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碱提山茱萸多糖的理化性质及抗氧化活性研究
目的研究碱提山茱萸多糖的单糖组成及抗氧化活性.方法经热水抽提后的山茱萸残渣用碱提取、盐酸中和、浓缩、透析、乙醇沉淀、DEAE-纤维素柱色谱分离,再通过Sephadex G-200柱色谱进一步纯化,得到白色粉末状多糖PFCC Ⅰ.结果该多糖经过完全酸水解、薄层色谱、红外光谱分析,证明PFCCⅠ由木糖和葡萄糖以18.8:81.2摩尔比组成,平均相对分子质量为7.57×104.以羟基自由基(·OH)清除剂苯甲酸和甘露醇为对照,用Fenton反应检测PFCC Ⅰ对·OH的清除作用,三者对·OH的清除率达50%所需浓度为18,330,80μg/mL.PFCC Ⅰ可以有效抑制猪油和芝麻油的氧化,对O-2的清除率达50%所需浓度为35.0μg/mL.结论该多糖为首次提取制得,具有良好的抗油脂氧化及清除自由基能力.
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高效液相色谱-电喷雾-质谱法分析山茱萸中的化学成分
目的 建立山茱萸中化学成分的高效液相色谱-电喷雾-质谱分析方法.方法 采用Zorbax SB-C18色谱柱,乙腈-水二元梯度洗脱;Agilent电喷雾离子阱多级质谱仪;负离子检出模式.结果 在负离子检出模式下,山茱萸的总离子流色谱图特征性很强,通过质谱中的主要碎片对莫罗忍冬苷、山茱萸裂苷、没食子酸、1,2,3-三-O-没食子酰葡萄糖和1,2,3,6-四-O-没食子酰葡萄糖5种主要成分进行了结构解析.结论 在谱负离子检出模式下,多数化学成分响应较好,为山茱萸药材质量控制提供了一种新的方法.
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山茱萸鞣质活性部位对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响
目的研究山茱萸免疫抑制活性部位(鞣质活性部位,F-1C)对佐剂性关节炎(AA)大鼠免疫功能的影响.方法运用淋巴细胞增殖反应、流式细胞技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)观察F-1C体内和体外对AA大鼠免疫功能的影响,并与环孢素A(CsA)和雷公藤多苷片(TW)进行比较.结果ig给予F-1C(30 mg/kg)对AA大鼠原发性足肿胀具有明显的治疗作用,该作用较TW强,较CsA弱;F-1C对AA大鼠低下的脾细胞增殖反应具有改善作用;对亢进的胸腺细胞增殖反应具有抑制作用.F-1C体外对AA大鼠低下的脾细胞产生IgG水平具有明显的促进作用,并能抑制亢进的胸腺细胞增殖反应.结论F-1C能够治疗AA大鼠原发足肿胀,该作用可能与纠正AA大鼠的异常的免疫反应有关.
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六味地黄颗粒剂与丸剂的药效学研究
六味地黄丸(简称丸剂)是传统的中成药,由熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、茯苓、牡丹皮6味中药材经粉碎后用蜂蜜配制而成.在临床上曾发挥了卓越的效能,但随着医药科技的进步,发现其有作用慢,含糖不利于糖尿病患者服用,水分高易于霉变、不利于贮存等缺点.
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六味地黄汤生物制剂的抗衰老作用
六味地黄汤由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓等6味中药组成,具有滋阴补肾的功效,可用于肾阴亏损引起的衰老及头晕耳鸣、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精、消渴等病症的预防与治疗[1].目前该药在临床上主要用于糖尿病、难治性肾病、更年期综合征、绝经后妇女原发性骨质疏松、老年性阴道炎、矽肺等病症的治疗.药理学研究表明,该方具有治疗阴虚、延缓衰老、调节免疫功能和肾功能、抗肿瘤、抑制骨质疏松、抗氧化、抑制血管内皮凋亡、益智和抑制黑素细胞生成等作用[2].
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莫诺苷对晚期糖基化终末产物加重链脲佐菌素诱导糖尿病肾病保护作用及其机制
目的 探讨山茱萸Cornus officinalis中效应成分莫诺苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)加重链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)小鼠的保护机制.方法 将STZ诱导成功的DN小鼠饲喂高AGEs饲料,并分别ig给予氨基胍(0.1 g/kg)、二甲双胍(0.2 g/kg)、卡托普利(0.02 g/kg)、莫诺苷低剂量(0.02 g/kg)和莫诺苷高剂量(0.10 g/kg) 12周.检测空腹血糖、胰岛素、血清肌酐和尿素氮、血清和肾脏AGEs、24 h尿蛋白等指标,RT-PCR法检测肾组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE) mRNA表达,Westom blotting法检测肾组织中RAGE蛋白表达,观察各组小鼠胰腺和肾脏的病理改变.结果 莫诺苷可显著降低DN小鼠血糖,改善“三多一少”症状,增加胰岛素分泌,降低24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐、血清和肾脏AGEs水平,缓解胰腺及肾脏病变,下调肾皮质RAGE mRNA和蛋白的表达.结论 莫诺苷具有保护DN小鼠的作用,且高剂量作用较优,其相关机制可能与降低血清、肾脏AGEs水平,下调肾皮质RAGE mRNA和蛋白的表达有关.
关键词： 莫诺苷 山茱萸 糖尿病肾病 晚期糖基化终末产物 晚期糖基化终末产物受体 -
附子与山茱萸配伍对慢性心力衰竭大鼠的影响
目的 探讨附子与山茱萸配伍对慢性心力衰竭大鼠增效减毒作用.方法 ip盐酸阿霉素构建大鼠慢性心力衰竭模型,分别给予附子提取物、山茱萸提取物和附子-山茱萸提取物3周后,检测动物血清脑钠素(BNP)含量,心肌细胞Ca2+-ATP酶和Na+,K+-ATP酶活性,镜下观察左心室组织病理学形态变化.结果 造模3周后,模型组大鼠普遍出现腹水、消瘦、稀便、弓背等症状体征;左心室射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS)明显下降;血清BNP水平显著升高;左心室组织出现心肌纤维断裂及心肌细胞变性、坏死等病理改变.连续ig给予附子-山茱萸提取物3周后,大鼠症状及体征明显改善,血清BNP水平下降,心肌细胞Na+,K+-ATP酶活性升高,左心室组织病理学形态有明显改善.附子提取物和山茱萸提取物分别连续给药3周,上述指标未见明显改善.结论 附子与山茱萸配伍可能通过提高心肌细胞Na+,K+-ATP酶活性,改善慢性心力衰竭的心肌能量代谢障碍,提高心力衰竭的心肌活性,起到增效减毒作用.
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山茱萸不同生长期鞣质的动态积累研究
目的 研究山茱萸不同生长期鞣质的积累动态.方法 采用干酪素法测定不同生长期山茱萸中鞣质的量.结果 山茱萸中鞣质的量呈规律性变化,以青果时量较高.结论 为山茱萸规范化种植及药材的质量评价提供了一定的科学依据.
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山茱萸不同栽培品种的RAPD分析
目的分析山茱萸不同栽培品种之间的遗传关系,为山茱萸品种选育提供依据.方法采用改良后的CTAB法从山茱萸叶片中提取总DNA,进行RAPD分析;采用SPSS10.0软件计算DICE遗传相似性系数,Between-groups linkage方法聚类,构建亲缘关系树系图.结果共筛选出22个10个碱基随机引物用于PCR扩增,12个样品获得了133条带,其中多态性条带75条,占56.39%.聚类分析结果表明:纺锤形果型自成一类,短梨形果型与短圆柱形果型聚为一类,其余几种较长大的果型聚为一类,反映了栽培过程中人为选择的后果.结论实验结果与山茱萸栽培品种的生物特性和区域分布基本一致;RAPD分析可作为对山茱萸品种选育的辅助手段.
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正交试验优选加压酒制山茱萸炮制工艺
目的 优选加压酒制山茱萸炮制工艺.方法 以山茱萸中马钱苷、莫诺苷、熊果酸、齐墩果酸的质量分数为评价指标,采用正交设计法考察加酒量、闷润时间、蒸制时间和蒸制温度对炮制工艺的影响,确定佳山茱萸加压酒制工艺.结果 佳炮制工艺参数:加酒量为药材量的25％,闷制时间为30 min,蒸制时间为60 min,蒸制温度为115℃.山茱萸炮制品外观色泽为紫黑色有光泽,炮制品的质量稳定.结论 结合山茱萸炮制品的质量及外观色泽,优选的加压炮制工艺能够节约时间,保证质量,是一种能够适用于山茱萸企业规模化生产的炮制方法.
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HPLC测定六味地黄丸(浓缩)中熊果酸的含量
六味地黄丸(浓缩)收载于卫生部药品标准第十一册(1993年),标准中采用薄层扫描法对其中主药山茱萸有效成分熊果酸进行定量,但操作繁琐,重现性差,我们采用HPLC-ELSD对制剂中熊果酸进行含量测定方法的研究.
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一测多评法与电子眼和电子舌技术相结合优化山茱萸蒸制时间
目的 建立山茱萸药材及饮片的一测多评法(QAMS),并将此法与电子眼和电子舌技术相结合,优选山茱萸佳蒸制时间.方法 以山茱萸药材及饮片为研究对象,采用HPLC法测定没食子酸、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷、山茱萸新苷、马钱苷量;通过建立没食子酸、5-HMF、莫诺苷、山茱萸新苷与内参物马钱苷之间的相对校正因子(RCF),计算各种成分的量;运用电子眼和电子舌技术进行颜色与滋味测定,所得数据用主成分分析(PCA)法进行分析;综合分析3种方法所得结果,对山茱萸佳蒸制时间进行优选.结果 被测定的5种成分色谱峰均有良好的分离度,方法精密度、重复性的RSD均小于2％,在室温条件下24 h内稳定性良好,各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.999 6),平均加样回收率为98％～100.1％,RSD均＜2％;在一定线性范围内马钱苷与没食子酸、5-HMF、莫诺苷、山茱萸新苷间的RCF分别为0.560、1.344、1.255、0.972.电子眼和电子舌PCA中,主成分之和分别为94.618％和94.98％,识别指数(DI)分别为98和93,说明山茱萸全部样品能够通过电子眼和电子舌很好地区分开来.综合分析3种方法所得结果,优选出山茱萸佳蒸制时间为4h.结论 通过QAMS分析指标成分量,与电子眼和电子舌技术进行颜色与滋味测定的结合应用,能够优选出山茱萸佳蒸制时间.
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秦七风湿方HPLC指纹图谱研究
目的 建立秦七风湿方的HPLC指纹图谱,为其质量评价及药效物质基础研究提供依据.方法 采用Inert Sustain C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);以0.1％磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温为30℃;体积流量为1 mL/mim;测定10批秦七风湿方样品,利用中药色谱相似度评价系统(2004A版)建立秦七风湿方HPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认.结果 建立了秦七风湿方HPLC指纹图谱,10批样品的相似度均在0.99以上,共标定19个共有峰,8个峰来源于珠子参,8个峰来源于秦艽,5个峰来源于山茱萸(其中1号峰为珠子参、秦艽和山茱萸共有),并通过与对照品比较指认了其中8个色谱峰,分别为马钱苷酸(2号峰)、莫诺苷(3号峰)、龙胆苦苷(5号峰)、马钱苷(6号峰)、人参皂苷Ro (12号峰)、人参皂苷F1(13号峰)、竹节参皂苷Wa (14号峰)、人参皂苷F2 (17号峰).结论 所建立的方法稳定、准确、重复性好,可为秦七风湿方的质量控制及药效物质基础研究提供依据.
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HPLC法测定山茱萸胶囊中熊果酸和齐墩果酸的含量
山茱萸胶囊由山茱萸有效部位环烯醚萜总苷及总三萜酸经特殊制剂工艺制备而成.对糖尿病微血管并发症有独特疗效.熊果酸和齐墩果酸为山茱萸胶囊的主要有效成分.由于熊果酸和齐墩果酸结构极相似,所以对两者的分离较困难[1,2].本实验建立的山茱萸胶囊中熊果酸和齐墩果酸含量的HPLC测定方法,较<中华人民共和国药典>2000年版使用的薄层扫描法操作更简便准确,且本法可使熊果酸和齐墩果酸达到基线分离,从而准确定量.
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RP-HPLC同时测定护肝剂中9种活性成分
目的 建立RP-HPLC法同时测定护肝剂中马钱素、芍药苷、野黄芩苷、黄芩苷、黄芩素、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素和熊果酸9种中药活性成分,为护肝剂的制剂质量提供保障.方法 采用安捷伦Zorbax SB-C18(150 mm×4.6mm,5 μmn)色谱柱;流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min;紫外检测波长为236、280、210 nm;柱温30℃;进样量为5 μL.结果 马钱素、芍药苷、野黄芩苷、黄芩苷、黄芩素、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素和熊果酸的低检测限分别为12.0、2.60、5.75、9.75、14.39、19.06、14.90、15.63、16.08 ng;线性范围分别为583.33～18.229、916.67～28.65、541.67～16.93、416.67～13.02、500.00～15.63、458.33～14.32、625.00～19.53、458.33～1432、1 000.00～31.25 mg/L:平均加样回收率分别为103.51％、104.19％、95.16％、96.71％、105.61％、96.12％、97.09％、96.87％、105.90％;精密度RSD分别为1.25％、1.31％、1.91％、1.88％、1.95％、1.45％、1.66％、1.52％、1.33％;重复性RSD分别为1.39％、1.41％、1.87％、1.91％、1.79％、1.45％、1.32％、1.71％、1.49％;稳定性RSD分别为1.36％、1.22％、1.87％、1.91％、1.93％、1.56％、1.39％、1.78％、1.61％.6批护肝剂中含马钱素、熊果酸、芍药苷、野黄芩苷、黄芩苷、黄芩素、五味子甲素、乙素及丙素的平均质量浓度分别在216.5～222.5、40.8～42.8、125.4～136.3、144.0～147.3、1 640.8～1 947.3、497.5～515.0、15.0～17.3、33.6～36.0、3.0～3.9 mg/L.结论 该方法简便、灵敏度高、重复性好、平均回收率高,是检测护肝剂中马钱素、芍药苷、野黄芩苷、黄芩苷、黄芩素、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素和熊果酸的可信方法.
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糖脂康胶囊质量标准的研究
糖脂康胶囊由大黄、黄芪、丹参、自术、山药、山茱萸等数味中药制成,具有益气健脾、滋阴补肾、清热生津之功效,适用于各类糖尿病及高血脂症的治疗,临床应用安全有效.
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六味地黄丸粉体粒径与其破壁率和溶出度的相关性研究
目的 考察六味地黄丸粉体粒径与细胞破壁率、体外溶出度之间的关系.方法 采用激光粒度仪和光学显微镜测定4种六味地黄丸粉体(粗粉、细粉、极细粉、微粉)的粒径、细胞破壁率;采用桨法,以马钱苷、丹皮酚为指标,考察上述4种粉体的溶出特征;比较粉体粉碎程度与细胞破壁率、溶出度之间的关系.结果 不同粉碎程度的六味地黄丸粉体的粒径分布、破壁率以及溶出度在一定范围内相关性较强,在该范围内,特征细胞破壁率以及马钱苷、丹皮酚累积释放率都随粉体粒径的减小而提高,而山茱萸、泽泻、牡丹皮微粉的特征细胞破壁率均能达到100％.结论 适度的改变粉碎程度能改变中药细胞破壁率,从而控制中药有效成分溶出的速率和程度.
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RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸
目的 建立RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸的量,对保肝丸的制剂质量提供保障.方法 采用ZORBAX SB-C18 (150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液(67∶33),体积流量1.0 mL/min;紫外检测波长为210 nm;柱温30℃;进样量10 μL.结果 五味子甲、乙、丙素及熊果酸的低检测质量浓度分别为0.016、0.019、0.020、0.025 mg/L,线性范围分别为3.906～250.000、5.323～340.000、3.225～205.000、5.323～340.000 mg/L.供试样品中五味子甲素、五味子乙素、五昧子丙素及熊果酸的平均回收率分别为100.79％、101.09％、101.26％、101.16％;精密度RSD分别为1.76％、1.69％、1.80％、1.86％;重复性试验RSD分别为1.77％、1.66％、1.49％、1.56％;稳定性试验分别为1.61％、1.39％、1.60％、1.56％.保肝丸(0.560 mg)含五味子甲、乙、丙素及熊果酸平均量分别为0.444、1.066、0.3125、1.068 μg/丸.结论 该方法简便、灵敏度高、重复性好、回收率高,是检测五味子甲、乙、丙素及熊果酸质量浓度的可信方法.
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HPLC法测定山茱萸及知柏地黄丸中齐墩果酸、熊果酸的含量
知柏地黄丸是在六味地黄丸处方基础上加黄柏、知母而成,治两尺脉旺、阴虚火动、午热骨蒸.
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参麦地黄丸质量标准提高研究
目的 通过对参麦地黄丸(SDP)进行薄层鉴别、定量测定等研究,建立了合理可行的质量控制方法与标准.方法 参照《中国药典》2015年版四部通则相关方法,建立鉴别SDP中牡丹皮、山茱萸(蒸)、泽泻、北沙参4味药材的TLC法;建立同时测定SDP中指标性成分补骨脂素、异补骨脂素和丹皮酚的HPLC法.采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 um);以0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长254 nm;柱温30℃.结果 TLC鉴别方法专属性强,能够有效鉴别4味药材;定量测定方法学研究结果表明,补骨脂素、异补骨脂素和丹皮酚质量浓度分别在6.531～58.780、6.115～55.040、20.40～183.60 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系,回归方程分别为Y=1.523×104 X-1.209×104,r=0.999 9;Y=1.809×104X 1.523×104,r=0.999 9;Y=2.760×104X-1.683×104,r=0.999 9;平均回收率分别为100.4％(RSD为1.1％)、101.5％ (RSD为1.3％)、101.5％(RSD为0.79％).5批SDP样品定量测定结果表明,该样品中补骨脂素为322.1～331.0 μg/g,异补骨脂素为298.0～350.1 μg/g,丹皮酚为929.5～982.7 μg/g.结论 建立的质量控制方法专属性强、重复性好、简便准确,为SDP的质量标准的提高提供依据.
