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山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症大鼠血清糖基化终产物-肽(AGE-P)水平的影响
探讨环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症大鼠血清糖基化终产物-肽(AGE-P)水平的影响.方法:在正常进食条件下,大鼠先以30mg·kg-1ip.链脲佐菌素(STZ)溶液,第二天再按0.11ml/只ip.弗氏完全佐剂(FCA),每周1次,连续3周.3周后测定大鼠血糖,若血糖≥16.7mol.L-1者则纳入为糖尿病大鼠,并按血糖值范围随机分为模型组、氨基胍组(0.1g·kg-1)和环烯醚萜总苷组(0.25、0.5g·kg-1),正常组,各组连续ig.12周.实验结束后运用流动注射分析法(FIA,flow injection assay)检测血清AGE-P含量.结果:模型组血清AGE-P水平显著增加(14.3±4.3vs2.8±0.4,P<0.01),而环烯醚萜总苷及氨基胍组均能降低血清AGE-P水平,与模型组比较有显著性差异(P<0.05).结论:环烯醚萜总苷能降低糖尿病血管并发症大鼠血清AGE-P水平,具有减轻糖尿病血管并发症的作用.
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HPLC法测定山茱萸胶囊中熊果酸和齐墩果酸的含量
山茱萸胶囊由山茱萸有效部位环烯醚萜总苷及总三萜酸经特殊制剂工艺制备而成.对糖尿病微血管并发症有独特疗效.熊果酸和齐墩果酸为山茱萸胶囊的主要有效成分.由于熊果酸和齐墩果酸结构极相似,所以对两者的分离较困难[1,2].本实验建立的山茱萸胶囊中熊果酸和齐墩果酸含量的HPLC测定方法,较<中华人民共和国药典>2000年版使用的薄层扫描法操作更简便准确,且本法可使熊果酸和齐墩果酸达到基线分离,从而准确定量.
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左归丸水提液中总环烯醚萜苷含量测定
目的：建立左归丸水提液中总环烯醚萜苷含量测定的方法。方法：水提液通过醇沉后经大孔树脂D101对环烯醚萜苷进行分离纯化，蒸干后加香草醛和高氯酸水浴显色后用紫外可见分光光度计进行含量测定。结果：大孔树脂D101对环烯醚萜苷的分离纯化效果良好，左归丸中环烯醚萜苷以马钱苷含量较高，故选马钱苷为对照品，显色后在24.96μg~99.84μg范围内线性关系良好。结论：该方法可用于左归丸水提液中总环烯醚萜苷的含量测定。
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女贞子环烯醚萜总苷纯化工艺的优化
目的 优化女贞子环烯醚萜总苷纯化工艺.方法 HPLC法测定特女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷G13、oleonuezhenide含有量.通过对AB-8、ADS-7、D-101、D-941、HPD-400、HPD-600、HPD-300 L、HPD-722型号大孔树脂进行静态吸附-解吸、动态洗脱实验以筛选出适宜者,优化纯化条件.然后,比较环烯醚萜总苷、提取物的体外抗氧化活性.结果 D-101型大孔树脂对环烯醚萜总苷有较好的吸附、洗脱、纯化效果,佳条件为以7.13 mg/mL质量浓度上样,上样量5 BV,体积流量2.5 BV/h,树脂吸附3h后,依次用5 BV水、5 BV 50％乙醇以2 BV/h体积流量洗脱.16批女贞子经大孔树脂纯化后,环烯醚萜总苷纯度以浙江丽水产高,湖北大冶、广东清平、山西运城产相对较低.该成分对DPPH自由基的清除能力明显高于女贞子提取物.结论 D-101型大孔树脂可用于纯化女贞子环烯醚萜总苷,并且其体外抗氧化活性在纯化后显著增加.
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环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症大鼠NO、NOS和ET的影响
目的探讨环烯醚萜总苷对NO、NOS、ET的影响,以了解其对糖尿病血管并发症大鼠的作用及作用机理.方法用STZ 60mg/kg一次给大鼠腹腔注射.若1周后大鼠血糖值高于16.7 mol/L则纳为糖尿病大鼠.将糖尿病大鼠随机分为模型组、环烯醚萜总苷Ⅰ组(0.5g/kg,ig.)、环烯醚萜总苷Ⅱ组(1.0g/kg,ig.)和氨基胍组(0.1g/kg,ig.),同期另设一组正常组.各组连续灌胃给药12周.实验结束后取血,测定大鼠血清NO、NOS和血浆ET.结果模型组与正常组比较,NO、NOS含量显著降低,ET含量显著升高;而环烯醚萜总苷组与氨基胍组均能显著升高糖尿病血管并发症大鼠血清NO、NOS的含量,并降低血浆ET含量.结论环烯醚萜总苷可部分恢复NO和ET的动态平衡,保护血管内皮细胞,对糖尿病血管并发症具有改善作用.
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山茱萸环烯醚萜总苷对AGEs培养肾小球系膜细胞的影响
目的观察山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)形态学、细胞周期及氧化应激的影响.方法用含AGEs的培养液配制ICO、氨基胍,同时设对照.GMC培养48 h后,加混合荧光染液进行染色,并立即进行荧光显微观察.另用流式细胞仪分析GMC的周期.试剂盒测定细胞上清液MDA含量与SOD和GSH-Px活性,流式细胞仪检测细胞内ROS含量.结果形态学显示,正常GMC形态结构正常.而GMC在AGEs的刺激下,细胞数量明显增多,细胞结构不甚清晰,细胞S期延长,G0/G1缩短,细胞内SOD、GSH-Px下调,ROS、MDA上调.在系统中加入ICO后细胞异常增殖明显减少,细胞形态趋于正常,使S期细胞减少,SOD、GSH-Px活力提高,ROS、MDA含量降低.结论 ICO能对抗AGEs对GMC的损伤作用.其可能是通过抑制氧化应激来保护GMC免受AGEs的损害,从而达到防治糖尿病肾病的目的.
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山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病大鼠胸主动脉血管内皮的保护作用
在发达国家,糖尿病大血管病变如糖尿病心脏病变导致50%的糖尿病人死亡,美国糖尿病心脏病居致死原因的第5位[1].糖尿病血管病变已严重地威胁着人类的健康,寻找能阻止或控制糖尿病血管病变发生、发展的有效药物已成为世界医药学研究的重点之一.现代研究认为,血管内皮损伤在糖尿病血管病变中是一早期的关键过程,故本文从形态学的角度观察其对糖尿病大鼠胸主动脉血管内皮的保护作用.
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山茱萸提取物对糖尿病小鼠降血糖作用的研究
目的 研究山莱萸提取物环烯醚萜总苷对糖尿病小鼠血糖的影响.方法 提取山茱萸环烯醚萜总苷,建立四氧嘧啶糖尿病小鼠模型.分成正常对照组、阴性对照组、阳性对照,实验组分低、中、高剂量环烯醚萜总苷.正常对照组为非糖尿病小鼠,不作处理,阴性对照组灌胃等体积生理盐水,阳性对照组灌胃优降糖[(1.5 mg/(kg·d))],环烯醚萜总苷[低剂量组3.0g/(kg·d)、中剂量组6.0g/(kg·d)、高剂量组12.0g/(kg· d)],持续60d,测量给药后和停药30、60天时的糖尿病小鼠的血糖及糖化血红蛋白(HBA1C)和糖化血清蛋白(GSP),并进行统计学分析.结果 环烯醚萜总苷给药组小鼠,低剂量组降血糖作用不显著,中、高剂量组较为显著(P＜0.05).给药停止后30、60天,中、高剂量组的血糖值及糖化血清蛋白(GSP)、糖化血红蛋白(HBA1C)较刚停药时没有显著差异,优降糖组血糖值及GSP、HBAIC有显著回升(P＜0.01).结论 环烯醚萜总苷低、中、高剂量组的降血糖作用均不及优降糖组显著,但是中高剂量组血糖维持效果较优降糖组显著.
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基于不同Caspase凋亡通路的玄参环烯醚萜总苷抑制心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡的作用机制研究
目的:研究玄参环烯醚萜总苷抑制心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡的作用机制.方法:将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和玄参环烯醚萜总苷低、中、高剂量给药组,每组10只.采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎.各剂量药物组大鼠在造模成功后分别灌胃玄参环烯醚萜总苷混悬液,每次剂量为50、100、200 mg/kg(以总苷提取物质量计),灌胃体积为10 mL/次,每天2次,连续给药7 d;假手术组和模型组大鼠同法灌胃等体积生理盐水.记录大鼠术前、术后及给药7d过程中的Ⅱ导联心电图S-T段变化情况;检查大鼠心功能指标;采用比色法、免疫抑制法或酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、N末端钠尿肽原(NT-pro BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况;采用比色法检测心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;采用ELISA法、酶解比色法或酶解荧光法检测心肌细胞中Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶8(Caspase-8)、Caspase-9、Caspase-12、Caspase-3、Calpain的蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,模型组大鼠心电图S-T段显著抬高,左室舒张末期内径、左室收缩末期内径均显著增加,左室射血分数、短轴缩短率均显著降低;血清中LDH、CK-MB、cTnⅠ、NT-pro BNP、TNF-α水平均显著升高;心肌组织中有大量黄褐色凋亡细胞;心肌组织中SOD活性显著降低,MDA含量显著升高;心肌细胞中Bcl-2蛋白表达水平及Bcl-2/Bax比值均显著降低,Bax、Cyt C、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Cas-pase-12、Calpain的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01).与模型组比较,各剂量药物组大鼠的上述指标及心肌组织病理学变化均有显著改善;心肌细胞中Bcl-2蛋白表达水平及Bcl-2/Bax比值均显著升高,Bax、Cyt C、Caspase-3、Caspase-8、Cas-pase-9、Caspase-12、Calpain的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01).结论:玄参环烯醚萜苷可同时通过抑制Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12相关的3条凋亡通路,继而抑制Caspase-3的激活,从而起到抗心肌细胞凋亡作用.
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山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病大鼠肾皮质糖化终产物及其受体mRNA表达的影响
目的:探讨山茱萸环烯醚萜总苷(HXMTZG)对糖尿病大鼠肾皮质糖化终产物(AGEs)的抑制作用及其对肾皮质内AGEs受体(RAGE)mRNA转录水平的影响.方法:用STZ 60mg/kg一次性腹腔注射造成糖尿病大鼠,连续灌胃给药12周,取右肾皮质测定其AGEs荧光强度以间接表示肾皮质内AGEs的含量;用RT-PCR半定量方法体外扩增目的基因RAGE,并以β-actin作为内参,比较肾皮质内RAGE mRNA的表达情况.结果:模型组AGEs沉积显著增加,RAGE表达明显上调;而环烯醚萜总苷能减少AGEs在肾皮质的过度沉积,同时亦能显著抑制RAGE的过高表达.结论:山茱萸环烯醚萜总苷能抑制糖尿病大鼠肾皮质AGEs的形成,使其受体mRNA表达水平下降,具有减轻糖尿病肾病变的作用.
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山茱萸环烯醚萜总苷对由链脲佐菌素诱导的糖尿病血管并发症大鼠血清sICAM-1、TNF-α的影响
目的:探讨山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症大鼠血清可溶性细胞间粘附分子(sICAM-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响.方法:STZ 60mg/kg ip 1周后血糖值高于16.7mM的糖尿病大鼠连续灌胃给药12周环烯醚萜总苷0.5g/kg、1.0g/kg和氨基胍0.1g/kg,各组取血清分别测定 sICAM-1、TNF-α的含量.结果:糖尿病血管并发症模型大鼠血清sICAM-1、TNF-α较正常组上调,环烯醚萜总苷及氨基胍均能显著降低糖尿病血管并发症模型大鼠血清sICAM-1、TNF-α的含量.结论:环烯醚萜总苷能降低糖尿病血管并发症大鼠血清中过高的sICAM-1、TNF-α水平,这一作用可能有利于控制糖尿病血管并发症的发生发展.
