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95D细胞转移相关基因在原发灶、循环肿瘤细胞和转移灶中的差异表达
目的 利用人巨细胞肺癌高转移株(95D)裸鼠自发转移模型,分析CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B肿瘤转移相关基因在原发灶、循环血肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)和转移灶中的差异表达.方法 根据前期实验结果并利用GoSufer软件进行GO(gene ontology)分析,筛选出可能与肿瘤转移相关的基因CD9、RHOA、MYL12A、B2M、PTOV1、HSPA1B.利用稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人巨细胞肺癌细胞株95D/GFP,建立肺癌裸鼠自发转移模型,用流式细胞分选术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分别纯化原发灶、外周血和转移灶中的肿瘤细胞,利用Real-time PCR技术检测上述基因在上述肿瘤细胞中的相对表达量.结果 CD9、RHOA、MYL12A基因在CTCs中表达较少,其次是肝转移灶,在皮下原发灶中表达较多;B2M基因在皮下原发灶、CTCs和肝转移灶中依次降低;PTOV1基因在CTCs中高表达,其次是皮下原发灶,肝转移灶中表达少;HSPA1B基因只在原发灶中表达.结论 CD9、RHOA、MYL12A、B2M、HSPA1B基因可能是潜在的肺癌转移抑制基因,而PTOV1可能促进肺癌微转移.
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乳腺癌循环肿瘤细胞与原发肿瘤临床病理特征关系的初步研究
目的 探讨乳腺癌循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)与原发肿瘤临床病理特征的关系.方法 128例乳腺癌及30例乳腺纤维腺瘤患者首次住院时抽取静脉血5 ml,用密度梯度离心法富集分离单个核细胞,以免疫荧光法检测所获单个核细胞中细胞角蛋白(cytokeratin,CK)8/18阳性的CTC,分析CTC与患者临床病理特征的关系.结果 在128例乳腺癌患者中CTC阳性率为40.6%(52/128),30例乳腺纤维腺瘤患者均未检出CTC.不同淋巴结病理分期(pN0、pN1、pN2和pN3期)患者CTC阳性率分别为15.4%(6/39)、27.O%(10/37)、64.7%(11/17)和66.7%(12/18),各组CTC阳性率差异有统计学意义(P=0.000 6);转移性(M1期)乳腺癌患者CTC阳性率为80%(16/20),较非转移性(M0期)乳腺癌患者CTC总阳性率33.3%(36/108)显著升高(P=0.000 9);小同TNM分期(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期)患者CTC阳性率分别为12.5%(3/24)、32.0%(16/50)、50.0%(17/34)和80.0%(16/20),各组CTC阳性率差异有统计学意义(P=0.000 3).结论 部分乳腺癌患者血液中存在CTC.CTC与淋巴结转移、远处转移及TNM分期密切相关.检测CTC有利于进行更精确的病情评估.
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循环肿瘤细胞检测指导老年非小细胞肺癌个体化治疗1例
目前,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是导致癌症死亡的首要原因[1].老年肺癌患者并发症多,常常掩盖肺癌症状,就诊时多为晚期.同时老年患者各系统生理功能减退,无法耐受纤维支气管镜、胸膜和肺组织穿刺活检以及其他有创检查,诊断相对较困难.我们通过检测循环肿瘤细胞(circulation tumor cell,CTC)来指导老年NSCLC患者个体化治疗1例,报告如下.
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膀胱癌循环肿瘤细胞NANOG基因的表达与临床特征相关性的初步研究
目的 探讨膀胱癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)及其中Nanog基因的阳性表达率与临床特征的相关性.方法 选取2015年12月至2016年8月陆军军医大学第一附属医院全军泌尿外科研究所收治的膀胱尿路上皮癌患者59例,采用广州益善生物技术股份有限公司开发的CanpatrolTM技术检测患者外周血中的CTCs分布情况及CTCs中Nanog基因的表达水平,分析上述检测结果与患者性别、年龄、肿瘤分级、浸润程度、淋巴结活检以及转移情况之间的相关性.结果 肌层浸润性膀胱癌患者外周血中CTCs阳性率高于非肌层浸润性膀胱癌患者(33/36,91.7％ vs 14/23,60.9％,P=0.007);淋巴结活检阳性膀胱癌患者CTCs阳性率高于淋巴结活检阴性患者(19/20,95.0％vs 28/39,71.8％,P=0.044);混合型CTCs中Nanog基因的阳性率高于上皮型(22/56,39.3％ vs 96/176,54.5％,P=0.047).结论 CTCs可作为判断膀胱癌恶性程度和侵袭能力的辅助指标,CTCs中的Nanog基因有望成为评估膀胱癌转移和预后的生物标志.
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循环肿瘤细胞分型检测在非小细胞肺癌中的应用
目的 探讨非小细胞肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的数量和型别分布,分析其与临床病理特征之间的关系.方法 采用新CanPatrolTM CTCs分型检测技术,基于滤膜法收集221例非小细胞肺癌患者外周血中的CTCs,通过RNA原位杂交、分支DNA技术对循环肿瘤细胞内的上皮、间质标志物mRNA进行荧光检测,将CTCs分成上皮型、混合型、间质型,分析其与年龄、性别、临床病理分期和是否远处转移的关系.结果 90.05％非小细胞肺癌患者检出CTCs,3个型别里混合型CTCs检出比例高.总CTCs,上皮型、混合型、间质型CTCs数量与临床分期和远处转移有关(P＜0.05),与年龄和性别无关(P＞0.05).Logistic回归分析结果显示,间质型CTCs是临床分期和远处转移的危险因素.结论 在外周血循环肿瘤细胞检测中,数量和分型均有重要价值,其中间质型CTCs可能为非小细胞肺癌患者肿瘤分期及远处转移提供重要线索.
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Cytokeratin和CD133在肺腺癌患者外周血中的联合检测及临床病理分析
目的 联合检测肺腺癌患者外周血中细胞角蛋白(cytokeratin,CK,肺腺癌循环肿瘤细胞阳性)和CD133基因(肺癌干细胞标志物)的表达,探讨二者在评估肺腺癌预后的临床价值.方法 选取2014年6月至2016年6月昆明总医院心胸外科和宣威市第一人民医院心胸外科的178例未化疗的肺腺癌手术患者,中位年龄59岁,其中男性78例,女性100例.收集患者术前外周血标本10 mL,细胞块法和CK(免疫细胞化学法)用于检测CTC,PCR法用于检测CD133表达.免疫组化法检测肺腺癌组织中CK、Vimentin (Vim)、TIF-1、Ki-67、CD133的表达,并分析与外周血CK和CD133表达的关系.根据外周血CK和CD133的检测结果,将病例分为CK/CD133双阳性组和非双阳性组,统计学分析两组间临床病理因素的差异.结果 178例肺腺癌患者外周血CTC(CK阳性)的检出率为48.3％(86/178),与癌组织中Ki-67、Vim表达显著正相关(P＜0.05);外周血的CD133阳性表达率为66.9％(119/178),与癌组织Vim、CD133表达显著正相关(P＜0.05);外周血CK/CD133双阳组53例(29.8％),双阳组淋巴结转移率显著增高,肺腺癌组织学分化级别显著降低,临床分期显著提高,转移率显著增高(P＜0.05).结论 肺腺癌患者外周血中CK与CD133双阳性表达提示外周血存在干性特征的循环肿瘤细胞,表明预后不良,联合检测CK与CD133可用于肺腺癌患者预后监测和指导治疗.
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利用微流控免疫磁珠分选仪高效富集外周血循环肿瘤细胞
目的 观察利用微流控免疫磁珠分选仪富集外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的效果.方法采用IsoFlux系统(微流体免疫磁珠分选系统),对16例肺癌患者(TMN分期法,Ⅰ～Ⅳ各4例患者)外周血中循环肿瘤细胞进行分离富集,并通过免疫荧光的方法标记CTCs的标记蛋白,对分选出的CTCs细胞进行了鉴定.结果 16位肺癌患者血样中10位患者的血样中均发现了Cytokeratine阳性和CD45阴性的CTCs,Ⅰ～Ⅳ期各4例患者的血样中检出CTCs细胞检出率分别为50％、50％、75％和100％.结论利用微流控免疫磁珠分选仪可以有效地富集外周血中稀有的循环肿瘤细胞,具有较高的灵敏性及特异性.
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循环肿瘤细胞γ-H2AX检测评估化疗疗效研究进展
作为目前肿瘤治疗主要手段之一的化疗应用广泛,对其疗效的评价依据基于影像学肿瘤缩小而设计的RECIST标准,一般在2~4个周期化疗后进行评估.姑且不论在影像学图像如CT片上进行测量,容易产生对可评价病灶数毫米级的测量出入,以及存在于测量者与测量者之间的差异;这样的以"周期"为测量单位跨度占据患者28~84 d的时间,有的患者可能在第1周期就耐药,有的患者转移可能已经发生,有的患者可能错过佳治疗时机等.由于有诸多的"可能"会发生,因此,需要更敏感、即时且更早期的评价指标以监测化疗患者的疗效.药物基因组学已经关注到个体药物代谢过程差异的多个环节,并在mRNA或蛋白表达水平有了很多富有吸引力的研究结果预测疗效[1-2],评估指标多数都要求组织标本.而晚期或多程化疗的患者,要重复取材,并以化疗"周期"为测量单位进行影像学检查,不容易满足早期评估要求,临床可操作性低,实用价值有限.在这样的背景下,探索外周血化疗疗效敏感指标,在化疗单次给药后以"d"为测量单位,调整下一周期的治疗方案,抑或即时手术,这样的指标将极具实际应用价值,成为目前肿瘤治疗学中的一个研究热点.
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老年晚期非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞与EGFR-TKI疗效的相关性研究
目的 探讨老年晚期非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞(CTC)的表达与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EG-FR-TKI)疗效相关性.方法 66例老年晚期非小细胞肺癌的患者,以全部患者CTC表达数值的中位数为分界点,高于中位数的为高表达组,低于中位数的为低表达组均予EGFR-TKI类药物治疗,对其疗效及预后进行对比.生存分析采用Kaplan-Meier法,Log rank法检验及Cox多因素回归分析.结果 疗效方面CTC低表达组有效率为53.3％ (16/30);CTC高表达组有效率为27.8％(10/36),两组差异有统计学意义(P＜0.05).预后方面CTC低表达组和CTC高表达组,中位总生存时间分别为22.8个月(95％CI:18.9～26.8个月)和18.3月(95％CI:14.8～21.9个月),中位无进展生存时间分别为11.5个月(95％CI:15.0～8.1个月)和5.6个月(95％CI:2.9～8.2个月),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CTC表达水平的变化与EGFR-TKI治疗的疗效及预后呈负相关,可作为老年晚期非小细胞肺癌患者EGFR-TKI治疗的疗效及预后的预测指标.
关键词： 癌 非小细胞肺 循环肿瘤细胞 表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂 -
循环肿瘤细胞与肺癌临床病理特征的关系
目的：探讨肺癌患者循环肿瘤细胞（CTC）与其临床病理特征的关系。方法取65例肺癌（肺癌组）、10例肺良性疾病患者和10例健康志愿者（对照组）外周血7．5mL，应用免疫磁珠阴性富集联合免疫细胞化学染色检测Pan-CK＋/CD45-的CTC，分析CTC与患者临床特征的关系。结果在65例肺癌患者中，CTC阳性率为69．23％（45/65），肺良性疾病患者及健康志愿者均未检出CTC。TNM分期Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者CTC阳性率分别为23．08％（3/13）、50．00％（6/12）、90．00％（36/40），各亚组肺癌患者CTC阳性率差异有统计学意义（P＝0．000）；转移性（M1期）肺癌患者CTC阳性率为83．33％（35/42），较非转移性（M0期）肺癌患者CTC阳性率43．48％（10/23）显著升高（P＝0．002）；随着转移部位个数（0、1、2、3）的增多，CTC阳性率呈升高趋势（43．48％、83．33％、87．50％、75．00％），各亚组肺癌患者CTC阳性率差异有统计学意义（P＝0．024）；CTC阳性率在细胞角质蛋白19片段（Cyfra21-1）＜5．6μmol/L组（53．33％，16/30）与Cyfra21-1≥5．6μmol/L组（82．86％，29/35）间差异有统计学意义（P＝0．021）；在乳酸脱氢酶（LDH）＜270U/L组（55．00％，22/40）与LDH≥270U/L组（92．00％，23/25）间差异也有统计学意义（P＝0．004）。结论部分肺癌患者中存在CTC；CTC阳性率与肺癌患者的临床分期、M分期、发生远处转移部位的个数、Cy-fra21-1值及LDH值密切相关；检测CTC有利于更精确的病情评估。
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CD44相关亚型在裸鼠原位胃癌生长转移中的表达变化及机制
目的 通过循环肿瘤细胞(CTC)探讨CD44相关亚型(CD44s、CD44v3、CD44v6、CD44v9)在裸鼠原位胃癌生长过程中表达水平的变化.方法 采用SGC7901、MNK-45两种胃癌细胞株分别构建裸鼠原位胃癌模型,于第1、2、3、4周分别收集裸鼠眼眶血,计数CTC数量,采用RT-PCR检测CTC中CD44s、CD44v3、CD44v6、CD44v9表达水平变化.处死裸鼠后通过免疫组织化学及Western blot检测原位胃癌中CD44s、CD44v3、CD44v6、CD44v9表达水平.结果 成功采用SGC7901、MNK-45两种细胞株构建了裸鼠原位胃癌模型,于第1、2、3、4周分别收集裸鼠眼眶血.在SGC7901组,随着时间进展,各组基因表达量逐渐升高,不同时间组之间,差异有统计学意义(F=461.547,P=0.000),时间和各组基因表达量存在交互效应(F=10.386,P=0.000),CD44v9表达水平在各时间组均明显高于CD44s、CD44v3、CD44v6.在MNK-45组,各组基因表达量在不同时间组之间差异有统计学意义(F=537.642,P=0.000),时间和各组基因表达量存在交互效应(F=16.122,P=0.000),CD44v9表达水平在各时间组均明显高于CD44s、CD44v3、CD44v6.免疫组织化学及Western blot均显示在两种胃癌细胞构建的原位胃癌模型中,CD44v9表达水平高.结论 随时间延长,CD44v9在CTC中表达水平逐渐增高,在两种胃癌细胞构建的原位肿瘤中相对于其他CD44亚型表达水平高.
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胃癌循环肿瘤细胞动物模型的构建
目的 构建胃癌循环肿瘤细胞(CTC)动物模型,为CTC运用于临床提供依据.方法 构建4种裸鼠胃癌肿瘤模型,分别为皮下移植瘤、原位移植瘤、腹腔移植瘤、尾静脉移植瘤,检测各组肿瘤生长、转移水平,比较各组循环血中CTC数目,并进一步行单细胞实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-QPCR)分析转移相关基因在CTC与原细胞中的表达变化,免疫组织化学法检测肿瘤组织中血管的生成情况.结果 胃癌细胞原位移植模型是研究胃癌CTC的理想模型,裸鼠死亡率低,肿瘤转移明显,CTC数量较其他造模方法明显升高.结论 成功构建了CTC裸鼠模型,为CTC应用于临床奠定了基础.
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外周血循环肿瘤细胞对非转移性乳腺癌预后预测价值的Meta分析
目的 系统评价循环肿瘤细胞(CTCs)对非转移性乳腺癌预后的预测价值.方法 计算机检索PubMed、EMbase、WanFang Data、CNKI和CBM数据库,收集CTCs与TNM Ⅰ～Ⅲ期非转移性乳腺癌预后的队列研究,检索时限均从建库至2014年3月20日.由2位研究者按纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的方法学质量后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析.结果 终纳入7个队列研究,共计1 780例患者.Meta分析结果显示:CTCs阳性组的无病生存率[RR=2.24,95％CI(1.92,2.61),P＜0.000 01]和总生存率[RR=2.55,95％CI(1.99,3.28),P＜0.000 01]均低于CTCs阴性组.按CTCs检测时间行亚组分析,结果显示辅助化疗前后,CTCs对非转移性乳腺癌的无病生存率与总生存率亦均有预测价值(P＜0.000 4).结论 外周血CTCs是非转移性乳腺癌的不良预后因素,且不受辅助化疗的影响.
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EPCAM、MUC16免疫磁珠制备及循环肿瘤细胞检测
目的 检测EPCAM、MUC16两种抗原在上皮性卵巢癌循环肿瘤细胞中表达的相关性.方法 分别用羧基磁珠制备EPCAM、MUC 16两种免疫磁珠,分3组:EPCAM免疫磁珠检测组、MUC16免疫磁珠检测组、2种磁珠均等混合检测组.对来源于同一患者的等体积外周血样本进行循环肿瘤细胞检测,HE染色后鉴定检测值.结果 EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+ MUC16免疫磁珠对同体积、同来源样本检测值分别为22±11、14±6、28±12个肿瘤细胞(P＜0.05),说明检测效率有统计学差异.结论 MUC16与EPCAM在上皮性卵巢癌循环肿瘤细胞中独立表达且存在差异,因此增加MUC16这一器官标志物可有效提高上皮性卵巢癌CTCs检出数量.
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循环肿瘤细胞检测技术在非小细胞肺癌中的研究进展
肺癌是我国发病率和死亡率均居首位的恶性肿瘤,传统的诊断方法主要有病理组织学检查、影像学方法和肿瘤标志物检测.近几年的研究发现,外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)检测可用于实时、无创地进行组织学鉴定,可能成为肺癌早期诊断、复发检测、疗效评估的一个重要手段.以下对肺癌中循环肿瘤细胞检测技术进行综述.
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抗体免疫脂质磁球法检测肺癌循环肿瘤细胞初探
目的 初步探索抗体免疫脂质磁球法在肺癌循环肿瘤细胞(CTCs)检测中的应用.方法 采用反向蒸发法制备上皮细胞粘附分子(EpCAM)和表皮生长因子受体(EGFR)抗体免疫脂质磁球.在磷酸盐缓冲溶液(PBS)和外周血肺癌CTCs模型中,评价EpCAM和EGFR抗体免疫脂质磁球对A549细胞的捕获效率;在此基础上,用上述两种抗体免疫脂质磁球法检测肺癌患者外周血中CTCs;并将EpCAM免疫脂质磁球法与CellsearchTM系统进行比较.结果 EpCAM和EGFR免疫脂质磁球法在PBS溶液CTCs模型中对A549细胞的中位检出率分别为92％和90％,在外周血模型中分别为85％和81％;两种磁球法在13例肺癌患者中均检测出了CTCs,中位检出个数均为5个,而在健康对照者中中位检出个数均为0个(P＜0.05).用EpCAM免疫脂质磁球法和CellsearchTM系统检测3例肺癌患者的CTCs,前者对其中2例患者的CTCs检出量高于后者,另外1例相等.结论 EpCAM和EGFR免疫脂质磁球法均能有效检出肺癌CTCs,两种磁球法检出率相当.EpCAM免疫脂质磁球法对肺癌患者CTCs检出量有高于CellsearchTM系统的趋势.
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胃癌患者外周血循环肿瘤细胞检测及其临床意义
目的 观察胃癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)的检出情况,探讨其与胃癌临床病理特征的关系.方法 选取2011年9月至2013年9月期间在笔者所在医院经病理学检查证实的60例胃癌患者为研究对象,并与同期40例胃良性疾病对照;采集其静脉血,经CellTracks AutoPrep系统检测其CTCs阳性率,并分析CTCs与胃癌临床病理特征的关系.结果 胃癌组CTCs检出率为70.0％ (42/60),对照组CTCs检出率为7.5％ (3/40),胃癌患者外周血组CTCs检出率显著高于胃良性疾病者(P＜0.05).胃癌患者外周血CTCs检出率与患者性别、年龄、N分期、远处转移、肿瘤大小及脉管侵犯均无关(P＞0.05),而与肿瘤TNM分期及分化程度有关(P＜0.05).外周血CTCs检测阴性的胃癌患者,其术后12个月及18个月的累积生存率均高于CTCs检测阳性者(P＜0.05).结论 CTCs检测方便,胃癌患者外周血中CTCs检出率较高,其外周血CTCs的检出情况可以反应胃癌的进展程度,可作为其预后判断的指标.
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循环肿瘤细胞标志物检测及临床应用新进展
目的 对循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)标志物及其在临床上应用的新进展进行总结.方法 复习近年来关于CTCs标志物检测及其临床应用的相关文献并加以综述.结果 上皮细胞标志物、其他标志物如人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)和免疫组化基因也已成为检测CTCs恶性转移能力的有利手段.此外,上皮间质化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)与肿瘤于细胞(cancer stem cells,CSCs)在肿瘤转移中的作用也受到越来越多的关注,也成为了CTCs的标志.结论 通过对外周血CTCs的检测,对癌症早期的识别、转移与复发的监测及其对肿瘤的治疗均具有很好的指导意义.CTCs标志物对肿瘤的诊治以及预后判断具有巨大的临床应用价值.
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胰腺癌循环肿瘤细胞检测及临床应用进展
目的 总结循环肿瘤细胞(CTCs)的检测方法及其在胰腺癌诊治中的临床应用.方法 对国内外相关文献进行综述分析.结果 胰腺癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,早期诊断率低,局部浸润和转移发生率高,预后不良.CTCs是胰腺癌术后复发和转移的重要原因,其检测方法主要基于免疫细胞化学法和逆转录聚合酶链式反应.结论 CTCs检测作为“实时液体活检”,在胰腺癌的早期诊断、治疗效果评估、预后分析等方面有较高的应用价值.
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胃癌转移中上皮间质转化的作用及其调控机理
目的 研究上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)与胃癌的发生、发展、侵袭及转移的关系,以利于寻求阻断EMT过程的方法,从而达到治疗肿瘤的目的.方法 通过查询PubMed,检索EMT、信号通路和胃癌的相关文献进行分析.结果 EMT的作用及其调控机理与胃癌的发展密切相关,在胃癌的生长增殖、肿瘤侵袭和转移过程中通过多种信号通路发挥作用,具有极大的临床应用前景.结论 EMT和肿瘤转移的关系十分密切,几乎参与了转移的每一个过程.因此有必要进一步深入研究EMT和肿瘤包括胃癌转移的关系,为人类胃肿瘤的治疗提供新的突破口.
