幼龄与成年沙鼠短暂性脑缺血再灌注后海马8-羟基脱氧鸟苷含量的比较

目的 比较幼龄与成年沙鼠短暂性脑缺血再灌注后脑组织8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量.方法 采用短暂性双侧颈总动脉夹闭建立脑缺血再灌注模型.采用ELISA法检测脑卒中后8-OHdG含量,采用甲酚紫及F-JB染色法观察海马CA1区神经元的死亡情况,采用免疫组化染色法观察海马CA1及DG区8-OHdG的表达情况.结果 缺血再灌注第4天,成年沙鼠海马CA1神经细胞明显死亡,而幼龄沙鼠几乎没有.缺血再灌注后,脑组织中8-OHdG含量逐渐增高,在6h时达到高峰,且成年沙鼠整体水平较幼龄沙鼠高.成年沙鼠CA1及DG区8-OHdG免疫活性变化与8-OHdG含量变化相似,幼龄沙鼠则无明显变化.结论 脑缺血再灌注后,幼年沙鼠海马CA1和DG区相对低表达状态与其抗脑缺血有密切的联系.

米诺环素对沙鼠脑缺血再灌注脑组织病理变化的实验研究

目的:研究米诺环素对沙鼠脑缺血再灌注脑组织病理变化的影响.方法:采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作沙鼠脑缺血再灌注模型,在电镜下观察米诺环素干预前后海马CA1区及额叶脑组织病理变化.结果与结论:随着沙鼠脑缺血再灌注时间的延长,线粒体、高尔基(氏)复合和内质网等肿胀程度加重,形成空泡、碎片、核固缩、核溶解等.米诺环素干预后损伤程度减轻,与缺血再灌注组比较有显著差异(P<0.05).

CV-A16对长爪沙鼠肌肉细胞的杀伤机理研究

目的 研究柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)对沙鼠原代肌肉细胞的杀伤机理,为阐明CV-A16的致病机理及沙鼠模型的进一步应用提供依据.方法 采用胰蛋白酶/胶原酶双酶法构建沙鼠原代肌肉细胞模型,用不同感染剂量CV-A16感染细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,Hoechst 33258染色法检测细胞染色质变化,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡比例,蛋白免疫印迹法检测Caspases家族蛋白、NF-κB通路相关蛋白及JNK激酶表达.结果 感染复数(MOI)=0.50和1.00组细胞存活率分别为88.95％和64.05％,与阴性对照组(100.00％)比较,差异均有统计学意义(P<0.05),细胞存活率与MOI呈负相关(rs=-0.857,P=0.014);MOI=0.01、0.10和1.00组细胞凋亡比例分别为7.2％、21.8％和50.7％,细胞凋亡比例与MOI呈正相关(rs=1.000,P<0.001).CV-A16感染后,Caspase-3和Caspase-8蛋白均被剪切激活,NF-κB通路相关蛋白IκBα、p65和p-p65表达均减少,JNK蛋白磷酸化水平增加.结论 CV-A16可能通过抑制NF-κB通路和激活JNK激酶诱导沙鼠原代肌肉细胞凋亡.

双价纯化肾综合征出血热疫苗临床观察

用沙鼠肾原代细胞培养肾综合征出血热(HFRS)Z10(Ⅰ型)和Z37(Ⅱ型)病毒,经β丙内脂灭活,已研制成Ⅰ型、Ⅱ型和双价(Ⅰ型加Ⅱ型)3种HFRS疫苗,均已取得新药证书和生产文号,并形成规模生产,经1000余万现场人群接种,取得了很好的预防效果[1].为使产品的质量进一步提高,达到副反应更轻,接种针次减少的目的,进行了纯化疫苗的研究.

清脑片对沙鼠脑缺血再灌注的保护作用及其机制研究

目的 探究清脑片对沙鼠脑缺血再灌注的保护作用及其机制.方法 采用双侧颈总动脉结扎10 min再灌注60 min,建立沙鼠脑缺血模型,观察高、中、低剂量清脑片组(1.5,0.75,0.375 g·kg-1)对沙鼠脑组织中白介素-1β(IL-lβ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、血栓烷素B2(TXB2)、丙二醛(MDA)含量及ATP活性和NF-κB免疫阳性表达的影响.结果 与模型组比较,高、中剂量清脑片可显著降低脑组织中IL-1β、TNF-α、Glu、Asp、TXB2、MDA的含量及NF-κB免疫阳性表达水平(P＜0.01或P＜0.05),显著提高脑组织中Na+-K+-ATP、Mg2+-ATP、Ca2+-ATP、Ca2+-Mg2+-ATP的酶活性(P＜0.01或P＜0.05).结论 清脑片对沙鼠脑缺血再灌注有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制体内炎症因子、过氧化能力及提高酶活力有关.

肾综合征出血热Ⅰ型灭活疫苗低年龄组儿童安全性及免疫效果观察

肾综合征出血热由于缺乏特异的治疗药物和大面积有效灭鼠措施的困难,疫苗预防就显得尤为重要.自WHO提出开发有效的肾综合征出血热灭活疫苗以来,无论是国外的鼠脑纯化疫苗,还是国内的沙鼠苗,地鼠苗和鼠脑苗都显示了良好的安全性和理想的防病效果.但从目前有关疫苗应用的资料报道均为大年龄组的青壮年,而对低年龄组(1～6)儿童的安全性及免疫效果未见报道.为探讨低年龄组接种肾综合征出血热疫苗的安全性及免疫效果,给肾综合征出血热Ⅰ型灭活疫苗的应用提供科学依据,现将试验结果报告如下.

清脑片对沙鼠脑缺血再灌注模型血浆ET和CGRP含量及脑组织病理变化的影响

目的 观察清脑片对沙鼠脑缺血再灌注模型血浆ET和CGRP含量及脑组织病理变化的实验研究.方法 采用双侧颈总动脉结扎10 min再灌注60 min,建立沙鼠脑缺血模型,观察清脑片对沙鼠血浆内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CGRP)的含量及脑组织海马区和皮质区病理变化的影响.结果 沙鼠脑缺血再灌注模型复制成功.高、中剂量清脑片组可显著降低血浆中ET含量(P＜0.01);可显著升高血浆中CGRP含量(P＜0.O1);可显著改善沙鼠脑组织海马区皮质区病理损伤(P＜0.01).结论 清脑片通过降低脑缺血沙鼠血浆ET含量,升高血浆CGRP的含量,调节脑血管舒缩程度,改善微循环,这也可能是清脑片在临床上治疗急性缺血性中风的重要机制之一.

椎间盘退变动物建模研究

腰椎间盘突出症是临床常见病和多发病,其基本病理变化是椎间盘退变,病因尚不十分清楚.关于椎间盘退变的病因、发病机制及早期发现并采取积极有效的措施,一直是近年来研究的热点.但是人类腰椎问盘退变是一个漫长的病理过程,对其研究是长期的,如果能寻找一种符合人体解剖生理功能、周期短、可重复性的实验动物作为替代,可大大缩短实验所需的时间,并可作为椎间盘退变病因病理及基因治疗研究的一个平台,付诸实施多种实验方法.动物模型可以模拟人类椎间盘退行性变的过程,用于其病因、药理学或生物治疗的研究.因此,对椎间盘退变动物模型的研究不仅能够为椎间盘退变的病因学提供参考资料,亦可为此病的药物治疗提供实验对象.

头针配合康复训练对脑缺血再灌注损伤沙鼠模型神经可塑性相关蛋白MAP-2的调节作用

目的 观测头针配合康复训练对脑缺血再灌注损伤沙鼠模型神经可塑性相关蛋白MAP-2调节作用.方法 使用SPSS 19.0版统计软件生成的随机数字表将36只成功造模的脑缺血再灌注损伤模型雄性沙鼠随机分为模型组、康复训练组和头针配合康复训练组,每组12只.模型组不作任何干预措施,康复训练组采用康复训练治疗,头针配合康复训练组给予头部穴位电针刺激配合康复训练治疗;1日1次,共治疗14 d.分别于术后24 h、第7天和第14天,对各组沙鼠采用Bederson评分评定其神经功能,14 d后行缺血灶MAP-2表达检测,并进行统计学分析比较.结果 术后第7天,头针配合康复训练组的Bederson评分为(1.81±0.52)分,与模型组[(2.13±0.49)分]和康复训练组[(2.00±0.31)分]比较,组间差异均无统计学意义(P＞0.05);但第14天头针配合康复训练组的Bederson评分为(0.47±0.31)分,与模型组[(1.46±0.72)分]和康复训练组[(1.04±0.63)分]比较,头针配合康复训练组明显优于其余两组(P＜0.05),且康复训练组亦优于模型组(P＜0.05).MAP-2蛋白表达水平定量分析,头针配合康复训练组为(0.91±0.18),与模型组的(0.43±0.21)及康复训练组的(0.67±0.24)比较,组间差异均有统计学意义(P＜0.05),康复训练组较模型组也有一定优势(P＜0.05).结论 头针配合康复训练能更好地促进神经运动功能的恢复,并增加脑缺血再灌注损伤沙鼠缺血灶神经可塑性相关蛋白MAP-2的表达.

脑缺血后内源性激活神经干细胞的机制研究

1 脑缺血后内源性神经干细胞的自身激活近年来研究表明,脑缺血后自身的神经干细胞有大量的增殖分化[1,2],说明神经干细胞可能参与脑缺血的病理生理过程.Zhang等通过建立沙鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,观察缺血再灌注后不同时期的室管膜下层(SVZ)、海马颗粒细胞层(DG)、嗅球以及梗死灶周边皮质的神经干细胞增殖、分化情况,发现7 d后在梗死同侧脑SVZ出现神经干细胞增殖高峰,14 d达高,而DG区则无增殖,且14 d后远离梗死区的嗅球有大量的神经干细胞增殖,但28 d后,标记Brdu阳性细胞大量减少,说明脑缺血只引起短暂的神经干细胞的增殖,Zhang认为是脑缺血损伤的应急保护反应[3].

沙鼠脑缺血脑组织转化生长因子βⅠ型受体表达的研究

目的阐明缺血脑组织的病理改变与转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)表达的关系.方法夹闭沙鼠双侧颈总动脉诱导短暂前脑缺血,检测缺血再灌后不同时点脑组织的病理变化和转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)mRNA及蛋白的表达.结果随沙鼠脑缺血再灌时间的延长,病理损害的加重,随之脑组织中TβRⅠmRNA和蛋白的表达逐渐上调.结论缺血脑组织TβRⅠ的表达上调可能是脑组织细胞对缺血产生的一种保护性反应以提高对TGFβ的敏感性,也可能是脑组织病理损伤严重程度的又一标志.

蒙古沙鼠耳蜗一氧化氮合酶的胆碱能调节

目的通过检测乙酰胆碱对蒙古沙鼠耳蜗中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的影响,初步探讨耳蜗中NOS的调节机制.方法蒙古沙鼠耳蜗经还原型辅酶Ⅱ-黄递酶(NADPH-黄递酶)染色后行耳蜗铺片,分别以同一动物两侧耳蜗为实验组和对照组进行对比观察,检测乙酰胆碱(ACh)对耳蜗NOS活性的影响,其染色深度的差异通过HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像免疫组化测量系统判断.结果蒙古沙鼠耳蜗外毛细胞基底部传出神经末梢呈现NADPH-黄递酶染色阳性反应,ACh处理后染色深度明显增强,其平均灰度值从74.28±11.71减低至46.5±7.78(P<0.01).结论蒙古沙鼠耳蜗外毛细胞基底部的传出神经末梢可见NOS分布,ACh能增强其活性,提示ACh通过第二信使分子一氧化氮在耳蜗生理调控机制中起重要作用.

沙鼠脑缺血后脑内Smad 2和Smad 4蛋白表达的研究

目的 研究沙鼠脑缺血后脑内Smad 2、Smad 4蛋白表达的变化.方法 40只雄性沙鼠被随机分为正常对照组、假手术组和脑缺血再灌注组.用免疫组化法检测各组沙鼠脑内Smad 2、Smad 4蛋白表达变化.结果 各组沙鼠神经元和胶质细胞胞浆内均有Smad 2、Smad 4蛋白阳性表达,且Smad 4蛋白表达均显著多于Smad 2蛋白.与正常对照组和假手术组比较,缺血再灌注6h、24 h时,Smad2、Smad4蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 缺血再灌注后Smad 2、Smad 4蛋向表达显著上调,提示Smad 2、Smad 4参与了沙鼠脑缺血的发生和发展.

沙鼠短暂脑缺血再灌p53基因表达

目的：研究脑缺血再灌后p53基因表达变化。方法：采用沙鼠短暂前脑缺血再灌损伤模型，应用Northern blot 检测脑缺血再灌后不同时期额叶p53 mRNA表达。结果：沙鼠脑缺血6 min，在再灌后6 h p53 mRNA出现表达增加，持续至第3 d(P<0.05)。结论:沙鼠短暂脑缺血后，促凋亡基因p53存在持续高表达，其结果可能是启动细胞凋亡，导致缺血神经细胞损伤死亡。

毒蕈碱和烟碱受体阻断剂对沙鼠耳蜗复合动作电位的影响

为探讨内侧橄榄耳蜗(MOC)传出神经及其递质乙酰胆碱对耳蜗机械特性和听觉传入神经活动的调节机制,在沙鼠动物模型上观察了对侧噪声和毒蕈碱(M)及烟碱(N)受体阻断剂对耳蜗复合动作电位(CAP)的影响.结果发现,对侧噪声对CAP产生明显抑制作用,阿托品和庆大霉素均能有效地消除这一抑制效应.表明沙鼠MOC系统通过M和N两种受体对听觉传入活动发挥生理效应.

沙鼠短暂前脑缺血脑内转化生长因子βⅠ型、Ⅱ型受体基因表达的研究

目的探讨沙鼠短暂前脑缺血脑内转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体基因的表达.方法夹闭蒙古沙鼠双侧颈总动脉10min诱导前脑缺血,原位杂交检测缺血再灌后不同时点脑内TβRⅠ、ⅡmRNAs的表达.结果各组沙鼠脑组织中神经元和胶质细胞胞浆均可见TβRⅠ,Ⅱ mRNAs阳性表达.缺血10min后1d、3d、7d时TβR Ⅰ mRNA表达增加,而TβRⅡmRNA在1d、3d时表达增加,7d时下降(与对照组比,P＜0.01).结论短暂前脑缺血诱导脑组织TβRImRNA表达增加;第1、3dTβRIImRNA表达增加,但第7d下降.提示沙鼠短暂前脑缺血第1、3d脑组织TβR Ⅰ,ⅡmRNAs表达增加,可能有利于TGFβ信息传递;第7d低量的TβRⅡmRNA表达,则可能不利于TGFβ信息传递.

沙鼠全脑缺血再灌注后海马神经营养保护作用研究

目的 沙鼠全脑缺血再灌注后给予神经营养保护,观察海马神经元细胞中凋亡相关蛋白表达变化.方法 通过夹闭沙鼠双侧颈总动脉法制作全脑缺血再灌注模型54只,随机分为神经营养因子治疗组、丹参治疗组以及生理盐水对照组3组.在沙鼠全脑缺血30 min再灌注后,分别在6 h、连续3 d、连续7 d给予腹腔注射神经营养因子、丹参以及生理盐水,采用免疫组化法观察海马神经元细胞胞浆中凋亡相关蛋白表达的变化.结果 生理盐水组中,B细胞淋巴瘤2蛋白表达无论是在第6小时,还是第3天或者第7天,都明显低,而丹参组次之,神经营养因子治疗组表达高;同组内不同时间相比,B细胞淋巴瘤2蛋白在第6 小时表达高.B细胞淋巴瘤2相关X蛋白无论是在第6小时,还是第3天或者第7天,在生理盐水对照组中都有阳性表达;但在神经营养因子治疗组及丹参治疗组,B细胞淋巴瘤2相关X蛋白几乎没有表达或者表达极低;在同组内不同时间,B细胞淋巴瘤2相关X蛋白表达没有明显的差异.结论 神经营养因子和中药丹参对全脑缺血再灌注所致的神经细胞损伤具有一定的保护作用且6 h内神经营养保护效果较好.

宝灵膏对沙鼠缺血再灌注损伤脑梗死面积及神经细胞凋亡的影响

目的 探讨宝灵膏对蒙古沙鼠脑缺血再灌注损伤脑组织梗死面积和神经细胞凋亡的影响及该影响是否存在剂量依赖性.方法 采用双侧颈总动脉阻断的方法 建造沙鼠脑缺血再灌注损伤模型.沙鼠随机分为假手术组、模型组、宝灵膏高剂量组、宝灵膏中剂量组、宝灵膏低剂量组.采用TTC染色法测腩组织梗死面积,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测脑组织凋亡神经细胞.结果 宝灵膏高、中剂量组TTC染色法测脑组织梗死面积与模型组比较差异显著,与假手术组无统计学意义;低剂量组测得梗死面积与模型组、假手术组比较差异显著.宝灵膏高、中剂量组采用TUNEL法检测脑组织凋亡神经细胞数与模型组比较有差异,与假手术组相近;宝灵膏低剂量组测得凋亡神经细胞数与模型组、假手术组比较有差异.结论 宝灵膏能减轻沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织梗死面积,抑制脑神经细胞的凋亡,并且其作用具有剂量依赖性.

宝灵膏对沙鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的 观察宝灵膏对蒙古沙鼠脑缺血再灌注损伤脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响及是否存在剂量依赖性.方法 采用双侧颈总动脉阻断的方法建立沙鼠脑缺血再灌注损伤模型.沙鼠随机分为假手术组、模型组、宝灵膏高剂量治疗组、宝灵膏中剂量治疗组、宝灵膏低剂量治疗组.采用比色法测量脑组织中SOD、MDA的含量,采用免疫组织化学法检测Bcl-2的阳性细胞数.结果 宝灵膏各剂量治疗组SOD、MDA、Bcl-2与模型组差异明显,宝灵膏高、中剂量组SOD、MDA、Bcl-2与低剂量组亦有明显差异,与假手术组相近.结论 宝灵膏能促进在沙鼠脑缺血再灌注损伤中对抗氧自由基损伤的SOD的表达、降低MDA的表达、上调Bcl-2的表达,从而起到对抗氧自由基对脑组织的损伤及抑制脑神经细胞的凋亡和坏死的作用,并且其作用具有剂量依赖性.

短暂缺血后沙鼠海马齿状回神经干细胞发育的三个步骤