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大鼠心肺复苏后脑损伤模型的建立
目的:建立大鼠心肺复苏后脑损伤模型.方法:Wistar 大鼠30只从颈外静脉内快速注入2% KCl,导致呼吸、心跳骤停;6 min后采用胸腹插入式按摩复苏;60 min后处死动物,取全脑用10%甲醛固定,取脑组织做病理学检查.在整个实验过程中动态观察大鼠脑电图、心电图、瞳孔和血压的变化.结果:所有动物在快速注入KCl后30 s内呼吸、心跳停止.复苏10 min左右心电图均能基本恢复;脑电图在心脏停跳后变平,复苏后60 min内未见恢复;动脉血压在心跳骤停后迅速下降至0 mmHg,复苏后10 min左右上升到80～90 mmHg.病理学检查提示:心跳骤停6 min后,心、肺、脑均可见缺血缺氧性损伤,复苏60 min后心、肺损伤未见加重,但脑损伤加重.结论:大鼠心肺脑复苏动物模型具有经济、实用,损伤创面较小,易于复苏等特征,在心肺复苏后脑损伤的研究中具有一定的使用价值.
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银杏叶提取物(EGb761)对鼠脑缺血半暗带神经细胞凋亡及超微结构的影响
目的:探讨银杏叶提取物(EGb761)对鼠脑缺血半暗带神经细胞凋亡及细胞超微结构的影响.方法:雄性Wistar 大鼠30只,随机分为假手术组、对照组(包括缺血90 min和缺血90 min再灌注12 h 两个亚组)、治疗组(亦包括缺血90 min和缺血90 min再灌注12 h 两个亚组),每组6只.治疗组于缺血前和缺血后即刻经腹腔注射EGb761溶液(每次20 mg/kg),假手术组和对照组均于相同时限腹腔注射等容量的生理盐水.建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)/再灌注模型.采用原位末端标记法,观察各组鼠脑缺血半暗带神经细胞凋亡,并结合电镜观察缺血神经细胞超微结构的改变.结果:对照组缺血90 min再灌注12 h缺血半暗带可见大量凋亡细胞,凋亡细胞计数为21.2±3.8,较药物治疗组缺血90 min再灌注12 h缺血的9.1±2.3显著增加(P<0.01).对照组缺血90 min 再灌注12 h 鼠脑组织电镜检查可见神经元细胞核染色质边聚,呈团块状,线粒体可见絮状结构改变;相同时限药物治疗组脑组织神经元细胞核染色质分布比较均匀,胞质内线粒体及其它细胞器基本正常.结论:血小板活化因子受体拮抗剂EGb761具有显著的缺血后脑保护作用.
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抑制枯否细胞对肝细胞线粒体再灌注损伤的影响
目的:探讨抑制枯否细胞对肝细胞线粒体再灌注损伤的影响.方法:大鼠分为对照组和实验组,第1、2日经鼠尾静注氯化钆(7mg/kg),对照组注射等量生理盐水,第3日手术使肝缺血2h后分别复流2h、6h和18h,测定肝组织和肝细胞线粒体的丙二醛(MDA)和血清转氨酶ALT含量,观察肝细胞及线粒体超微结构的变化.结果:实验组复流2h、6h肝细胞线粒体MDA含量(nmol/g)分别为1.81±0.24和1.91±0.56,对照组分别为4.89±2.91(P＜0.05)和2.93±0.51(P＜0.05),实验组复流6h肝组织MDA醛含量为3.50±2.06,对照组为7.65±2.46(P＜0.05).随着复流时间的延长,对照组出现核固缩,染色质边集,细胞器减少直至肝细胞破坏,而实验组在复流18h后仍可见肝细胞结构基本正常,线粒体的损伤程度也明显减轻.结论:抑制枯否细胞可以减轻肝细胞线粒体的再灌注损伤.
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大鼠动脉化肝移植热缺血损伤胆管外引流模型的建立体会
大鼠肝移植模型在肝移植免疫学及缺血再灌注损伤研究中具有重要价值.无心跳供体可以缓解供肝的短缺.扩大供肝来源[1]:肝移植术后胆汁的获取可为研究肝移植细胞学及免疫学的指标提供依据.为此本研究在大鼠动脉化肝移植热缺血损伤模型的基础上,建立胆管外引流模型.
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改良"二袖套法"制备大鼠原位肝移植动物模型
目的:介绍改进的"二袖套"法大鼠原位肝移植动物模型.方法:采用改进的"二袖套"法进行110只大鼠原位肝移植.结果:切取供肝时间平均37min,修肝时间平均13min,无肝期平均14min.术中和术后4h内死亡8只,手术成功率达93%.术后1周死亡11只,1周存活率为89%,主要死亡原因为感染和胆道梗阻.结论:改进的"二袖套"法大鼠原位肝移植具有无肝期短、手术成功率高、大鼠术后存活时间长的优点,是大鼠原位肝移植的理想术式.
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重组链激酶腹腔灌注预防大鼠腹腔粘连的实验研究
目的:探讨基因重组链激酶(r-SK)对腹腔粘连的预防价值.方法:30只SD大鼠手术制作腹腔粘连模型后随机分3组,SK组给予r-SK、NS组给予生理盐水腹腔灌注,另一组空白对照(N组).术后1周、2周分别处死动物,观察腹腔粘连程度,并取腹膜和网膜组织进行HE、嗜银染色和纤维蛋白、CD34免疫组化染色,镜下观察组织学改变情况.结果:SK组中,无粘连者33.3% ,Ⅰ度粘连61.1%,Ⅱ度粘连5.6%;NS组和N组中均有腹腔粘连,其中2/3表现为Ⅱ～Ⅳ度粘连.镜下表现:腹膜和网膜组织HE、嗜银染色和纤维蛋白、CD34免疫组化染色,显示SK组炎症反应较轻,NS组和N组均呈明显急性炎症反应.结论:r-SK腹腔灌注有减轻大鼠术后腹腔粘连的作用,有一定的量-效关系.
关键词： 链激酶·腹腔灌洗法·腹膜·粘连·大鼠 近交系 -
Ⅰ.腹主动脉瘤动物模型的建立及改进
目的:确定建立腹主动脉瘤动物模型时弹力蛋白酶短灌注时间和腹主动脉佳游离长度.方法:80例大鼠随机均分为1组生理盐水对照组和7组弹力蛋白酶实验组.灌注时间分别为10、20、30、60和120min,游离长度分别为0.5和1.0cm.术后14d观察各组大鼠腹主动脉直径扩张率及动脉壁的组织学变化.结果:≥30min组腹主动脉直径平均扩张率均>100%,与10、20min及对照组有显著差异(P<0.05);而30min组与60、120min组无明显差异(P>0.05).≥30min各组的大鼠腹主动脉中弹力蛋白均严重受损,且与游离腹主动脉长度无关.结论:在弹力蛋白酶诱导的大鼠腹主动脉瘤模型中,弹力蛋白酶灌注时间可由120min降至30min,游离腹主动脉长度可从1.0cm缩至0.5cm,不影响腹主动脉瘤的形成.
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Ⅱ.基质金属蛋白酶-9在大鼠腹主动脉瘤模型中的动态表达
目的:检测MMP-9在大鼠正常动脉及动脉瘤模型组织中的动态表达,以探讨其在腹主动脉瘤发病机制中的作用.方法:Wistar大鼠54只,随机均分为1组正常对照组、4组灌注对照组和4组实验组.实验组腹主动脉灌注弹力蛋白酶(25U/ml)2ml,灌注对照组灌注生理盐水2ml,分别于术前、术后即刻、2d、7d、14d测量腹主动脉直径,并采用免疫组织化学和分子原位杂交技术动态检测腹主动脉组织中MMP-9的表达.结果:正常及灌注对照组腹主动脉组织中均未发现MMP-9,而实验组弹力蛋白酶灌注后2～14d MMP-9均有不同程度升高,第7d达到高峰,第14d有所回落.结论:MMP-9分泌的增加可能与炎症反应有关,且为腹主动脉瘤形成中不可或缺的一步.
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肝硬化大鼠部分肝切除后TGF-α和C-met蛋白在肝脏中的表达及其意义
目的:研究转化生长因子-α(TGF-α)、C-met蛋白在肝硬化大鼠肝脏中的表达及意义.方法:将成年雄性Wistar大鼠制作为肝硬化大鼠,然后将肝脏部分切除制作肝再生模型.随机分为7组,一组立即处死,计算肝切除率;其他组分别于术后12h、1d、3d、5d、7d、14d处死.用免疫组织化学方法检测TGF-α和C-met蛋白在肝细胞中的表达,以正常大鼠肝再生模型为对照.结果:肝硬化大鼠部分肝脏切除后不同时间肝中TGF-α、C-met蛋白表达的变化均较正常大鼠延迟.结论:TGF-α和C-met在肝脏中的表达显示,硬化肝脏具有再生能力,但较正常肝脏弱.
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缺血预处理与肝脏缺血再灌注损伤的研究
目的:观察缺血预处理对肝脏再灌注损伤的影响.方法:通过构建正常大鼠和肝硬化大鼠肝脏70%的原位热缺血再灌注损伤模型,比较缺血预处理和无预处理组及间歇阻断肝门法对再灌注损伤的影响;以肝功酶、能量代谢和过氧化损伤等生物化学指标、组织学病理和细胞超微结构的形态学指标,观察不同预处理条件对结果的影响.结果:各项指标显示,正常大鼠中,缺血预处理与无预处理组相比,可显著减轻再灌注损伤(P＜0.05),与间歇性阻断肝门组相比也有显著性意义(P＜0.05);在各个缺血预处理组内,缺血预处理5min(IPC5min)组较IPC10min组和IPC5min×2组效果好(P＜0.05),证实缺血预处理对肝硬化大鼠肝脏再灌注损伤有保护作用.结论:缺血预处理可减轻肝脏再灌注损伤,并优于间歇性阻断肝门法,是一种应用方便、效果较好、前景广阔的阻断肝脏血供的新方法.
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急性胰腺炎大鼠胰腺组织中转化生长因子及Ⅰ型胶原变化的研究
目的:研究转化生长因子(TGF)对急性胰腺炎发生后胰腺组织修复的影响.方法:雄性Wistar大鼠96只,实验组和对照组各48只,腹腔一次性注射L-精氨酸制成胰腺炎模型,分别于术后4、12、24、48、72、96h各处死8只取标本,进行病理学检查、血淀粉酶的测定及胰腺组织TGFβ1mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的检测(Northern分子杂交方法).结果:腹腔注射L-精氨酸后经病理学及血淀粉酶检测证实产生了急性水肿性胰腺炎的病理损害,但同时胰腺组织内TGFβ1mRNA水平升高,于12h时达到较高水平,持续至72h时开始下降;这一时段内Ⅰ型胶原mRNA水平也显著升高,并与TGFβ1 mRNA的变化呈密切相关性(r=0.728,P＜0.05).结论:在急性胰腺炎胰腺组织病理损害的同时存在着胰腺自身修复的机制,TGF和Ⅰ型胶原在这一机制中起重要作用.
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联合转染eNOS基因反义ET核酸对自体移植静脉内膜增生的影响
目的:探讨联合转染eNOS基因和反义ET核酸对自体移植静脉内膜增生的影响.方法:制作20只自体颈静脉腹主动脉移植Wistar大鼠模型,实验组、对照组各10只,实验组移植血管行腺病毒介导的eNOS溶液浸泡和反义ET核酸凝胶涂布,对照组仅行空载腺病毒溶液浸泡和凝胶涂布.术后2周取出移植血管,利用病理学、免疫组织化学、R-PCR方法检测移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、内膜VSMC数及PCNA阳性表达、血管ET mRNA、eNOS mRNA表达情况.结果:实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄及VSMC数均较对照组减小或减少,PCNA阳性表达及ET mRNA表达较对照组减少,而eNOS mRNA表达则明显增加.结论:联合转染NOS基因和反义ET核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生,是一种有效地防治移植静脉再狭窄的基因疗法.
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外源性NO在大鼠小肠缺血再灌注损伤中作用的实验研究
目的:了解外源性L-Arg在肠缺血再灌注损伤中的作用及其机制.方法:30只雄性Wistar大 鼠随机分为5组,每组6只,肠系膜上动脉分离结束前10min静脉注射生理盐水2.0ml(C组);缺血前10min静脉注射生理盐水2.0ml(IR组);缺血前10min静脉注射L-Arg 200mg/kg(AIR组);再灌注前10min静脉注射L-Arg 200mg/kg(IAR组);再灌注前10min同时静脉注射L-Arg 200mg/kg和N-硝基-L-精氨酸40mg/kg(INAR组).120min实验结束后,所有动物取距回盲瓣5.0cm以上回肠肠断15cm,均分为3段,分别测定各组肠粘膜PMN浸润数量、MDA含量和粘膜组织学Chiu分级;另取36只大鼠,随机分为生理盐水对照组和L-Arg实验组(再灌注前10min静脉注射L-Arg 200mg/kg),每组再随机分为3组,每组6只.两组分别与缺血前、缺血60min和再灌注60min取小肠中段肠管2.0cm,测定小肠组织线粒体内Ca2+含量.结果:再灌注前给予适量的外源性b-Arg后,与C组相比,各组的肠粘膜PMN浸润数量、MDA含量、线粒体内Ca2+含量和粘膜组织学分级均无明显差异(P＞0.05);缺血前给予L-Arg后,与IR组相比,上述各项指标除Ca2+含量外均明显减少(P＜0.05),但仍高于C组(P＜0.05).结论:再灌注前给予外源性L-Arg对大鼠小肠缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,缺血前给予1-Arg对肠粘膜损伤也能起到一定程度的保护作用.
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肠康复治疗用于小肠移植的免疫安全性研究
目的:观察肠康复治疗对大鼠小肠移植急性排斥反应的影响,评价其应用的安全性.方法:48只异基因异位小肠移植受体大鼠(SD→Wistar)根据肠康复治疗及环孢素A应用与否随机分为4组,观察至术后14天各时相点移植小肠病理改变、固有层淋巴细胞IL-2受体表达、血浆IL-2水平以及受体大鼠脾淋巴细胞转化试验和IL-2分泌能力.结果:肠康复治疗能够增强小肠移植受体大鼠的细胞免疫功能,加重急性排斥反应.应用环孢素A(10mg@kg-1@d-1)能阻断这种免疫增强作用,在这种情况下,肠康复治疗不能诱发或加重急性排斥反应.结论:肠康复治疗能够加重小肠移植的排斥反应,但在应用环孢素A的情况下,免疫增强作用受抑制,不会诱发或加重急性排斥反应.
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舒脉胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的:研究舒脉胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法:制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,用化学比色法测定血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量及心肌组织匀浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,用放免法测定血浆内皮素(ET)及降钙素基因相关肽(CGRP)含量.结果:大鼠心肌缺血10 min,再灌注30 min后,血清CK水平明显升高,血浆ET含量增加,心肌组织匀浆SOD活性下降.舒脉胶囊可显著降低缺血再灌注大鼠血中CK、ET水平及心肌组织MDA含量,显著升高血中CGRP水平及心肌组织SOD活性.结论:舒脉胶囊对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与扩张血管、提高氧自由基清除酶活性、抑制脂质过氧化反应有关.
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糖皮质激素受体水平在白血病、肾病治疗中临床意义的探讨
目的:探讨糖皮质激素受体(GCR)水平高低对急性淋巴性白血病(ALL)、肾病综合征(NS)疗效的影响.方法:采用受体放射配体结合技术测定ALL、NS和对照组外周血淋巴细胞糖皮质激素高亲和力受体GCRH和低亲和力受体GCRL位点数,分析GCR与疗效之间的关系;并通过动物实验观察中药小柴胡汤对应用糖皮质激素所产生的GCR"降调节"效应的影响.结果:疗前GCRH＞4000位点/细胞的ALL患者对激素联合化疗疗效好,化疗后GCRH明显降调,但GCRL治疗前后无明显变化.NS患者疗前GCRH＞6000位点/细胞,则对GC疗效好,当GCRH＜3000位点/细胞,则GC治疗无效.SD大白鼠实验表明,小柴胡汤具有显著的调控GCR水平作用.结论:对ALL患者和NS患者治疗前检测GCR水平,有助于制定个体化的治疗措施.
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肝性脑病大鼠肝和脑组织一氧化氮及一氧化氮合酶的研究
目的:探讨一氧化氮(NO)与肝性脑病(HE)的关系.方法:用硫代乙酰胺(TAA)制造大鼠HE模型,35只大鼠随机分为2组,HE模型组25只,正常对照组10只.HE模型组第1天均腹腔注射TAA300 mg@kg-1,第2～4天,每日分别注射TAA 150 mg@kg-1,直至出现HE症状.正常组每日注射等量生理盐水.采用分光光度法测定两组大脑、小脑、肝组织中NO含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果:HE模型组大脑、小脑、肝组织中N0含量与正常组比较明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01);NOS活性与正常组比较明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01);HE模型组大脑、小脑、肝组织中NO含量与NOS活性呈正相关(r=0.7284,r=0.8220,r=0.7010;P＜0.001).结论:NO可能是肝性脑病的重要影响因素之一.
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化合物N-2035对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察异黄酮类化合物N-2035对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:利用大脑中动脉栓线阻断法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察化合物N-2035对缺血再灌注大鼠的脑水肿、细胞内钙及凋亡抑制基因bcl-2表达的影响.结果:化合物N-2035能改善局灶性脑缺血再灌注损伤脑水肿,降低细胞内钙,增加bcl-2的表达.结论:化合物N-2035对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与化合物N-2035抗细胞凋亡有关.
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气相色谱法测定大鼠血清脂肪酸
目的:用气相色谱法测定大鼠酒精性脂肪肝血清中7种游离脂肪酸的含量.方法:选用10%丁二酸二乙二醇酯(DEGS)色谱柱,样品经乙酸乙酯提取后,用三氟化硼-乙醚/甲醇甲酯化处理.内标采用正十七碳酸.结果:月桂酸、豆蔻酸、硬脂酸与花生四烯酸的线性范围在1～50 mg/L,棕榈酸、油酸与亚油酸的线性范围在10～100mg/L.7种脂肪酸的变异系数在0.9991～0.9998之间.7种脂肪酸的加样回收率在85.6%～94.3%之间.结论:本法简便、快速、可靠,为临床科学研究及疾病的诊断提供参考依据.
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促生长素添加剂对大鼠青春期生长发育影响的初步探讨
目的:探讨动物饲料促生长素添加剂对雌性大鼠部分生殖功能指标和毒性指标的影响.方法:采用动物实验方法,研究灌胃不同浓度促生长剂溶液对大鼠阴道开口时间、动情周期、脏器系数等生殖功能指标和毒性指标的影响.结果:①低剂量组大鼠平均体重和体重增长率明显高于对照组(P＜0.05);②低剂量组大鼠阴道开口时间明显早于对照组(P＜0.05);③染毒2周后低剂量组进入动情期的大鼠显著多于对照组(P＜0.05),中剂量组和高剂量组与对照量组比较,进入动情周期的大鼠无统计学意义;(④各剂量组大鼠子宫和卵巢脏器系数与对照组相比均无统计学意义(P＞0.05),但随浓度增加,各剂量组有一定的下降趋势.结论:促生长剂对大鼠有一定的雌激素样作用,并且这种影响可能和促生长剂的浓度有一定的相关性.
