初探糖肝煎浓缩丸对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠的治疗作用

目的:初步研究糖肝煎浓缩丸对2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝模型大鼠糖脂代谢,肝功能及肝脏胰岛素受体的影响.方法:选择健康雄性Wistar大鼠进行研究,随机分为正常组,模型组,吡格列酮组,糖肝煎浓缩丸中剂量组和糖肝煎浓缩丸低剂量组.采用高脂高糖饲料喂养加30 mg·kg-1链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法建立2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的动物模型.吡格列酮组给予吡格列酮混悬液1 mg·kg-1,糖肝煎浓缩丸中剂量组给以5.6 g·kg-1 ·d-1糖肝煎浓缩丸混悬液,糖肝煎浓缩丸低剂量组以2.8g·kg-1·d-1糖肝煎浓缩丸混悬液灌胃,模型组和正常组给予相同量的生理盐水.8周后,检测血糖,血脂,肝脏功能及胰岛素受体的表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2hBG)、空腹胰岛素(Fins)升高,TC、TG、LDL-C、AST、ALT均升高,HDL-C和肝糖原水平,胰岛素受体蛋白表达水平均下降(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组胰岛素抵抗指数改善,TC、TG、LDL-C、ALT、AST均下降,HDL-C,肝糖原,胰岛素受体蛋白表达水平均升高(P＜0.01);与吡格列酮组比,糖肝煎浓缩丸组TC、LDL-C降低显著(P＜0.01),其余指标差异无显著性;糖肝煎浓缩丸中剂量组和低剂量组相比,糖肝煎浓缩丸中剂量组可以显著降低模型大鼠血糖及血脂水平,改善胰岛素抵抗,肝脏功能及肝脏形态.结论:糖肝煎浓缩丸对2型糖尿病及非酒精性脂肪肝大鼠的糖脂代谢具有显著的治疗作用,明显改善肝脏功能,且增加胰岛素受体蛋白表达水平,改善胰岛素抵抗.

补肾通脉方对Ⅱ型糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素受体表达的影响

目的:探讨补肾通脉方对Ⅱ型糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素受体表达的影响.方法:采用小剂量链脲佐菌素加高热量饲养方法建立Wistar大鼠Ⅱ型糖尿病模型,并随机分为模型组、中药组及西药组(分别用补肾通脉方和二甲双胍干预8周),另设正常组(喂以普通饲料);检测骨骼肌组织中三酰甘油(mTG)含量;以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测骨骼肌组织胰岛素受体(InsR)mRNA的表达水平.结果:与正常组相比,模型组骨骼肌组织mTG水平明显升高(P<0.01),而InsR mRNA表达显著减少(P<0.01);与模型组比较,中药组骨骼肌组织mTG水平显著降低(P<0.01),InsR mRNA表达则显著增提高(P<0.01).结论:补肾通脉方改善胰岛素抵抗的作用机制可能与其上调Ⅱ型糖尿病大鼠骨骼肌组织InsR mRNA表达水平有关.

黄芪多糖对2型糖尿病大鼠肾组织胰岛素信号转导的影响

目的:研究黄芪多糖(APS)对2型糖尿病大鼠肾组织胰岛素信号分子表达的影响.方法:Wistar大鼠随机分成正常对照组(Control组)、链脲佐菌素(STZ)糖尿病组(DM组)和糖尿病黄芪多糖治疗组(DM+APS组),5周后观察动物一般情况,处死动物取血测血糖、血清胰岛素水平,用免疫组化的方法检测肾组织中胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)表达水平. 结果:DM组体重水平高于Control组和DM+APS组,差别有显著性(P<0.01);DM组和DM+APS组血糖水平均高于Control组(P<0.01),DM+APS组血糖水平低于DM组(P<0.01);各组间血胰岛素水平差别无显著性(P>0.05);DM组肾组织InsR、IRS-1、PI3K的表达水平均低于Control组和DM+APS组(P<0.05). 结论:黄芪多糖可降低2型糖尿病大鼠血糖水平,其机制可能与提高糖尿病大鼠肾组织中InsR、IRS-1、PI3K水平,增加组织对胰岛素的敏感性,改善胰岛素信号转导有关.

硫化氢对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗的影响

目的 研究硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗的影响.方法 取雄性SD大鼠,采用高糖高脂饮食喂养和腹腔注射小剂量STZ的方法制作大鼠2型糖尿病模型,将成模后大鼠随机分为糖尿病组(DM组)、糖尿病+NaHS(H2S供体)组(DM+NaHS组)、糖尿病+炔丙基甘氨酸(PAG,CSE的抑制剂)组(DM+ PAG组),另设对照组,各15只.每日在固定的时间腹腔注射受试制剂,DM+ NaHS组注射NaHS 56 μmol/(kg·d),DM+PAG组给予PAG 50 mg/(kg·d),对照组和DM组注射相同体积的生理盐水,连续给药2周后处死大鼠.分别检测各组空腹血糖、血浆胰岛素水平、肝脏组织中H2S水平,苏木精-伊红染色观察各组肝脏组织病理学变化;免疫组化法检测胰岛素受体底物-2(IRS-2)的表达;Western blot和RT-PCR检测胱硫醚-r裂解酶(CSE)、胰岛素受体(InsR)和IRS-2的表达.结果 与对照组相比,DM组空腹血糖水平升高、胰岛素水平明显下降,CSE表达明显升高,InsR、IRS-2表达明显降低(均P＜0.05),肝小叶结构破坏,脂肪变性明显,有炎症细胞浸润;与DM组比较,DM+ NaHS组空腹血糖水平明显升高(P＜0.05),胰岛素水平、CSE、InsR、IRS-2表达明显降低(均P＜0.05),肝组织病变更明显;与DM组比较,DM+ PAG组空腹血糖水平、CSE表达明显降低(均P＜0.05),而胰岛素水平、InsR、IRS-2表达明显升高(均P＜0.05),肝组织病变有所减轻.结论 H2S可通过下调2型糖尿病大鼠肝细胞InsR和IRS-2的表达水平,促进胰岛素抵抗;PAG可通过上调2型糖尿病大鼠肝细胞InsR和IRS-2的表达水平,改善胰岛素抵抗.

慢性胰岛素刺激对胰岛素受体后不同信号转导途径的下降调节

胰岛素抵抗的分子机制研究进展

胰岛素抵抗(IR)是指胰岛素效应器官或部位对胰岛素生理作用不敏感的一种病理生理状态,表现为靶器官,如肝脏、肌肉、脂肪组织等对胰岛素介导的葡萄糖代谢作用不敏感.胰岛素抵抗现象在人类是普遍存在的.特别是大多数2型糖尿病患者及肥胖者均可见胰岛素抵抗.25%糖耐量正常者及25%的老年人身上亦可见IR.除此之外,即使在正常生理情况下,也会发生IR,如妊娠.因此,探讨IR发生机制是终可能控制和改善IR的根本途径.以往对IR的研究大多是围绕着靶器官及其胰岛素受体进行的,随着分子生物学研究方法和技术的日新月异,人们发现胰岛(Ins)信号传导障碍、脂防源性细胞因子表达异常及炎性介质的作用也在IR发生过程中扮演了重要的角色.

高迁移率族蛋白A1与2型糖尿病

高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)作为基因激活的特定辅助因子,其本身并没有转录作用,而是通过DNA -蛋白质促进基因转录的稳定性这一机制来激活启动子.HMGA1可通过影响胰岛素受体及胰岛素样生长因子1受体的表达及其信号转导,导致胰岛素的分泌减少及脂肪细胞的分化不良,从而出现胰岛素抵抗和2型糖尿病的表型.然而,HMGA1缺失的小鼠模型却表现出对胰岛素高度敏感.人与小鼠的外周组织对胰岛素敏感性上的差异可能与视黄醇结合蛋白有关.

胰岛素受体与VEGF

胰岛素受体与胰岛素结合后发生自身磷酸化并磷酸化底物,启动受体后信号传导途径,在胰岛素促代谢、促细胞生长繁殖作用中起重要作用.血管内皮生长因子(VEGF)参与肿瘤发生与发展、缺血性血管病变、糖尿病小血管异常增生等多种病理生理过程,受缺氧、多种生长因子、高胰岛素水平等多种因素的调控.胰岛素受体及其底物作为VEGF的调控因素之一可通过多种途径影响VEGF的表达.

中国人内源性高甘油三酯血症患者胰岛素受体底物1基因的多态性

为探讨胰岛素受体底物1基因多态性是否与内源性高甘油三酯血症患者有关联,应用多聚酶链反应对成都地区汉族117例高甘油三酯血症患者及194例正常对照者胰岛素受体底物1基因酶切位点的限制性片段长度多态性进行研究.血脂用酶法测定,血清载脂蛋白AⅠ、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ及E用RID试剂盒测定.结果发现,高甘油三酯血症组和正常对照组胰岛素受体底物1基因均以GG基因型为主,其频率分别为0.995和0.985(P>0.05).高甘油三酯血症组中具有GR基因型者血清载脂蛋白CⅢ水平较具有GG基因型者降低(P>0.05).以上结果提示胰岛素受体底物1基因G972R位点多态性与中国人高甘油三酯血症无关联.

星形胶质细胞代谢功能对阿尔茨海默病的影响

星形胶质细胞是脑内唯一具有精原储备的细胞,可为神经元提供葡萄糖外的更多能量底物,对抗能量代谢减退造成的神经元损伤.能量代谢减退是散发型阿尔茨海默病早期可逆性标志,可能与脑内胰岛素受体信号传导通路异常有关,星型细胞能量底物生成减少,神经细胞氧应激增加.改善脑内的胰岛素抵抗,有助于星形胶质细胞生成更多能量底物,间接拯救神经元.

长期雌激素替代治疗对血压及心肌IR和IRS-1表达的影响

目的:研究长期雌激素替代治疗对血压及心肌组织胰岛素受体(IR)和胰岛素受体底物-1(IRS-1)表达水平的影响.方法:将50只雌性SD大鼠随机分成3组,构建假手术、去势(去卵巢)和雌激素替代3组动物模型.手术前后,用尾套法测定大鼠的尾动脉收缩压,RT-PCR方法检测大鼠心肌IR和IRS-1的表达.结果:去势组血压[(118.75±2.77) mmHg]明显高于假手术组 [(103.86±1.84)mmHg,P＜0.05]和替代组[(107.83±3.24)mmHg,P＜0.05] .去势组大鼠心肌IRS-1的相对表达量(1.2588±0.1045)显著低于假手术组(2.2089±0.0988, P＜0.05)和替代组(1.9100±0.1230,P＜0.05).然而,替代组与假手术组间血压和IRS-1的表达无明显差异(P＞0.05).假手术、去卵巢和替代组间心肌IR的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:长期雌激素替代治疗可降低血压、增加心肌细胞IRS-1的表达,从而一定程度上保护心血管.但血清雌激素水平对心肌细胞IR的表达影响不明显.

加减苍附导痰汤对痰湿阻滞型多囊卵巢综合征患者子宫内膜胰岛素及其受体作用研究

目的 探讨加减苍附导痰汤对痰湿阻滞型多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜胰岛素及其受体的影响.方法 收集痰湿阻滞型多囊卵巢综合征患者30例为观察组,予加减苍附导痰汤治疗.连续治疗3个月经周期.对照组为输卵管性不孕患者30例.以免疫组化法检测治疗前后子宫内膜胰岛素(INS)及胰岛素受体(INS-R)的表达.结果 观察组治疗前INS-R的表达低于对照组(P＜0.01),INS表达高于对照组(P＜0.01);治疗后INS-R的表达升高(P＜0.05)、INS表达则下降(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 加减苍附导痰汤能升高痰湿阻滞型PCOS患者子宫内膜INS-R的表达,降低内膜局部INS的表达,有利于子宫内膜局部的糖代谢,改善局部胰岛素抵抗情况.

滋阴益气活血解毒组方对MKR转基因2型糖尿病小鼠糖代谢的影响

目的 观察滋阴益气活血解毒组方-左归复方干预治疗对骨骼肌胰岛素样生长因子-1及胰岛素双受体功能缺失(MKR)转基因2型糖尿病小鼠的糖代谢的影响.方法 由美国国立卫生研究院(NIH)授权使用引进的MKR鼠,经自然交配后繁殖的子代作为研究对象.MKR小鼠经繁殖鉴定后,以左归复方给药30 d进行干预治疗.结果 MKR鼠所有子代鼠均会出现长度为330 bp的DNA片断,表明该MKR鼠后代能稳定遗传.新生MKR鼠自出生3周开始,即出现显著的血糖增高,5周以后血糖则较稳定地维持在高水平.与对照组小鼠同期的血糖比较,差异具有非常显著性意义(P＜0.01).而左归复方给药30 d进行干预治疗后,其高剂量具有显著的改善MKR鼠糖耐量异常和降低空腹血糖的作用(P＜0.05,P＜0.01).结论 我们成功地引进了MKR模型,MKR鼠是目前一种非常良好的2型糖尿病的动物模型.以滋阴益气活血解毒立法化裁组方的左归复方具有显著的改善MKR鼠糖耐量异常和降低空腹血糖的作用.

电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦部INS及IR表达的影响

目的 观察电针“足三里”等穴对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis,DGP)模型大鼠胰岛素及其受体表达的影响,探讨电针调整血糖、改善DGP胃肠动力的可能机制.方法 将50只SD大鼠随机分为5组,即空白对照组、DGP模型对照组、电针穴位组、电针非穴组、胃复安对照组,每组10只.造模组按55 mg/kg单次右下腹腔注射2％链脲佐菌素(STZ)联合高脂高糖不规律饮食建立DGP模型,连续喂养8周,每周用强生稳豪倍易型血糖仪及试纸测量血糖,尿糖试纸测量尿糖.电针穴位取大鼠“足三里”、“梁门”、“三阴交”,电针非穴组取大鼠“足三里”、“梁门”、“三阴交”的穴位对照点,胃复安对照组予1.7％胃复安药液(1 ml/100 g)灌胃.治疗结束后,以酚红为标志物,观察各组大鼠胃排空率及小肠移行率,以ELISA法检测胃窦部胰岛素(INS)及胰岛素受体(IR)的表达.结果 与空白对照组比较,模型组血糖水平、症状积分明显升高,胃排空率、小肠移行率、胃窦部INS、IR含量明显降低(R0.01);与模型组比较,电针穴位组血糖水平及症状积分明显降低,胃排空率及小肠移行率、胃窦组织INS及IR表达升高(P＜0.05,P＜0.01),与电针穴位组比较,电针非穴组、胃复安对照组症状积分升高、胃窦部INS、IR含量明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论 电针能降低DGP大鼠血糖,促进DGP大鼠胃肠动力,其作用机制可能与增加胃窦部INS及IR含量有关.

TNF-α对红细胞胰岛素受体磷酸化的影响

目的:用TNF-α培养离体红细胞,观察其对胰岛素诱导的β亚基自身磷酸化的影响,探讨TNF-α致胰岛素抵抗的分子机理.方法:红细胞加或不加TNF-α(5ng/ml)培养20h,收集培养的红细胞,制备膜蛋白,并测定胰岛素诱导的受体自身磷酸化程度.结果:红细胞TNF-α(-)培养20h后,正常人红细胞胰岛素受体自身磷酸化程度为80.85±43.92△A/mg蛋白,Ⅱ型糖尿病患者胰岛素受体的自身磷酸化程度为24.24±8.05△A/m9蛋白,二者有显著性差异(P＜0.05).5ng/ml TNF-d培养20h后,正常人红细胞胰岛素受体的磷酸化程度下降至22.95±14.93△A/mg蛋白,糖尿病组的胰岛素受体磷酸化程度下降至8.81±8.31△A/mg蛋白,与TNF-α(-)组相比,差异有显著性(P＜0.05).正常人红细胞TNF-α(+)培养20h后,其受体磷酸化程度与糖尿病组TNF-α(-)培养20h后的受体磷酸化程度相比,二者差异无显著性.结论:小剂量TNF-α(5ng/ml)培养红细胞20h后,可抑制细胞膜上胰岛素受体的自身磷酸化,且正常人红细胞经TNF-α处理后,膜上胰岛素受体自身磷酸化程度可降至患者水平,这可能是TNF-α引起糖尿病病人对胰岛素抵抗的机制.

人成骨细胞胰岛素受体底物的表达

目的观察人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞(human osteoblast-like cells HOB)胰岛素受体底物(insulin receptor substrate IRS)的表达.方法半定量RT-PCR检测IRS mRNA表达,免疫共沉淀检测IRS蛋白表达.结果人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均有IRS-1、-2、-3、-4 mRNA和蛋白质的表达,以IRS-1的表达丰度高, IRS-4表达丰度低.其中IRS mRNA和蛋白质在MG-63细胞中的表达丰度较在正常人成骨细胞中的表达丰度稍高.结论人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均可表达IRS mRNA和蛋白质.且IRS不同成员在同一细胞中的表达丰度不同.

非肥胖2型糖尿病胰岛素抵抗的病机研究

目的探讨胰岛素受体数目及其β亚基自身磷酸化程度改变在2型糖尿病患者胰岛素抵抗发生中的作用.方法 14例非肥胖型2型糖尿病患者和12例正常对照者,用放射配基结合法测定完整红细胞膜上胰岛素受体数目及其亲和常数,按Comi等人所述方法制备红细胞膜蛋白,用胰岛素及γ-32P ATP促发磷酸化反应,反应结束后进行不连续垂直板凝胶电泳(0.1 % SDS～7%5% PAGE)分离蛋白质,并进行放射自显影,测定95KD蛋白质的吸光度.结果非肥胖型2型糖尿病患者,每个红细胞上胰岛素高亲和力位点数目为21±13,亲和常数为(1.70±0.93)×10-9LM-1,低亲和力位点数目为955±427,亲和常数为(1.44±0.86)×10-7LM-1,与正常对照组相比,差异无显著性;非肥胖型2型糖尿病患者红细胞膜上95KD蛋白的磷酸化程度为8.02±5.60△A/mg蛋白,明显低于对照组28.38±15.24△A/mg蛋白.结论胰岛素受体β亚基自身磷酸化程度的降低可能是非肥胖型2型糖尿病患者胰岛素抵抗产生的主要因素;胰岛素受体数目及其与胰岛素亲和力的改变可能与非肥胖型2型糖尿病胰岛素抵抗的产生无关.

p62dok蛋白氨基酸和cDNA序列测定

目的:报道p62dok蛋白的纯化和氨基酸及cDNA序列的测定方法和结果,拟为研究p62dok在胰岛素信息传递中的作用提供必需的技术方法和试剂.方法:过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞(CHO/IR)细胞用含10%胎牛血清的Hams F-12培养12 h(37℃)后,加入胰岛素+Vanadate或Pervanadate处理.

胆固醇线粒体转运蛋白（StAR）对脂肪酸引起的肝细胞脂质沉积及胰岛素抵抗的作用及其机制

目的：探讨胆固醇线粒体转运蛋白对脂肪肝细胞模型糖脂代谢、炎症反应及其胰岛素敏感性的作用及其机制。方法：1．32 mmol／L油酸＋0．66 mmol／L软脂酸共同作用小鼠原代肝细胞建立脂肪肝细胞模型，携带StAR基因的腺病毒转染细胞得到StAR高表达组。 Real－time PCR和Western blot检测糖脂代谢、炎症反应相关分子的变化；相关试剂盒检测肝细胞内甘油三酯、胆固醇及糖原水平；Western blot检测胰岛素信号转导通路上关键蛋白的表达，并用PI3K抑制剂抑制该通路后观察StAR的作用。结果：StAR过表达降低脂肪酸合成关键分子、炎症因子（ TNF－α、MCP1）及糖异生关键分子的表达，升高糖原合成关键分子的表达，且减少脂肪肝细胞模型内甘油三酯和胆固醇的水平，提高该模型的糖原合成能力及葡萄糖利用能力；StAR过表达降低细胞内二酰基甘油含量，减少PKCε的磷酸化，从而升高胰岛素受体底物1及Akt的磷酸化；PI3K被阻断后，StAR对糖脂代谢的作用消失。结论：StAR对脂肪酸引起的脂质沉积及胰岛素抵抗的肝细胞有保护作用，且该作用通过胰岛素信号转导通路介导。

Urotensin II诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及机制探讨

目的：采用Urotensin II（ UII）体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，并探讨其机制。方法：采用含不同UII浓度的DMEM培养基培养HepG2细胞，后半小时与1×10－7 mol／L insulin共孵育，葡萄糖－己糖激酶法检测不同时点培养基中葡萄糖含量，以HepG2细胞蛋白进行定量，确定胰岛素抵抗佳作用浓度及时间；多功能酶标仪检测UII诱导hepG2细胞内活性氧（ ROS）变化；Western blot法检测胰岛素受体结合物IRS－1及Akt蛋白的表达。结果：hepG2细胞产生胰岛素抵抗的佳作用时间为24 h，佳UII浓度为1×10－7 mol／L。与空白对照相比，UII刺激hepG2细胞后ROS增高明显（ P＜0．05）；且UII孵育组IRS－1及Akt蛋白的表达明显降低（P＜0．05），提示UII可能通过增高hepG2细胞中ROS而使hepG2细胞产生胰岛素抵抗。结论：采用UII体外诱导的方法，UII浓度为1×10－7 mol／L，作用24 h后，可建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，且UII可能通过诱导HepG2细胞ROS的增高而引起胰岛素抵抗。