1株非嗜肺军团菌的鉴定

目的 鉴定非嗜肺军团菌.方法 用常规分离培养军团菌,进行生化和血清学试验,进一步运用PCR法进行相关基因的分子诊断.结果 BCYE-α平板上生长,而BCYE-CYS及血平板上均不生长；触酶试验阳性、明胶液化阳性,与非嗜肺军团菌乳胶凝集；5SrRNA基因阳性、16SrRNA基因阳性,mip基因阴性.结论 运用常规分离培养技术结合分子诊断方法,鉴定出1株非嗜肺军团菌.

2017年福建省监测点致泻性大肠埃希菌监测及耐药性分析

目的 了解福建省致泻性大肠埃希菌(DEC)流行特点及耐药情况,为预防与控制福建DEC腹泻提供依据.方法 收集2017年福建省永安与南平市腹泻人群粪便标本共300份,经初步培养分离后利用PCR方法进行毒力基因检测,并对检出的病原菌进行血清学试验,运用K-B纸片法进行耐药性分析.结果 300份标本中检出已纯化单克隆DEC 22株,检出率为7.33％,其中EAEC 9株(40.91％),ETEC 9株(40.91％),aEPEC 4株(18.18％);检测分离到血清凝集菌株4株.药敏结果显示:DEC对氨苄西林、复方新诺明耐药率较高,分别为59.09％、36.36％;其中1株菌对6类抗菌药物均耐药;一株产ESBLs菌株.结论 福建省DEC流行属种以EAEC、ETEC为主,且具有较高的耐药性.

特发性矮小遗传学研究及展望

矮小是常见的人类性状.较严重的和/或伴有其他表现的矮小通常是某综合征表现的一部分,可能为单基因疾病.比较单纯的矮小可能是多基因复杂病变.选择合适的分子检测或研究方法对于实现准确的诊断、合适的治疗及深入探究影响身体生长发育的基因和信息通路都有重要意义.

河南省结核病分子诊断技术能力验证结果分析

目的 了解河南省结核病实验室分子检测能力现状.方法 对河南省参加全国第四轮结核病分子诊断技术能力验证的结果进行分析.结果 1个省级和19个市级实验室100.0％通过测试,5 1个县级结核病实验室40个通过测试,通过率78.4％.结论 省市级结核病实验室分子检测能力较强;县级结核病实验室的分子检测能力不足,需要进一步加强自身的能力建设.

分子诊断,切中肿瘤要害

案例肿瘤标记物检测连年正常,癌症却悄然来袭自从过了知天命之年,老季就对年度体检特别在意.尤其是肿瘤标记物指标,每次拿到体检报告单,首先查阅的就是CEA(癌胚抗原)和AFP两项.听人说CEA是一种“广谱”的肿瘤标记物,灵敏性不是很理想,因此老季在体检套餐外又自费选择了几项肿瘤标记物.一连数年,检查结果都在正常范围内.

多重PCR试剂盒在检测致泻性大肠埃希菌中的应用

目的 应用商品化多重PCR试剂盒来检测致泻性大肠埃希菌,以建立更快速、高效的致泻性大肠埃希菌监测工作方法.方法 应用某市场商品化致泻性大肠埃希菌多重PCR试剂盒来初筛检测福建省的腹泻病分离的菌株,用本实验室前期已建立的致泻性大肠埃希菌不同的PCR方法进行串联试验对初筛结果加以验证.结果 验证试验从2015年福建省2个监测点分离的经生化反应初步鉴定为大肠埃希菌的菌株中,致泻性大肠埃希菌鉴定率为7.00％(21/300),阳性菌株为21株,均成功获得了分纯单克隆菌株.结论 商品化致泻性大肠埃希菌多重PCR试剂盒对于提高效率、减少繁重的工作量有帮助.

循环microRNA对原发性肝癌诊断价值的初步研究

目的 筛选原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)相关的miRNA,并探索其对PLC的诊断价值.方法 生物信息学方法 发掘PLC异常表达的miRNA,结合miRNA靶基因预测及PLC相关高频突变基因,确定目的miRNA;收集确诊PLC、肝硬化及非肝病对照患者血浆样本及临床资料,定量PCR检测上述目的miRNA表达水平;以肝硬化为对照,选取有价值的miRNA进行PLC诊断试验,绘制ROC曲线,计算曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度及约登指数(YI)等评价指标.结果 筛选得到4种miRNA,分别为miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-1258、miR-1269a.纳入确诊PLC 39例、肝硬化38例和无肝病对照者8例,检测上述miRNA血浆表达水平,结果显示,与肝硬化患者比较,PLC患者miR-10b-5p、miR-21-5p表达水平升高,差异有统计学意义(P=0.028、0.004);而miR-1258表达水平基本相同(P =0.985),miR-1269a表达升高,但差异无统计学意义(P =0.223).miR-10b-5p、miR-21-5p和AFP诊断PLC的AUC为0.651、0.730、0.731(P ＜0.05),YI为0.273、0.458、0.379;以上3个指标两两或三者进行平行诊断试验和系列诊断试验,可显著提高灵敏度或特异度;miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-1258和AFP联合诊断PLC的AUC为0.885(P ＜0.001),YI为0.639.结论 生物信息学方法 筛选目的 miRNA是简便、可靠的方法,但临床验证过程必不可少.单个miRNA诊断PLC准确性一般,多个miRNA联合或联合AFP可显著提高PLC诊断准确性,有望成为miRNA诊断PLC的主要方法.

儿童结核病分子生物学诊断进展

儿童结核病对社会公共卫生健康造成严重的威胁,故得到越来越多的关注.由于儿童结核病患儿症状、体征及辅助检查缺乏特异性,且排菌少,使得诊断相对困难,造成临床的延误诊断,从而增加治疗负担及病死率,而分子生物学方法如聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),实时荧光PCR,线性探针(DNA line probe)等基于结核分枝杆菌特异性核酸序列,可对儿童结核病进行快速有效的诊断.

多重连接探针扩增技术诊断Prader-Willi综合征3例

目的 分析Prader-Willi综合征(PWS)患儿的临床特征及分子诊断方法,以提高儿科医师对本病的认识.方法 收集白求恩国际和平医院新生儿科存在肌张力低、喂养困难,生长发育过程中不明原因的发育延迟、身材矮小、肥胖等特征怀疑为PWS的4例患儿,采用临床结合多重连接探针扩增技术(MLPA)对P245和ME028进行序贯检测.结果 共送检4例,其中婴幼儿期3例,新生儿期1例;男2例,女2例;以运动发育迟缓为主要表现2例,以出生后哭声差为主要表现1例,以走路不稳为主要表现1例;检测出缺失型患儿3例,另1例临床疑似患儿经ME028检测阴性.结论 新生儿期无明显诱因存在喂养困难、肌张力低等表现,发育过程中有不同程度的运动智力发育落后表现的婴幼儿需考虑PWS,进一步通过MLPA检测P245结合临床辨析及ME028补充检测,可以实现该病的快速诊断,对PWS的临床诊疗有积极意义.

分子诊断儿童耐药结核病研究进展

近些年来随着儿童耐药结核病发生率的增高,儿童结核病作为威胁全球儿童公共健康的严重疾病越来越受到广大儿科医师的关注.由于儿童结核病灶内结核杆菌含量很低,常常不能引起典型的临床症状及影像学表现,同时"金标准"结核分枝杆菌(MTB)检测耗时长,且阳性率低,使儿童结核病不能得到及时诊断和治疗,儿童结核的分子诊断技术因其快速、准确、高效、操作简便等显著优点而得到广泛的临床应用和发展,以期为儿童耐药结核分子诊断提供帮助.

分子基因组检测方法在罕见病分子诊断中的应用

罕见病是人群中发病率低或发病人数少的一类疾病,遗传性罕见病占罕见病的80％.罕见病的诊断一直是临床上的难点.现全面介绍分子基因组检测方法,尤其是近几年发展起来的以基因芯片和二代测序为代表的高通量、全基因组的基因组检测技术,比较各检测平台的特点以及如何合理选择基因检测方法诊断罕见病.

Alagille 综合征2例临床特征及 JAGI 基因分析

目的：对慢性胆汁淤积症患儿开展 JAGI 基因检测，以提高对 Alagille 综合征临床特征的认识和诊断水平。方法选取2例慢性胆汁淤积症伴多器官受累患儿为研究对象，收集其临床资料、实验室检查结果。抽取患儿外周静脉肝素抗凝血2 mL，采用聚合酶链反应和基因测序技术对 JAGI 基因26个外显子及其侧翼序列进行突变基因检测。结果1例患儿临床表现为慢性胆汁淤积、心脏杂音和特殊面容，肝穿刺病理检查显示胆管上皮缺乏，JAGI 基因检测6号外显子新 c.809809delG（p. G270Dfs*142）杂合突变，为异常氨基酸代替 JAG1蛋白，导致 JAG1蛋白截断，表皮生长因子（EGF）样重复序列部分丢失以及富含半胱氨酸区完全丢失；1例患儿典型的临床表现仅包括慢性胆汁淤积和特殊面容，JAGI 基因检测第20内含子剪切位点已知 IVS20-25delTAAG 杂合突变，导致剪切位点改变。结论发现1种尚未报道的 JAGI 基因新突变 c.809809delG（p. G270Dfs*142）。对慢性胆汁淤积症伴多器官受累患儿开展 Notch 信号通路 JAGI 致病基因筛查，有助于临床 Alagille 综合征的诊断。

分子诊断在结直肠癌术后治疗中的应用

目的 探讨分子诊断在结直肠癌术后治疗中的应用及其意义.方法 回顾性分析34例结直肠癌患者的临床病理资料,检测DNA切除修复交叉互补基因1(ERCC1) mRNA、胸苷酸合成酶(TYMS) mRNA水平以及二氢嘧啶脱氢酶(DPYD)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)基因多态性.结果 ERCC1、TYMS mRNA高表达分别占67.6％、52.9％,其中ERCC1 mRNA表达水平与淋巴结转移数目呈负相关.DPYD、UGT1A1突变率分别为26.0％、30.4％,UGT1A1突变率与肿瘤肿瘤分化程度成负相关.结论 分子诊断在结直肠癌术后治疗方案选择中具有重要指导意义.

二聚体蝎型探针快速检测α-地中海贫血基因-α3.7缺失

目的 建立快速检测α-地中海贫血基因-α3.7缺失的二聚体蝎型探针荧光聚合酶链反应(gap-PCR)方法.方法 采用二聚体蝎型探针gap-PCR技术,建立一种快速检测α-地中海贫血基因-α3.7缺失的方法;检测40份已知基因型和100份临床样本,并与常规gap-PCR法进行平行对比分析.结果 本研究建立的检测方法能准确检测α-地中海贫血基因-α3 7缺失;40份已知基因型和100份临床标本检测的灵敏度和准确性均达到100％.结论 本研究建立的二聚体蝎型探针α-地中海贫血基因-α3.7缺失gap-PCR方法,操作简单快速,结果准确可靠.

滴血测癌变

只需抽取1-2毫升血液,就有预知患癌的可能性.目前,这种癌症基因突变位点的分子诊断已用于临床,这意味着防癌普查已成为一种经济、简便的手段.吴红(化名)今年42岁,因查出左侧乳房患乳腺癌在武汉大学人民医院甲乳外科住院准备手术治疗.但到底是两侧乳房一起切除,还是只切除单侧患乳保留右侧乳房呢?如果不同时切除,以后右侧乳房癌变的可能性也很大.如何抉择,需要仔细斟酌.

《微循环学杂志》第五届编辑委员会主编、副主编

李艳,主编,女。医学博士,教授,博士生导师,博士后流动站导师。曾留学日本。长期从事医学检验临床、科研和教学工作,对感染性疾病的分子诊断和发病机制、动脉粥样硬化性疾病与激素调节、个性化医疗与分子诊断等有深入研究。现任武汉大学第一临床学院实验诊断学教研室主任,武汉大学人民医院检验科主任。兼任中华医学会检验分会委员,中华医院管理学会临床检验管理专业委员会委员,中国医师协会检验分会常委,国家教育部高等学校医学技术类教学指导委员会委员,湖北省医学会微生物与免疫分会主任委员,湖北省医学会检验分会副主任委员,武汉医学会检验专业委员会主任委员等职务,2013年评为“湖北省医学领军人才”。现承担省、部级科研课题12项；在国内外重要刊物上发表相关论文108篇,其中SCI收录22篇；近年来培养博士后2人,博士研究生13人,硕士研究生24人。

分子诊断在血液病中的应用

分子诊断是利用分子生物学和分子遗传学方法检测疾病相关基因和蛋白,并与临床诊断密切结合的一种诊断技术.经过分子杂交、PCR定量和芯片技术3个阶段的发展,分子诊断已经广泛应用于肿瘤和遗传性疾病等相关领域,尤其在严重危害人类健康的恶性血液病领域取得了长足进步,对这些疾病的精细诊断、预后评估和分层治疗均提供了宝贵的信息.以下将概述分子诊断在血液病中的应用现状和进展.

多学科联合-综合诊治静脉血栓栓塞症

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对脊柱结核不同类型标本检测的研究

目的 比较应用利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)对脊柱结核不同类型组织标本检测的差异.方法 收集在天津市海河医院骨科接受病灶清除手术治疗诊断明确的脊柱结核患者223例,收集脓液、肉芽组织及干酪样坏死组织,分别进行结核分枝杆菌培养和Xpert MTB/RIF检测,计算阳性率,并以细菌培养与表型药敏试验为金标准,计算Xpert MTB/RIF进行细菌和利福平耐药基因rpoB突变检测的敏感度、特异度.结果 223例脊柱结核患者多标本联合Xpert MTB/RIF检测阳性率高于细菌培养阳性率,差异有统计学意义[(68.61±7.35)％比较(44.39±6.51)％,P=0.000].两种细菌检测方法中,都是脓液阳性率高,肉芽组织其次,干酪样坏死组织低,差异有统计学意义[细菌培养:(44.44±7.08)％比(43.86±7.44)％比(30.72±7.31％),P =0.017;Xpert MTB/RIF检测:(73.02±6.33)％比(63.74±7.21)％比(39.87±7.76％),P =0.000].3种标本Xpert MTB/RIF检测阳性率都高于细菌培养(脓液、肉芽组织:P=0.000,差异有统计学意义;干酪样坏死组织:P=0.131,差异无统计学意义).Xpert MTB/RIF检测结核杆菌的敏感度达(96.97±3.38)％,rpoB突变检测的敏感度(97.44％)和特异度(94.74％)也较高.结论 脊柱结核患者应尽量获取多种标本,尤其脓液标本,进行Xpert MTB/RIF检测,可简便、快速、准确地诊断结核感染及评估其耐药性,有助于开展有效治疗.

液相芯片技术研究应用进展

人类基因组计划(HGP)的完成和蛋白质组计划(HPP)的启动,获得了数量巨大的基因和蛋白质信息,而要对如此庞大的信息进行全面的处理和研究,必须设计和利用更为高效的硬件和软件技术,建立新型、高效、快速的检测分析方法.生物芯片正是在这种背景下应运而生,其不仅在高通量基因测序、基因表达研究、蛋白质相互作用等方面发挥重要作用,亦将在临床诊断中占据重要地位[1].液相芯片(liquichip)是美国纳斯达克上市的Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术,它既能为后基因组时代科学研究提供强大的技术支持,又能提供高通量的新一代分子诊断技术平台.现就液相芯片的基本技术原理、制备方法、与传统固相芯片比较的优越性及其初步临床应用进行综述.