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虫类药临床应用体会
虫类药大多药力峻猛而疗效显著,且为血肉有情之品.唐容川<本草问答>谓"动物之功利,尤甚于植物".笔者多年来应用虫类药治疗一些疑难杂病,获得满意疗效.
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虫类中药临床应用心得
祖国医药在运用植物、矿物等药用资源的同时,对虫类药物的应用也十分广泛.正如唐容川在<本草问答>中说"动物之功利,尤甚于植物".虫类药物大多药力峻猛而疗效显著,且为血肉有情之品.笔者应用虫类药物治疗一些疑难杂病,获满意疗效,简述如下.
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社区医疗机构多重耐药铜绿假单胞菌产金属β内酰胺酶检测
目的 了解多重耐药铜绿假单胞菌(M RPA)的社区感染情况及产金属β内酰胺酶(MBL)情况.方法 2011年1月至12月在广州市多个社区医院收集分离出MRPA 54株.采用MicroScan Walk Away 40S1全自动细菌鉴定与药敏检测系统检测其对亚胺培南等11种抗菌药物的耐药性,比较亚胺培南耐药铜绿假单胞菌与亚胺培南敏感铜绿假单胞菌对常用9种抗菌药物的耐药率.改良三维实验分析亚胺培南耐药铜绿假单胞菌产MBL情况.结果 54株MRPA中有29株对亚胺培南耐药,占53.7％( 29/54).三维试验显示有9株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌产MBL,占31.0％( 9/29).亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对常用7种抗菌药物的耐药率显著高于亚胺培南敏感铜绿假单胞菌(头孢他啶:65.5％比36.0％;头孢噻肟:89.7％比44.0％;头孢曲松:100.0％比52.0％:氨曲南:72.4％比36.0％,氧氟沙星:70.0％比32.0％;哌拉西林-他唑巴坦:58.6％比16.0％;阿米卡星:62.1％比32.0％,均P＜0.05).结论 社区医疗机构临床分离MRPA 产MBL的比率较高.
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DARPP-32在胃癌中的表达及其意义
目的探讨DARPP-32蛋白在胃癌组织、细胞系及耐药细胞系中的表达及意义.方法用免疫组织化学SABC法检测96例胃癌组织及57例正常胃黏膜中DARPP-32的表达,用Western蛋白印迹检测胃癌组织及细胞系中DARPP-32的表达.结果胃腺癌组织中DARPP-32的表达率(92.7%,89/96)显著高于正常胃组织(52.6%,30/57,P＜0.05),且DARPP-32表达与胃腺癌的分化、浸润、转移无关(P＞0.05).在胃癌患者的癌组织中DARPP-32和剪切产物t-DARPP均表达,其表达水平显著高于其癌旁组织(t=2.45,P=0.015),并以t-DARPP的表达为主.在人胃癌细胞系中也存骀在DARPP-32和t-DARPP的表达,而且DARPP-32在SGC7901耐药细胞株SGC7901/VCR和SGC7901/ADR中的表达水平较其亲本细胞明显下调.结论DARPP-32在胃腺癌组织中的表达增高,DARPP-32参与胃癌的发生,其信号转导通路可能存在于胃上皮细胞,并与胃癌的发生及多药耐药相关.
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肠杆菌科细菌多药外排系统AcrAB的研究进展
细菌耐药性的产生及扩散使新型抗生素从一问世就面临耐药的威胁,尤为突出的是,当细菌接触某种抗生素时,其可产生对多种结构不相关抗生素的多重耐药,这种表型通常是多药外排系统超表达的结果.现已认识到,在决定细菌对各种抗微生物制剂固有及获得性耐药的因素中,主动外排机制居主要地位[1].其中AcrAB-TolC是大肠埃希菌主要的、占绝对优势的多药外排系统,并存在于其它肠杆菌科细菌中,其与细菌对氟喹诺酮耐药及多重耐药密切相关[2-4].本文就AcrAB多药外排系统的结构、调控等研究进展作一综述.
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不合理用药处方浅析
我院是二级医院,病员病种复杂,药物品种繁多,因此多药合用非常多见.因药物的理化特性、剂型、作用机制等方面的差异,多药合用很可能导致不良反应的发生或增加.为促进药物的安全、有效、经济、适当使用,更好使用促进药学服务,我院临床药师对2005年度处方进行了复查、审核,旨在发现药物的不合理应用,及时发现并纠正错误,以提高合理用药水平.现报告如下.
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耐药表型P-gp在骨肉瘤中的表达及其意义
目的 探讨P糖蛋白(P-glyeoprotain,P-gP)在骨肉瘤(osteosareoma,OS)患者中的表达意义,以及与OS多药耐药(multidrug resistant,MDR)机理的联系.方法 收集87例OS病理标本,参照2002年WHO软组织和骨肿瘤病理学及遗传学分类进行组织学分型.选用6例骨软骨瘤(osteochondroma,OCH)和5例正常骨组织标本作对照.采用抗P-gp单克隆抗体进行免疫组织化学染色.在光镜下观察、计算每例OS中P-gp的阳性细胞数占总细胞数的百分比进行等级分组统计学处理.结果 (1)P-gp在OS、OCH和正常骨组织中的阳性表达率分别为60.92%(53/87)、16.67%(1/6)和0%(0/5);OS患者P-gp阳性表达率明显高于OCH和正常骨组织(P<0.05).(2)P-gp着色强度和细胞阳性率呈正相关,相关系数的rs=-0.940/0.983,P<0.05.(3)OS各亚型之间P-gP的表达经秩和检验显示差异无统计学意义(P>0.05),各亚型两两之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 研究结果表明P-gp可能是OS MDR的主要作用机制;P-gp在OS着色强度和细胞阳性率呈正相关;OS各亚型之间P-gp的阳性表达率总体分布无统计学意义;由于OS中P-gp影响MDR,因此在选择检测OS组织细胞MDR时,可用免疫组织化学方法检测.
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铜绿假单胞菌791株耐药性分析
现对我院2006-01～2006-12分离到的791株铜绿假单胞菌进行实验分析如下.
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烧伤病房多重耐药鲍曼不动杆菌院内感染分析
目的 通过对烧伤病房患者感染多重耐药鲍曼不动杆菌处理方法的分析,为以后发生类似医院内感染的处置提供参考.方法 对19例发生多重耐药鲍曼不动杆菌感染患者进行回顾性调查分析.结果 19例创面经换药及植皮后细菌培养多重耐药鲍曼不动杆菌转阴,经换药及植皮后创面愈合.结论 正确处理创面,严格无菌操作,加强营养,心理疏导,提高机体免疫力及合理使用抗生素等是有效控制大面积烧伤患者感染多重耐药鲍曼不动杆 菌的佳方法.
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siRNA干扰血小板内皮细胞黏附因子-1表达对人鼻咽癌耐药细胞CNE1/R多药耐药性的影响
目的 探讨抑制血小板内皮细胞黏附因子-1(PECAM-1)表达对多药耐药基因1(MDR-1)及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)的影响.方法 设计并化学合成针对PECAM-1的三条siRNA序列,命名为si-PECAM1,2,3,脂质体转染法将其转入CNE1/R,采用Semi-qRT-PCR、Western blot方法检测并筛选出抑制效果好的si-PECAM序列,将筛选出的si-PECAM转入CNE1/R,采用Semi-qRT-PCR、Western blot方法检测抑制PECAM-1表达前后MDR-1及其编码产物P-gp的变化情况.结果 Semi-qRT-PCR的结果显示,设计三条si-PECAM序列均有效,以si-PECAM3干扰效果明显(P<0.001),Western blot结果显示与Semi-qRT-PCR的结果一致;转染si-PECAM3 48 h后做Semi-qRT-PCR的结果显示抑制PECAM-1表达后MDR-1表达明显下调(P<0.001),Western blot结果与Semi-qRT-PCR的结果一致,抑制PECAM-1表达后MDR-1编码产物P-gp的表达也明显下调(P<0.001).结论 抑制CNE1/R中PECAM-1表达后MDR-1及其编码产物P-gp的表达均明显下调,提示PECAM-1可能参与X射线辐射诱导人鼻咽癌细胞发生多药耐药.
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靶向沉默HuR基因增强人肝癌细胞Hep3B对多柔比星的化疗敏感性
目的：探讨沉默人抗原R（HuR）基因对人肝癌细胞Hep3B多柔比星化疗敏感性的影响及相关机制。方法脂质体包裹靶向HuR基因的短发夹RNA（shRNA）转染Hep3B细胞，real-time PCR和Western blot分别检测沉默HuR基因后HuR、MDR1 mRNA和蛋白的表达，MTT法检测沉默HuR基因后Hep3B细胞对多柔比星化疗的敏感性，流式细胞术（FCM）检测沉默HuR基因后对Hep3B细胞凋亡的影响。结果 HuR shRNA质粒转染Hep3B细胞能有效沉默HuR基因，mRNA和蛋白水平的抑制率分别为82%和75%。与未处理Hep3B细胞（Mock组）比较，沉默HuR基因的Hep3B细胞（siHuR组）对多柔比星的半数抑制浓度（IC50）显著降低[（86.36±6.54）μg/L vs.（318.56±9.89）μg/L， P＜0.05]，细胞凋亡率明显升高[（30.48±5.12）%vs.（8.86±1.35）%，P＜0.05]，MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达显著降低，比值分别为0.36±0.08和0.28±0.11，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Mock组与转染对照shRNA质粒Hep3B（Control组）的各检测指标均无统计学差异（P＞0.05）。结论沉默HuR基因可能通过抑制耐药蛋白P-gp的表达增强其对多柔比星的化疗敏感性。
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抗疟药氯喹增强胃癌裸鼠移植瘤对顺铂的化疗敏感性
目的：探讨抗疟药氯喹（CQ）增强顺铂（DDP）抑制胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长的作用。方法建立胃癌SGC7901细胞裸鼠异位移植瘤模型，将24只荷瘤鼠随机分为对照组、DDP组、CQ组和CQ＋DDP组。腹腔注射给药，给药后每3日测量肿瘤体积。给药结束时处死裸鼠，剥离移植瘤，称重。Western Blot检测肿瘤组织beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰcaspase3和P-gp表达，RT-PCR技术检测MDR1 mRNA水平。结果与对照组相比，DDP组移植瘤生长缓慢，体积较小，抑瘤率为47.6%，而且Beclin1和LC3表达增加，LCⅠ转换LCⅡ增多。联合氯喹后，抑瘤率提高至84.7%（P＜0.01），LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降；检测到caspase3蛋白水平升高，MDR1/P-gp表达下降（均P＜0.05）。结论氯喹能增强胃癌裸鼠移植瘤对顺铂的化疗敏感性，这一作用可能与抑制自噬活性和下调多药耐药基因MDR1/P-gp的表达有关。
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碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行病学及碳青霉烯酶类型的研究
目的了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶类型.方法收集本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌45株,浓度梯度法(Etest)测定低抑菌浓度(MIC);采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性;通过等电点聚焦电泳(IEF)、三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)、克隆测序等方法分析碳青霉烯酶类型.结果 45株细菌均为多重耐药株,仅对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率较低分别为2.2%和6.5%,敏感率分别为63.0%和43.5%.45株菌株PFGE图谱分为A、B两型,A型是主要流行株(44株),主要集中在重症监护病房(ICU).B型1株来自血液科病房.45株菌中有43株产碳青霉烯酶 ,其中16号株(PFGE为B型)等电点有6.6、7.2两个条带,pI 6.6为OXA-23,其余42株(A1～A4亚型)pIs均有6.4、7.0两个条带,均不被克拉维酸、氯唑西林及2-巯基丙酸抑制,PCR方法也未能检出OXA-23、OXA-24系列的基因.结论本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致,该流行株呈多重耐药,未发现金属酶,仅1株产OXA型碳青霉烯酶,为OXA-23.
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南京地区2004-2007年血培养病原菌分布和耐药性变迁
引起重视.
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多药耐药基因在人骨髓CD34+细胞中的表达及对化疗药物的耐受性
目的探讨人多药耐药(MDR1)基因过表达能否提高骨髓造血干/祖细胞对化疗药物的耐受性.方法应用免疫磁性分选系统(miniMACS)体外分离、纯化骨髓CD34+细胞并进行扩增;采用脂质体介导的基因转移方法,将人MDR1基因转染骨髓CD34+细胞,并运用流式细胞术检测基因转导前后造血干/祖细胞中MDR1基因的编码产物-Pl70糖蛋白表达和功能变化.MTT法检测基因转导前后造血干/祖细胞对化疗药物耐受性的改变.结果 MDR1基因转导后48 h骨髓造血干/祖细胞Pl70抗原表达为(23.6±2.34)%,明显高于转导前(11.2±2.2)%(P<0.01).P170的功能活性被Rh-123的摄取和排除试验证实.转基因后细胞表现为典型的多药耐药表型,对P170谱的多种化疗药的耐受性提高了约2～8倍,对非P170谱的顺铂、氨甲喋呤耐受性没有改变. 结论人多药耐药基因能提高骨髓造血干/祖细胞对多种化疗药物的耐受性,表现为典型的多药耐药表型.
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多重耐药绿脓假单胞菌中I类整合子的研究
目的探讨整合子介导耐药在多重耐药绿脓假单胞菌中所起的作用.方法采用纸片扩散法进行药物敏感试验,筛选多重耐药绿脓假单胞菌;应用三维试验法区别β内酰胺酶型别;采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药菌中的整合子基因,并应用DNA测序研究整合子内携带的耐药基因.结果多重耐药绿脓假单胞菌中整合子检出率为42.4%,所检出整合子共有3种长度即750、1 000、2 500 bp,它们分别携带了aadB、aadA2、aadB、aac6-II和PSE-1基因.结论整合子参与是形成绿脓假单胞菌多重耐药的重要因素.
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卡他莫拉菌耐药性与β内酰胺酶分型
目的对卡他莫拉菌BROβ内酰胺酶进行分型分析,并对其与抗菌药物耐药的关系进行探讨.方法采用BSAC(british society for antimicrobial chemotherapy, BSAC)琼脂稀释法对本院呼吸道感染患儿鼻咽部分离的80株卡他莫拉菌株进行8种药敏试验,用Nitrocefin纸片检测β内酰胺酶,采用限制性内切酶分析方法进行bro 基因分型,同时将bro-1基因阳性和bro-2基因阳性菌株对β内酰胺类抗菌药物的耐药性进行比较.结果 (1) 80株卡他莫拉菌β内酰胺酶阳性率为95.0%.对氨苄西林MIC90为32 μg/ml,对头孢呋辛、头孢克洛和头孢噻肟的MIC90分别为4、8、1 μg/ml,对四环素的MIC90为16 μg/ml;环丙沙星为敏感的抗菌药.(2)80株卡他莫拉菌bro基因分型结果:6株(7.5%)bro阴性,55株(68.8%)bro-1阳性,19株(23.8%)bro-2阳性.其中有2株bro基因阴性经Nitrocefin纸片法检测,β内酰胺酶结果为阳性,其他菌株基因检测与产酶结果一致.(3)bro-1阳性菌株对氨苄西林、头孢克洛的MIC90值与bro-2阳性菌株相比,有不同程度的升高.结论我国儿童携带的卡他莫拉菌产酶率高,对氨苄西林高度耐药.目前应加强该菌对头孢类和四环素的耐药监测.限制性内切酶分析方法在检测bro基因、筛选卡他莫拉菌对β内酰胺类抗生素的耐药及分子流行病学调查方面有一定的应用价值.
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整合子介导大肠埃希菌和克雷伯菌多重耐药机制的研究
目的 研究整合子参与大肠埃希菌和克雷伯菌多重耐药的分子机制.方法 纸片扩散法测定61株临床分离的大肠埃希菌和克雷伯菌的药物敏感性;整合酶基因扩增法检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;整合子可变区扩增并测序.结果 73.8%(45/61)的菌株Ⅰ类整合子阳性,2株大肠埃希菌Ⅱ类整合子阳性,未检测到Ⅲ类整合子;88.9%(40/45)的Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性,扩增片段大小从150～2 800 bp不等,有1株Ⅱ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性,大小为2 200bp;整合子可变区含有编码对氨基糖苷类抗生素耐药的基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadB、aacA4、aac6'-Ib)、编码对磺胺类抗生素耐药的基因(dfrA1、dfr2d、dfrⅤ、dfrⅫ、dfr17)、编码对氯霉素耐药的基因(cat、catB8、cmlA1-variant)、编码对β-内酰胺类抗生素耐药的基因(blaoxa10)和编码对链丝菌素耐药的基因(sat1).结论 整合子在大肠埃希菌和克雷伯菌中广泛存在,参与了这两种菌多重耐药的形成.
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嗜麦芽窄食单胞菌两株临床菌株外排泵SmeDEF诱导表达的研究
近10年来嗜麦芽窄食单胞菌所致的感染不断上升,已成为医院感染的重要致病菌,其多重耐药可能与外排泵有关.SmeDEF泵外排包括氟喹诺酮类等多种抗生素.大肠埃希菌多药外排泵AcrAB表达,与耐药表型的诱导有关,是否嗜麦芽窄食单胞菌也有同样机制,待研究.
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上海地区肺结核病患者氧氟沙星耐药情况分析
目的 了解上海地区肺结核病患者氧氟沙星耐药的分布情况及可能的危险因素.方法 收集2009-2010年上海市各结核病定点医院的447株对任意一种一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇)耐药的菌株,同期随机选取151株对上述4种一线抗结核药物全敏感菌株,对这598株结核分枝杆菌菌株进行氧氟沙星敏感性检测,分析氧氟沙星耐药的分布情况.收集肺结核患者的年龄、性别、抗结核治疗史和户籍资料,采用多因素分析研究氧氟沙星耐药可能的危险因素.用DNA测序分析氧氟沙星耐药菌株gyrA、gyrB基因耐药突变的特征.结果 447株耐药菌株中,72株(16.1%)对氧氟沙星耐药,MDR(至少同时对异烟肼、利福平耐药)结核分枝杆菌中氧氟沙星耐药44株(39.6%).在151株一线抗结核药物全敏感菌株中,4株(2.6%)耐氧氟沙星.多因素分析结果显示MDR和多耐药(对一种以上抗结核药物耐药,但不对异烟肼和利福平同时耐药)等与氧氟沙星耐药有关(OR分别为19.5、5.6,95% CI 分别为6.4～59.4、1.7～18.1,P均＜0.05).患者为复治病例与氧氟沙星耐药相关(OR=2.3,95%CI:1.2～4.0,P＜0.05).氧氟沙星耐药与年龄偏大有关(OR=1.03,95%CI:1.01～1.05,P＜0.05).76株氧氟沙星耐药菌株的gyrA、gyrB基因序列分析显示62株(81.6%)发生耐药突变.结论 上海地区MDR结核病患者中氧氟沙星耐药率高于对一线抗结核药物全敏感的肺结核病患者.MDR、多耐药、复治、年龄为氧氟沙星耐药可能的危险因素,其中以MDR与氧氟沙星耐药的关联强度大.
