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顺铂诱导人小细胞肺癌多药耐药细胞系NCI-H446/CDDP的建立及其生物学特征分析
目的建立人小细胞肺癌多药耐药细胞系,鉴定其细胞生物学特性.方法以顺铂为诱导药物,人小细胞肺癌细胞系NCI-H446为诱导对象,采用首次大剂量冲击和逐步增加剂量结合的方式,建立人小细胞肺癌多药耐药细胞系NCI-H446/CDDP.细胞计数法绘制生长曲线,计算其倍增时间;MTT法测定细胞IC50,计算其耐药指数;光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察其形态.结果经过8个月的诱导,成功建立了人小细胞肺癌多药耐药细胞系NCI-H446/CDDP;生长曲线测定结果表明,亲代和耐药细胞增殖速度接近,其倍增时间分别为40.72h和41.80h;流式细胞仪检测细胞周期发现,耐药细胞系中S期细胞所占比例为20.24%,亲代细胞系中S期细胞所占比例为18.42%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05),而G0/ G1和G2/M期细胞无显著性变化;MTT结果表明,耐药细胞系对顺铂、羟基喜树碱、长春新碱、5-氟尿嘧啶和拓扑替康等5种化疗药物有不同程度的耐受性,其耐药指数分别为85.00、42.75、60.28、24.31、12.47;细胞超微结构显示,耐药细胞较其亲代体积增大,核浆比例降低,线粒体、高尔基体、粗面内质网和游离核糖体增多,细胞表面指状突起增多.结论 NCI-H446/CDDP细胞生物学性状稳定,是一种可靠的人小细胞肺癌多药耐药细胞系.该细胞系的建立为深入研究顺铂诱导人小细胞肺癌多药耐药的发生机制奠定了基础.
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多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及qacE△1基因检测研究
目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pa)的耐药机制,为临床使用氨基糖苷类药物治疗Pa感染和消毒灭菌工作提供参考.方法采用琼脂稀释法从临床分离的Pa中筛选出35株多重耐药菌株,用PCR方法检测这些菌株中氨基糖苷类修饰酶编码基因及qacE△1基因存在状况.结果35株Pa中aac(3)Ⅱ、aa(6')-Ⅱ、ant(3")Ⅰ和ant(2")-Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为48.6%、40.0%、54.3%、45.7%和60.0%,绝大多数菌株携带2种或2种以上的氨基糖苷类修饰酶基因,而qacE△1基因检出率也达到94.3%.结论铜绿假单胞菌产生氨基糖苷修饰酶与该菌的多重耐药有密切关系,临床治疗Pa感染应参考药敏试验结果,慎选氨基糖苷类药物;同时在消毒灭菌工作中,不宜继续使用季铵盐类、双胍类等作为常用消毒剂.
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人膀胱癌非P-糖蛋白介导的多重抗药性
目的:建立人膀胱癌耐阿霉素细胞系及研究它们的生物学特性及药物耐受性的机制.方法:采用人膀胱癌细胞系EJ,经递增阿霉素剂量的方法,历时一年,建立一株耐药亚株EJ/DOR,对其生物学特性及耐药机制进行了研究,并应用反转录PCR检测了MDR1、MRP和DNA TopoⅡ基因的表达.结果:EJ/DOR对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了14.3倍;对蒽环类、长春花属生物碱及DNA TopoⅡ靶制剂足叶乙甙有明显的交叉耐药性,但对顺铂、丝裂霉素无明显的交叉耐受性;耐药细胞对柔红霉素的细胞内聚集量显著减少;EJ/DOR并不表达MDR1基因,而MRP基因过表达,但细胞内DNA TopoⅡ基因表达低于亲本细胞.结论:细胞内DNA TopoⅡ基因表达下降及MRP基因过表达是EJ/DOR表现为多耐药受性亚型的主要原因,这种非P-gp介导的非经典型多耐药受性细胞为寻求包括阿霉素在内的化疗方案提供了良好的实验模型.
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产超广谱β-内酰胺酶细菌的耐药性
超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是质粒介导的属于分子生物学分类的A类酶,主要由以肺炎克雷白菌和大肠埃希菌为代表的肠杆菌科细菌产生.由于它能水解几乎所有的β-内酰胺类和单酰胺类抗生素,并可以通过多种形式使耐药基因在细菌间扩散,造成严重的医院爆发性感染和院外耐药菌株的传播,从而给医院和患者带来极大的威胁,给临床治疗带来极大的困难.近年来,ESBLs菌受到了国际医学界的广泛关注,已成为临床微生物急需研究的一个课题,为了了解和掌握我院ESBLs菌的发生率和耐药特点,治疗和控制ESBL菌的感染和传播,指导和评价临床合理使用抗生素,我们对140株肺炎克雷白菌和大肠埃希菌进行了ESBLs的检测,分析其对10种抗生素的耐药性并对各种标本进行了分析比较,现将结果报告如下:
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走出药品营销的误区
当前,一些医药企业在开展产品营销时似乎走进了一个误区,高投入、大制作、炒概念等营销理念正在流行,原来一些朴素的营销方式正在被一些营销者遗忘.按理,营销创新是必须的,也是诸多药企所热衷的.然而,不少操盘手们打着"创新"的旗号却在进行着营销的游戏,一番折腾下来效果并不明显.其中存在的问题,药企应引起足够的重视,以避免营销资源和市场机会的浪费.
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多药联用治疗盆腔复发直肠癌的近期疗效观察
盆腔复发直肠癌病例,能够行再次手术者较少.特别是年迈体弱患者,病期晚,病变广泛,无根治性手术及放疗指征,化疗是主要治疗手段.由于大部分患者营养状况差,体质弱,不能耐受高强度化疗,因此寻找疗效好,毒性低的化疗方案尤为重要.我科自2003年2月至2007年6月应用顺铂(PDD)、醛氢叶酸(CF)、5-氟脲嘧啶(5-FU)与左旋咪唑(Lev)四药联用治疗盆腔复发直肠瘤16例,近期疗效报告如下.
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商业3.0时代来了
与传统药店一样,宝岛眼镜的1200多家线下店面也在承受着互联网的冲击.直面互联网革命,我们将转型定义为商业模式的转换,这种转换涉及到三个阶段:商业1.0、商业2.0及商业3.0.从工业革命到现在,都处在商业1.0时代.我们这些传统商业都是商业1.0的模式.现在MBA学校教的都是商业1.0.许多药企做品牌的方式都采用商业1.0的思路,品牌就靠三板斧:产品,高大上代言人,土豪级别的广告预算.做好品牌接下来就是找代理商,再把货铺出去,这是商业1.0的做法.商业1.0具代表性的企业就是脑白金和哈药六厂.
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本芴醇衍生物LY980503逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF/DOX对多柔比星的耐药性
目的探讨本芴醇衍生物LY980503对肿瘤多药耐药的逆转作用及其作用机理.方法采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒作用; 采用流式细胞术测定细胞内多柔比星(Dox)浓度; 应用人乳腺癌裸鼠移植瘤模型研究LY980503对肿瘤多药耐药的体内逆转作用.结果 LY980503在4.0 μmol*L-1(非细胞毒剂量)能大部逆转人乳腺癌耐Dox细胞株MCF/Dox对Dox的耐药性; 药物蓄积实验表明,LY980503能显著增加MCF/Dox细胞内Dox蓄积;10 μmol*L-1 LY980503作用96 h能明显抑制MCF/Dox细胞mdr-1基因表达水平.将MCF/Dox细胞接种于裸鼠皮下,接种后d 42,合用LY980503(200 mg*kg-1*d-1×3,ig)的移植瘤体积(0.34±0.19)cm3较单用Dox的移植瘤体积(0.90±0.32)cm3显著缩小.结论LY980503在体外及体内均能有效逆转MCF/Dox细胞对Dox的耐药性.
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4-[4"-(2",2",6",6"-四甲基-1"-哌啶氮氧自由基)氨基]-4'-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用
目的 比较4-[4"-(2",2",6",6"-四甲基-1"-哌啶氮氧自由基)氨基]-4'-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷.方法 以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解.结果 8～128 mol·L-1 GP-7处理48 h或64 μmol·L-1 GP-7处理24～72 h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P＜0.05)和时间依赖性(r = 0.999,P＜0.01).GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol·L-1;64 μmol·L-1 GP-7作用48 h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256 μmol·L-1 GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48 h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64 μmol·L-1时作用则相反.结论 GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡.GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷.
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氯化两面针碱体外对人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的抗癌活性
目的 探讨氯化两面针碱对多药耐药癌细胞的抗癌作用.方法 应用MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞周期,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)含量.结果 氯化两面针碱(0.75,1.5,3,6和12 mg·L-1)浓度依赖性地降低人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的存活率,作用48 h时IC50值为(2.43±0.19)mg·L-1;氯化两面针碱(0,3,6和9 mg·L-1)与KBV200细胞作用48 h,细胞凋亡率依次为(1.6±0.4)%,(2.3±0.7)%,(14.0±2.5)%和(8.3±2.2)%;氯化两面针碱6 mg·L-1可使KBV200细胞caspase 3含量升高,3 mg·L-1作用12,24和48 h可增加KBV200细胞G2/M期细胞比例.结论 氯化两面针碱对多药耐药KBV200细胞具有抑制生长、促进凋亡和阻滞细胞周期的作用,可能是对多药耐药癌细胞敏感的一种中药活性成分.
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抗生素的药源性疾病及其防治
当前,随着新药源源不断上市,多药并用、滥用、误用致使药物反应呈上升趋热,引起一些"药源性疾病".抗生素类药物是目前应用广泛的药物之一,这类药物所产生的药源性疾病已成为临床用药中的严重问题,现将抗生素在临床上可能引起的药源性疾病,简述如下:
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抗生素致药源性疾病及其防治
当前,随着新药源源不断上市,多药并用、滥用、误用致使药物反应呈上升趋势,引起一些"药源性疾病".抗生素类药物是目前应用广泛的药物之一,这类药物所产生的药源性疾病已成为临床用药中的严重问题,现将抗生素在临床上可能引起的药源性疾病,简述如下:
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关于执业药师法律责任问题的思考
国家药品监督管理局执业药师立法调研课题组在调研过程中,许多药师反映责、权、利均不到位的实际情况,呼吁提高执业药师的经济报酬,保障执业药师在工作中的人格尊严和人身安全不受侵犯的权利,这是在社会主义市场经济发育尚不完善的实际情况下,行政部门必须认真研究,逐步加以解决的重要问题.
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胃癌细胞MGC-803耐药细胞株的建立及分泌蛋白差异分析
目的:应用蛋白质组学技术系统比较5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药细胞与敏感细胞的分泌蛋白表达谱,以期发现胃癌耐药相关分泌蛋白标志物,为临床选择有针对性的化疗药物提供依据.方法:通过药物梯度诱导建立胃癌MGC-803耐药细胞株.从培养上清中收集MGC-803亲代及耐药细胞的分泌蛋白,应用双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)进行分离,通过PD Quest 7.1.0软件分析获得差异蛋白,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行鉴定,并用实时定量PCR检测各差异蛋白在耐药细胞株和亲本细胞间mRNA水平上的表达差异.结果:分别建立了对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药指数为110.6、70.0和13.3的耐药细胞株.顺铂耐药细胞对5-氟尿嘧啶和紫杉醇、5-氟尿嘧啶耐药细胞对紫杉醇均有较强的交叉耐药,前者耐药指数分别为23.5和114.0,后者为70.0.制备获得了耐药细胞培养上清的双向凝胶电泳蛋白组分图谱;经PD Quest软件分析获得18个差异在2倍以上、3株耐药细胞培养上清中丰度均增高的蛋白点,其中13个得到了质谱鉴定,它们分别属于蛋白酶类、信号转导分子等.与亲本细胞相比,在mRNA水平上,SLMAP、TOP3A、DYNC1H1、RHPN1、PUF60和SIAH1在3种耐药细胞中皆有明显上调;IFT172、FILIP在耐5-氟尿嘧啶和紫杉醇细胞中上调显著;PLVAP、LMNA在耐紫杉醇及顺铂细胞中表达有所升高,但在耐5-氟尿嘧啶细胞中升高不显著.在蛋白水平上的进一步验证发现,SIAH1在3种耐药细胞中的表达量及培养上清中的含量皆有升高.结论:本研究以胃癌细胞MGC-803为亲本细胞分别建立了针对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂的耐药细胞株,在此基础上应用双向电泳及蛋白质谱技术,整体展示了耐药细胞与亲本细胞的差异分泌蛋白,并发现SIAH1蛋白在耐药细胞总蛋白及培养上清中的含量均明显升高,其有可能成为研发胃癌血清耐药标志物的候选分子.
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热疗促进HSP70表达对免疫效应细胞杀伤肿瘤的影响
目的: 探讨热疗通过促进乳腺癌药物敏感细胞株与多药耐药细胞株表达热休克蛋白(HSP)70,提高免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性.为开展基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据.方法: 采用IFNγ、CD3单抗、IL-1和IL-2等细胞因子诱导并扩增免疫效应细胞.分别给予乳腺癌药物敏感株MCF7和耐受株MCF7/ADR非致死温度热冲击42 ℃ 1 h,继续培养4 h,24 h,48 h后收获细胞,用流式细胞术检测靶细胞上HSP70的表达.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定靶细胞增殖活性以及免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性.结果: HSP70在两种靶细胞上的表达有差异,加热前MCF7/ADR细胞HSP70表达明显高于MCF7,加热后4 h,HSP70在MCF7/ADR表达提高了6倍,在MCF7表达提高了22倍,超过了耐药株.药物敏感株MCF7增殖的热抑制率低于耐药株MCF7/ADR.热冲击前免疫效应细胞对MCF7细胞的杀伤活性低于MCF7/ADR细胞.热冲击后免疫效应细胞对MCF7的杀伤活性提高了86.23%,超过了对MCF7/ADR的杀伤活性(提高了30.32%).结论: 热疗明显提高HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的表达,增加了免疫效应细胞对这两种靶细胞的杀伤活性.HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的差异性表达对免疫效应细胞的杀伤活性有影响.
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肝炎肝硬化患者发生多重耐药菌感染病例危险因素分析
目的:用病例对照研究探讨肝炎肝硬化患者发生多重耐药菌感染的危险因素.方法:选择发生多重耐药菌感染的肝炎肝硬变患者18例作为病例组,发生敏感菌感染的肝炎肝硬变患者91例作为对照组,进行流行病学调查.结果:单因素分析发现院内感染、插管、血清总胆红素、抗生素应用时间为肝炎肝硬变患者发生多重耐药菌感染的可能危险因素.Logistic回归分析表明只有院内感染、抗生素应用时间与发生多重耐药菌感染有关.结论:控制院内感染、合理应用抗生素可以减少肝炎肝硬变患者发生多重耐药菌感染的风险.
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多药耐药蛋白和 bcl-2 蛋白表达与初治急性白血病预后的关系
目的: 探讨多药耐药蛋白和 bcl-2 蛋白表达与初治急性白血病 (AL)患者化疗效果的关系.方法: 用流式细胞仪检测 29 例初诊未治AL患者多药耐药蛋白和 bcl-2 蛋白表达.结果: 初治AL患者多药耐药蛋白和bcl-2蛋白表达率分别为 37.9% 和 83%;bcl-2 蛋白阳性与阴性患者的首次完全缓解(CR)情况经统计学分析显示差异无显著性(P＞0.05);而多药耐药蛋白阳性与阴性患者的首次完全缓解(CR)情况经统计学分析显示有显著性差异(P＜0.05);多药耐药蛋白和 bcl-2 蛋白两者之间无相关性.结论: 多药耐药蛋白可作为预测初治AL患者化疗效果的敏感性指标.
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重视过期药品处理是走出非法收药怪圈的有效途径
过期药品的形成随着人们对自身健康的关注与投入越来越多,许多人认为家里应当预备一些治疗腹泻、感冒和头痛等常见疾病的药品,以备不时之需.此外,对于售药方来说,"拆零药"利润少;"拆零"出售又要求药店具有较好的"拆零"条件和职业素质较高的药师,对操作要求高;剩余药品保存又有难度,销售又有风险.凶此,售药方都愿意整盒出售.但是,很多药被买回去后,很可能只服用一次或几次,或吃半盒剩半盒,这些剩余药品存放时间长了就会过期,家里的过期药品就这样积攒下来.
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难治性高血压的治疗进展
难治性高血压是日益常见的医学难题,罹患此病的患者心血管事件发生风险较高.其治疗包括去除致病因素,恰当控制继发因素和有效的多药联合治疗.更多的尝试如盐皮质激素受体拮抗剂及新技术如颈动脉刺激术和去肾交感神经术等,已用于难治性高血压的治疗.现将难治性高血压的治疗进展综述如下.
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乳腺癌耐药蛋白及其抗体的研究进展
耐药性是导致肿瘤患者化疗失败的主要原因之一.肿瘤细胞在药物诱导下对结构和功能不相关的药物耐药,这就是多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象.
