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损伤调节自噬调控基因对胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响
目的 研究损伤调节自噬调控基因( DRAM)对胃癌SGC7901细胞移植瘤放射敏感性的影响.方法 取对数生长期的人胃癌SGC7901细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组、DRAM组(在瘤体约为1.0 cm3时,在瘤周注射携带DRAM基因的腺病毒Admax-pDC315-DRAM-EGFP)、放疗组、放疗联合DRAM组,对瘤体进行剂量为10 Gy局部放疗,分别在放疗后3、6、9d处死裸鼠,切取肿瘤,计算抑瘤率.用免疫组化方法检测P53、PCNA、C-myc、Fas-L蛋白的表达.结果 放疗联合DRAM组的抑瘤率在3、6、9d分别为9.3％、14.1％、16.7％,均显著高于单纯放疗组(5.0％、8.8％、6.5％)(P＜0.05)；在空白对照组、DRAM组、放疗组、放疗联合DRAM组中,随时间延长PCNA和C-myc蛋白表达的阳性率逐渐下降,而P53和Fas-L蛋白表达的阳性率逐渐增强.结论 DRAM基因可通过促进细胞凋亡和抑制细胞增殖,增强裸鼠皮下胃癌移植瘤的放射敏感性.
关键词： 胃肿瘤 损伤调节自噬调控基因 增殖 放射敏感性 -
不同非小细胞肺癌细胞株中DNA-PKcs的表达及其与放射敏感性的关系
背景与目的:DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)在电离辐射引起的DNA双链断裂的修复过程中起着关键作用,可影响组织细胞对放射治疗的敏感性.本研究通过检测DNA-PKcs在不同组织学类型非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的表达情况,探讨其与放射敏感性的关系.方法:Western blot及DNA-PK活性分析法检测NSCLC细胞株A549、H1299、L78、PGCL3和H460中DNA-PKcs的含量与活性.成克隆实验分别测定各细胞株照射后的剂量-存活曲线,并分析放射敏感性与DNA-PKcs的关系.结果:成克隆实验结果显示:不同NSCLC细胞株的放射敏感性不同,A549细胞2 Gy剂量照射下的存活分数(survival fraction at 2 Gy,SF2)为0.74,H1299细胞为0.25,H460细胞为0.21,PGCL3细胞为0.48,L78细胞为0.58.Western blot显示各NSCLC细胞株中DNA-PKcs的表达有差异,A549细胞的DNA-PKcs表达水平为3.26±0.98,L78细胞为0.51±0.07,H1299细胞为0.51±0.11.H460细胞为0.86±0.23.PGCL3细胞为2.60±0.76.A549细胞的DNA-PKcs活性为8.30±1.03,H1299细胞为2.45±0.52,H460细胞为0.11±0.02,PGCL3细胞为4.13±0.87.L78细胞为0.42±0.07.在腺癌及大细胞癌中SF2与DNA-PKcs含量(P<0.05,r=0.95)及活性(P=0.03,r=0.98)呈线性相关.结论:在腺癌及大细胞癌中,DNA-PKcs是判断细胞放射敏感性的重要因素.
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DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株辐射抗性的影响
背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤.本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸人鼻咽癌细胞株.探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株的放射敏感性的影响.方法:利用LipofectamineTM 2000转染DNA-PKcs反义寡核苷酸人鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-1-wtp53;设0、0.5、1、2、4、6、8 Gy 7个放射剂量点,用集落形成法分析转染反义寡核苷酸前后细胞的存活情况,并分别用线性二次模型和单击多靶模型拟合出细胞的剂量存活曲线,求出放射生物学参数α、β、α/β、SF2、Do、Dq和N值,评价细胞放射敏感性的变化.结果:转染DNA-PKcs反义寡核苷酸前,CNE-1和CNE-1.wtp53的α值分别为0.03、0.05,SF2值分别为0.73、0.50,Do值分别为2.08 Gy、1.13 Gy,Dq值分别为2.04 Gy、1.36 Gy.转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,CNE-1和CNE-1.wtp53的α值分别为0.04、0.26,SF2值分别为0.45、0.21,Do值分别为1.07 Gy、0.83 Gy,D.值分别为1.24 Gy、0.73 Gy.转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,鼻咽癌细胞的α值增大,SF、Do、Dq 值均减小.结论:DNA-PKcs反义寡核苷酸可逆转CNE-1的辐射抗性,该逆转作用不依赖细胞的p53功能状态.
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DNA-PKcs、Ku80及ATM备选宫颈癌放疗增敏靶点的体外研究
背景与目的:DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB)是细胞受辐射后致命的损伤,而DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)、Ku80和ATM(ataxia-telangiectasia mutated)为DSB的主要修复蛋白.宫颈癌是以放疗为主要治疗手段的肿瘤.但其肿瘤细胞对放射线的敏感性不同.本实验拟研究3种DSB修复蛋白的表达与宫颈癌细胞放射敏感性的关系.并探讨DSB修复蛋白成为宫颈癌放疗增敏靶点的可能性.方法:免疫组化法检测41例宫颈癌患者组织中DNA-PKcs、Ku80和ATM蛋白的表达情况;Western blot检测8株肿瘤细胞(包括4株宫颈癌细胞)中3种蛋白的表达,克隆形成实验检测SF2 (suivival fraction at 2 Gv)、α值,分析蛋白表达水平和SF2、α值的关系;利用靶向抑制DNA-PKcs的shRNA表达质粒和小分子抑制剂LY294002,分别抑制HeLa细胞DNA-PKcs蛋白表达和活性后,克隆形成实验和流式细胞仪检测HeLa细胞受6 MVX线照射后的SF2、α值和凋亡率变化.结果:在41例宫颈癌组织中,Ku80、DNA-PKcs和ATM的阳性率分别为70.73%、68.29%和19.51%:8株肿瘤细胞中Ku80、DNA.PKcs和ATM蛋白的相对表达量与各细胞SF2、α值各不相同,作Pearson线性相关分析后得出DNA-PKcs的表达水平与SF2之间有明显的正相关关系(r=0.72,P=0.04);靶向抑制DNA-PKcs的shRNA可以促进HeLa细胞的放射敏感性,其SF2值为0.37,显著低于对照HeLa细胞的0.53(P＜0.05);单独接受50 μmol/L LY294002作用1 h HeIa细胞的凋亡率未见明显增加,但先经LY294002处理再照射6 Gy的HeLa细胞在48 h和72 h的凋亡率比单独照射6 Gy的HeLa细胞凋亡率显著增加(48 h点:t=3.25,P=0.03;72h点:t=3.01,P=0.04).结论:DNA-PKcs在宫颈癌组织中表达较高,且其表达水平可以预示肿瘤细胞的放射敏感性:抑制DNA-PKcs的表达或活性可以促进HeLa细胞的放射敏感性.
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吉非替尼对胃癌细胞株放射增敏的作用
背景与目的:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在绝大部分人类上皮肿瘤中都有表达,其表达高低与放疗抗拒有关.我们检测EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(gefitinib)对高表达胃癌细胞株放射增敏的作用,并初步探讨其机制.方法:Western blot法测定7株人胃癌细胞株(MKN45、SGC7901、SNU-1、N87、AGS、SNU-16、KATO-Ⅲ)中EGFR蛋白的表达,选取2株EGFR相对高表达的胃癌细胞用于后续实验.采用MTT法测定吉非替尼的半数抑制浓度(50%inhibition concentration,IC50),克隆形成实验计算细胞存活率,拟合生存曲线并计算放射生物学参数,流式细胞仪检测吉非替尼联合放疗的凋亡率及细胞周期分布.结果:选取7株胃癌细胞中EGFR表达高的MKN45和SGC7901细胞,发现其存活率均随吉非替尼浓度或放射剂量的增加而明显下降(P＜0.05).MTT法检测吉非替尼对MKN45及SGC7901细胞的IC50分别为0.4mmol/L和0.8 mmol/L.MKN45细胞在0.1×IC50及0.2×IC50剂量下的增敏比(SER)分别为1.102和1.154,SGC7901则为1.092和1.176.吉非替尼或照射均可增加凋亡率,减少S期细胞比例及增加G2/M期细胞比例(P＜0.01).结论:吉非替尼序贯照射应用可提高EGFR高表达胃癌细胞的放射敏感性并阻碍细胞增殖、促进凋亡和干扰细胞周期分布.吉非替尼有望成为EGFR高表达胃癌的放射增敏剂.
关键词： 胃肿瘤 MKN45细胞株 吉非替尼/放射增敏剂 放射敏感性 体外照射 -
人喉鳞癌细胞端粒长度、端粒酶活性与放射敏感性的关系
背景与目的:肿瘤细胞的端粒长度、端粒酶活性与其增殖能力和恶性程度关系密切,而且端粒和端粒酶还可能参与放射诱导的DNA损伤的修复;由此推测肿瘤细胞的端粒长度、端粒酶活性与放射敏感性之间可能存在联系.本研究旨在探讨人喉鳞癌细胞端粒长度、端粒酶活性与放射敏感性的关系.方法:体外长期传代的人喉鳞癌细胞系Hep-2经0、2、4、8、12Gy剂量照射3次后的存活后代体外培养20代,以克隆形成实验测定其放射敏感性参数SF2,Southern blot法测定其端粒长度(mean length of telomere restriction fragments,TRF),TRAP-ELISA法测定其端粒酶活性(telomerase activity,TA).结果:人喉鳞癌细胞不同放射剂量存活后代的SF2:0.47～0.64,TRF:3.76～9.43kb,TA:2.606～1.761,且它们各自的SF2、TRF、TA存在差异(P均＜0.05);而且,SF2与TRF呈现明显的正相关(r=0.921,P＜0.01),SF2与TA呈现明显的负相关(r=-0.929,P＜0.01),TRF与TA呈现明显的负相关(r=-0.944,P＜0.01).结论:人喉鳞癌细胞接受不同放射剂量存活后代的放射敏感性与其端粒长度和端粒酶活性具有一定的相关性,提示端粒长度与端粒酶活性检测对预测肿瘤细胞放射敏感性有一定意义.
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ATM蛋白在不同放射敏感性鼻咽癌细胞株中的表达
背景与目的: ATM(Ataxia- telangiectasia mutant)蛋白与细胞放射敏感性密切相关.本研究探讨 ATM蛋白在具有不同放射敏感性的鼻咽癌细胞系 CNE1, CNE2中的表达.方法:采用免疫荧光标记技术,对 CNE1、CNE2中的 ATM蛋白进行激光扫描共聚焦显微镜( LSCM)分析.结果: ATM蛋白定位于细胞核及胞浆中,并以细胞核为主,且 CNE1细胞核中 ATM蛋白阳性细胞的荧光强度较 CNE2强;半定量分析, CNE1中 ATM蛋白表达的积分吸光度值为 9× 106, CNE2中为 3× 106.结论: ATM蛋白的表达在 CNE1、CNE2中有差别,这种差别可能与它们所具有的不同放射敏感性有关.
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UCN-01增加鼻咽癌细胞株放射敏感性的研究
背景与目的:应用药物提高肿瘤组织的放射敏感性 , 是改善放疗疗效的主要研究方向之一 . 本研究通过观察已知 p53基因突变的鼻咽癌 CNE-1 细胞照射后 G2期阻滞的情况 , 以及药物 7-hydroxystaurosporine( UCN-01) 是否能够去除此 G2期阻滞并增加放射敏感性 , 探讨 UCN-01增加放射敏感性的机制 . 方法:用细胞培养和流式细胞仪 ( FCM) 技术分析 X线照射对 CNE-1 细胞周期 ( 特别是 G2期阻滞 ) 的影响 , 观察 UCN-01对放射引起的 G2期阻滞的影响 . 应用细胞克隆形成实验观察 UCN-01去除 G2期阻滞对放射敏感性的影响 . 结果:照射明显导致 CNE-1细胞 G2期阻滞 , 未照射组 (对照组 )及照射 2 Gy、 4 Gy和 6 Gy 组的细胞 G2 期比例分别为 18.4% 、 43.6% 、 77.4% 和 86.4% , G2期阻滞的程度与照射剂量正相关 . UCN-01能够去除放射引起的 CNE-1细胞 G2期阻滞 , 50 nmol/L、 100 nmol/L、 200 nmol/L和 400 nmol/L UCN-01组细胞的 G2 比例由对照组的 63.5% 分别降至 28.5% 、 25.0% 、 16.1% 和 13.7% , UCN-01去除 G2期阻滞的程度与药物浓度正相关 . UCN-01能明显降低放射后 CNE-1细胞的克隆形成率 , 100 nmol/L和 200 nmol/L UCN-01组的放射增敏比分别为 2.60和 3.09. 结论:UCN-01对 CNE-1细胞有放射增敏作用 , 其机制可能与 UCN-01去除放射引起的 G2期阻滞有关 .
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薏苡仁提取物体外对肾癌细胞系放射敏感性的影响及作用机制探讨
目的:探讨康莱特(KLT)对肾癌细胞系(GRC-1)的放射增敏作用和机制.材料和方法:利用细胞克隆技术进行剂量-存活曲线分析,末端脱氧核苷酰转移酶法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法分析bcl-2和PCNA基因表达.结果:0.2mg/ml KLT组D0值为90.44 cGy,空白对照组和空白乳组D0值分别为131.09 cGy和139.40 cGy,统计学处理P<0.05.0.2mg/ml KLT处理GRC-1细胞后,M1区阳性细胞为89.76%,空白乳组为1.02%.0.2mg/ml KLT组GRC-1细胞bcl-2和PCNA基因表达的标记指数(LI)分别为6.60%和15.2%,空白乳组LI分别为25%和0%,统计学处理差异显著(P<0.01).结论:0.2mg/ml KLT具有明显提高GRC-1细胞放射敏感性的作用,其作用机制是诱发GRC-1细胞凋亡,抑制GRC-1细胞bcl-2基因表达和上调PCNA基因表达.
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咖啡因促进受照肿瘤细胞凋亡的研究
目的:探讨肿瘤细胞受照后G2/M期阻滞和凋亡的关系及调控.方法:以K562细胞为对象,用流式细胞仪、形态学、DNA电泳和凋亡蛋白2.7(APO2.7)等方法检测细胞周期和凋亡.结果:(1)20Gyγ射线照射K562细胞后引起G2/M期阻滞,48hG2/M期比例为71.2%,流式细胞仪、形态学和APO2.7检测凋亡比例分别为2.6%、2.0%±1.1%和22.5%;(2)照前加入10mmol/L咖啡因,G2/M比例降低至12.0%,凋亡比例增至13.5%、20.1%±3.5%和34.4%,明显高于单纯照射组(P<0.01).咖啡因本身对细胞周期和凋亡没有影响.结论:抑制G2/M期阻滞可促进辐射诱导的凋亡,为提高肿瘤细胞的辐射敏感性提供一个新思路.
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P53蛋白、血管内皮生长因子等生物分子指标与鼻咽癌放射敏感性的关系
背景与目的:临床上常见鼻咽癌患者虽属于同一分期,并采用相同的治疗技术和治疗剂量,却有20%～40%患者在5年内出现射野内复发,这主要与肿瘤细胞的放射治疗内在敏感性个体差异有关.本研究对鼻咽癌细胞增殖、凋亡以及肿瘤血管生成、淋巴管生成等状况与放疗敏感性的关系作一初步探讨.方法:对放疗敏感及放疗抗拒的鼻咽癌患者活检标本各60例行免疫组化法检测P53、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、Survivin、VEGF-C、Ki67蛋白及微血管密度(microvascular density,MVD)表达,结合临床资料,分析它们之间的相关性.结果:P53、VEGF、Survivin、VEGF-C、Ki67蛋白阳性率分别为65.0%、57.5%、60.8%、42.5%、57.5%,放射敏感组及放射抗拒组P53、VEGF、MVD表达分别为(25.97±21.26)%、(18.50±19.86)%、32.65±19.61及(37.85±28.67)%、(30.83±23.94)%、41.95±16.97,两组间差异有显著性(P＜0.05),Survivin、VEGF-C、Ki67蛋白阳性率两组间差异无显著性(P＞0.05).P53、VEGF、MVD三者间显著相关.结论:P53、VEGF蛋白及MVD在放疗抗拒组比放疗敏感组明显增高,有可能作为放疗前评估鼻咽癌内在放射敏感性的指标.
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两株人肝癌细胞QSG-7701和HepG2放射敏感性的体外研究
在研究肿瘤的辐射效应之初就有人发现 [1], 各种肿瘤细胞对辐射的敏感性有明显差异 , 因而在接受放射治疗时效果也不一样 . 体外培养细胞株的存活分数 (surviving fractionm,SF)在受到 2 Gy照射后 (简称 SF2)可以在 0.01～ 0.90之间变动 , 即使是同一肿瘤的不同细胞株 , SF2也可以相差数十倍 [1]. 放射诱发细胞凋亡现象是近年放射生物学研究的一个热点 . 有人在研究鼠的肿瘤时发现 [2], 细胞放射反应与照射后凋亡水平具有相关性 .
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X线照射后耐替莫唑胺U251细胞株中多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白的表达
目的 观察耐替莫唑胺人脑胶质瘤U251细胞(U251/TR)经放射线照射后多药耐药基因(MDR1)及P-糖蛋白(P-gP)表达的改变. 方法 体外常规培养U251细胞,低浓度替莫唑胺分步诱导法诱导建立耐药细胞U251/TR.细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测替莫唑胺、阿霉素、依托泊苷、硫酸长春新碱和环磷酰胺对U251、U251/TR细胞的相对抑制率和耐药指数(RD.采用双光子医用直线加速器产生的不同剂量(2、4、6、8、10、12、15 Gy)X线照射U251、U251/TR细胞24 h后,RT-PCR检测细胞MDR1的表达,Westem blotting检测细胞膜P-gp的表达. 结果 CCK-8检测结果显示替莫唑胺、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱对U251细胞的抑制率分别为(19.3±0.04)％、(39.9±0.13)％、(28.1±0.09)％、(66.2±0.02)％、(26.3±0.11)％,对U251/TR细胞的抑制率分别为(3.2±0.03)％、(15.3±0.09)％、(4.1±0.03)％、(45.6±0.10)％、(10.8±0.04)％,U251/TR细胞对上述5种药物的RI分别为U251细胞的2.63、2.76、2.15、10.58、3.54倍;RT-PCR检测显示:2 Gy、4 Gy、6Gy放射线照射U251/TR和U251细胞后,2种细胞的MDR1基因表达均依次下降,且6Gy时降至低.但经大剂量如8Gy、10Gy、12 Gy、15 GyX线照射后,2种细胞的MDR1基因表达开始依次上升,均高于6 Gy照射组.Western blotting结果显示:6 Gy放射线照射U251/TR和U251细胞后,P-gp的蛋白表达均下降. 结论 小剂量的X线(8 Gy以下)照射后U251、U251/TR细胞的放射敏感性均增高,但大剂量的X线(8 Gy以上)照射后U251/TR、U251细胞均产生放射抗拒.
关键词： 耐替莫唑胺U251细胞 放射敏感性 多药耐药基因 P-糖蛋白 -
阿司匹林对人胶质母细胞瘤U87细胞系放射敏感性的影响
目的 观察阿司匹林(ASA)对人胶质母细胞瘤U87细胞系放射敏感性的影响并探讨其可能机制.方法 常规培养U87细胞,CCK-8法检测16、8、4、2、1、0.5 mmol/L ASA对细胞抑制率和1 mmol/L ASA预处理对2、4、8 Gy 6MV-X射线单次照射后细胞抑制率的影响,计算ASA对这3种剂量射线的放射增敏比；选取1 mmol/L ASA和8 Gy照射剂量进行实验,分为对照组、照射组、ASA组、ASA+照射组,流式细胞仪检测细胞凋亡和NF-κB的含量,激光共聚焦显微镜观察NF-κB的表达.结果 与空白对照组比较,0.5、1 mmol/L ASA组细胞抑制率的差异无统计学意义(P＞0.05)；ASA对8Gy射线的放射增敏比高于2、4Gy,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,与照射组比较,ASA+照射组细胞凋亡率较高,NF-κB含量较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).激光共聚焦显微镜下观察显示,照射组细胞NF-κB在细胞质、细胞核均有表达,与ASA+照射组细胞比较表达较强.结论 ASA可提高胶质母细胞瘤的放射敏感性,它可能通过抑制NF-κB的表达而增加由射线介导的胶质瘤细胞的凋亡,从而增强细胞对射线的反应.
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RNA干扰IgG表达对人前列腺癌细胞株PC3放射敏感性的影响
目的：探讨RNA干扰沉默IgG表达对人前列腺癌PC3细胞株放射敏感性的影响。方法将IgG FC段受体RNA质粒（FCGR1AshRNA）和阴性对照质粒（NCshRNA）转染人前列腺癌PC3细胞，Q-PCR和Western-blot检测IgG表达。以60Coγ射线0、2、4、6、8、10 Gy分别照射空白对照组、NCshRNA组、FCGR1AshRNA组细胞；照射48 h后，MTS法检测细胞增殖状态；照射12、24、48 h后，流式细胞术检测细胞凋亡率。重点探讨6Gy射线照射后不同时间的敏感性、增值率、抑制率与凋亡率。结果质粒转染前列腺癌PC3细胞后，FCGR1AshRNA与NCshRNA组和空白对照组相比，IgG表达水平明显下降，细胞增殖受抑制（P<0.05）。不同放射剂量下48 h后及6Gy射线照射后的不同时间段，FCGR1AshRNA组的增值率减低，凋亡率升高（P<0.05）。结论 RNA干扰抑制IgG表达能提高PC3细胞对放射线的敏感性，IgG基因可能是联合放疗治疗前列腺癌的理想靶点。
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Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性
目的 探讨下调microRNA-221 (miR-221)表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制.方法 常规培养人结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221 (anti-miR-221)后,应用实时荧光定量PCR(Real-time Q-PCR)检测Caco2细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化；不同处理组的肿瘤细胞经照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况.结果 Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显下调(P＜0.05),同时PTEN蛋白表达增高(P＜0.05)；流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组死亡细胞比例均明显增多(P均＜0.01),转染anti-miR-221可明显提高Caco2细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部分但不完全阻断.结论 Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性.
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下调miR-21可以增强食管癌TE-1细胞的放射敏感性
目的 研究miR-21下调对食管癌TE-1细胞的放射敏感性的影响.方法 采用慢病毒介导的方法将含有反义miR21表达基因的载体转染至食管癌TE-1细胞系,嘌呤霉素筛选稳定下调miR21的食管癌细胞亚系,命名为TE-1-miR21-；荧光定量PCR检测TE-1-miR21-中miR21的相对表达量；细胞克隆形成实验测定TE-1和TE-1-miR21-细胞的放射敏感性；RT-PCR和Western-blot法测定TE-1和TE-1-miR21-细胞中β-catenin的变化；流式细胞术检测TE-1和TE-1-miR21-细胞中p75NTR+细胞的比例.结果 成功构建稳定下调miR21的食管癌细胞亚系TE-1-miR21-,荧光定量PCR结果显示miR21表达量明显下调；细胞克隆形成实验提示TE-1-miR21-细胞较TE-1细胞的放射敏感性明显增强；RT-PCR结果分析显示,TE-1-miR21-细胞与TE-1细胞的β-catenin mRNA的表达量无明显差异；Western blot的结果分析显示,TE-1-miR21-细胞在接受高剂量照射(8Gy,10 Gy)时,β-catenin蛋白量明显下降；流式细胞仪分析结果显示,TE-1-miR21-细胞中p75NTR+细胞的比例较TE-1细胞明显降低.结论 下调miR21可以增强食管癌TE-1细胞的放射敏感性；下调miR21增强放射敏感性的机制可能与wnt/β-catenin信号通路的活化程度降低以及食管癌TE-1细胞中p75NTR+细胞比例减少有关.
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沉默Peroxiredoxin I基因对乳腺癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响
目的 探讨Peroxiredoxin I(Prx I)沉默后对乳腺癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及其作用机制.方法 将稳定表达Prx I shRNA的pGPU6-Prx I和阴性对照pGPU6-HK细胞接种于裸鼠皮下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型.实验共分为4组:pGPU6-HK组、pGPU6-Prx I组、pGPU6-HK+照射(ionizing radiation,IR)组、pGPU6-Prx I+IR组.用6MVX线照射裸鼠瘤组织,测量肿瘤体积,称取肿瘤质量,计算抑瘤率;免疫组化检测肿瘤组织中Prx I和Caspase3蛋白表达;电镜观察肿瘤细胞超微结构,Western blot测定肿瘤组织中γ-H2AX和Rad51蛋白表达.结果 成功构建了裸鼠移植瘤模型,pGPU6-Prx I+IR组裸鼠移植瘤生长肿瘤明显迟缓,体积较小,抑瘤率为79.76%,与pGPU6-Prx I(34.92%)和pGPU6-HK+IR(56.94%)比较差异具有显著性(P<0.05);给予pGPU6-Prx I及IR处理后,肿瘤细胞凋亡和坏死增多,Prx I和Rad51蛋白表达减少,而Caspase3和γ-H2AX蛋白表达增加,以pGPU6-Prx I+IR组更为显著,其Rad51蛋白下降了84.8%,γ-H2AX蛋白表达升高5.6倍(P<0.05).结论 沉默Prx I表达可提高乳腺癌移植瘤的放射敏感性,其作用机制与DNA双链断裂增加、DNA损伤后修复能力降低有关.Prx I可能是-个理想的乳腺癌放射增敏分子靶点.
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表皮生长因子受体shRNA对人鼻咽癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响
目的 荷瘤裸鼠瘤内注射RNA干扰(RNAi)表皮生长因子受体(EGFR)基因表达载体shRNA-EGFR,探讨其对肿瘤放射敏感性的影响.方法 用shRNA-EGFR结合脂质体转染人鼻咽癌细胞系CNE1,收集转染后细胞的总RNA和蛋白质,利用RT-PCR和Western blotting检测EGFR表达水平的变化.用CNE1细胞建立裸鼠肿瘤动物模型,荷瘤裸鼠瘤内注射shRNA-EGFR脂质体混合物,观察肿瘤体积变化.经放射治疗后第16天处死裸鼠剥离瘤体称重,评价其对放射敏感性的影响.结果 shRNA-EGFR成功转染CNE1细胞.RT-PCR和Western blotting检测结果 表明shRNA-EGFR可显著下调EGFR mRNA和蛋白质的表达(P<0.05).shRNA-EGFR联合放射治疗组与对照组、单独放射治疗组、shRNA-EGFR治疗组之间的肿瘤体积变化和质量存在显著性差异(P<0.05).结论 shRNA-EGFR基因放射治疗能显著抑制鼻咽癌移植瘤的生长,增加其对放射治疗的敏感性.
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不同放射敏感性肺腺癌细胞株中DNA-PKcs蛋白的表达情况比较
目的 通过检测DNA-PKcs在肺腺癌细胞中的表达情况,探讨其与放射敏感性的关系.方法 成克隆实验分别测定肺腺癌细胞株A549、H1299照射后的剂量.存活曲线,Western blotting及DNA-PK活性分析法检测两株细胞中DNA-Pkcs的含量与活性.分析放射敏感性与DNA-PKcs的关系.结果 成克隆实验结果显示:肺腺癌细胞H1299较A549放射更敏感,SF2分别为A549:0.7412,H1299:0.2473.Western-blot显示A549和H1299积分光密度比值分别为:3.29±0.44、0.50±0.17,A549中DNA-PKcs的表达更高(t=10.37,P<0.001).DNA-PKcs活性检测结果为A549:8.29±1.37.H1299:2.47±1.09(t=5.76,P=0.005).结论 放射敏感性不同的肺腺癌细胞株中DNA-Pkcs的表达不同.提示DNA-PKcs可能是影响肺腺癌细胞放射敏感性的重要因素.
