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医药营销两极现象透视
当前,一些医药企业在开展产品营销时似乎走进了一个误区,高投入、大制作、炒概念等营销理念正在流行,原来一些朴素的营销方式正在被一些营销者遗忘.按道理,营销创新是必须的,也是诸多药企所热衷的.
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加强处方审核促进临床合理用药
近年来,临床上使用的药物品种日益增多,多药合用现象比较常见,极易导致不良反应的发生,不合理用药已经成为十分严重的药害事件的重要原因,为保证患者用药的安全、有效、经济、方便,推进药学服务水平,应强化处方审核,对不合理用药实行有效干预.
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临床血液培养病原菌菌群分布及耐药趋势分析
目的 调查血液培养中病原菌的菌群分布及耐药趋势.方法 1995/2004血液培养标本用荧光全自动血液培养仪(Bactec9120)进行培养,阳性标本用全自动微生物鉴定仪(Vitek32)进行鉴定,药敏采用KB法.结果 在3 104份血液培养标本中分离出病原菌331株,阳性检出率为10.7%.病原菌以革兰阳性(G+)需氧球菌居首位(50.3%),革兰阴性(G-)需氧杆菌次之(44.7%),真菌占3.0%,厌氧菌占1.1%.血液培养中的G+球菌对万古霉素和亚胺培南较为敏感,G-杆菌对亚胺培南、舒普深、丁胺卡那较为敏感.结论 血液培养病原菌以G+球菌为主,G-杆菌次之;儿童血液培养病原菌以葡萄球菌属为主;亚胺培南对G+球菌和G-杆菌均具有较高的敏感率.
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小儿用药注意事项
小儿正处于生长发育阶段,在解剖、生理、病理方面有明显的特点,许多脏器,神经系统发育尚不完全.对许多药极为敏感,因此,严格小儿用药,正确选择使用安全、有效的药物是我们每一位医务人员的职责.
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东北三省近期药市行情:大黄走快价攀升虫草走缓价微降
入夏以来,虽然到了药市销售淡季,但是热点、亮点品种轮番登场,东北三省药材市场人气旺盛,价升品种增多,价降品种逐日减少,预计药市后市走势将稳中看涨.特别值得一提的是大黄近日货少、价升,且升幅较大,引起很多药商的关注.具体行情如下:
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医院五年鲍曼不动杆菌耐药性分析
鲍曼不动杆菌常引起呼吸机相关性肺炎、泌尿系统感染和败血症等[1],是医院感染呼吸机相关性肺炎的常见病原菌[2].自2010年,我院开始分离出多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-Ab)、泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-Ab)以及耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CR-Ab)等鲍曼不动杆菌耐药菌株,为了解我院鲍曼不动杆菌感染及其耐药特点,本研究对所有送检标本分离的鲍曼不动杆菌的试验结果进行分析,现报道如下.
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重组腺病毒介导MRP反义RNA逆转人肝癌细胞多药耐药表型的体外实验研究
目的探讨重组腺病毒介导的多药耐药相关蛋白(MRP)反义RNA对阿霉素诱导的人肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM多药耐药表型的体外逆转作用.方法应用自行构建的携带反义MRP的重组腺病毒(Ad-Asmrp),在体外转染人肝癌耐药细胞,测定转染后细胞对阿霉素(ADM)及柔红霉素(DNR)的半数致死量(IC50)并计算耐药倍数(RF值);在转染后不同时间点用流式细胞仪动态测定细胞对DNR摄取的变化及细胞膜表面P190表达、并用RT-PCR反映细胞MRP之mRNA水平的变化.结果体外实验中,携带MRP反义RNA的重组腺病毒转染后的人肝癌耐药细胞对ADM、DNR的IC50分别为0.487 μg/ml、0.328 μg/ml,RF值分别为97.4、109.3,RF值分别下降36.8和35.4.在转染后24 h,MRP mRNA水平开始下降并呈持续下降趋势(P＜0.01),48 h后伴有P190蛋白表达的持续下降(P＜0.01),二者趋势一致.转染后48h,经流式细胞仪测得细胞内DNR浓度明显上升(P＜0.01).结论重组腺病毒介导的MRP反义RNA可有效封闭MRP基因表达,在体外实验中能增加人肝癌耐药细胞株对化疗药物的敏感性,对肝癌耐药细胞的MDR表型有较好的逆转作用.
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肾移植中他克莫司的血药浓度与多药耐药基因多态性的关系
目的探讨肾移植术后患者的多药耐药基因(MDR1)外显子21(exon21)和26(exon26)的基因多态性对免疫抑制剂他克莫司(FK506)血药浓度的影响.方法采用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切片段多态性(RFLP)的方法对86例肾移植术后的患者进行MDR1基因分型.使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者在术后不同时间的FK506血药浓度.比较不同基因型之间FK506血药浓度与每公斤体重的剂量比值的差异.结果在86例患者中,exon21中GG型为26个(30.2%), GT型为35个(40.7%),TT型为25个(29.1%);exon26中CC型为26个(30.2%), CT型为37个(43.0%),TT型为23个(26.8%).MDR1 exon26 C3435T与MDR1 exon21 G2677T之间存在着明显的连锁不平衡.GG型患者的比值明显低于CT型和TT型患者,而GT型患者又低于TT型患者,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);同样CC型患者的比值明显低于CT型和TT型患者,而CT型患者又低于TT型患者,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论在肾移植患者中MDR1基因多态性与FK506血药浓度具有相关性.GG型和CC型患者拟取得相似的血药浓度要比GT或TT型和CT或TT型患者服用更高剂量的FK506.了解患者的MDR1基因型,有利于肾移植术后FK506个体化应用.
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朊蛋白在耐阿霉素胃癌细胞系SGC7901/ADR中的过表达及其意义
目的探讨朊蛋白(PrP)在耐阿霉素胃癌细胞系SGC7901/ADR中过表达及其与胃癌多药耐药性的相关性.方法 (1) 利用Northern 印迹和Western 印迹分别从RNA水平和蛋白质水平检测朊蛋白在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR及其亲本细胞 SGC7901中的表达;(2) 借助DNA重组技术构建朊蛋白基因的正反义真核表达载体;(3) 通过电穿孔方法将正反义真核表达载体分别转入SGC7901和SGC7901/ADR细胞;(4) 以流式细胞仪检测瞬时转染细胞中的阿霉素蓄积和潴留.结果 (1) Northern印迹和Western印迹结果提示朊蛋白在SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达显著高于其在SGC7901中的表达;(2) 将正反义真核表达载体转入SGC7901(命名为PS)和SGC7901/ADR(命名为PA)中,PCDNA3.1空载体转入SGC7901(命名为BS)和SGC7901/ADR(命名为BA);转染48 h后检测转染细胞的平均阿霉素荧光强度,阿霉素蓄积BS为8.9±0.7,PS为6.6±0.3,BA为 5.5±0.7, PA 7.5±0.6,阿霉素潴留BS为8.0±0.7,PS为5.9±0.5,BA 5.1±0.7, PA为7.1±0.5,PS与BS相比两组均为P<0.01,RA与BA相比均为P<0.01表达,并对胃癌细胞,具有统计学意义.结论朊蛋白在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中高表达并对胃癌细胞的药物蓄积有影响.
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葡萄糖糖基神经酰胺合成酶特异性小干扰RNA表达载体的构建及其逆转乳腺癌细胞耐药的研究
目的构建葡萄糖糖基神经酰胺合成酶 (GCS) 小干扰RNA表达载体,观察其对乳腺癌耐药细胞(MCF-7/ADR)GCS基因表达和耐药性的影响.方法设计合成2对GCS基因的特异性siRNA,分别定向克隆入真核表达载体pSUPER,构建pSUPER-GCS1和pSUPER-GCS2重组质粒,脂质体Lipofect AMINE 2000介导转染MCF-7/ADR细胞,空载体pSUPER转染作为对照,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析GCS mRNA的表达,流式细胞仪观察GCS蛋白的表达,四氮唑盐法检测阿霉素对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50),流式细胞技术检测细胞凋亡率的改变.结果酶切分析和测序证实成功构建了针对GCS的siRNA表达载体pSUPER-GCS1和pSUPER-GCS2.两对重组质粒均可特异性抑制GCS基因表达,转染后48 h GCS mRNA抑制率分别为89.4%、88.5%,GCS蛋白含量分别下降为8.3%±1.0%,9.2%±0.8%,四氮唑盐法显示重组质粒对阿霉素耐药性相对逆转率分别为93.7%、91.6%,明显提高了乳腺癌细胞对于阿霉素的药物敏感性,流式细胞仪结果表明细胞凋亡率增加为15.38±1.16,13.92±1.73,而空载体对照组无以上作用.结论 GCS特异性siRNA表达载体构建成功,且有效抑制了GCS基因表达,并通过诱导耐药细胞凋亡率增加,逆转乳腺癌细胞多药耐药.
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肺炎链球菌临床菌株Tn1545和Tn917介导的大环内酯类耐药性研究
目的探讨上海地区大环内酯类耐药肺炎链球菌ermB基因表达及传播特性.方法收集上海地区对红霉素耐药的肺炎链球菌共86株,用E试验和K-B纸片扩散法检测其对12种抗生素的敏感性;用双纸片法(D试验)确定大环内酯类耐药表型;用PCR 扩增检测耐药基因ermB、mefE和Tn1545、Tn917中ermB基因调控序列,经测序、BLAST比对分析调控序列多态性并按菌株携带Tn1545和Tn917的不同分为Tn1545组和Tn917组,分析二者介导的耐药表型的不同;用BOX-PCR分析不同菌株遗传背景.结果 (1)86株红霉素耐药肺炎链球菌中ermB、mefE、Tn1545、Tn917检出率分别为94%、46%、87%、7%,基因型为ermB-mefE+的5个菌株未检出Tn1545和Tn917.(2)Tn1545组和Tn917组Sp大多对红霉素高度耐药(低抑菌浓度MIC50 256 μg/ml),Tn917组对β内酰胺类抗生素的MIC低于Tn1545组,对四环素、复方磺胺及左氧氟沙星耐药率前者亦低于后者.(3)Tn917组中三株菌发生ermB基因启动子区194 bp片段的删除和前导肽N末端TAAA插入,可能导致ermB基因由诱导型转变成组成型表达;Tn1545组菌株主要表现为cMLSB表型.(4)BOX-PCR图谱呈散发性,未发现单一的耐药克隆株流行. 结论上海地区大环内酯类耐药肺炎链球菌主要是由ermB基因介导的高水平、组成型耐药,ermB基因大多由Tn1545携带并水平转移传播.
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儿科产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药的流行特征分析
目的 研究我国4个地区儿科产超广谱β内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌的耐药流行特征,为临床儿科其致病菌感染治疗提供参考.方法 2005-2006年4个地区5家儿童专科医院临床分离大肠埃希菌5127株,酶抑制剂增强试验初筛及确证产ESBL,琼脂稀释法测定349株产ESBL大肠埃希菌对9种儿科常用抗生素小抑菌浓度(MIC).结果 判断标准根据美国临床标准化委员会2005年版执行.结果 5127株大肠埃希菌产ESBL率为46.7%.349株产ESBL大肠埃希菌对阿莫西彬克拉维酸耐药率为23.1%,中介率为38.5%;头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟耐药率分别为67.2%、24.5%和48.4%,中介率分别为26.4%、5.7%和19.1%;阿米卡星耐药率为5.4%,未检出亚胺培南耐药株.分离株对阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟、环丙沙星及庆大霉素耐药性存在地区差异.结论 ESBL在中国儿科临床分离大肠埃希菌中广泛流行,除亚胺培南、阿米卡星外,产ESBL大肠埃希菌对β内酰胺类药物耐药现象严重,部分药物耐药性存在地区差异.
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白血病K562/ADM细胞耐药性与白血病干细胞及耐药蛋白表达的关系
目的 观察白血病药物敏感和耐受细胞中白血病干细胞(ISC)、耐药蛋白表达和耐药性的关系.方法 以白血病多药耐药株K562/ADM细胞及其亲本K562细胞为模型,MTT比色法测定细胞的药物耐受性;流式细胞术检测细胞免疫标志、P-糖蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达;甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖潜能.结果 K562/ADM细胞对阿霉素、柔红霉素和鬼臼乙叉苷高度耐受.K562/ADM细胞中CD34+、CD123+和CD34+CD38-细胞含量均显著高于K562细胞,LSC细胞相对含量是K562细胞的4.12倍;共表达P-gP和BCRP的K562/ADM细胞比K562细胞高11.25倍,其中CD34+ CD38- CD123+ BCRP+和CD34+ CD38- P-gp+ BCRP+细胞数量分别为K562细胞的3.66倍和11.37倍.K562/ADM细胞集落形成率是K562细胞的4.17倍,与LSC含量相当.结论 白血病K562/ADM耐药细胞中存在的高表达耐药蛋白的耐药性LSC是其多药物耐受性的根源.
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K562细胞及其耐药细胞株K562/A02细胞白血病耐药相关microRNA筛选
目的 通过检测慢性粒细胞白血病急变细胞系K562及其阿霉素耐药株K562/A02的微小RNA(microRNA、miR)表达差异,探讨microRNA与白血病化疗耐药的关系.方法 MTT法检测K562/A02及其亲本细胞系K562的耐药性能;流式细胞术检测K562与K562/A02细胞的P-gp表达;运用microRNA芯片技术筛查K562与K562/A02细胞之间差异表达的microRNA,随后用实时荧光定量RT-PCR方法进一步证实.结果 阿霉素耐药株K562/A02相对于其亲本细胞系K562对阿霉素的耐药倍数为180倍;K562细胞P-gp的表达率为0.2%,K562/A02细胞P-gp的表达率为86%;microRNA芯片结果显示K562/A02与K562细胞之间有22种microRNA表达存在显著的差异(P<0.01),表达差异在2倍以上的有9种,其中miR-221、miR-155、miR-451在K562/A02细胞表达上调,而miR-98、miR-181a、let-7f、miR-424、let-7g和miR-563则表达下调.实时荧光定量RT-PCR进一步证实了上述结果,并显示miR-451、miR-155、miR-221、let-7f、miR-424在两种细胞中表达差异显著.结论 K562/A02与K562细胞存在microRNA表达差异,其中miR-451、miR-155和miR-221在K562/A02中表达显著上调,而let-7f、miR-424则显著下调,提示microRNA可能参与白血病耐药形成,差异表达的microRNA可能为逆转白血病耐药提供新的作用靶点.
关键词： 白血病 抗药性 多药 微RNAs K562/A02细胞 -
碱基错配对短发夹RNA逆转白血病细胞耐药作用的影响
目的 探讨碱基错配对短发夹RNA(shRNA)逆转白血病细胞耐药作用的影响.方法 针对mdr1基因mRNA合成一条序列正确的shRNA及正义链少1个碱基的对应错配shRNA,构建一对抗mdr1 shRNA真核表达载体,脂质体介导转染白血病耐药细胞株K562/A02.采用实时荧光定量RT-PCR检测mdr1 mRNA表达;柔红霉素泵出实验检测P-gp外排泵功能;MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果 序列正确和对应错配shRNA真核表达载体均明显下调mdr1 mRNA的表达,降低细胞膜P-gp外泵功能,60 min柔红霉素泵出率分别为6%和10%,显著低于对照组的45%;细胞内柔红霉素平均荧光强度分别为9.51和7.09,明显高于对照组的2.80;对阿霉素药物敏感性的相对逆转率为90%和87%.结论 正义链碱基错配shRNA对RNA干扰功能无明显影响,与序列正确的shRNA一样可有效逆转mdr1所致的耐药.
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米非司酮逆转K562/A02细胞多药耐药的研究
目的 研究孕激素拮抗剂米非司酮对白血病多药耐药细胞K562/A02的逆转作用及其机制.方法 MTT法检测米非司酮作用72 h后K562/A02细胞增殖及其对阿霉素杀伤敏感性的变化;流式细胞术检测米非司酮作用前后K562/A02细胞表面P糖蛋白的表达和细胞内柔红霉素的浓度;免疫组化法观察米非司酮作用前后K562/A02细胞凋亡相关蛋白bcl-2、Bax、caspase-3的表达;RT-PCR检测米非司酮作用后对K562/A02细胞内葡萄糖神经酰胺合成酶(GcS)mRNA表达的影响.结果 2.5、5.0和10.0 μmol/L米非司酮不抑制K562/A02细胞的增殖,但上述浓度的米非司酮作用后K562/A02细胞对阿霉素的敏感性较前分别增强了1.68、4.17和10.71倍.K562/A02细胞表面P糖蛋白的表达为(49.03±5.32)%,10 μmol/L米非司酮作用72 h后降低到(28.60±2.13)%(P＜0.01);K562/A02细胞内柔红霉素的浓度为(61.07±8.61)%,而10 μmoL/L米非司酮作用后升高到(92.72±3.48)%(P＜0.01).经10 μmol/L米非司酮作用后,bcl-2蛋白表达由(56±9)%降低到(37±6)%(P＜0.05);Bax蛋白由(40±5)%升高到(87±10)%(P＜0.01);caspase-3蛋白则由(36±7)%升高到(89±6)%(P＜0.01).RT-PCR结果显示K562/A02细胞GcS mRNA的表达较K562细胞明显升高,10μmol/L米非司酮能明显降低K562/A02细胞内GcS mRNA的表达.结论 米非司酮可逆转白血病K562/A02细胞的多药耐药,且具有剂量依赖性.10 μmol/L米非司酮能明显逆转白血病K562/A02细胞的多药耐药,其机制与降低P糖蛋白的水平,调节凋亡相关蛋白bcl-2、Bax、caspase-3的表达,降低GcS mRNA有关.
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WT1基因表达下调对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响
目的 探讨WT1基因表达下调对人红白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素敏感性的影响.方法 将WT1mRNA的短发夹RNA(short hair RNA,shRNA)构建至真核表达载体后转染K562/A02细胞,流式细胞术检测转染效率;荧光定量RT-PCR和Western blot法分析WT1基因在转染前后表达的差异;pWT1shRNA转染K562/A02细胞48 h并经阿霉素作用后,MTT法检测各组细胞阿霉素IC50值;流式细胞术检测细胞阿霉素累积量及细胞凋亡率.结果 与未转染对照组及空载体组相比,转染WT1shRNA质粒的K562/A02细胞WT1mRNA和蛋白水平均明显降低;经阿霉素诱导24 h后,其对阿霉素的敏感性明显增高,相对逆转率为71.5%,细胞内阿霉素的累积量较各对照组明显增高(P值均<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论 靶向WT1shRNA干扰质粒可有效抑制K562/A02细胞WT1基因表达,增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性.
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姜黄素、红霉素逆转K562/A02细胞多药耐药机制的研究
目的研究姜黄素(curcumin,Cur)及红霉素(erythromycin,EM)对多药耐药(MDR)细胞株K562/A02的影响及作用机制.方法MTT法测定Cur、EM作用后K562/A02细胞对阿霉素(ADM)敏感性的变化.流式细胞仪测定细胞内柔红霉素的平均荧光强度(DNR MFI).免疫组化法检测细胞膜上P-gp的表达.RT-PCR法检测细胞mdr1 mRNA水平.结果Cur、EM均可减低ADM对K562/A02细胞的IC50值,两药合用时逆转倍数可达11.3倍.K562/A02细胞内DNR MFI明显低于K562细胞(P＜0.01),Cur、EM均可明显增加K562/A02细胞内DNR MFI(P＜0.05),以两药合用时作用为明显,Cur 2.5μg/ml处理组细胞内DNR MFI略高于EM 120μg/ml处理组,但差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组化检测结果显示K562/A02细胞P-gp表达明显高于K562细胞(P＜0.01),各组药物分别处理后,K562/A02细胞膜P-gp表达减低(P＜0.01),但仍高于K562细胞(P＜0.01);各药物组处理5 d细胞膜P-gp表达均低于3 d组(P＜0.01),Cur与EM合用时细胞膜P-gp表达降低为明显,低于其它处理组(P＜0.01).RT-PCR结果显示K562/A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞(P＜0.01),各组药物处理后,K562/A02细胞mdr1 mRNA水平均减低(P＜0.01),5 d组低于3 d组,但仍高于K562细胞(P＜0.01);Cur与EM合用时K562/A02细胞mdr1 mRNA水平降低为显著,Cur 2.5μg/ml处理5 d K562/A02细胞mdr1 mRNA水平低于EM 120μg/ml处理5 d组(P＜0.01).结论Cur、EM均可部分逆转K562/A02细胞的MDR,降低其P-gp的表达和功能,逆转作用有时间依赖性;两药联合应用时逆转作用明显增强,Cur 2.5μg/ml逆转作用略强于EM 120μg/ml.
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Src激酶抑制剂ZD6474对白血病耐药细胞系K562/A02细胞增殖的影响及其作用机制探讨
目的 研究Src激酶抑制剂ZD6474对K562及其耐药株K562/A02细胞增殖的影响及其作用机制.方法 用不同浓度ZD6474处理K562、K562/A02细胞,观察细胞的增殖情况；用流式细胞术分析细胞周期的变化；用Western blot法分析ZD6474处理前后K562/A02细胞Src激酶及其磷酸化水平.用K562和K562/A02细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤直径达到0.5 ～1.0 cm,灌胃方法每天给予25、50及100 mg/kg ZD6474,生理盐水灌胃作为对照,观察ZD6474对裸鼠移植瘤的影响.并对移植瘤组织进行HE染色和免疫组化染色检测Src激酶表达(末次给药后24h)的改变.结果 ZD6474呈剂量依赖的方式抑制K562和K562/A02细胞增殖,作用48 h的IC50值分别为(1.61±0.07)μmol/L和(3.22±0.21) μmol/L.6μmol/L ZD6474分别作用K562和K562/A02细胞24 h,可以诱导G0/G1期细胞分别由(40.2±9.4)％、(25.0±7.0)％提高至(76.3±6.1)％、(54.2±6.6)％.6 μmol/L ZD6474可呈时间依赖方式抑制磷酸化(p)-Src和Src激酶的表达.用灌胃方法给予ZD6474,连续给药18 d,50 mg/kg ZD6474对K562和K562/A02移植瘤的抑制率分别为43.7％和56.3％.结论 ZD6474可通过抑制Src激酶磷酸化水平诱导K562/A02细胞凋亡；体内给药可抑制裸鼠移植瘤的生长.
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K562和K562/DNR细胞中mdr1基因启动子甲基化状态的分析
目的分析K562和K562/DNR细胞中mdr1基因启动子甲基化模式及其与P-gp表达的关系.方法用流式细胞术和RT-PCR方法检测两个细胞系中mdr1基因的表达,用亚硫酸氢钠脱氨基-DNA测序的方法分析mdr1基因启动子甲基化模式.结果 K562细胞不表达P-gp,mdr1基因启动子甲基化;K562/DNR细胞P-gp表达阳性,mdr1基因启动子非甲基化.结论 K562和K562/DNR细胞mdr1基因启动子甲基化模式不同,前者有甲基化修饰,后者无甲基化修饰,mdr1基因沉默与其启动子甲基化有关.
