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绿原酸调节肥胖大鼠胰岛素抵抗作用的研究
目的：研究绿原酸（CHA）对高脂诱导的肥胖大鼠胰岛素抵抗（IR）的调节作用。方法采用饲喂高脂饲料的方法建立营养型肥胖大鼠IR模型，将造模成功的大鼠分为4组：模型组、吡格列酮组（4．5 mg／kg）、CHA（大、小剂量组），以未造模的正常大鼠作为空白组，连续给药4周后，测定其糖耐量、血清胰岛素、血脂水平等指标。结果 CHA能显著减缓肥胖大鼠体质量的增速，降低血糖浓度时间曲线下面积（AUC），增加糖耐量，降低血清胰岛素、三酰甘油和总胆固醇水平，增加肝糖原、肌糖原水平，降低胰岛素敏感指数（HOMA‐IR），升高胰岛素抵抗指数（HOMA‐ISI）。结论 CHA具有调节肥胖大鼠IR的作用，其机制与抑制内脏脂肪聚积，降低体内肝糖原、肌糖原水平，促进外周组织吸收利用葡萄糖，降低血清游离脂肪酸（FFA ）水平，防止脂质过氧化有关，其分子机制值得进一步研究。
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针刺夹脊穴对切口痛大鼠的镇痛效应
目的：通过建立大鼠足底切口痛模型，拟从大鼠行为学方面来观察应用针刺夹脊穴和夹脊穴持续输注镇痛药物治疗术后疼痛的效果。方法60只健康雄性SD大鼠，随机分为健康对照组、模型组、皮下输注组、夹脊穴电针组、夹脊穴输注组，每组12只。按照Brennan法建立大鼠足底切口疼痛模型。对5组大鼠于术前1h、术后6、24、48h，测定机械缩足反射阈（MWT）和热退缩潜伏期（TWL）值。结果MWT值的变化：5组大鼠实验前MWT值的基础值组间差异无统计学意义（P＞0．05）；健康对照组各时间点的MWT值比较差异均无统计学意义（P＞0．05）；模型组、皮下输注组、夹脊穴电针组、夹脊穴输注组与健康对照组比较，在术后6、24、48hMWT值明显减少（P＜0．05）；皮下输注组、夹脊穴电针组、夹脊穴输注组与模型组比较，在术后6、24、48hMWT值明显增加（P＜0．05）；夹脊穴输注组与皮下输注组、夹脊穴电针组比较，在术后6、24、48hMWT值明显增加（P＜0．05）；TWL值的变化：与健康对照组比较，模型组大鼠在术后6、24、48h明显缩短（P＜0．05）；皮下输注组、夹脊穴电针组、夹脊穴输注组与模型组比较，在术后6、24、48hTWL明显延长（P＜0．05）；夹脊穴注射组与皮下注射组、夹脊穴电针组比较，在术后6、24、48hTWL明显延长（P＜0．05）。结论电针夹脊穴和夹脊穴持续输注镇痛药物对切口痛大鼠具有明显镇痛效应；夹脊穴输注的镇痛效果好于皮下镇痛。
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异种抗原α-Gal在近交系版纳小耳猪椎间盘的表达
临床椎间盘突出症是骨科常见病之一,行髓核摘除术后由于纤维环的完整性被破坏, 其抵抗压力的功能受损.当椎体随承载后,椎间隙变窄塌陷,导致脊柱的内源性稳定因素被破坏,可引起或加重椎间关节和小关节的退行性改变,使脊柱的稳定功能下降.人工椎间盘可望解决这一难题.但目前在临床应用的人工椎间盘还存在以下问题:(1)假体活动度过大,稳定性不够.(2)有滑动核突出现象.(3)金属盖板缺乏表面处理,与骨表面的生物相容性欠佳 .故探索异种生物椎间盘移植是治疗椎间盘疾患的途径之一.目前近交系猪被认为是异种移植的理想的供器官动物.探讨猪的椎间盘能否用作临床移植材料,首先需要解决人体对异种组织材料的免疫排斥反应.α-半乳糖基(α-Cal)是公认存在于除旧世纪灵长目以外的哺乳动物体内的异种抗原.本实验通过检测版纳小耳猪椎间组织中α-Cal的分布情况,为临床猪-人异种椎间盘移植提供依据.采用6头8-11月龄雄性近交系版纳小耳猪的椎间盘组织,常规福尔马林固定,石蜡包埋切片.以植物凝集素作为亲和物质,采用组织化学方法观察猪椎间盘组织中异种抗原的分布情况.椎间盘纤维环状软骨细胞及髓核软骨样细胞的核膜有染色阳性的棕黄色颗粒沉着.云南近交系版纳小耳猪椎间盘组织中有异种抗原存在,但抗原性较弱,可以成为临床损伤修复中良好的材料来源.
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近交系小耳猪肾、小肠组织中α-Gal抗原分布的研究
随着器官移植工作的广泛开展,同种供体远远不能满足临床治疗的要求.目前科学研究正积极寻找可供人体器官移植的异种供体,以满足临床需要,而猪被认为是理想的异种供体之一.但猪-人异种移植的主要障碍是供体器官或组织中的异种抗原(α-半乳糖抗原, α-galactose residues,α-Gal)引起的超急性排斥反应.研究猪组织器官内α-Gal的分布情况,对猪进行基因改造,以达到猪-人异种器官移植的目的具有重大意义.本实验选用两种方法对猪肾、小肠内α-Gal抗原分布进行研究,以筛选更敏感的α-Gal检测方法.实验选用近交系中国西双版纳小耳猪(近交系数为0.9 0以上)的肾、小肠(12指肠、空肠、回肠)标本,甲醛固定,常规石蜡制片,片厚6μm. 以16、8、4μg/ml三种浓度的生物素标记的BSI-B4作为亲和物,切片孵育3 0分钟(37℃)、24和48小时(4℃),分别与SP(工作浓度1:10)、SABC 结合,DAB呈色后观察.结果为:1.SABC方法:三种不同浓度的BSI-B4在肾近曲小管上皮细胞、小肠绒毛上皮细胞及固有膜内淋巴细胞的胞浆内均有棕黄色反应,以8 μg/ml BSI-B4孵育24小时的结果为优,4μg/ml的浓度,4℃孵育48 小时,亦可获得与8μg/ml相似的结果,而16μg/ml的浓度则有较深的背底.2 .SP方法:16μg/ml BSI-B4孵育24小时(4℃)的结果与SABC法的8 μg/ml相似,但阳性反应稍弱且背底较深;8、4μg/ml两种工作浓度孵育24小时甚至更久,肾及小肠标本均显示阴性结果.因此,通过实验得出SABC法的敏感性要优于SP法.在对不同组织或器官进行α-Gal抗原分布检测的研究中,应首选SABC方法,既可获得较准确的抗原定位又可节省试剂.
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门静脉注射pSilencer质粒观察DA大鼠移植肝脏EOLA1的表达变化研究
目的 观察EOLAl在大鼠移植肝脏中的表达和功能.方法 采用近交系雄性DA大鼠60只,Lewis大鼠120只,分为3组,改良"二袖套"法建立肝脏移植模型90例.A组Lewis为供体(n=30),Lewis为受体;B组DA为供体(n=30),Lewis为受体;C组以DA大鼠为供体(n=30),Lewis为受体,受体肝在移植后于门静脉注射RNA抑制性干扰质粒.观察平均存活时间;术后1、3、5、7、10时相点血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平以及移植肝脏的病理学变化;半定量检测EOLA1蛋白的表达变化.结果 平均存活时间A组超过100d,B组(16.2±1.4)d,C组平均存活时间(11.8±1.6)d;术后第5天B、c组血清ALT和TBIL升高较A组非常显著(P＜0.01),B组高于C组差异显著;B、C组病理检查为明显的炎性反应,A组不明显;A组移植肝组织EOLAl表达高,B组次之,C组低,B、C组与A组比较差异非常显著(P＜0.01),B、C两组间比较差异显著(P＜0.05).结论 EOLAl蛋白表达水平的高低与肝组织内炎症反应的严重程度存在负相关;门静脉注射pSilencer质粒可以明显的抑制EOLAl在移植肝脏的表达.
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DA→LEW大鼠肝脏急性排斥反应模型的技术改进与评价
目的:建立大鼠肝脏移植急性排斥反应模型并改进其手术技巧,对所建模型进行评价.方法:采用近交系雄性DA大鼠60只,Lewis大鼠120只,分为两组,其中A组30例:Lewis大鼠为供体(n=30),Lewis大鼠为受体;B组60例:DA大鼠为供体(n=60),Lewis大鼠为受体.采用改良"二袖套"法建立肝脏移植模型,观察手术成功率、平均存活时间、术后第1、3、5、7和10 d各时相点血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平以及移植肝脏的病理学变化.结果:手术成功率为93.3%(84/90);总耗时(90.0±15.0)min;无肝期时间(14.2±2.6)min;平均存活时间A组超过100 d,B 组(16.2±1.4)d;术后第5 d B组血清ALT和TBIL升高,与A组比较差异非常显著(P＜0.01);B组移植肝脏病理检查有明显的排斥反应,而A组没有.结论: DA→LEW(Lewis)大鼠的品系组合是稳定的肝脏移植急性排斥反应模型;通过改进手术技巧提高了手术成功率,为进一步研究提供技术保障.
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大鼠C6胶质瘤模型的建立及MRI影像学特征
目的:探索建立大鼠C6胶质瘤模型的有效方法,了解MRI动态检测肿瘤的可行性.方法:采用立体定向仪种植C6胶质瘤细胞,建立C6胶质瘤模型,病理及MRI检测肿瘤生长情况.结果:所有大鼠均有肿瘤生长,并有一定规律性.MRI增强扫描及T2相均可显示肿瘤.结论:该方法可有效建立胶质瘤模型,采用MRI增强扫描可以较好地反映C6胶质瘤的生长情况.
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大鼠注射CCl4后血清羟脯氨酸和脯氨酸含量变化
目的:研究血清羟脯氨酸、脯氨酸含量在肝纤维化形成过程中的诊断价值.方法:制作四氯化碳(CCl4)大鼠肝纤维化模型,测定复制模型前及造模型后2, 4,6,8周血清羟脯氨酸、脯氨酸及肝脏胶原蛋白含量.结果:血清羟脯氨酸、脯氨酸含量于造模型2周后明显增加,随后逐渐下降;肝脏胶原蛋白含量也在第2周明显增加,并一直保持不变.结论:血清羟脯氨酸、脯氨酸含量测定对早期肝纤维化的辅助诊断有重要应用价值.
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小鼠骨髓源树突状细胞的体外培养及鉴定
目的：建立小鼠骨髓源树突状细胞（bone marrow dendritic cell， BMDC）的培养方法并对其表型和功能进行鉴定．方法无菌取BALB/c小鼠股骨、胫骨中的骨髓细胞，以粒-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导分化为BMDC，倒置显微镜动态观察BMDC增殖和形态变化情况，流式细胞术分析细胞表型，并检测其抗原吞噬功能．结果小鼠骨髓细胞体外诱导可获得大量未成熟和成熟BMDC，呈现典型的树突状形态．未成熟BMDC的细胞表型为CD11chighCD40lowCD86low MHC-IIlow，具有较强的抗原吞噬能力．未成熟BMDC经细菌脂多糖刺激后可分化为高表达CD11c、CD40、CD86及MHC-II类分子的成熟BMDC．结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC．
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建立近交系大鼠肝移植急性排斥模型的体会
目的:探讨近交系大鼠原位肝移植模型的建立并判断排斥反应发生的强度.方法:采用Kamada二袖套法,利用封闭群大鼠SD和Wistar进行建模技能训练,在此基础上建立近交系大鼠DA→LEW肝移植模型,根据临床表现和Banff标准判断排斥反应发生的强度.结果:共施行DA→LEW大鼠肝移植模型15例,手术成功率86.7%,死亡原因为肝上下腔静脉漏血、肝下下腔静脉血栓、胆道梗阻.术后第3天开始出现Ⅰ级排斥反应,7 d以后逐渐达到高峰,除术后并发症致死外,剩余均在12 d内死于Ⅲ级排斥反应.结论:DA→LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥及免疫耐受的理想动物模型.但近交系大鼠在组织结构上有其自身特点,给建模带来一定难度.
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DA到Lewis大鼠肝脏移植急性排斥模型的建立
目的:建立大鼠原位肝脏移植的急性排斥模型并观察其排斥反应的特点. 方法:采用近交系雄性DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,改良"二袖套"法建立肝脏移植模型30例. 随机分为两组,对照组(n=15)术后不用免疫抑制剂,FK506处理组(n=15)术后1～7 d用FK506 0.2 mg/(kg·d) 灌胃. 术后4, 7和10 d分别随机处死3只,检测血清肝功能生化指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(BILI)]以及肝脏病理组织学变化,每组各留6只观察生存期. 结果:术后7和10 d时对照组血清AST, BILI浓度均高于FK506处理组[AST:7 d, (17.7±3.6) μkat/L vs (7.9±1.6 ) μkat/L, P<0.05; 10 d, (21.9±4.3) μkat/L vs (4.7±0.7) μkat/L, P<0.05. BILI:7 d, (90.9±18.8) μmol/L vs (6.8 ± 0.7) μmol/L, P<0.05; 10 d, (111.5±23.3) μmol/L vs (15.5±3.2) μmol/L, P<0.05]. 术后7 d,对照组移植物出现明显的排斥反应的病理学变化,10 d时更为严重. FK506组术后7和10 d病理学检查为不明确或轻度的排斥表现. 对照组中位生存时间为12 d, 95%可信区间为(11.77～13.90) d (n=6, 12 d×4, 14 d×1, 15 d×1). FK506处理组中位生存时间为78 d,95%可信区间为(65.26～90.74) d (n=6, >65 d×1, >67 d×1, 76 d, 78 d, 89 d和90 d),生存时间明显较对照组延长(P<0.05). 结论:DA到Lewis大鼠品系组合可以建立稳定可靠的肝脏移植急性排斥模型;该模型的排斥反应的特点与临床相似,且可以为抗排斥药物FK506预防而达到长期存活.
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同种异体近交系小鼠原位气管移植模型的建立
目的:建立近交系小鼠同种异体原位气管移植模型.方法:供受体体质量配对后,C57BL/6 和BALB/c小鼠随机分为2组,每组各10对,A组为C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)组,B组BALB/c(供体) →BALB/c(受体)组,昆明种小鼠10对作为C组即KM(供体) →KM(受体)组. 利用颈前肌肉及周围组织被覆移植气管提供血供建立同种异体小鼠原位气管移植模型. 使用HE染色以及扫描电镜对同种异体小鼠原位气管移植模型进行评估,观察比较上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞等指标.结果:A, B组全部存活,C组存活6只. A, C组移植气管均发生一定程度的排斥反应,B组无排斥反应发生. A, B, C三组上皮积分分别为: 1.094±0.120分,2.872±0.059分及0.995±0.444分;无核软骨细胞数/骨细胞总数比值分别为:(27.22±1.09)%, (10.60±1.01)% 及(31.40±6.43)%;淋巴细胞计数分别(20.18±1.31)个/HPF,≤5个/HPF及(22.55±4.87)个/HPF. A, B组及C,B组各项指标相比均有统计学意义,而A,C组相比则差异无统计学意义;且C组各数值离散程度均大于A组.结论:成功建立了C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)小鼠原位气管移植模型. 近交系及封闭群模型均能反应移植气管的各种病理生理变化,但封闭群模型稳定性较近交系差.
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16,16-二甲基前列腺素E2在大鼠肺纤维化发展各阶段中的作用
目的: 观察16,16-二甲基前列腺素E2(dmPGE2)对博莱霉素诱导肺纤维化发展过程中各阶段的干预作用.方法:通过免疫组化方法分析各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(Col -Ⅲ)水平,运用原位杂交方法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA转录水平.结果: ①实验组第7天TNF-α与模型组相比稍有下降,无明显差异;实验组后3阶段TNF-α水平较模型组明显下降(P<0.05). ②实验组前3阶段CTGFmRNA水平与模型组比较明显下降(P<0.05),Col-Ⅰ,Col-Ⅲ水平较模型组明显下降(P<0.05),而纤维化终末期CTGFmRNA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ水平均较模型组稍减低,无显著性差异.结论:在纤维化发生发展阶段,dmPGE2可能通过调节炎症反应和抑制成纤维细胞胶原合成使慢性炎症和纤维化反应均减轻.
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内毒素致新生大鼠肺组织病理改变的特点与肺出血的关系
目的:探讨感染致新生鼠肺损伤以至于肺出血的发病机理.方法:用LPS腹腔注射法制备新生和成年大鼠肺损伤模型,观察肺组织病理改变特点,并用Western-blotting检测肺组织ColⅣ,LN的表达变化.结果:病理改变证实了LPS可导致新生大鼠发生肺出血,LPS作用后,ColⅣ和LN的表达减少,于8h差异显著(P<0.01).结论:LPS可导致新生大鼠发生肺出血,ColⅣ和LN表达的减少可能是导致新生大鼠发生肺出血的原因之一.
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细胞凋亡及Fas和FasL在高脂肾损害中的作用
目的:探讨细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas和FasL在高脂饮食肾损害中的表达.方法:将24只Wistar大鼠随机分为对照组、肾病组及高脂饮食组,饲养12周,观察血脂、尿蛋白、肾脏病理积分、肾脏细胞凋亡及Fas和FasL的表达.结果:高脂饮食组血胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、尿蛋白、肾脏病理积分高于肾病组及对照组,肾脏免疫组化也显示高脂饮食组细胞凋亡及Fas和FasL表达增强.结论:高脂血症可加剧肾小球损伤,肾脏细胞凋亡及Fas和FasL参与其发病过程.
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关于禽流感病毒的通用疫苗
当前靶向表面蛋白的疫苗可驱使抗原变异，其结果或是导致更高致病性病毒的出现，或是产生抗原上不同的病毒能逃逸疫苗接种下的控制从而在宿主人群中生存下来。通常的流感疫苗是靶向高度易变的表面蛋白且不能抗异源病毒的攻击。诱导抗流感保守表位的免疫应答的疫苗可提供抗异源病毒攻击的保护作用。作者在此文中报道了用经修饰的痘病毒Ankara（ MVA）与腺病毒（ Ad）表达核蛋白和基质蛋白（ NP＋M1）的融合体形成重组体用其接种的后果，以序贯的疫苗接种方式在不同年龄的鸡中进行试验，发现是安全和具免疫原性的。用干扰素-γ（ IFN-γ）斑点试验法评估第二针接种后的细胞免疫应答。卵内Ad初免孵化后4周用MVA加强免疫对近交系和远交系小鸡都是具免疫原性的方式。近交系鸡（ C151）用致病性的禽流感病毒（ LPAI ） H7 N7攻击。用Ad-NP＋M1初免、MVA-NP＋M1加强的小鸡在感染后的第17天，根据空斑试验测定的泄殖腔病毒排量比用含非相关抗原的重组病毒的免疫者减少了。这种初步的效力可证明鸟中的概念验证：含流感病毒内部抗原的病毒载体诱导鸡的T细胞应答可能是研制流感疫苗有效的策略，这种疫苗可诱导抗禽流感的异源保护作用。
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高能电子射线局部外照射致皮肤损伤的实验研究
一、材料与方法1.动物来源及分组:选取SD近交系雄性大鼠49只(本校实验动物中心),其中39只采用100 g/L水合氯醛腹腔注射麻醉,0.8 ml/200～250 g,周围以铅板屏蔽,以直线加速器发射高能电子射线一次性照射大鼠臀部皮肤,面积约4 cm×4 cm, 能量为6.4×10-13 J.根据照射剂量不同分为5、15、45 Gy 3组.5 Gy组14只,7只照射后2个月处死,7只3个月处死;15 Gy组15只,其中10只照射后2个月处死,5只3个月处死;45 Gy组10只,照射后2个月处死.余下10只作正常对照组,普通饲料喂养,不作任何处理.
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3种小鼠品系的四氧嘧啶糖尿病模型建立及初步评价
目的:比较不同品系小鼠糖尿病建模及模型评价效果,为合理选择药物活性分析实验动物提供方法依据.方法:选择封闭群KM、近交系BALB/c、C57 BL/6J 3种小鼠,腹腔注射四氧嘧啶建模,并计算成模率和死亡率.参照建模实验结果,仅选择死亡率及成模率较接近的雄性KM和BALB/c小鼠进行糖尿病模型效果评估实验.通过灌胃已知阳性药物盐酸二甲双胍,测定实验各组生存率、体重、空腹血糖值、葡萄糖耐量、血清中胰岛素及C肽含量等指标评价模型效果.结果:KM品系建模成功率高,雌雄分别为60％和65％,C57BL/6J低,雌雄分别为15％和20％,BALB/c雄性为60％,但雌性小鼠全部死亡.同一品系的雌性小鼠比雄性小鼠死亡率高,雌雄KM小鼠死亡率分别为40％和20％,BALB/c小鼠分别为100％和25％,C57BL/6J小鼠分别为80％和65％.高血糖模型组及二甲双胍组小鼠均逐渐表现出多食多饮消瘦的症状,体重与正常对照组相比增长慢且差异显著.因BALB/c小鼠高血糖模型组实验期内全部死亡,所以实验末期仅测定了KM小鼠糖耐量、血清中胰岛素和C肽含量,测定的血清学数据也均符合糖尿病小鼠模型指标.KM、BALB/c小鼠Oh的血糖值离散系数的数值分别为0.17和0.20;72 h的血糖值离散系数数值分别为0.32和0.12.结论:综合比较建模成功率及建成模型的特征,雄性KM小鼠优于其他2个品系,更适合作为建模动物;但建模前后空腹血糖值的离散数值表明封闭群KM小鼠个体差异明显,数据一致性不及近交系小鼠,提示采用近交系小鼠建模具有其优势,但建模方法还需进一步优化.
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自发雄性不育近交系MIJ大鼠形态学特征观察
目的:了解本实验室培育的自发雄性不育近交系MIJ大鼠的形态学特征.方法:分别取1月龄、2月龄、3月龄不育大鼠(不育组,A组)、近交系内正常大鼠(系内正常组,B组)、正常雄性Wistar大鼠(正常对照组,C组),观察生长发育情况,常规方法制备病理切片,观察睾丸、附睾等器吉组织学变化;取骨髓,常规方法染色体制片,G显带,进行染色体分析.结果:不育组大鼠体重增长速度稍慢,生殖器官发育迟缓;1月龄时腹腔内隐睾;睾丸下降时间、精索长度、睾丸引带长度、睾丸系数、附睾系数均明显落后于其他二组;且睾丸生精上皮发育不全,附睾内精子数量明显减少;但染色体形态及数目均正常,未观察到畸变.结论:自发雄性不育近交系MIJ大鼠呈睾丸下降延迟、睾丸发育不全、少精等特征,可以作为人类男性不育研究的良好动物模型.
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牛磺酸对大鼠生长和智力发育的影响
①目的探讨牛磺酸对大鼠生长及智力发育的影响.②方法Wistar大鼠自受孕开始分别喂以不同的饲料:基础饲料(A组),基础饲料添加牛磺酸(B组),低蛋白饲料(C组),低蛋白饲料添加牛磺酸(D组).断乳后的仔鼠仍继续按原饲料分别喂养并检测体质量、观察体态及辨别学习能力.③结果A,B,D组出生16d,平均体质量无显著差异;至44d,D组平均体质量明显低于A,组(F=381.83,q=18.87,18.4l,P<0.01),C组则出现明显营养不良,体质量低于D组(q=21,41,P<0.01).到60d时,A,B组体质量均已达到150g左右,而D组的大鼠仅为80g左右.A组大鼠亮度辨别学习实验的达标时间为(4.70±0.94)d,B组大鼠达标时间为(3.54±0.75)d,两者具有显著差异(t＝2.25,P<0.05).④结论营养不良的情况下,自胚胎期开始补充牛璜酸,仍有助于仔鼠的生长发育,对智力发育也具有明显的促进作用.
