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PCR技术在性病病原体检测中的临床应用
聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术具有特异性强、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点,现广泛用于临床检验.PCR技术使医学界真正兴起基因诊断技术热,成为现代医学发展的又一里程碑,特别是在感染性疾病检测和诊断中的应用日趋广泛和成熟,目前可开展几十种感染性疾病的基因检测和治疗监测,特别是在致病微生物如病毒、细菌、衣原体、支原体、螺旋体等引起的性病感染DNA检测应用较广.
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溶血对不同浓度乙型肝炎病毒DNA检测结果的影响
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发区,目前诊断HBV感染的指标有很多,检测血清中的HBV表面抗原(HBsAg)是其中之一,但是一些低浓度的HbsAg容易造成时阴时阳的结果[1],荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA则是抗病毒治疗选择和抗病毒疗效考核的直接可靠的指标之一[2],能准确地对HBV DNA进行核酸检测,不仅对诊断和治疗是非常重要的,甚至会影响到患者的情绪[3].送检标本的质量则直接影响着检验结果的准确性,在日常检验工作中,临床送检的标本,溶血则是常遇到的情况之一,本文主要探讨不同程度的溶血对不同浓度HBV DNA的结果是否有影响,为临床诊断及治疗提供参考.
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孕妇外周血中胎儿DNA检测及临床应用
产前诊断是预防出生缺陷、降低缺陷儿出生的有效措施之一,通常分为有创性和无创性.有创性产前诊断技术主要包括孕早期绒毛活检、胚胎(胎儿)镜、羊膜腔穿刺术以及经皮胎儿脐血穿刺取样等,这些操作可能对胎儿或孕妇造成一定的危害,因而限制了其临床应用;无创性产前诊断技术,以其对母儿极少损伤成为广大医师努力的方向.
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肝癌患者血浆游离DNA检测的意义
近年,血浆游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)受到越来越多的关注.新近一期
杂志专门刊登编辑文章强调cfDNA可能是血液中的潜在的生物标志物[1].cfDNA的检测就如"液态的组织活检(liquid biopsy)",有可能代替现在的肿瘤活组织检查[2].研究表明cfDNA浓度在肿瘤患者中升高[3],且随肿瘤大小、部位以及严重程度而不同[4].然而这种改变也可以发生于各种其他的疾病,如外伤、自身免疫性疾病等. -
150例不同宫颈病变中 HPV 基因分型分析及意义
目的：分析不同宫颈病变患者中HPV感染的基因分型。方法选择接受宫颈活检的妇女150例为研究对象，进行HPV-DNA检测，分析不同宫颈病变的HPV感染情况及HPV基因型亚型分布情况。结果宫颈鳞状细胞癌患者的HPV感染阳性率94.74％，CINⅢHPV感染阳性率71.43％，均远高于其他宫颈病变类型患者（ P＜0.05）；高危基因型感染率为94.92％，其中前三位为HPV16、HPV51、HPV58，低危基因型包括HPV6、HPV11共3例（5.08％）。结论 HPV感染率随着宫颈病变的严重程度上升而上升，通过对HPV进行亚型检测，有助于早期宫颈癌的预警及治疗，改善患者预后。
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DNA检测技术在基因剔除小鼠保种中的初步应用
目的 针对基因剔除小鼠在饲养过程中出现母本繁殖困难,频频出现突发死亡等情况,对运用DNA检测技术进行辅助保种的可行性探讨.方法 将本实验室饲养的 P110(p110dPI3-Kinase)基因剔除小鼠的父本与其背景品系C 57BL/6小鼠杂交,获得的杂交一代再进行自交,其后代通过 DNA检测,分离出野生型(425 bp)、杂合子型(425 bp+602 bp)和纯合子型(602 bp),将得到的纯合子小鼠雌雄交配.结果 经DNA鉴定获得了正常的P110小鼠,使该品系得以维持.结论 对父母本一方发生繁殖困难或死亡的基因剔除小鼠,采用杂交-自交繁殖方式,结合DNA 检测技术,可重建繁育群.
关键词： P110基因剔除小鼠 杂交-自交 DNA检测 -
非典型皮损及无皮损的生殖道分泌物单纯疱疹病毒DNA检测分析
目的 探讨非典型皮损及无皮损单纯疱疹病毒(HSV)疑似感染者生殖道分泌物DNA检测的临床意义.方法 选取150例疑似HSV感染但无典型症状患者为观察组,以同期150例生殖器典型病变者为对照组,比较2组HSV-Ⅱ型及HSV-Ⅰ型的DNA检测情况.结果 观察组HSV检出率20.00％,显著低于对照组的64.00％ (P ＜0.01).疑似HSV感染男性患者HSV检出率34.10％,显著低于女性52.76％ (P ＜0.05).结论 对非典型皮损或无皮损HSV疑似感染患者,生殖道分泌物DNA检测对HSV感染的诊治及传播的防范具有重要的临床意义.
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纳米金标记法在DNA检测及基因芯片技术中的应用
近年来DNA介导的纳米金颗粒的组装研究受到广泛重视,烷巯基修饰的寡核苷酸可与纳米金共价结合,形成的探针可与目的多核苷酸序列杂交,纳米金颗粒被可逆组装成超分子结构,聚集过程伴有红色到蓝色的颜色变化,由此衍生出比色法检测特定DNA序列的新方法.该方法具有极高的选择性和较好的灵敏度,与银染法结合更提高了检测的灵敏度,可用于斑点杂交、芯片检测等领域.本文对该方法的原理、操作过程及研究进展作一简要介绍.
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住院儿童EB病毒感染临床分析
目的:了解云南省昆明市住院患儿EB病毒(EBV)感染状况及相关疾病谱临床流行分布特征.方法:回顾性统计分析疑似EBV感染住院患儿经PCR荧光法检测全血中EBV核酸阳性病例的临床资料.结果:共送检住院患儿血样本547例,EBV核酸检测阳性例数97例,检出率17.73％,其中男56例(57.73％),女41例(42.27％);平均年龄(4.60±2.84)岁,学龄前儿童(0～6岁)76例,占检出人数的78.35％.儿童EBV感染临床症状多样,常以发热、咳嗽、淋巴结肿大等上呼吸道感染症状首诊,多以EB病毒感染、肺炎、支气管炎、传染性单核细胞增多症、咽炎等临床表现为主,可伴有肝-脾等肿大、皮疹、肝脏和心肌损害等并发症状;同时检出合并其他病原体感染71例次,其中肺炎支原体19例(19.59％),伤寒或副伤寒杆菌18例(18.56％),乙型脑炎病毒17例(17.53％),副流感病毒8例(8.25％),肠道病毒2例(2.06％),其他病毒共7例(7.22％),合并感染患儿47例(42.27％);且各季节时段的检出率差异无统计学意义(P>0.05).结论:EBV感染是昆明地区住院患儿呼吸道感染的重要病原体之一,各季节时段均可发病,常呈现与其他病原体混合感染.
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人乳头状瘤病毒检测联合液基细胞学检查筛查宫颈癌前病变及宫颈癌的意义
目的：探讨液基细胞学检查（ TCT）联合高危型人乳头状瘤病毒（ HR－HPV） DNA检测早期筛查宫颈癌前病变及宫颈癌的临床意义。方法选择835例患者进行TOT和HPV检测，两项检查结果有一项异常即接受阴道镜宫颈组织活检，以病理结果为金标准，分析TOT联合HPV检测的临床意义。结果 TCT检测结果阳性者256例，灵敏度66．5％；HPV检查结果阳性者281例，灵敏度55．4％；TCT联合HPV检测灵敏度为78．1％。结论 TCT联合HPV检测是临床筛查宫颈癌前病变及宫颈癌效果较好的方法，两者联合试验用于早期筛查宫颈癌，可提高检出率。
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对ASC-H的妇女行高危人乳头状瘤病毒DNA检测的临床意义
目的 探讨高危人乳头瘤病毒DNA(hrHPv DNA)辅助检测对宫颈非典型鳞状上皮,不除外高度鳞状上皮内病变(ASC-H)女性疾病的风险评估.方法 对1187例ASC-H妇女进行hrHPV感染的流行病学和组织病理学资料调查及分析.结果 在277,400例宫颈细胞学检查中判读为ASC-H的1187例中,589例(49.6%)hrHPV DNA检测结果为阳性.对其中505例的组织病理学随访,32.7%hrHPV DNA阳性者系宫颈高度鳞状上皮内病变(CIN2/3),hrHPV DNA阴性妇女仅有1.2%呈CIN2/3改变.hrHPV DNA检测结果 提示CIN 2/3改变的阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、敏感性和特异性分别是32.7%、98.8%、96.6%和58.6%.该PPV约是单纯细胞学结果 ASC-H预测CIN改变的2倍.宫颈/移行区(EC/TZS)样本的存在与否并不影响hrHPV DNA或CIN2/3级的检出率.结论 对细胞学判为ASC-H的妇女行hrHPV DNA检测具有较高的临床价值.对hrHPV DNA阴性患者可单纯行常规细胞学随访和hrHPV DNA检测,而不需要进行阴道镜检查,尤其是对40岁以上妇女.
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236例ASCUS临床处理探讨
目的 总结宫颈细胞学结果为意义不明的不典型鳞状细胞(atypical squamous cells undetermined significance,ASCUS)进一步处理的临床经验.方法 对236例宫颈液基细胞学检查诊断为ASCUS的患者,联合进行HPV DNA检测和阴道镜下宫颈活组织检查,分析临床特点.结果 ASCUS患者主要分布在30-49岁年龄段(72.32％).236例ASCUS中包含各种宫颈病变,炎症79.24％(187/236),CIN 19.49％(46/236),宫颈浸润癌1.27％(3/236).HPV阳性98例,其中CIN 28例,包含11例CINⅡ、4例CINⅢ、3例SCC. HPV阴性144例,其中CIN 18例,包含2例CINⅡ.HPV检测阳性可预测高级别宫颈病变(P＜0.05).结论 对待ASCUS患者应给予个体化处理,可采用HPV DNA检测分流ASCUS,HPV阳性者行阴道镜检查;对随访性差患者应及时行阴道镜检查及病理活检,以早期发现宫颈病变.
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DNA测序诊断孢子丝菌病三例
目的:本文报道通过对组织分子鉴定明确病原菌的孢子丝菌病3例.方法:提取3例怀疑孢子丝菌病患者活检组织中的真菌DNA,进行ITS区扩增、测序和比对;病变组织行组织病理学检测.对脓液和组织进行真菌镜检及培养,对培养阳性菌落进行形态学、分子生物学、糖同化实验鉴定以及体外药敏检测.结果:真菌镜检脓液见少量孢子、未见菌丝;病理检查提示感染性肉芽肿,抗酸染色及PAS染色均阴性;ITS区鉴定提示申克孢子丝菌;真菌培养、形态学及糖同化鉴定及calmodulin分子鉴定为球形孢子丝菌;药物敏感性检测显示其对特比萘芬高度敏感;口服特比萘芬250 mg/d;舍他康唑乳膏外用,治疗后明显改善.结论:直接提取病变组织DNA进行早期DNA测序能够尽早明确致病菌种并指导用药.
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呼吸道感染患儿肺炎支原体DNA检测结果分析
目的 分析呼吸道感染患儿肺炎支原体DNA检测结果及与相关检验的一致性.方法 对我院就诊的呼吸道感染患儿进行咽拭子肺炎支原体DNA检测,并采集静脉血进行血常规、C-反应蛋白及肺炎支原体抗体检测.结果 1245例呼吸道感染患儿咽拭子标本中肺炎支原体DNA阳性96例,阳性率为7.71％,其中1月～3岁组阳性率占5.19％,＞3 ～6岁组阳性率占14.48％,＞6～14岁组阳性率占34.42％,1月～3岁组阳性率明显低于其他两组,差异有统计学意义(P ＜0.05);96例肺炎支原体DNA阳性患儿检测其肺炎支原体抗体结果分别为阴性53例,占55.21％,阳性43例,占44.79％,其中1∶40阳性6例,占6.25％,1∶80阳性12例,占12.50％,1∶160阳性25例,占25.04％;1∶160阳性率明显高于其他两组,差异有统计学意义,P＜0.05.96例肺炎支原体DNA阳性患儿检测C-反应蛋白数值＞5.0共26例,占27.08％;而白细胞(WBC)总数、淋巴细胞(L)比值、中性粒细胞(N)比值的均值分别为8.80×109[参考范围:(4.00～10.00)×109]、38.36％(参考范围:18.30％～47.90％)和49.63％(参考范围:41.00％～74.30％),均在参考范围之内.结论 学龄前及学龄儿童是肺炎支原体感染易感好发人群,3岁以上患儿感染率较高,咽拭子肺炎支原体DNA检测与血清肺炎支原体抗体检测符合率较低.
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磁珠法对淋球菌DNA的检测分析
目的 了解磁珠法提取淋球菌DNA的效率和敏感性.方法 对2012年1月-2013年1月本院皮肤性病科送检的338例标本同时进行淋球菌培养和磁珠法提取淋球菌DNA.结果 淋球菌培养阳性标本101例,培养阴性标本237例.结果表明,在101例淋球菌培养阳性标本中,淋球菌DNA检测全为阳性;在237例培养阴性标本中,淋球菌DNA检测共有201例为阴性,其中有36例为淋球菌DNA阳性.结论 虽然淋球菌培养是金标准,但由于培养时间长,且淋球菌非常脆弱,培养阳性率较低,所以容易漏诊.磁珠法提取淋球菌DNA的效率快、敏感性较好,还在于细菌死亡后或早期使用抗生素产生淋球菌培养假阴性结果时,淋球菌DNA检测仍然为阳性,对这一部分患者能够做到早期诊断和鉴别诊断,对预防和治疗性病有重要作用.
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聚丙烯酰胺凝胶银染技术改良
目的:对变性及非变性聚丙烯酰胺凝胶银染方法适条件进行探讨和改良.方法:采用PCR-聚丙烯酰胺电泳、硝酸银染色检测159～196 bp及336 bp DNA片段,并对不同显影液浓度与显色温度下的结果进行比较.结果:DNA分子经改良银染法检测均清晰可见,对比良好.结论:聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析,方便快捷,易长期保存,并减小了对人及环境的毒害作用.
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犯罪现场中生物检材的发现和提取与案件侦破
随着DNA检验技术的发展，对微量生物检材的检验越来越成为可能。同样，随着犯罪手段的日益智能化，微量生物检材在重大案件中的作用愈来愈重要，甚至对整个重大案件起着决定性作用。因此，如何有效地发现和提取生物检材特别是微量的生物检材显得愈为重要。
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生物检材在案发现场的发现与提取
目的 探讨现场生物检材的发现与提取技巧.方法 结合实际破案工作,综述生物检材在现场中分布范围、特点及提取技巧.结果 全面、细致勘查现场,严格操作规范是保障生物检材得以发现并提取的关键环节.结论 现场勘查技术人员需重视生物检材的发现与提取技巧.
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妇科门诊患者HPV感染状况及基因型研究
目的 探讨妇科门诊患者宫颈HPV感染状况及基因型分布.方法 采用核酸分子快速导流杂交分型技术,对在本院妇科就诊的3 652名女性患者宫颈拭子进行HPV分型检测.结果 21种HPV亚型均被检出,3 652例门诊妇女中HPV阳性率为36.7%(1 342/3 652),检出率在5%以上的亚型有5种,依次为HPV 16(9.7%,354/3 652),HPV52(7.2%,262/3 652),HPV 11(6.9%,252/3 652),HPV 58(6.8%,248/3 652)和HPV 6(5.6%,203/3 652).结论 妇科门诊患者HPV感染率较高,应开展HPV DNA常规检测,以预防宫颈癌的发生.
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液基细胞学检查、高危型人类乳头状瘤病毒DNA检测联合阴道镜对宫颈癌筛查的应用价值
目的 探讨基液细胞学检查(TCT)、高危型人类乳头状瘤病毒(HPV)检测联合阴道镜对宫颈癌筛查的临床价值.方法 选择2003年1月～2006年6月到该院就诊的652例患者,包括宫颈炎、宫颈湿疣、阴道不规则流血流液等患者,均为已婚妇女,无子宫颈锥形切除或子宫切除病史,无盆腔放射治疗史,年龄在23～65岁,均做液基细胞学检查和人类孔头状瘤病毒DNA检测.对TCT检查为意义不明的不典型鳞状细胞(ASC-US)以上、HPV DNA检测阳性、宫颈细胞学检查阴性,但肉眼观察可疑病例共157例行阴道镜检查.结果 652例患者中,TCT诊断宫颈异常细胞阳性率18.40%,组织学阳性率12.34%,两者比较差异元显著性;高危型HPV检测,PCR检出率21.01%,与TCT检出率(13.65%)相比差异有显著性(P＜0.01).联合阴道镜检查157例,拟诊CIN以上病变敏感性71.33%,特异性51.60%.结论 TCT、高危型HPV DNA检测联合阴道镜可明显提高CIN的阳性检出率,降低漏诊率,是进行宫颈病变筛查的佳方法,只有三者同时应用于癌前痛变检查中,才能更好地发现宫颈癌前痛变,阻断宫颈癌的发生.
