首页 > 文献资料
-
含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定
目的:构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuramidinase,HN)基因的重组腺病毒,为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础.方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切质粒pVHN,将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA,构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组病毒可有效表达HN基因,表达产物分子量约为63 kD,重组病毒滴度为108～1010 PFU/ml.结论:成功构建含HN基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.
-
双特异性重组腺病毒Ad-HT对肝癌细胞的体内、外抑制效应
目的:探讨双特异性抗肿瘤重组腺病毒Ad-HT对肝癌细胞的体内、外抑制作用和作用方式.方法:运用噻唑兰法检测重组腺病毒Ad-HT对BEL-7402细胞的抑制作用;应用AO/EB染色法、DAPI染色法、Annexin V检测、Caspase检测、线粒体膜电位检测和活性氧检测等多种方法分析Ad-HT对BEL-7402细胞抑制作用的方式和途径;构建C57BL/6小鼠荷H22肿瘤模型,瘤内注射重组腺病毒,通过非放射性乳酸脱氢酶细胞毒性检测方法,检测NK活性、CTL活性,利用酶联免疫吸附方法检测IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ等细胞因子水平,探讨Ad-HT对体内实体肿瘤的抑制作用和对免疫系统的影响.结果:Ad-HT能够抑制BEL-7402细胞生长,且其作用具有一定时效和剂效关系趋势;Ad-HT感染导致BEL-7402细胞磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加、Caspase酶活性增强、线粒体膜电位下降和活性氧水平升高;Ad-HT实验组模型动物平均期在30天以上,显著高于对照组;另外,Ad-HT具有增强NK和CTL活性,上调IL-2和IFN-γ等细胞因子水平的功能.结论:Ad-HT能够通过诱导细胞凋亡,抑制BEL-7402肿瘤细胞增殖,而这种抑制作用可能通过线粒体途径实现.另外,Ad-HT能够有效延长模型动物平均生存期,活化免疫功能细胞,并使免疫趋向Th1优势.
-
新城疫病毒长春株和四平株致细胞死亡方式的研究
目的: 研究NDV长春株和四平株致细胞死亡的方式。方法： 采用空斑试验、细胞抑制试验、琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法进行研究。结果： NDV长春株和四平株对鸡胚成纤维细胞（CEF）、BHK、HeLa、Hep-2、HCT和OS-732等肿瘤细胞产生明显的病变，而对人的羊膜细胞(Wish细胞)无明显影响。结论： 长春株对肿瘤细胞的抑制作用强于四平株，长春株对肿瘤细胞的抑制不存在量效关系，只有适剂量才引起强的抑制作用。长春株和四平株在体外引起细胞死亡的途径不完全一致，长春株导致细胞死亡以凋亡为主，而四平株导致细胞死亡以坏死为主。
-
新城疫病毒诱导产生的抗肿瘤作用相关细胞因子
新城疫病毒(Newcastle diease virus,NDV)属禽类副黏病毒科副黏病毒亚科腮腺炎病毒属,NDV的基因组为单股负链RNA,大小约为15～16 kb,包括6种基因,分别用于编码6种病毒的结构蛋白.
-
NDV CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析
本文研究了NDV-CN株对5株不同的人肿瘤细胞的体外杀伤作用.结果表明5株肿瘤细胞对NDV-CN敏感,于感染早期出现细胞收缩变圆,失去贴壁性,感染第5天时细胞存活率低于10%.其中尤以HEP3B细胞敏感.但NDV-CN株对人二倍体细胞2BS有弱杀伤性.病毒感染早期可检测到感染细胞中有病毒核酸的复制、感染细胞表面有病毒蛋白的表达,胞浆内有病毒粒子存在.NDV-CN株主要诱导HEP3B及T24细胞产生凋亡,主要诱导Hep2、Hela及A549细胞产生坏死.
-
新城疫病毒对血管生长的抑制作用
目的研究鸡新城疫病毒对血管的生长抑制作用.方法采用小鼠肺癌转移模型观测鸡新城疫病毒(NDV)对癌细胞转移的影响及组织内微血管的生长情况;用体外药物敏感实验(MTT)检测NDV在不同剂量和作用时间下对人血管内皮细胞ECV304细胞的增殖抑制效应;用PI和Hoechst33342进行荧光染色检测NDV作用后细胞有无凋亡改变及其形态学变化.结果NDV在体内可以有效抑制小鼠发生癌转移时组织内微血管的生成,在体外可以抑制ECV304细胞的增殖并导致较为轻微的凋亡现象.结论体内外实验均表明NDV可以抑制肿瘤发生时微血管的生长,这一作用通过抑制血管内皮细胞的增殖而非直接的细胞毒作用实现,该作用机制可能与某种特定病毒蛋白有关,尚待进一步研究.
-
新城疫病毒对肿瘤细胞的杀伤及其作用机制研究
目的探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)对肿瘤细胞的抑制机制及其体内抑瘤作用.方法采用基因组电泳法观察NDV感染对Hep-2肿瘤细胞基因组的影响.运用SDS-PAGE、Western blot等方法检测NDV感染对Hep-2肿瘤细胞内p53及Bcl-2蛋白表达量的影响.通过间接免疫荧光法检测NDV感染后其新城疫病毒HN基因在Hep-2肿瘤细胞表面的表达情况.另外,构建C57/BL小鼠荷H22模型,瘤内注射NDV,观察其对实体肿瘤的抑制作用,探讨NDV在动物模型体内所介导的抑瘤作用.结果 NDV可致Hep-2肿瘤细胞的基因组断裂,电泳呈梯状条带.NDV感染能够上调p53的表达,且不影响Bcl-2蛋白的含量.间接免疫荧光实验显示,NDV感染Hep-2肿瘤细胞后可在其表面表达大量新城疫病毒HN蛋白.动物实验结果说明,NDV可抑制实体肿瘤生长.结论 NDV可诱导Hep-2肿瘤细胞凋亡,且不受Bcl-2的影响;能够有效抑制体内实体肿瘤的生长.
-
新城疫病毒诱导人自然杀伤细胞杀伤喉癌细胞株Hep-2的体外研究
目的研究新城疫病毒(NDV)和紫外线灭活的新城疫病毒(NDV-UV)在体外诱导人外周血自然杀伤细胞(NK)对喉癌细胞株Hep-2的杀伤作用.方法用淋巴细胞分离液从外周血中分离单个核细胞,经贴壁黏附法去除Mφ,尼龙毛柱去除B细胞,补体裂解法去除T细胞,得到富集的NK细胞后,用NDV和NDV-UV分别诱导NK细胞16 h作为效应细胞,Hep-2细胞作为靶细胞,然后用MTT法测定NK细胞杀瘤活性,并进一步比较NDV和NDV-UV对NK细胞杀瘤活性的影响.结果 NDV和NDV-UV诱导的NK细胞对Hep-2细胞的杀伤率高于未诱导组(P＜0.01),而NDV诱导组的杀瘤率高于NDV-UV诱导组(P＜0.05),随着效应细胞数量增大,NK细胞杀瘤活性逐渐增强(p＜0.01).结论 NDV和NDV-UV能在体外诱导人外周血NK细胞,使之杀瘤活性增强,NDV的诱导作用较NDV-UV强.
-
新城疫病毒及其应用研究进展
新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)自1946年在我国首次分离至今已有60多年,非典型性的新城疫是威胁养殖户的禽类疾病之一.针对新城疫疫苗的广泛开发和使用,使新城疫发病率和病死率得到了较好的控制.研究发现,NDV在肿瘤细胞中的复制是正常细胞的10 000倍,NDV可使胃癌的转移受到抑制[1],NDV在肿瘤学上的应用引起人们的广泛关注.本文就NDV的生物学活性及其应用展开综述.
-
新城疫病毒Ⅳ系活疫苗辅助治疗肿瘤的临床效果观察
目的考察鸡新城疫病毒Ⅳ系(new castle disease virusⅣ,NDV Ⅳ)活疫苗作为辅助治疗手段用于人类鼻咽癌患者的安全性、免疫学效应和临床效果.方法以NDV La Sota株制备活疫苗,以喷雾吸入途径接种于家兔,观察其安全性及免疫学效果;之后,再以相同途径接种于放射治疗后的鼻咽癌患者,观察其安全性、免疫学效果和辅助治疗的临床效果.结果接种该疫苗之后,实验动物和鼻咽癌患者的近期毒副发应都属轻微,未见严重肝肾功能损害;血清均可测出相应的抗体,其几何平均滴度随接种程序的推进而相应升高;接种该疫苗的鼻咽癌患者,其3年复发率、5年复发率均明显低于对照组(分别为3.23% vs25.81%;12.36% vs33.72%),差异均有统计学意义.结论鸡新城疫病毒Ⅳ系活疫苗接种于实验动物家兔和人,都具有良好的安全性;都能产生明显的免疫学效应;用于放射治疗后的鼻烟癌患者,能明显减少其治疗后复发率.
-
pIRVP3/pIRHNVP3核酸表达质粒的构建及对肿瘤细胞的影响
目的研究应用凋亡素基因(VP3)和NDV HN基因联合抗肿瘤的可能性.方法以pIRES1neo为表达载体构建了含鸡贫血病毒VP3基因和长春株HN基因的pIRVP3/pIRHNVP3 2个核酸重组质粒.将2个重组质粒在体外转染HeLa和OS-732细胞,用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法,检测凋亡素基因和HN基因导致细胞死亡的类型.结果 pIRVP3和pIRHNVP3转染HeLa和OS-732细胞48 h后,pIRVP3和pIRHNVP3均具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力,且pIRVP3的抗肿瘤作用强于pIRHNVP3.结论在体外,pIRVP3和pIRHNVP3有望成为新的抗肿瘤生物制剂.
-
肿瘤患者ATV-NDV治疗的护理
目的:通过细致周密的护理过程尽量避免接受ATV-NDV患者发生不良反应.方法:对ATV-NDV疫苗的制备及治疗全过程采取一系列护理措施.结果:接受ATV-NDV治疗者未发现任何不良反应.结论:ATV-NDV治疗是生物治疗的一种,对术后肿瘤患者提供了难得的辅助治疗机会.其制备及治疗过程相当复杂,为保证治疗的安全有效,必须做好各阶段的护理.
