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急性白血病患者骨髓中GST-pi的表达与活性
目的:检测GST-pi在急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓中的表达及活性,分析其临床意义.方法:采用免疫组化方法检测160例急性白血病患者骨髓GST-pi的表达,同时采用Habig的实验方法测定其中25例标本的GS-pi活性.结果:GST-pi在复发/难治组中的表达显著高于初治/敏感组,x2=21.910,P=0.000;AML组与ALL组GST-pi表达差异无统计学意义,P＞0.05;GST-pi表达阳性组的完全缓解率明显低于GST-pi表达阴性组,x2=46.166,P=0.000.白血病组GST-pi活性明显高于正常对照组,t=7.512,P=0.002;GST-pi表达与活性高度正相关,r=0.71,P=0.004,其中有2例患者GSt-pi高表达低活性.结论:GST-pi的表达及活性与AL的发生发展密切相关,GST-pi可作为判断AL预后的重要指标.
关键词： 白血病 谷胱甘肽转移酶/代谢 抗药性 多药 -
鼻咽癌组织多药耐药相关蛋白表达及其与临床分期关系的研究
目的:探讨多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)在鼻咽癌中的表达及与临床分期的关系.方法:对73例鼻咽癌采用免疫组化SP法检测鼻咽癌中MRP的表达,并分析其表达与临床分期的关系.结果:鼻咽癌中有较高水平的MRP表达,阳性表达率为68.49%(50/73).其中,MRP在Ⅰ～Ⅱ期的阳性表达率为58.33%(7/12),Ⅲ～Ⅳ期的阳性表达率为70.49%(43/61);T1～2期的阳性表达率为61.54%(24/39),T3～4期中阳性表达率为76.47%(26/34);N0～1期的阳性表达率为69.70%(23/33),N2～3期中阳性表达率为67.50%(27/40).以上表达率经检验差异无统计学意义,P＞0.05.结论:MRP基因在鼻咽癌中有较高的表达水平,但其表达与临床分期无关.
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宫颈腺癌组织ERK1/2和p16INK4a及P-gp表达与耐药相关性分析
目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、p16INK4a及p-糖蛋白(P-gp)与宫颈腺癌耐药的关系.方法:PV9000免疫组化二步法检测化疗敏感组(14例)及耐药组(25例)宫颈腺癌活检组织中ERK1/2、p16INK4a及P-gp蛋白的表达情况,分析ERK1/2、p16INK4a及P-gp在两组的表达差异、3者的表达相关性及与宫颈腺癌患者3年生存率的关系.结果:ERK1/2在耐药组及敏感组的高表达率分别为72.0％(18/25)及35.7％(5/14),差异有统计学意义,U=96,P=0.016;P-gp在耐药组的高表达率为76.0％(19/25),显著高于敏感组的28.6％(4/14),差异有统计学意义,U=102,P=0.026；p16INK4a蛋白在耐药组及敏感组的表达差异无统计学意义,U=129,P=0.140.ERK1/2与p16INK4a的表达呈正相关,r=0.571,P＜0.001；ERK1/2与P-gp的表达呈正相关,r=0.364,P=0.023；p16INK4a与P-gp的表达无明显相关性,r=0.254,P=0.132.ERK1/2高表达与低表达患者的3年生存率分别为60.9％(14/23)和93.8％(15/16),差异有统计学意义,x2 =4.723,P=0.030;而p16INK4a高表达与低表达患者的3年生存率分别为68.0％(17/25)和85.7％(12/14),差异无统计学意义,x2=1.355,P=0.244;P-gp高表达与低表达患者的3年生存率分别为65.2％ (15/23)和87.5％(14/16),差异无统计学意义,x2 =2.347,P=0.125.结论:ERK1/2和P-gp的高表达与宫颈腺癌耐药相关;ERK1/2的表达情况不仅可为宫颈腺癌化疗用药提供参考,而且可作为宫颈腺癌判断预后的指标.
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p38MAPK对卵巢癌顺铂耐药作用及机制的探讨
目的:研究p38MAPK在卵巢上皮癌顺铂化疗耐药中的作用,并探讨其作用机制.方法:蛋白质印迹法检测顺铂对卵巢癌中p38MAPK的激活情况 ;MTT法检测p38MAPK抑制剂SB203580处理后及p38 shRNA干扰后细胞顺铂耐药指数的变化 ;实时定量PCR技术检测SB203580处理后及p38 shRNA干扰后,耐药蛋白ERCC1、MDR、LRP、GST-π及凋亡蛋白Caspase-3、Survivin等mRNA的表达变化.结果:在一定时间浓度梯度下,顺铂可诱导卵巢癌顺铂敏感株COC1及耐药株COC1/DDP细胞内p38MAPK的激活,但耐药株的激活程度弱于敏感株 ;p38MAPK抑制剂SB203580及p38 shRNA干扰可增加卵巢癌细胞株的耐药指数(t=4.610,P=0.041 ;t=11.621,P=0.000) ;SB203580及p38 shRNA干扰后Survivin mRNA(t=5.152,P=0.007 ;t=6.008,P=0.004)、ERCC1 mRNA(t=13.742,P=0.005;t=11.621,P=0.000)及LRPmRNA(t=8.173,P=0.001 ;t=16.815,P=0.000)的表达明显上调.结论:p38MAPK受抑制可能导致卵巢上皮性癌顺铂耐药的产生,其机制可能是通过上调Survivin、ERCC1及LRP的mRNA表达来实现.
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99Tcm-MIBI SPECT预测小细胞肺癌CE方案化疗疗效的临床研究
目的:探讨99Tcm-MIBI摄取与小细胞肺癌(SCLC) CE方案化疗疗效的关系.方法:48例SCLC患者根据胸部CT分为化疗有效组(完全缓解+部分缓解)和无效组(进展加重+无缓解),于化疗前行99Tcm-MIBI肺显像,静脉注射99Tcm-MIBI 740 MBq后10～30 min及2～3 h分别行早期及延迟显像, 在99Tcm-MIBI显像的断层图上用感兴趣区(ROI)的方法,勾画出病灶,然后镜像ROI于健侧肺的相应部位,由此分别获得早期相肿瘤/正常肺组织摄取比值(ER)和延迟相肿瘤/正常肺摄取比值(DR),并计算出滞留指数(RI%)=100×(DR-ER)/ER.分析化疗有效组与化疗无效组ER、DR和RI之间的差别.结果: 99Tcm- MIBI显像结果中,化疗有效组和无效组平均 ER、DR和RI比较差异有统计学意义(t=2.573 8,P＜0.02;t=4.829 1,P＜0.001;t=4.733 1,P＜0.001),化疗有效组的ER、DR、RI均高于无效组.结论:99Tcm-MIBI显像的ER、DR和RI可能有助于预测SCLC患者CE方案化疗的疗效.
关键词： 癌 小细胞肺/药物疗法 99锝m甲氧基异丁基异腈 抗药性 多药 -
转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞多药耐药性研究
目的:探讨转染Bcl-2基因后膀胱癌细胞的多药耐药变化.方法:采用基因重组技术构建Bcl-2基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2,经酶切和基因测序分析对构建结果进行鉴定;通过脂质体将含Bcl-2基因的表达载体转染膀胱癌细胞BIU-87,RT-PCR检测基因转录水平;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞在不同化疗药物作用下的细胞耐药性.结果:经酶切鉴定和基因测序分析证明真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2构建成功.将该表达载体转染BIU-87细胞后,Bcl-2基因的表达水平与野生型BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞相比显著提高(P＜0.01).与BIU-87细胞和BIU-87/neo细胞相比, BIU-87/Bcl-2细胞对MMC、PHA和DDP等化疗药物的耐药性也明显增强(P＜0.01).结论:Bcl-2基因高表达是膀胱癌多药耐药的原因之一.
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斑蝥酸钠维生素B6注射液对人白血病K562/AO2细胞的逆转作用及机制的研究
目的:研究斑蝥酸钠维生素B6注射液(SCA)体外对K562/AO2细胞多柔比星(ADM)耐药的逆转作用及机制.方法:应用MTT法测定SCA作用人白血病K562/AO2细胞后对ADM敏感性的变化.采用流式细胞术(FCM)法测定SCA对K562/AO2细胞内ADM的影响及Bcl-2、P-gp蛋白表达的影响.结果:SCA作用K562/AO2细胞前后,对ADM的IC50分别为(40.85±0.40)和(27.09±0.63) μg/mL,逆转倍数为1.51倍;FCM发现SCA能明显增加K562/AO2细胞内ADM的浓度,并使Bcl-2、P-gp蛋白表达下调.结论:SCA能部分逆转K562/AO2对ADM的耐药性,机制可能与增加MDR细胞内的ADM浓度,抑制Bcl-2和P-gp蛋白表达有关.
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原发性卵巢癌多药耐药性及其与预后相关性的研究
目的:检测PGP、GST-π、Topo-Ⅱ和LRP在原发性卵巢癌组织中的表达状况,为卵巢癌术后化疗方案的选择和预后判断提供新的有价值的参考指标.方法:采用免疫组化技术检测80例卵巢癌组织中PGP、GST-π、Topo-Ⅱ和LRP的表达,评价其与卵巢癌临床病理参数的关系和预后.结果: PGP、GST-π、Topo-Ⅱ、LRP在卵巢癌组织中阳性表达率分别为57.5%、58.8%、76.3%和73.8%,均高于良性肿瘤和正常组织对照组,P<0.05.临床分期Ⅰ/Ⅱ和Ⅲ/Ⅳ期中,PGP的表达率为40.7%和66.0%(P<0.05),GST-π的为40.7%和67.9%(P<0.05),Topo-Ⅱ的为66.7%和81.1%(P>0.05),LRP的为55.6%和83.0%(P<0.05).随分化程度由高到低,PGP的表达率为57.9%、62.1%和53.1%(P>0.05),GST-π的为36.8%、55.2%和75.0%(P<0.05),Topo-Ⅱ的为52.6%、79.3%和87.5%(P<0.05),LRP的为84.2%、69.0%和71.9%(P>0.05).PGP阳性与阴性组中位生存期为36和48个月(P=0.001 7),GST-π为36和41个月(P=0.010 3),Topo-Ⅱ为37和39个月(P=0.381 1),LRP为37和55个月(P=0.002 1).影响卵巢癌生存因素分别为临床分期和PGP、GST-π、LRP的表达.临床Ⅲ/Ⅳ期的患者相对死亡风险度为Ⅰ/Ⅱ期患者的9.460倍,PGP、GST-π、LRP阳性患者相对死亡风险度分别是阴性表达患者的2.049、2.452和2.609倍.结论:原发性卵巢癌存在多药耐药,联合检测有助于遴选术后化疗药物,并预测患者的生存和预后.
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肺癌组织中突变型p53蛋白与肿瘤耐药蛋白表达对治疗及预后影响的研究
目的:探讨突变型p53蛋白与肿瘤耐药蛋白在肺癌组织的表达特点及其临床意义.方法:免疫组化法检测66例肺癌组织中突变型p53蛋白与各种肿瘤耐药蛋白的表达,并分析治疗及其效果和生存情况.结果:不同TNM分期(χ2＝6.22,P＝0.016)、淋巴结转移(χ2＝3.88,P＝0.045)、化疗效果(χ2＝4.78,P＝0.035)及3年生存组(χ2＝5.10,P＝0.024)的突变型p53蛋白表达均差异有统计学意义;而P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)和谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)的表达仅对近期化疗效果产生影响,P值分别为0.035、0.018、0.041和0.021.仅突变型p53蛋白阳性组和阴性组的3年生存率、中位生存期差异有统计学意义,χ2＝5.137,P＝0.023;不同病理类型肺癌患者3年生存率、生存时间的差异也有统计学意义,χ2＝19.5,P＝0.001.结论:突变型p53蛋白的检测能在一定程度上反映肺癌的TNM分期、淋巴结转移、化疗效果和预后;而P-gp、MRP、GST-π和LRP的检测只能提示肺癌的近期化疗效果;不同病理类型的肺癌患者预后不同.
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乳腺癌组织中多药耐药相关蛋白的表达及其临床意义
目的:探讨P-gp、LRP、GST-π和Topo-Ⅱ在乳腺癌组织中的表达及术前化疗对乳腺癌多药耐药的影响和临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法,对18例术前曾用化疗和70例术前未用化疗的88例乳腺癌组织检测P-gp、LRP、GST-π和Topo-Ⅱ的表达.结果:88例乳腺癌中P-gp、LRP、GST-π和Topo-Ⅱ的阳性率分别为42.0%、53.4%、48.9%和40.9%.术前应用化疗的的患者癌组织P-gp、LRP和GST-π三者阳性表达率均较未用化疗的患者高,P-gp和LRP差异有统计学意义(P＜0.05),而GST-π差异无统计学意义,P＞0.05.Topo-Ⅱ有化疗史的患者比无化疗史的患者低,但差异无统计学意义,P＞0.05.结论:P-gp、LRP、GST-π和Topo-Ⅱ的耐药机制各不相同,同时检测P-gp、LRP、GST-π和Topo-Ⅱ等多种导致多药耐药的因素,对乳腺癌化疗有重要的指导意义.
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宫颈癌组织及外周血耐药相关基因的表达及其相关性研究
目的:探讨宫颈癌组织及外周血多药耐药MDR1基因、多药耐药相关蛋白MRP的表达及其相关性.方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测36例宫颈癌组织及外周血MDR1mRNA、MRPmRNA.结果:宫颈癌组织及外周血MDR1的阳性表达率分别为61.1%、58.3%,两者之间明显相关(rs＇=0.597,P＜0.01).而MRP的阳性表达率分别为66.7%、77.8%,两者之间无相关性.宫颈癌组织中MDR1和MRP的表达存在正相关(rs＇=0.524,P＜0.05).两者在低分化宫颈癌中阳性率均高于中、高分化者(P＜0.05).结论:宫颈癌组织中MDR1和MRP的共表达可提示预后不良,外周血MDR1阳性可间接反应癌组织对化疗药物的耐受.
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子宫内膜癌多药耐药基因(MDRI)的表达及其意义
目的探讨子宫内膜癌多药耐药基因(MDR1)的表达及其意义.方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),对37例初治子宫内膜癌、10例正常子宫内膜及10例正常子宫肌层组织MDR1 基因的表达进行检测,同时用MTT 法对宫内膜癌进行肿瘤细胞体外药敏试验.结果 37例子宫内膜癌和10例正常子宫内膜组织MDR1 表达均为阳性,MTT药敏试验表明绝大多数子宫内膜癌对化疗药物具有交叉耐药性.结论子宫内膜癌对化疗的耐药可能是一种固有性MDR,这可能与MDR1基因的表达有关.
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肿瘤敏感相关基因克隆cDNA消减文库的构建
目的:烷基磷脂类化合物(十六烷基磷酸胆碱,HePC)诱导人上皮性肿瘤细胞系产生交叉耐药.方法:用抑制消减杂交技术,构建KB和KBr cDNA消减文库.KB为tester cDNA与过量的KBr cDNA消减杂交,非特异性cDNA片段被有效消减,特异表达的文库得到富集.结果:扩增后得到127个克隆,挑取质粒,酶切分析均得到400～800 bp插入片段.在获得可分析的78个克隆中,27%没有同源基因片段或同源性很低,暂定为"新基因";14%具有染色体明确定位,应该认为是化疗敏感肿瘤KB细胞所特有的cDNA片段;19%在人类EST文库MGC和CGAP中出现,可能是肿瘤细胞所特有基因;发现与耐药性相关的已知功能基因高达40%.结论:探索伴随肿瘤细胞耐药发生基因丢失,以开拓抗性逆转措施的新途径.
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放射与肿瘤多药耐药性研究的现状
肿瘤发病率及死亡率一直呈上升趋势,合理的放化综合治疗是肿瘤治疗中一直在研究的一个重要课题.但临床上对于比较常用的序贯治疗尚无好方案,有些观点认为应先放后化.
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胃癌细胞多药耐药机制及耐药性逆转
中国胃癌的发病例数占全球总数的1/3.化疗是治疗胃癌的有效手段,但由于肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的产生,化疗疗效往往不佳.深入探讨胃癌MDR产生机制,寻找有效低毒的多药耐药逆转剂,对提高化疗的有效性,延长患者的生存期有着重要的意义.从转运蛋白有关的耐药机制、酶系统有关的耐药机制、细胞凋亡与耐药、细胞因子等四方面肿瘤细胞MDR产生的机制做一简要综述.
关键词： 胃肿瘤 抗药性 多药 多药耐药相关蛋白质类 反转录酶抑制剂 -
多药耐药基因、谷胱甘肽S-转移酶特异性siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药
目的 研究多药耐药基因(mdr1)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)特异性siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药性.方法 以mdr1 mRNA第79～99和GSTπmRNA第308～327核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的siRNA,克隆入pSilence2.1-U6 neo,克隆产物为pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ,脂质体介导下转染K562/A02细胞.用实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞mdr1和GSTπ mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法检测多柔比星的半数抑制浓度(IC50).结果 经酶切、测序分析表明,成功构建siRNA真核表达载体.经pSilence-mdr1转染后的K562/A02细胞株mdr1 mRNA表达量下降了71.5%,从(2.8±1.65)×108拷贝/μg RNA下降至(3.9±2.37)×107拷贝/μg RNA(P＜0.01);同时pSilence-GSTπ作用后,K562/A02细胞GSTπmRNA表达量较显示空载体pSilence2.1-U6转染组下降了39.8%,从(2.3±1.14)×105拷贝/μg RNA下降至(5.4±2.45)×104拷贝/μg RNA(P＜0.01);流式细胞仪显示空载体pSilence2.1-U6转染组细胞凋亡率为(11.65±4.06)%,pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ共转染组细胞凋亡率为(44.98±11.27)%(P＜0.01);空载体转染组耐药指数为23,pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ共转染组耐药指数降低为7,IC50值从转染前的(1.16±0.38)mmol/ml下降为(0.33±0.04)mmol/ml(P＜0.01).结论 siRNA真核表达载体pSilence-mdr1、pSilence-GSTπ对K562/A02细胞株多药耐药性具有明显的下调作用.
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具有转移能力鼻咽癌细胞株候选抗药与多药耐药相关基因的筛选
目的 筛选具有转移能力的鼻咽癌细胞株中候选抗药与多药耐药相关基因.方法 利用8000点的基因芯片比较5-8F和6-10B细胞株之间的差异表达基因,并利用在线MILANO程序分析,筛选抗药与多药耐药相关基因.半定量RT-PCR验证差异表达基因.结果 分析5-8F和6-10B细胞株之间基因表达谱后,共找到283个差异表达基因,其中表达上调基因185个,下调基因98个.MILANO程序分析后,在5-8F细胞株中找到4个可能与抗药和多药耐药相关的高表达基因:UGT1A9(15.85倍)、MVP(6.77倍)、CAV1(2.49倍)和HIF1A(2.67倍).半定量RT-PCR验证4个基因筛选结果的可靠性.结论 经在线MILANO程序分析鉴定的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞株之间的差异表达基因可能与具有转移能力鼻咽癌细胞株的抗药和多药耐药有关.
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十字孢碱促进多柔比星诱导的多药抗药性肿瘤细胞系的凋亡
目的 明确蛋白激酶C(PKC)活性的抑制是否能促进化疗药物诱导的多药抗药肿瘤细胞系的凋亡.方法 选用口腔鳞癌细胞KB/S及其多药抗药株KB/VCR,常规细胞培养,比较在单独或联合PKC抑制剂十字孢碱的情况下,多柔比星(ADM)诱导这2种细胞的凋亡情况.凋亡采用流式细胞术和吖啶橙荧光染色检测,并经电子显微镜观察证实.结果 ADM 0.04μg/ml,作用36 h有96.68%KB/S细胞凋亡,作用48h有64.99%的KB/VCR细胞凋亡;将ADM质量浓度增加到0.4μg/ml和2.0 μg/ml时,KB/VCR细胞凋亡比例分别为69.74%和37.18%;合用十字孢碱后,凋亡细胞比例分别增加到82.58%和47.65%,经统计学处理,前者χ2=4.5,P＜0.05;后者χ2=2.2,P＞0.05.这些结果均经电镜和吖啶橙染色证实.结论 耐受凋亡可能是肿瘤细胞多药抗药的机制之一,而PKC抑制剂可解除这种耐受.
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癫痫病人血细胞多药耐受基因表达产物细胞膜糖蛋白的检测
目的探索血白细胞多药耐受(MDR)基因表达与难治性癫痫耐药性的关系.方法用免疫组化和流式细胞仪两种方法检测癫痫病人血中MDR基因的表达产物细胞膜糖蛋白,并对其结果进行临床验证.结果流式细胞仪检测49例,其中11例表达阳性的患者对随后进行的治疗无效,而表达阴性的32例患者中18例有效;免疫组化检测34例,22例阳性患者中仅2例有效,12例表达阴性的患者中7例有效.结论血中MDR的表达可作为难治性癫痫病人耐药性的重要参考指标,流式细胞仪检测的敏感性较免疫组化差,但准确度高.
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耐药性杏仁核点燃癫痫模型海马组织中γ-氨基丁酸受体表达变化
目的 建立多药耐药性癫痫模型,观察海马组织γ-氨基丁酸(GABA)受体表达变化从而探讨其在耐药性杏仁核点燃癫痫形成中的作用.方法 选用Wistar大鼠100只制作慢性杏仁核点燃癫痫模型,模型制作成功(n=52)后用经典抗癫痫药苯妥英钠和苯巴比妥进行筛选,根据大鼠对苯妥英钠和苯巴比妥的反应区别出耐药癫痫大鼠(n=8)及药物敏感大鼠(n=8),然后处死动物留取脑组织标本,用免疫组织化学染色方法观察海马组织内GABAA受体表达变化,用蛋白质印迹法检测GABAA受体含量,观察耐药癫痫大鼠和药物敏感大鼠之间的不同.结果 耐药癫痫性颞叶大鼠海马细胞变性坏死,排列紊乱,结构特征消失；耐药性颞叶癫痫大鼠海马组织内GABAA受体阳性表达细胞的灰度值(141.15±14.72)比药物敏感大鼠增高(92.56 ±5.17;t =3.380,P=0.006)；蛋白质印迹方法提示受体条带变淡变窄,蛋白含量明显减少(0.38 ±0.08),与药物敏感大鼠(0.88 ±0.18)比较,差异具有统计学意义(t=5.420,P=0.002)；但两组间GABAA受体阳性细胞数百分率比较差异无统计学意义.结论 耐药性颞叶癫痫大鼠海马组织内GABA受体表达明显减少,这可能在耐药性颞叶癫痫的形成过程中发挥部分作用.
