红O染色和三酰甘油试剂盒检测肝细胞内脂肪变程度;Western blot检测自噬体标记分子p62和LC3的表达水平并计算LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值.结果 40 μg/mL油酸处理LO2细胞24h后,油红O染色观察,油酸组肝细胞中可见大小不等的橘红色脂滴.而空白对照组无明显橘红色脂滴形成,油酸在体外成功建立NAFLD模型.与油酸组相比,辣椒素组肝细胞内三酰甘油水平显著降低(P＜0.05),脂滴明显减少,p62蛋白水平明显降低(P＜0.05),而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显上调(P＜0.05).结论 在体外利用油酸诱导LO2细胞株建立NAFLD模型,辣椒素刺激NAFLD细胞,上调NAFLD细胞自噬水平,减少细胞内脂质沉积,但具体机制还需进一步研究.
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急性肺损伤大鼠肺泡上皮通透性的变化及特普他林对其的影响
目的观察油酸肺损伤大鼠肺泡上皮细胞通透性的变化及特普他林的防治作用. 方法常规方法复制大鼠油酸肺损伤模型.随机将动物分为正常对照组、油酸致伤组和特普他林组.特普他林组动物致伤后经气管注入特普他林溶液(0.1mM,5ml/kg).分别于伤后12h和24h取材采用同位素示踪法测定肺泡上皮通透性(AEP)、改良Noble氏法测定总肺水量(TLW)和肺血管外肺水量(EVLW)、放射免疫分析法测定肺组织cAMP含量.结果静注油酸后,大鼠AEP进行性增高,TLW及EVLW逐渐增加,肺组织cAMP含量呈现逐渐下降趋势.伤后动物给予特普他林治疗后,能明显降低AEP,减少肺组织含水量,升高肺cAMP水平.结论油酸致伤后大鼠肺泡上皮通透性明显增高;特普他林对伤后肺泡上皮通透性增加有显著的抑制作用,并可减轻肺水肿,其机制与增加肺组织cAMP含量有关.
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SCAP在培养肝细胞脂肪变性模型中的表达及意义
目的 探讨油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(srebp cleavage activating protein, SCAP)的表达及意义.方法 以正常肝细胞株L-02进行细胞培养,用油酸诱导建立肝细胞脂肪变性模型.采用油红O染色观察细胞内的脂滴,并检测细胞内甘油三酯含量,RT-PCR法检测SCAP mRNA的表达,Weston blot检测SCAP蛋白的表达.结果 油红O染色显示24h开始出现脂肪变性,120h脂肪变性重;模型组肝细胞内甘油三酯(TG)含量在各时相点较对照组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01),120h增高明显;模型组SCAP mRNA的表达上调,于24h开始增高,72h表达强,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);SCAP蛋白的表达24h开始增高,120h强,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型SCAP的表达增强,细胞内TG的合成增加,SCAP可能参与了肝细胞的脂代谢及脂肪变性的形成.
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油酸诱导培养肝细胞脂肪变性模型的建立
目的 以人正常肝细胞株L-02 为实验材料,采用油酸诱导建立培养肝细胞脂肪变性模型.方法 将人肝细胞株L-02进行细胞培养,加入不同浓度的油酸,采用MTT法确定油酸诱导肝细胞脂肪变的佳浓度,以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并检测细胞内TG的含量及上清中的ALT、AST的水平.结果 用含20μg/ml油酸的1640培养基培养L-02肝细胞72h,光镜及电镜下见肝细胞内有典型的脂滴形成,肝细胞内TG含量显著升高; ALT及AST较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功建立了油酸诱导培养肝细胞脂肪变性的模型.
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采用Changliver细胞制备肝细胞脂肪变性模型的方法探索
目的：探索油酸（OA）诱导建立人正常肝细胞Changliver脂肪变性的离体细胞模型的实验条件。方法选用不同浓度油酸作用不同时间点诱导Changliver细胞，并用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞活性，油红O染色观察细胞内脂滴数量、甘油‐3‐磷酸氧化酶法检测细胞内三酰甘油（TG）含量。结果采用0．2mmol/LOA诱导24h能建立较好的Changliver细胞脂肪变性模型，模型组细胞内TG水平为（379．98±23．19）mg/g，空白组细胞内TG水平为（185．03±12．68）mg/g，两组比较差异有统计意义（P＜0．01）。结论0．2mmol/LOA油酸诱导的Changliver细胞24h可建立比较稳定的脂肪变性模型。该模型为非酒精性脂肪性肝病的研究提供可靠的新途径。
关键词： 脂肪肝 模型 油酸 Changliver细胞
