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不同炮制方法对大黄中5种蒽醌类化合物含量的影响
目的:观察不同炮制方法对大黄中5种蒽醌类成分的影响,建立大黄炮制品的质量控制方法.方法:采用色谱柱为Shimadzu C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱进行测定.结果:大黄酸,大黄素、大黄粉,芦荟大黄素,大黄素甲醚加样回收率分别为98.9%(RSD=1.61%),97.5%(RSD=1.12%),100.6%(RSD=1.08%),102.3%(RSD=1.78%),101.2%(RSD=2.11%).结论:本方法操作简单、准确,重现性好,适用于大黄饮片内在质量的评价和控制.
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高效液相色谱法同时测定黄氏响声丸中5种蒽醌类成分含量
目的:建立黄氏响声丸中5种蒽醌类活性成分的高效液相色谱含量测定方法,有利于制剂的质量控制.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Shimadzu VP-ODS柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm,柱温30℃.结果:5种成分为芦荟大黄素0.042～0.840μg(r=0.9996)、大黄酸0.168～3.352μg(r=0.9998)、大黄素0.084～1.680μg(r=0.9997)、大黄酚0.093～1.852μg(r=0.9999)和大黄素甲醚0.174～3.488μg(r=0.9994)内成良好线性关系,平均回收率分别为99.8%(RSD=1.34%,n=5)、99.8%(RSD=1.72%,n=5)、100.0%(RSD=0.89%.n=5)、99.5%(HSD=0.97%,n=5)和100.2%(RSD=1.04%,n=5).结论:该方法简便、快捷、准确、可靠,重复性好,可用于同时测定黄氏响声丸中5种蒽醌类成分的含量.
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芦荟大黄素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
芦荟大黄素是蓼科植物掌叶大黄的根和块茎中含有的一种活性成分.研究发现其对多种肿瘤细胞株具有抑制作用,文章综述了近年来有关芦荟大黄素诱导肿瘤细胞株凋亡的作用及其机理的研究进展.
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HPLC同时测定四季三黄片中芦荟大黄素、黄芩苷、黄柏酮和西红花苷-Ⅰ的含量
目的 采用HPLC同时测定四季三黄片中芦荟大黄素、黄芩苷、黄柏酮和西红花苷-Ⅰ的含量.方法 采用Welch Topsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,4μm);流动相:甲醇-0.2％磷酸水溶液;梯度洗脱;检测波长分别为254 nm(芦荟大黄素、黄芩苷、黄柏酮)和440 nm(西红花苷-Ⅰ);流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃.结果 芦荟大黄素、黄芩苷、黄柏酮和西红花苷-Ⅰ线性范围分别为0.079 10～1.582 μg·mL-1(r=0.999 5),0.167 5～3.350 μg·mL-1(r=0.999 8),0.097 92～1.958 μg·mL-1(r=0.999 7)和0.033 57～0.671 5μg·mL-1(r=0.999 4),平均加样回收率分别为95.9％(RSD=0.7％),97.5％(RSD=0.8),96.4％(RSD=1.0％),95.5％(RSD=1.3％).结论 该方法简便、准确、专属性强、重复性好,可用于四季三黄片中芦荟大黄素、黄芩苷、黄柏酮和西红花苷-Ⅰ的定量分析.
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高效液相色谱法测定三黄片中蒽醌类衍生物的含量
目的建立同时测定三黄片中葸醌类衍生物含量的RP-HPLC.方法用YWG-C18反相柱(200mm×4.6mm,10μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(90:10),流速为1.0mL/min,检测波长为440nm.结果本法线形关系良好,平均回收率为96.37%～101.28%,RSD 0.8%～1.08%.结论建立的定量方法可用于三黄片质量控制标准.
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不同生长年限唐古特大黄中五种蒽醌衍生物的含量比较
目的 探讨唐古特大黄中五种蒽醌衍生物的含量与生长年限的关系.方法 用高效液相色谱法测定不同生长年限唐古特大黄中大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚的含量.色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸(85∶15),流速为1.0 mL*min-1,检测波长为254 nm,柱温为室温,按外标法定量.结果 与结论 唐古特大黄中五种蒽醌衍生物的含量随生长年限的增加而增加,第4年增长趋势变缓,且两年生唐古特大黄已符合药典要求.
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芦荟大黄素抑制人胃癌BGC-823细胞增殖及对Wnt通路的影响
目的:观察芦荟大黄素对人胃癌BGC-823细胞增殖及对Wnt通路的影响.方法:用人胃癌BGC-823细胞作为模型,用芦荟大黄素处理,用MTT分析方法来检测细胞的增殖情况及β-catenin和TCF7L2基因及蛋白表达水平.结果:随着芦荟大黄素浓度的提高以及作用时间的延长,人胃癌BGC-823细胞增殖抑制率显著增加(P＜0.05);随着芦荟大黄素浓度越高,在平板上形成的克隆数量越少;β-catenin和TCF7L2基因及蛋白表达下调,呈现浓度依赖性(P＜0.05).结论:芦荟大黄素能够抑制胃癌BGC-823细胞增殖,其分子机制可能与Wnt信号通路有关.
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芦荟大黄素对非酒精性脂肪性肝病细胞模型内质网应激的影响
目的:探讨芦荟大黄素(AE)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型内质网应激(ERS)的影响,寻找AE治疗NAFLD的可能机制.方法:正常培养的人肝细胞L-02采用脂肪乳剂诱导其发生脂肪变性建立NAFLD细胞模型,于建模的同时在含脂肪乳剂的培养液中加入不同浓度AE相同条件下培养,油红O染色观察细胞脂肪变性程度并检测肝细胞内甘油三脂(TG)含量,观察胞质内脂滴及TG的变化情况,检测细胞培养液超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)变化,MTT细胞增殖及细胞毒实验检测细胞增殖情况,Western blot检测肝细胞ERS标志性蛋白GRP78、CHOP的表达.结果:NAFLD细胞模型组细胞培养液中SOD含量下降(P＜0.05),MDA含量上升(P＜0.05),肝细胞增殖受到抑制,ERS标志性蛋白GRP78、CHOP的表达明显升高(P＜0.05),AE的干预能有效抑制脂滴在肝细胞内的沉积,减轻肝细胞脂质过氧化程度(P＜0.05),改善脂毒性对肝细胞增殖抑制作用的影响(P＜0.05),并能够有效降低肝细胞GRP78、CHOP蛋白的表达(P＜0.05).结论:AE能有效减轻肝细胞脂肪变性程度,改善脂毒性对肝细胞生长抑制作用,其机制可能与AE能够减轻肝细胞脂质过氧化程度,抑制ERS引起的肝细胞脂质代谢紊乱及细胞凋亡有关.
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基于ROS/TXNIP/Nlrp3探讨芦荟大黄素对P.g-LPS诱导的小鼠牙周膜成纤维细胞的影响
目的 研究芦荟大黄素(aloe-emodin,AE)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g-LPS)诱导的牙周膜成纤维细胞Nlrp3-in-flammasome活化的影响.方法 体外培养牙周膜成纤维细胞,采用P.g-LPS作为刺激剂,通过Western blot观察不同浓度芦荟大黄素(aloe-emodin,AE)对Nlrp3、前体caspase-1(pro-caspase-1)、活化caspase-1(cle-caspase-1)、TXNIP蛋白表达量的影响分子活化程度,利用RT-qPCR方法检测其对前体caspase-1、Nlrp3转录水平的影响,并使用荧光探针法评价对ROS生成量的影响.结果 与空白对照相比,给予P.g-LPS刺激的小鼠牙周膜成纤维细胞Nlrp3、前体caspase-1、TXNIP的蛋白表达量及ROS的生成量明显增高,活化caspase-1的生成明显增多,AE可以明显降低Nlrp3、前体caspase-1,活化caspase-1,TXNIP在细胞内的蛋白表达量,同时抑制Nlrp3和前体caspase-1的转录水平并且减少ROS在细胞内的生成量.结论 AE能通过抑制Nlrp3相关蛋白的表达及减弱ROS/TXNIP诱导的Nlrp3-inflammasome聚集明显抑制P.g-LPS诱导的小鼠牙周膜成纤维细胞Nlrp3-inflam-masome的活化.
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芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响
目的 研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移潜能的影响及其作用机制.方法 MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR、Western blot法检测AE对MDA-MB-231细胞黏着斑激酶(FAK) mRNA和蛋白表达的影响.明胶酶谱法检测MDA-MB-231细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性.结果 80 μmol·L-1 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力、趋化性运动能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(45.88±8.51)%.作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE下调FAK mRNA和蛋白表达,下调MDA-MB-231细胞分泌MMP-9.结论 AE抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、趋化性运动能力,其作用机制与其下调FAK表达和MMP-9的分泌有关.
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芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响
目的 观察芦荟大黄素(aloe-emodin)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的作用.方法 采用LPS诱导的RAW264.7细胞株建立细胞炎症反应模型.采用Griess试剂法测定NO释放量;采用硝普钠释放NO法测定NO自由基含量的变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达改变.结果 芦荟大黄素在0.69～2.50 mg·L~(-1)剂量范围内可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,并呈剂量和时间依赖关系;芦荟大黄素在0.63～5.00 mg·L~(-1)剂量范围内可下调LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA含量;而此范围内芦荟大黄素无直接清除NO自由基作用,不影响iNOS活性.结论 芦荟大黄素可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,呈时间和剂量依赖关系,此作用并非通过捕捉NO或抑制iNOS活性来实现,而是通过抑制iNOS mRNA表达发挥作用的.
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芦荟大黄素的差示脉冲伏安法测定
目的建立芦荟大黄素的差示脉冲伏安测定方法.方法在pH4.0的磷酸盐缓冲溶液,开路搅拌富集2min,于0.4～-0.8V电位范围用差示脉冲伏安法测定芦荟大黄素的还原峰电流.结果在5×10-8～2×10-7mol*L-1范围内,芦荟大黄素的差示脉冲伏安峰电流与其浓度有良好的线性关系,检测限为3×10-8mol*L-1.结论本方法简便、快速、灵敏度高、重现性好,用于芦荟大黄素的含量测定,结果满意.
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双波长标准加入法同时测定芦荟大黄素甙和芦荟大黄素
应用双波长标准加入分光光度法同时测定芦荟中芦荟大黄素甙和芦荟大黄素的含量.根据两种物质的吸收光谱,选择芦荟大黄素甙为标准加入组分,在芦荟大黄素的等吸收波长361.4nm和480.9nm处进行标准加入测定.芦荟大黄素甙和芦荟大黄素浓度在0～1×10-4mol*L-1范围内均符合比尔定律.对库拉索芦荟中芦荟大黄素甙和芦荟大黄素含量测定的相对标准偏差(n＝6)小于2%.
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HPLC法同时测定肿痛外擦酊中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量
目的 建立HPLC法同时测定肿痛外擦酊中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量.方法 采用Welch Ultimate XB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相进行等梯度洗脱(0~6.5min,72%A;6.5~20min,92%A;22.5~24min,72%A),柱温30℃,流速1.0mL·min-1,检测波长221nm,进样量20μL.结果 大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5个成分浓度分别在19.6~392.0μg·mL-1(r=1.0000)、10.80~215.9μg·mL-1(r=0.9999)、19.98~399.5μg·mL-1(r=1.0000)、10.56~211.3μg·mL-1(r=1.0000)、20.63~412.6μg·mL-1(r=0.9998)的范围内与峰面积呈现良好的线性关系;方法平均回收率(n=9)分别为100.0%,100.2%,100.2%,100.1%,99.9%.结论 所建立的高效液相色谱测定方法简便、准确,重现性好,专属性强,可用于肿痛外擦酊的含量测定及质量控制.
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等吸收双波长分光光度法同时测定芦荟中芦荟大黄素和芦荟甙
目的建立紫外可见分光光度法同时测定芦荟大黄素和芦荟甙的方法.方法根据双波长原理,分别在测定波长255,376 nm,参比波长355,475 nm处测定芦荟大黄素和芦荟甙含量.结果芦荟大黄素在2.00×10-6～5.00×10-5mol/L浓度范围内与光密度(D)呈线性关系,r=0.9995;芦荟甙在2.00×10-6～6.00×10-5mol/L浓度范围内与D呈线性关系,r=0.9998.结论等吸收双波长分光光度法操作快速、简便、准确,无需分离可同时测定芦荟样品中两组分含量.
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荧光法测定芦荟康胶囊中芦荟大黄素和芦荟苷
目的用荧光光度法测定芦荟康胶囊中的芦荟大黄素和芦荟苷的含量.方法在pH为5.76的HAc-NaAc缓冲液中和十二烷基磺酸钠(SDS)表面活性剂存在下测定芦荟大黄素的λex和λem.在Na2B4O7-NaOH介质中测定芦荟苷的λex和λem.结果芦荟大黄素和芦荟苷浓度分别在1.0×10-6～2.5×10-5mol/L和1.0×10-6～2.0×10-5mol/L,与其荧光强度呈线性关系,检测限分别为2×10-8 mol/L和1×10-8 mol/L.芦荟大黄素的λex和λem分别为460, 550 nm,芦荟苷在此体系无荧光;芦荟苷的λex和λem分别为387, 533 nm,芦荟大黄素在此体系无荧光.结论该法灵敏度高,选择性和重现性好,可直接测定芦荟康胶囊中芦荟大黄素和芦荟苷的含量.
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高效液相色谱法测定黄连上清丸中芦荟大黄素和大黄酸的含量
目的：建立黄连上清丸中芦荟大黄素和大黄酸含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法测定黄连上清丸中芦荟大黄素和大黄酸的含量，色谱柱为 Inertsil-ODS3-C18（4．6 mm×150 mm，5μm），流动相为甲醇（A）-0．2％磷酸溶液（B）（6535），检测波长为254 nm，流速为1．0 mL·min－1，柱温为25℃。结果芦荟大黄素在8．28～41．4μg·mL－1与峰面积呈良好的线性关系（r＝0．9999），大黄酸在5．94～29．7μg·mL－1峰面积呈良好的线性关系（r＝0．9998）。芦荟大黄素、大黄酸的平均加样回收率分别为100．50％、98．74％，RSD 分别为2．03％、0．23％。结论建立的高效液相色谱法具有简单、灵敏、重复性好等优点，可作为黄连上清丸中芦荟大黄素和大黄酸含量的测定方法。
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利胆排石片中游离蒽醌、总蒽醌和结合蒽醌的含量测定
目的：建立利胆排石片中游离蒽醌、总蒽醌和结合蒽醌的高效液相色谱测定方法。方法采用Phenomenex Luna 5u-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱，流速1 mL/min，检测波长：254 nm。结果各待测组分分离度良好；芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5个成分的进样量在2.408～24.08 ng（r=0.9996），2.718～27.18 ng （r=0.9999），3.060～30.60 ng（r=0.9995），4.298～42.98 ng（r=0.9999），3.050～30.50 ng（r=0.9998）与峰面积呈良好的线性关系；游离蒽醌中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的加样回收率（n=6）分别为：99.1%（RSD=1.3%），98.6%（RSD=1.1%），99.0%（RSD=1.4%），98.5%（RSD=0.8%），99.7%（RSD=1.0%）；总蒽醌中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的加样回收率（n=6）分别为：98.4%（RSD=0.6%），99.5%（RSD=0.9%），98.8%（RSD=1.2%），99.3%（RSD=0.8%），99.1%（RSD=1.3%）。结论经方法学验证，本方法简单、快速、灵敏、准确，可用于利胆排石片的质量控制定量分析方法。
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芦荟大黄素对人肝癌HepG2细胞端粒酶活性的影响及机制探讨
目的 观察芦荟大黄素(AE)对人肝癌HepG2细胞端粒酶活性的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 取对数生长期的HepG2细胞,分别以终浓度为0、10、30、50μmol/L的AE作用24 h;收集HepG2细胞,采用端粒重复序列扩增技术(TRAP)测定HepG2细胞端粒酶活性,分别以Western blotting、PCR法检测HepG2细胞中的hTERT、c-myc蛋白和基因表达水平.结果 以终浓度为0、10、30、50μmol/L的AE作用HepG2细胞24 h,其端粒酶活性分别为0.707±0.001、0.546±0.008、0.338±0.001、0.214±0.009;随着AE浓度升高,HepG2细胞的端粒酶活性下降,且30、50μmol/L与0μmol/L AE作用的HepG2细胞端粒酶活性差异有统计学意义(P均<0.05).随着AE浓度升高,HepG2细胞hTERT、c-myc mRNA和蛋白表达水平均下降;其中,hTERT、c-myc mRNA和蛋白在50μmol/L,hTERT mRNA在30μmol/L,与0μmol/L差异有统计学意义(P均<0.05).结论 AE可通过下调c-myc和hTERT表达从而抑制HepG2细胞端粒酶活性.
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UPLC法同时测定小儿化食丸中5种蒽醌类成分
目的:建立一种同时测定小儿化食丸中5种活性成分即芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的方法.方法:采用乙酸乙酯萃取和超高效液相色谱法检测,色谱柱为Acquity UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相为甲醇-1 g/L的磷酸水梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温35℃,检测波长254 nm.结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在1.493 4～14.9340 ng(r=0.999 97),3.0000～30.0000 ng(r=0.999 94),2.633 4～26.3340 ng(r=0.999 97),5.408 7～54.087 0 ng(r=0.999 99),1.724 4～17.2440 ng(r =0.999 99)内具有良好的线性关系,加样回收率分别为102.8％、98.6％、103.5％、97.2％及96.9％.结论:本方法操作简单、省时,结果准确,重复性好,适用于小儿化食丸的质量控制.
