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MRN复合体基因在头颈肿瘤治疗中的应用概况
MRN复合体是由Mre11、Rad50及Nbs1三个亚单位组成的一种高度保守的蛋白复合体,是先识别DNA双链断裂并发出信号的反应子.近来研究证实:它在DNA双链断裂(Double Strains Breaks,DSBs)修复过程中,发挥着至关重要的作用[1,2].
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来曲唑联合同期或序贯放疗对MCF-7细胞放射敏感性的影响
目的:研究来曲唑同期或序贯放疗对人乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响及其可能的机制.方法:将人乳腺癌MCF-7细胞分成单纯放疗组(R)、放疗前加来曲唑组(L+R)和放疗后加来曲唑组(R+L),采用克隆形成试验法检测各组的放射敏感性,用MTS法检测各组的细胞增殖率,用DAPI染色法检测各组的细胞凋亡率,用western blot法检测各组Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果:(L+R)组和(R+L)组的放射增敏比(SER)分别为1.07和1.14；对比单纯放疗组,来曲唑联合放疗组肿瘤细胞抑制率和细胞调亡率均明显升高；单纯放疗组使Bax蛋白升高,但对Bcl-2蛋白没影响,而来曲唑联合放疗组能明显使Bax蛋白升高,Bcl-2蛋白降低,但治疗顺序无统计学意义.结论:来曲唑对MCF-7细胞具有放射敏感性,可能与促进细胞凋亡有关,治疗顺序对疗效无影响.
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NHEJ基因保守性缺陷与放射敏感性的关系研究
目的:研究DNA双链断裂非同源性末端连接系统(NHEJ)保守性与敏感性的关系,寻找NHEJ 系统基因的关键突变与肿瘤放射敏感性的关系.方法:采用聚合酶链式反应和克隆技术测定CNE、SPC-A1和MCF-7肿瘤细胞株与DNA双链损伤修复有关的NHEJ系统各基因的功能区序列,梯度比较和分析它们的功能区变化,模拟和比较突变产物亲疏水性差异.结果:CNE细胞中,NHEJ系统的终极基因LigaseⅣ存在与放射敏感性相关的突变,其氨基酸替换:313aa His→Arg、538aa Gly→Arg、579aa Lys →Arg和585 aa Asn→ser影响产物蛋白结构.结论:在放射敏感性与NHEJ系统基因保守性和功能关系方面,LigaseⅣ的突变影响较大,与肿瘤细胞DNA双链断裂损伤修复能力和肿瘤放疗疗效直接相关.
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胃癌患者microRNA-126水平与其放化综合疗效的关系及对其胃癌细胞放射增敏作用的影响
目的 探究胃癌患者microRNA-126水平与其放化综合疗效的关系及对其胃癌细胞放射增敏作用的影响.方法 回顾性选取2015年4月至2016年10月商洛市中心医院肿瘤诊治中心收治的75例晚期胃癌患者作为研究对象.观察临床资料、放化疗效果不同的患者中MicroRNA-126相对表达水平,以及转染情况和放射增敏作用.结果 中、高分化组患者的microRNA-126相对表达水平为(1.14±1.40)2-△△Ct,明显低于低分化的(1.97±2.05)2-△△Ct,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ～Ⅳ期患者的microRNA-126相对表达水平为(1.02±1.27)2-△△Ct,明显低于Ⅰ～Ⅱ期的(1.84±1.97)2-△△Ct,差异有统计学意义(P<0.05);直径<5 cm组患者的microRNA-126相对表达水平为(2.17±2.24)2-△△Ct,明显高于直径≥5 cm的(1.16±1.16)2-△△Ct,差异具有统计学意义(P<0.05);非敏感组患者的组织、血浆的microRNA-126相对表达水平分别为(0.73±0.07)2-△△Ct、(0.57±0.03)2-△△Ct,显著低于敏感组的(1.00±0)2-△△Ct、(1.00±0)2-△△Ct,差异具有统计学意义(P<0.01);转染microRNA-126组患者的D0、SF分别为(2.35±0.29)、(0.53±0.15),明显低于未转染组、转染microRNA-NC组的(4.12±0.25)、(0.84±0.06),(4.24±0.24)、(0.79±0.09),而SER为(1.79±0.1),明显高于其他两组的(1.00±0)、(1.06±0.11),差异均具有统计学意义(P<0.05);未转染组与转染microRNA-NC组的D0、SF、SER比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 microRNA-126可能具有放射增敏作用,并提高放化疗效果;且在不同胃癌患者中microRNA-126相对表达水平有差异,可能提示其具有诊断胃癌的作用.
关键词： 胃癌 MicroRNA-126 放疗 化疗 放射敏感性 -
与泛素-蛋白酶体代谢途径有关的放射敏感性基因
泛素-蛋白酶体途径(Ubiquitin proteasome pathway)是细胞内ATP依赖的非溶酶体蛋白降解系统,能将泛素分子从底物蛋白上移除,选择性地调节细胞内蛋白质表达.p53、Chkl、Survivin、Notch、Cyclin D1等影响肿瘤细胞放射敏感性的基因编码蛋白可以在细胞内经过泛素-蛋白酶体途径降解,本文就这些基因做一综述.
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沙纳唑合并γ射线对在体小鼠骨髓粒系造血祖细胞的影响
目的:研究沙纳唑直接给药以及合并γ射线照射处理对在体小鼠骨髓粒系造血祖细胞(CFU-GM)集落形成的影响.方法:通过对小鼠骨髓CFU-GM培养的检测,观察从小鼠尾静脉注射不同剂量沙纳唑对小鼠造血系统的影响;并于不同放射剂量照射前30min从小鼠尾静脉注射不同剂量沙纳唑,观察沙纳唑合并γ射线照射处理对小鼠造血系统的影响.结果:静脉注射沙纳唑对在体小鼠骨髓CFU-GM集落形成抑制作用较小;沙纳唑合并γ射线照射处理后对小鼠骨髓CFU-GM的抑制作用与单一放射照射处理结果相似.结论:沙纳唑直接给药对在体小鼠骨髓CFU-GM无明显细胞毒性作用,合并放射照射处理对放射照射所致小鼠骨髓CFU-GM的抑制没有明显协同作用.
关键词： 沙纳唑 放射敏感性 小鼠骨髓粒系造血祖细胞 -
siRNA沉默survivin基因表达对恶性胶质瘤细胞放射敏感性的影响
目的 探讨针对人survivin基因的siRNA(small interfering RNA)对恶性胶质瘤细胞放疗敏感性的影响.方法 设计并合成针对survivin 基因的siRNA片断,构建干涉质粒载体pSil 4.1-shsurvivin 1和pSil 4.1-shsurvivin 2(pSil 4.1-shcontrol作为阴性对照).利用脂质体辅助转染恶性胶质瘤细胞(U251),以G418筛选稳定表达干涉载体的细胞系,RT-PCR和Western blot试验检测survivin的mRNA和蛋白表达,并筛选survivin基因显著抑制的稳定转染细胞系(U251-s2).通过克隆形成试验和皮下移植瘤试验分别在体外和体内检测恶性胶质瘤细胞放射敏感性的变化.结果 相对于未转染和阴性对照组细胞,U251-s2细胞中survivin mRNA和蛋白表达分别显著下调了40.5%和51.8%;同时,survivin基因表达下调能够显著增强恶性胶质瘤细胞的体内外放射敏感性.结论 Survivin基因过表达和恶性胶质瘤的放疗抗性密切相关,抑制其表达可以显著增强恶性胶质瘤细胞的放疗敏感性,具有潜在的临床应用前景.
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阿帕替尼对宫颈癌HeLa细胞体外放射作用的研究
目的 探讨阿帕替尼(apatinib,APA)对宫颈癌HeLa细胞体外放射的作用.方法 将对数生长期HeLa细胞分为放疗组和APA联合放疗组.MTT法检测APA对HeLa细胞的增殖抑制,以克隆形成试验观察放射敏感性.结果 APA对HeLa细胞抑制率呈浓度依赖性增加,APA联合放疗组细胞克隆数和细胞存活分数明显低于放疗组,APA的放射增敏比(SERD0)为0.851,SERDq为14.919,SERSF2为1.245.结论 体外APA对HeLa细胞有增殖抑制作用,联合放疗有增强亚致死性损伤和细胞死亡协同作用.
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尼美舒利对A549细胞株放疗增敏作用的观察
目的:观察尼美舒利(Nimesulide)作为环氧化酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂对肺腺癌细胞株A549的放射增敏作用并探讨其作用机制.方法:对数期生长的A549细胞株,按照实验要求分为对照组、药物组、照射组及实验组,流式细胞仪检测各组肿瘤细胞凋亡率及对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响;克隆形成实验检测放射增敏作用.结果:小剂量(75mmol/L)尼美舒利与射线照射联合应用能够上调Bax的蛋白表达,同时抑制Bcl-2蛋白表达,明显增加肿瘤细胞的凋亡,具有统计学差别.结论:COX-2抑制剂尼美舒利对人肺腺癌A549细胞株具有明显的放疗增敏作用.
关键词： 环氧化酶2选择性抑制剂 放射敏感性 肺腺癌 凋亡 X线 -
反义mdr1对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响
目的:探讨用反义技术抑制多药耐药基因1(Multidrug resistance gene 1,mdr1基因)对鼻咽癌细胞CNE放射敏感性的影响.方法:设立空白组、脂质体组(仅加入等量的脂质体)和mdr1正义寡核苷酸组作对照,用RT-PCR检测鼻咽癌细胞转染反义mdr1前后mdr1表达水平的变化.用集落形成试验检测各实验组照射后人鼻咽癌CNE细胞株的集落形成率,免疫组织化学法测定甲基鸟嘌呤甲基转移酶(Methylguanine-methyhransferase,MGMT)的表达.结果:mdr1反义寡核苷酸能有效抑制mdr1基因的表达.mdr1反义寡核苷酸+60Coγ射线照射组,其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,MGMT蛋白的表达也显著下调.与各对照组比较有显著差异(P<0.05).结论:mdr1反义寡核苷酸通过抑制mdr1基因降低了人鼻咽癌CNE细胞放射抗性.其辐射增敏作用可能与mdr1反义寡核苷酸下调照射后鼻咽癌细胞MGMT蛋白表达有关.
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抑制c-raf-1基因对人宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究
目的:探讨用反义技术抑制癌基因c-raf-1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响.方法:设立空白对照组、c-raf-1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化.用集落形成试验检测各实验组照射后人宫颈癌HeLa细胞株集落形成率,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡率的变化,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白的表达.结果:c-raf-1反义寡核苷酸能有效抑制c-raf-1癌基因的表达,经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的宫颈癌细胞经60Coγ射线照射后其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,而凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白的表达显著下调,与对照各组比较有显著差异(P＜0.01).结论:c-raf-1反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1基因降低人宫颈癌HeLa细胞放射抗性.其辐射增敏作用可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了辐射抵抗信号转导途径,增加照射后肿瘤细胞的凋亡率有关.
关键词： 人宫颈癌细胞株HeLa c-raf-1 反义技术 放射敏感性 -
低氧诱导因子1α对小鼠宫颈癌放射敏感性的影响
目的:探讨低氧诱导因子1α(HIF-1 α)对小鼠宫颈癌皮下移植瘤放射敏感性的影响,探讨其可能的机制.方法:建立宫颈癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组、单次γ射线大剂量照射组、小剂量分次照射组、大剂量照射联合高压氧组、小剂量分次照射联合高压氧组,采用不同的方案进行体外放射治疗.免疫组化法测定放射治疗后移植瘤内的HIF-1 α、bcl-2的表达水平,观察各γ射线处理组照射后移植瘤的抑瘤率,并对HIF-1α与bcl-2的表达及抑瘤率进行相关性分析.结果:HIF-1 α的表达与移植瘤抑瘤率呈负相关(r=-0.514,P＜0.05);与Bcl-2表达无明显相关关系.结论:抑制HIF-1 d的表达可提高肿瘤对放射治疗的敏感性,该效应可能与Bcl-2表达无关.
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c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响
目的:探讨癌基因c-erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响.方法:设立c-erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照,用RT-PCR检测卵巢癌细胞处理前后c-erbB2表达水平的变化.用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率.结果:c-erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降(P＜0.01),而转染c-erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异(P＞0.05).结论:c-erbB2反义寡核苷酸通过抑制c-erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性.该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关.
关键词： 卵巢癌细胞株 脂质体 c-erbB2反义寡核苷酸 放射敏感性 -
全反式维甲酸对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响
目的:研究全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞的放射敏感性的影响及其可能的作用机制.方法:对数生长期的.A549细胞,分为对照组、单纯ATRA组、单纯照射组、联合组(ATRA+照射组).MTT法检测生长抑制率并筛选佳实验浓度；克隆形成实验检测放射增敏作用；流式细胞术( Flow cytometry, FCM)检测各组的细胞周期及凋亡；反转录聚合酶链反应(Reverse transcription-Polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA表达；酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组细胞上清液中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)值.结果:选择10 umol/L的ATRA作为佳实验浓度；ATRA对A549细胞有放射增敏作用；单纯ATRA组的G0/G1期比例较对照组明显增加(P＜0.05),细胞凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05)；联合组VEGF mRNA的表达较单纯放疗组明显减少(P＜0.05)；联合组上清液VEGF水平较单纯照射组明显减少(P＜0.05).结论:ATRA对A549细胞有放射增敏作用,其机制可能与ATRA对A549细胞的直接抑制、诱导细胞周期的再分布、诱导凋亡和下调肿瘤细胞VEGF的表达有关.
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三氧化二砷对人肺癌细胞株A2放射增敏的实验研究
目的:本文探讨三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)对人肺癌细胞株A2放射敏感性的影响.方法:设立空白对照组、单纯照射组(直线加速器X射线照射,2Gy)、As2O3组(1.0μmol/LAs2O3)、As2O3+照射组(1.0μmol/LAs2O3+X射线照射,2Gy).用流式细胞仪检测As2O3作用后肿瘤细胞周期的变化,MTT法及平板克隆形成试验测定各实验组人肺癌细胞株A2细胞存活分数和集落形成率,用流式细胞仪观察Bcl-2蛋白的表达.结果:As2O3作用后使A2细胞出现明显G2/M期阻滞.As2O3+照射组细胞存活分数和集落形成率较As2O3组及单纯照射组明显下降,与As2O3组或单纯照射组比较差异具有显著性(P＜0.01).As2O3+照射组细胞Bcl-2蛋白的表达明显下调,与As2O3组或单纯照射组比较差异具有显著性(P＜0.01).结论:As2O3对人肺癌细胞A2具有放射增敏作用,其增敏机制可能与As2O3增加照射前G2/M期细胞比例及照射后肿瘤细胞的凋亡率有关.
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RNAi沉默clusterin基因对卵巢癌SKOV3细胞放射敏感性的影响
目的:研究clusterin(CLU)基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞放射敏感性的影响.方法:靶向CLU基因的siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,Western blot法测定CLU基因蛋白表达水平.给予不同放射剂量(2、4、6Gy)处理后,通过MTT法及克隆形成实验检测卵巢癌SKOV3细胞的存活率及克隆形成率,流式细胞仪Annexin V/PI法检测凋亡率.结果:靶向CLU基因的siRNA特异性地从蛋白水平抑制了CLU基因表达.MTT及克隆形成实验结果显示卵巢癌SKOV3细胞的存活率及克隆形成率与放射剂量呈反比,剂量越大,存活率及克隆形成率越低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果表明:2Gy放疗后实验组细胞凋亡率明显增加,达(24.32±1.75)％,较单纯放射组升高约12％,差异具有明显统计学意义(P＜0.05).结论:CLU基因沉默可以明显增强卵巢癌SKOV3细胞对放射的敏感性,为卵巢癌放疗增敏基础研究提供了新的靶点.
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COX-2抑制剂对乳腺癌放射增敏作用的实验研究
目的:探讨环氧化酶2抑制剂尼美舒利对乳腺癌细胞株MCF-7的放射增敏作用并初步探讨其机制.方法:克隆形成实验检测尼美舒利对MCF-7的放射增敏作用;电镜观察肿瘤细胞形态学改变;流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞调亡率及Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果:不同浓度的尼美舒利对乳腺癌细胞MCF-7均有放射增敏作用,且呈剂量依赖性关系;尼美舒利与射线照射联用能够上调Bax的蛋白表达,同时抑制Bcl-2蛋白表达,明显增加细胞凋亡率.结论:COX-2抑制剂尼美舒利对人乳腺癌MCF-7细胞株具有明显的放疗增敏作用.
关键词： 环氧化酶2选择性抑制剂 放射敏感性 乳腺癌 凋亡 -
Clusterin基因沉默对脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响
目的:研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术沉默簇集蛋白(clusterin,CLU)基因表达对人脑胶质瘤U87细胞放射敏感性的影响.方法:设计和合成靶向CLU的短发夹RNA(short hairprin RNA,shRNA)序列(CLU shRNA1,CLU shRNA2),并构建到慢病毒的载体plentilox 3.7,以不针对任何基因的shRNA序列作为对照(对照shRNA).包被能成功表达各种shRNA载体的慢病毒.将慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞,Real-time PCR法和Western blot法测定CLU mRNA表达和蛋白质表达水平,证实干扰效果.给予不同放射剂量(2、4、6 Gy)处理后,通过四甲基偶氮唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bxomide,MTT)法及流式细胞仪Annexin V/PI法检测脑胶质瘤U87细胞的存活率及凋亡率.Western blot方法筛选多个凋亡相关信号分子的改变.结果:靶向CLU基因的shRNA特异性地抑制了CLU mRNA和蛋白质的表达.MTT实验结果显示实验干扰组细胞在不同放射剂量下的脑胶质瘤实验U87细胞的存活率与对照组比较明显下降,差异具有统计学意义(4 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.003;6 Gy时,对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000,对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000).流式细胞仪Annexin V/PI法检测结果表明:4 Gy放疗后2个实验组细胞凋亡率均明显增加,高达(35.54±0.95)％,较对照组高2倍多,差异具有明显统计学意义(对照shRNA vs.CLU shRNA1:P=0.000;对照shRNA vs.CLU shRNA2:P=0.000).Western blot法发现CLU沉默可以显著上调促凋亡分子Bax蛋白水平.结论:CLU基因沉默可能通过调控Bax蛋白的表达,明显增强脑胶质瘤U87细胞对放射的敏感性,有望成为增加脑胶质瘤放射敏感性的新靶点.
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MUC1胞内段抑制剂GO-201对人肺腺癌A549放射敏感性作用研究
目的:研究MUC1胞内段(MUC1-CT)抑制剂GO-201对人肺腺癌A549细胞放射敏感性影响.方法:MTT检测不同剂量以及不同时间GO-201对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率;克隆形成实验检测GO-201对A549细胞放射增敏作用,单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算Dq、D0、SF2值和放疗增敏比(sensitizing enhancing vatio,SER);流式细胞术检测各实验组细胞活性氧水平,Western blot法检测锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)表达变化.结果:MUC 1-CT抑制剂GO-201可抑制肺腺癌A549细胞的增殖,其作用24、48、72 h IC50值分别是30.79、23.32、13.60 μmol/L.并且对肺腺癌A549细胞具有放射增敏作用,其放疗增敏比SER为1.14;联合照射组中,A549细胞活性氧水平明显升高(F=12.019,P=0.008),Mn-SOD蛋白表达量明显下降(F=5.465,P=0.048),与对照组比较差异具有统计学意义.结论:MUC1-CT抑制剂GO-201可增加人肺腺癌A549细胞的放射敏感性.
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沉默CD133基因对CD133+肝癌干细胞放射敏感性的影响
目的 研究沉默CD133基因对人肝癌CD133+-HepG2干细胞放射敏感性的影响.方法 免疫磁珠分选HepG2细胞；流式细胞术检测分选前后CD133表达率；NOD/SCID小鼠成瘤实验验证其干性；靶向沉默CD133基因并分组(空白组、阴性感染组、阳性感染组)；RT-PCR和Western blot检测各组CD133基因mRNA和蛋白表达；克隆形成实验检测各组细胞经不同剂量照射后的克隆形成率及存活率,绘制存活曲线并计算各组细胞放射生物学参数Do、Dq、N及放射增敏比(SER)；流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况.结果 流式细胞术检测结果显示,分选前后CD133表达率分别为(1.36±0.20)％和(87.62±1.92)％.CD133+细胞在细胞数为1×103/ml时即可形成皮下移植瘤.RT-PCR和Western blot检测结果显示,阳性感染组CD133 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制.流式细胞术检测结果显示:阳性感染组G1、S 期减少G2期增加,细胞凋亡率明显增加.克隆形成实验显示阳性感染组D0、Dq、N值与SF2均减小,放射敏感性明显增强,其SER为(1.37±0.02),差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 CD133作为肝癌干细胞的表面标志物之一,可能成为肝癌干细胞放射治疗增敏的靶点.
