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实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析在α-地中海贫血基因诊断中的价值
目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术.方法运用SYBR-Green1和ABI 7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应(SYBR-Q-PCR),同时进行融解曲线(D.C)和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型,即以该峰值≥Cut off 值定为PCR结果阳性.将PCR产物重组到T-载体,筛选到含正确扩增片段的克隆,以梯度稀释重组质粒DNA为模板,进行SYBR-Q-PCR得出标准曲线.从而定量未知标本.结果优化了3个SYBR-Q-PCR反应的引物及其浓度,热循环条件等.检测--SEA等位基因的PCR产物长800 bp,Tm=82.5℃±1℃.αα等位基因的PCR产物长206 bp,Tm=83.0℃±1℃.非--SEA等位基因的PCR产物长436 bp,Tm=84.0℃±1℃.重组质粒拷贝数在1至105范围内,其对数值与CT值均呈良好线性关系.该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上.联合运用3个SYBR-Q-PCR反应可以为--SEA缺失携带者、缺失型HbH病、非缺失型HbH 病、α-地贫2纯合子、Bart′s水肿胎儿综合征做出基因诊断,并可用于产前诊断.结论该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点,适于临床推广应用.
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基于 Pre－NAT 全自动核酸提取平台的高敏 HBV DNA 检测性能评价
目的：评价基于Pre－NAT全自动核酸提取系统的高敏HBV核酸定量试剂的检测性能。方法方法学性能验证。于2014年5月和7至9月分别在北京大学医学部病原生物学系实验室和上海交通大学医学院附属仁济医院检验科进行实验，采用HBV WHO标准品验证正确度与检测下限，A、B、C、D型标准血浆（6个浓度）重复检测验证精密度，高浓度HBV假病毒颗粒梯度稀释验证线性范围，以及144份临床血清评价与罗氏系统的相关性。结果正确度方面，该试剂在5个浓度水平的实测值与标准品理论值偏差均小于±0．35 lg IU／ml（－0．17～0．32 lg IU／ml）。精密度方面，A、B、C、D型标准血浆的检测重复性（ CV）分别为：3．87％～6．32％、0．45％～14．68％、0．16％～8．36％、0．64％～13．01％；中间精密度（ CV）分别为：5．67％～9．69％、1．28％～15．68％、0．36％～9．05％、1．69％～13．65％。线性范围评价显示在20～1×1010 IU／ml范围内呈良好的线性关系（ r＝0．998，P＜0．001）。检测下限验证结果，20 IU／ml浓度水平检出率5／5。临床标本检测中，与国际通用Roche试剂符合率为100％（144／144）；104份阳性标本两者数据显著相关（ r＝0．984，P＜0．0001）。结论该高敏HBV DNA检测的正确度、精密度、检测下限和线性范围均表现良好，并与Roche试剂有良好相关性，有一定临床应用价值。（中华检验医学杂志，2015，38：696－700）
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血小板反应蛋白-1:对胰岛β细胞功能有重要意义的胰岛内皮细胞信号
既往研究发现,胰岛血小板反应蛋白-1缺失可引起胰岛增生.一项发表在Diabetes上的研究证实,内皮源型血小板反应蛋白-1对胰岛β细胞功能具有重要影响.该研究评价了小鼠体内和体外胰岛功能,采用实时聚合酶链反应和Western blot法测定了信使RNA和蛋白质表达水平,观察了受体血管能否长入移植胰岛,从而判定内皮源型血小板反应蛋白-1对胰岛β细胞功能的作用.
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Bcl-2、cyclin A2和PI3K在激素受体阴性乳腺癌中的表达及意义
目的 探讨激素受体阴性乳腺癌中B淋巴细胞瘤/白血病2基因(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、细胞周期素A2(cyclin A2)和磷酸肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)的表达及意义.方法 采用实时聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测Bcl-2、cyclin A2和PI3K在激素受体阴性乳腺癌组织(58例)、乳腺正常组织(14例)中的表达水平,并采用Mann-Whitney U检验分析其与临床病理特征的关系.结果 与乳腺正常组织相比,激素受体阴性乳腺癌中Bcl-2表达降低,而cyclin A2和PI3K表达增高(P＜0.05).在乳腺癌组织中,Bcl-2在TNM分期Ⅲ期、组织学分级Ⅲ级和出现转移复发的患者中表达水平降低(P＜0.05),但其表达在不同年龄、肿瘤大小和淋巴结转移的组间差异无显著性(P＞0.05)；cyclin A2在转移复发的患者中显著高表达(P＜0.05),但在不同的年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期和淋巴结状态的组间差异均无显著性(P＞0.05)；PI3K在有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期的患者中高表达(P＜0.05),但其表达在不同年龄、肿瘤大小、组织学分级以及是否转移复发的组间差异均无显著性(P＞0.05).结论 Bcl-2低表达、cyclin A2和PI3K高表达可能与激素受体阴性乳腺癌的发生发展有关.
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结核分枝杆菌在临床治疗中的耐药变迁
目的 了解海盐县自肺结核患者分离出的结核分枝杆菌在治疗过程中耐药的变迁情况,以利于抗结核治疗中抗菌药物的合理调整与选用.方法 对痰涂片阳性的新发初治肺结核患者,行痰结核分枝杆菌培养,阳性菌株采用高、低两药物浓度进行4种抗结核药物耐药性测试,同时用实时PCR法对结核分枝杆菌的耐药基因rpoB和katG突变进行检测,同时观察治疗2个月后分离菌株的耐药性检测.结果 131例痰培养阳性肺结核患者初始耐药率14.5%,经治疗2个月后分离菌株性耐药率37.8%;初始分离株rpoB和katG的突变率为14.5%和8.4%,耐药基因总携带率16.8%;治疗2个月后分离株rpoB和katG的突变率为39.2%和25.7%,耐药基因总携带率44.6%.结论 结核病患者分离出的结核分枝杆菌在初始治疗时已存在有耐药性,而治疗过程有可能使其耐药性增加;在抗结核治疗前及在治疗过程中对结核分枝杆菌进行耐药性及耐药基因检测很有意义.
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实时聚合酶链反应技术检测妊娠晚期孕妇B族溶血性链球菌的多中心研究
目的探讨实时聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术检测妊娠晚期孕妇B族溶血性链球菌（group B Streptococcus，GBS）的准确性。方法本研究为多中心研究。选择2009年3月1日至12月31日在北京大学第一医院妇产科、首都医科大学附属北京妇产医院产科和北京大学第三医院妇产科产前保健的妊娠35~37周孕妇，取阴道下1/3分泌物及肛周分泌物，采用常规细菌培养法及实时PCR方法进行GBS检测。采用基因测序作为矫正方法，分析实时PCR方法检测GBS的敏感性和特异性。结果（1）3家医院共收集1395份标本，细菌培养法检测GBS阳性40例（2.9%），实时PCR方法检测GBS阳性114例（8.2%）。（2）仅实时PCR方法检测GBS阳性者77例，采用事先设计好的第2对引物扩增后进行测序，检测鉴定为GBS序列的共66例，11例为非GBS。（3）以细菌培养法加测序法校正作为金标准，实时PCR方法检测GBS的敏感性为97.2%（103/106），特异性为99.1%（1278/1289）。常规细菌培养法漏诊率62.3%（66/106）。（4）细菌培养法加测序法校正3家医院孕妇妊娠晚期GBS携带率为7.6%（106/1395）。结论实时PCR方法检测GBS具有较高的敏感性和特异性，有望成为妊娠晚期常规检测GBS的方法。
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实时聚合酶链反应技术检测妊娠晚期B族溶血性链球菌的临床价值
目的：探讨实时聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术检测妊娠晚期孕妇B族溶血性链球菌（group B Streptococcus，GBS）带菌状态的价值。方法收集2013年5月至8月在解放军总医院产前检查的妊娠35~37周孕妇312例，采用实时PCR和细菌培养方法进行GBS检测（其中12例仅行细菌培养检测）。任意一种方法检测结果阳性判定为GBS阳性。对2种检测方法检测结果不一致者进行基因测序验证。采用χ2检验比较2种检测方法的阳性率差异。结果单纯行细菌培养者12例，检测结果均为GBS阴性，另外300例孕妇同时行细菌培养和实时PCR检测。细菌培养法阳性率为1.3%（4/300），明显低于实时PCR的阳性率[7.7%（23/300）]（χ2=12.57，P<0.05）。共有25例孕妇GBS阳性，其中21例实时PCR阳性而培养阴性，2例实时PCR和培养均阳性，2例培养阳性而实时PCR阴性。总体阳性率为8.0%（25/312）。以培养结果作为金标准，实时PCR检测的灵敏性为2/4，特异性为92.9%（275/296），阳性预测值为8.7%（2/23），阴性预测值为99.3%（275/277）。结论实时PCR技术可提高GBS的检出率。
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唾液标本聚合酶链反应技术筛查新生儿巨细胞病毒感染
先天性巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染是听力丧失的重要原因,但由于巨细胞病毒感染检出困难,导致许多有CMV相关听力丧失风险的婴儿难以在生后早期得到诊断.目前,新生儿CMV筛查的标准方法是在其出生时收集唾液标本进行CMV的快速培养,但该方法不能实现自动化,难以进行大规模筛查.为了解决这一问题,利用唾液液体标本或干燥标本进行的实时聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术应运而生.《新英格兰医学杂志》2011年6月发表的前瞻性多中心研究显示,这种新的CMV感染筛查方法具有很高的敏感性和特异性[1].
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TUG1基因沉默对脑胶质瘤生物学功能影响的实验研究
目的 观察TUG1基因沉默对胶质瘤细胞生长和凋亡的影响.方法 构建携带shRNA-TUG1的慢病毒载体pLenti6.3-EGFP,将慢病毒载体感染人胶质瘤U251细胞.采用实时荧光定量PCR检测U251细胞中长链非编码RNA(lncRNA) TUG1基因的表达,观察干扰载体对TUG1基因的抑制效果.应用流式细胞术和CCK-8法观察干扰TUG1基因对U251细胞增殖和凋亡的影响.结果 实时荧光定量PCR检测结果显示,对于TUG1的相对含量,U251空白对照组(0.40±0.05)、阴性对照组(1.01 ±0.12)、siRNA-1组(0.09±0.01)、siRNA-2组(0.32±0.01)、siRNA-3组(0.18±0.04)、siRNA-4组(0.18±0.02)之间的差异有统计学意义(P＜0.05).选择干扰效果好的siRNA-1进行后续干扰实验,TUG1干扰组感染72 h时的细胞凋亡率[(11.58±0.11)％]高于空白对照组[(8.55±0.23)％]和阴性对照组[(9.14±0.17)％](均P ＜0.05);TUG1干扰组感染72 h的细胞增殖能力(0.64±0.23)低于空白对照组(1.07±0.50)和阴性对照组(0.94±0.42)(均P＜0.05).结论 TUG1基因沉默能够抑制胶质瘤U251细胞的增殖,促进细胞凋亡.
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紧密连接蛋白Occludin在鼻息肉中的表达及调节
目的 探讨紧密连接蛋白Occludin在鼻息肉发病中的作用.方法 采用免疫组化和实时荧光定量聚合酶链反应检测鼻息肉组织(n=20)和健康对照组钩突组织(n=15)中紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin及ZO-1蛋白及其mRNA的表达.并通过离体细胞培养模型检测白细胞介素(interleukin,IL)6、IL-13、IL-17、γ干扰素(interferon-y,IFN-γ)、转化生长因子β(transforming growth factor-β、TGF-β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激对鼻黏膜上皮细胞表达Occludin mRNA和蛋白的调节作用.以SPSS 16.0软件进行统计学分析.结果 紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1在鼻息肉与对照组钩突组织中均有表达,主要表达部位在鼻黏膜上皮细胞的细胞膜与细胞质.鼻息肉组Claudin-1、Occludin及ZO-1的平均吸光度值分别为0.187±0.076、0.172 ±0.109、0.098±0.035,均较对照组的0.312 ±0.101、0.220±0.069、0.233±0.093明显减少,差异有统计学意义(t值分别为9.345、3.301、13.323,P值均＜0.01).鼻息肉组织中Occludin mRNA相对表达量为0.000 117 ±0.000 035,低于对照组的0.000464±0.000 134,差异具有统计学意义(Z=-5.0,P＜0.05),而Claudin-1和ZO-1 mRNA在两组之间表达差异无统计学意义(P值均＞0.05).IL-13、IL-17和IFN-γ等促炎因子刺激鼻黏膜上皮细胞后,Occludin mRNA相对表达量分别为0.631±0.039、0.581±0.029、0.648±0.040,与未刺激对照组相比,差异有统计学意义(f值分别为16.299、24.669、14.995,P值均＜0.05).蛋白免疫印迹结果显示上述因子刺激组与未刺激对照组相比Occludin蛋白表达升高,差异有统计学意义(t值分别为9.880、8.442、7.310,P值均＜0.05).结论 紧密连接蛋白Occludin表达降低可能是鼻息肉发生的原因之一.
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五种牙周致病菌与药物性牙龈增生的关系
目的 探讨牙周致病菌在药物性牙龈增生发展过程中的作用评价57例服用环孢素的肾移植患者的牙龈增生(gingival overgrowth,GO)指数,将GO指数为1、2、3的患者列为牙龈增生组(A组,28例),将GO指数为0的患者列为牙龈未增生组(B组,29例),采用实时聚合酶链反应(PCR)技术对龈下菌斑内的牙龈卟啉单孢菌(Porphyromonas gingivdis,Pg)、伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)、中间普氏菌(Prevotella intermedia,Pi)、齿垢密螺旋体(Treponema denticola,Td)和福赛氏类杆菌(Tannerella forsythia,Tf)进行定量检测,比较两组患者中细菌检出率的差异,并分析细菌数量和牙龈增生的严重程度之间的相关性.结果 Pg、Td和Tf的检出率在A组分别为96%、82%和89%,均显著高于B组(分别为69%、55%和66%),差异有统计学意义(P<0.05);同时检测出Pg、Td和Tf的概率在A组(79%)明显高于B组(38%),差异有统计学意义(P<0.01);Pg、Td、Tf和Pi的细菌数量随着牙龈增生指数的升高而增加,Aa的细菌数量未发现与牙龈增生相关的变化.结论 Pg、Td和Tf可能在药物性牙龈增生发展过程中起着重要的作用.
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IRX2基因在原发性肝癌中表达的初步研究
目的 检测易洛魁族同源盒基因(IRX2)在原发性肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义.方法 收集手术切除的HCC组织标本及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测IRX2在肝癌组织及相应癌旁组织的表达情况.采用免疫组化法分析IRX2蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达及定位.比较高、中、低分化肝癌组织中IRX2蛋白表达与肝癌临床病理分期之间的关系.结果 80％(16/20)的肝癌组织中,IRX2 mRNA的表达量低于癌旁组织(P=0.04)；IRX2蛋白在肝癌组织中的相对表达量(0.866)低于癌旁组织(1.803,P=0.009).随着肝癌分化程度的降低,IRX2蛋白表达量也随之降低,差异有统计学意义(P=0.001).进一步研究发现,高分化与低分化肝癌组织,中分化与低分化肝癌组织中IRX2蛋白的表达差异有统计学意义(P=0.006,P=0.001),而中分化与高分化组织IRX2蛋白表达差异无统计学意义(P=0.539).结论 HCC组织中IRX2的表达水平低于癌旁组织,IRX2的异常表达与HCC的分化程度有关.
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银翘散对流感病毒感染小鼠模型肺组织病毒载量和IFN-γ mRNA表达的影响
目的 研究银翘散对流感病毒载量和IFN-γ mRNA表达的影响.方法 除正常对照组小鼠不进行处理外,其他小鼠经甲型流感病毒感染后分为模型对照组,银翘散大、中、小剂量组,使用Real-time RT-PCR方法分别在流感病毒感染后第1,2,3,5,7天检测小鼠肺组织病毒载量和IFN-γ mRNA表达.结果 银翘散可以降低肺组织病毒载量,其中大剂量组在各时间点均可降低病毒载量(P＜0.05,P＜0.01),中、小荆量组在第3天和第5天均可降低病毒载量(P＜0.01,P＜0.05);银翘散可以提高肺组织IFN-γ mRNA表达,其中大剂量组在各时间点均可提高IFN-γ mRNA表达(P＜0.01,P＜0.05),中剂量组在第2,3,5天可以提高IFN-γ mRNA表达(P＜0.01),小剂量组在第3,5天可以提高IFN-γ mRNA表达(P＜0.01).结论 银翘散可能通过上调流感病毒感染小鼠肺组织内IFN-γ mRNA相对表达量,来发挥抗流感病毒的作用.
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新型MGB探针特异性检测变形链球菌
目的:设计一种新型TaqMan(R) MGB探针,利用实时荧光定量PCR检测变形链球菌,提高PCR法检测变形链球菌的特异性,减少检测的假阳性.方法:提取 6种不同链球属细菌的DNA,分别进行巢式PCR和TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR,比较两种PCR方法检测变形链球菌的特异性.巢式PCR第1轮扩增的引物是细菌16S rRNA基因通用引物,第2轮扩增使用变形链球菌16S rRNA基因可变区序列的特异性引物.TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR的引物与第2轮巢式PCR特异性引物相同,设计的MGB探针序列与变形链球菌16S rRNA基因中特异性序列相匹配,不与其他细菌的基因序列匹配.将变形链球菌标准株的DNA样本从2.5 mg/L至0.16 μg/L 按5倍梯度稀释,制备出实时荧光定量PCR的标准曲线.结果:变形链球菌和格氏链球菌在巢式PCR中均扩增出282 bp的DNA片段,出现假阳性结果.TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR能定量检出变形链球菌标准株和临床株,不检出其他链球菌,比巢式PCR特异性更好.TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR对变形链球菌DNA的低检出浓度为20 μg/L.结论:本研究设计出一种针对变形链球菌的TaqMan(R) MGB探针,建立利用TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR特异性检测口腔中变形链球菌的方法.
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实时荧光定量PCR法检测原发性Sj(o)gren综合征口腔真菌菌群
目的:定量分析原发性舍格伦综合征(primary Sj(o)gren's syndrome,pSS)患者组和健康对照组口腔内真菌菌量,为探寻敏感、快速和准确的pSS诊断方法及其临床早期诊断和防治提供有价值的参考依据.方法:研究对象为北京大学口腔医院黏膜科25名pSS患者(pSS组)和北京某社区25名无口干症状身体健康的居民(健康对照组),收集两组受试者的唾液含漱液样本,采用实时荧光PCR方法,定量比较两组口腔各致病真菌数量.结果:口腔含漱液中热带念珠菌和近平滑念珠菌每克基因中拷贝数对数的均值pSS组分别为10.6±1.07和9.47±4.86,明显高于健康对照组的8.30±3.82和5.24土6.05,差异均有统计学意义(P＜0.05).pSS组唾液中氟康唑敏感性菌总数量(12.21±0.82)较健康对照组(11.53±0.81)明显增多(P＜0.01).结论:白色念珠菌仍是pSS和健康对照组主要检出念珠菌,但pSS组口腔内热带念珠菌和近平滑念珠菌的数量明显高于对照组,本研究为pSS患者临床有针对性的用药提供一定的参考.
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Clusterin在食管鳞癌组织中的表达异常及意义
目的:通过比较食管癌组织中clusterin表达的变化,探讨其在食管癌发展过程中的意义,并进一步从基因水平探讨clusterin在食管癌组织中表达情况,阐释其变化机制.方法:应用免疫组化方法比较分析不同食管癌组织及正常食管组织中clusterin表达变化:实时聚合酶链反应法检测食管癌及配对正常食管上皮组织中clusterin基因表达情况.结果:正常食管上皮中clusterin全部表达(100%),食管癌组织中clusterin表达显著下降(29.5%),差异有统计学意义(P<0.05):clusterin基因在食管鳞癌组织中也存在缺失/下调,二者相符.结论:Clusterin 表达下调可能与食管癌发展过程中的较早期事件有关.其表达下调与clustrin基因缺失可能有关.
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白血病细胞来源微粒BCR-ABL mRNA检测在监测慢性髓性白血病治疗反应中的意义
目的 探讨通过检测白血病细胞来源微粒(MP)BCR-ABL融合基因水平对达完全分子学反应(CMR)后慢性髓性白血病(CML)患者进行分层的可能.方法 收集29例不同疾病状态的CML患者,采用实时定量PCR方法分别检测患者外周血细胞与MP中的BCR-ABL mRNA水平.结果 患者外周血MP和细胞中均能稳定检测出BCR-ABL mRNA；CMR、主要分子学反应(MMR)、完全细胞遗传学反应(CCyR)三种疾病状态下患者MP中的BCR-ABL mRNA水平分别为9.1±2.8、25.2±6.9和62.8±6.3,差异具有统计学意义(P＜0.05)；细胞内BCR-ABL转录本为阴性时,来源于同一份样本的MP仍可检测到BCR-ABL mRNA[中位水平6.5(3.7～15.3)]；CMR患者MP中BCR-ABL融合基因水平与服药时间呈负相关(t=-0.656,P＜0.05)；在同样达到CMR的前提下,造血干细胞移植组患者和酪氨酸激酶抑制剂治疗组患者相比,MP中BCR-ABL mRNA水平更低(分别为3.3±2.1和9.1±2.8,P＜0.05).结论 CML患者外周血细胞来源MP中可以稳定检出BCR-ABL mRNA,并有望成为患者达CMR后继续监测的重要指标.
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转换国际标准化的BCR-ABL（P210）转录本水平的转换系数多中心再确认研究
目的：再确认已获得的用于转换慢性髓性白血病国际标准化的BCR-ABL（P210）转录本水平（BCR-ABLIS）的转换系数（CF）的有效性。方法北京大学人民医院（简称PKUPH）统一制备用于再确认15家单位9或18个月之前已获得的CF的比对样品，即用BCR-ABL阴性患者骨髓或外周血有核细胞稀释BCR-ABL（P210）阳性细胞制备出相同16套、每套24种不同BCR-ABL水平的样本，加入TRIzol中。15家单位分别检测1套，采用GraphPad Prism 5.0软件对其与PKUPH的BCR-ABLIS检测值分别进行Bland-Altman一致性分析。对于未达到再确认标准的单位，去除结果明显偏离的样本直至其检测值与PKUPH的BCR-ABLIS之间的回归方程相关系数>0.98，来计算新的CF。结果10家单位达到标准（偏倚介于±1.4倍，且95%可信区间介于±6.0倍），说明原有的CF依然准确，可以继续有效转换BCR-ABLIS。5家未达到标准的单位通过重新计算得出新的CF，分别是原有CF的1.8～6.3倍。结论通过室间样本比对的CF再确认过程既检验了原有CF是否依然有效，又使CF不再有效的单位获得新的适用于当前的CF，保持了BCR-ABLIS应用的准确性和连续性。
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实时定量PCR检测BCR-ABL(P210)转录本水平室内长期质控体系的建立及应用
目的 制备BCR-ABL(P210)实时定量PCR(RQ-PCR)检测的室内质控物,建立RQ-PCR检测BCR-ABL(P210)转录本水平的室内质控方法.方法 取K562细胞和HL-60细胞,制备RQ-PCR检测BCR-ABL(P210)转录本水平的高、低浓度质控物,2013年8月至2015年10月用RQ-PCR法与临床标本同步检测BCR-ABL (P210) 184次,按试剂批号(批号20130303、20131212、20140411和20150327分别简称为R1、R2、R3、R4)统计分析标准曲线斜率、截距及相关系数,并按试剂批号和质控物批号(批号20130725、20140611分别简称为Q1、Q2)统计分析高、低浓度质控物检测结果,对斜率、截距及质控物检测结果采取Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法进行质控判断.结果 ①标准曲线斜率、截距:R1检测53次,斜率、截距均未失控;R2检测37次,斜率失控6次,且第2～8次在x-s限值下侧,第12～37次在-i值上侧,截距失控9次,且第1～8次在-x+s限值上侧,第12～37次出现在-x值下侧;R3检测80次和R4检测14次,斜率、截距均未失控.②质控物结果:Q1批号质控物,R1检测49次未失控,R2检测23次失控1次;Q2批号质控物,R2检测14次、R3检测72次及R4检测14次均未失控.结论 利用K562细胞和HL-60细胞制备定量检测BCR-ABL(P210)转录本水平的高、低浓度室内质控物,制备方便,检测结果可靠、稳定,使用质控物检测结果结合标准曲线斜率、截距进行室内质控,可更有效地保证临床检测结果的准确性和稳定性.
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实时荧光聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA诊断肺结核价值
目的：探讨实时荧光聚合酶链反应（FQ-PCR）检测支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌脱氧核糖核酸（TB-DNA）诊断肺结核的临床价值。方法选取我院收治的115例肺结核患者作为研究对象，所有患者均进行支气管肺泡灌洗液TB-DNA检测、血清结核分枝杆菌特异性抗原（TB-SA）抗体检测、痰涂片抗酸染色镜检等。结果支气管肺泡灌洗液TB-DNA检测、血清 TB-SA 抗体检测、痰涂片抗酸染色镜检诊断肺结核的敏感度分别为65．2％（75/115）、50．4％（58/115）、20．9％（24/115）。支气管肺泡灌洗液检测 TB-DNA诊断肺结核的敏感度显著高于血清 TB-SA抗体、痰涂片抗酸染色镜检（均P＜0．05）。结论采用 FQ-PCR检测支气管肺泡灌洗液 TB-DNA诊断肺结核具有较高的敏感度。
