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HPLC法测定甜叶菊中6个酚酸类成分含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定甜叶菊叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C6个酚酸类成分.方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长327 nm.结果:6个酚酸质量浓度在10～196 μg·mL-1范围内线性关系良好;6个酚酸的加样回收率分别为98.3％、95.2％、100.1％、97.3％、95.6％和96.1％,加样回收率、精密度、重复性、稳定性均符合有关规定;9批样品中6个酚酸类成分的含量分别为新绿原酸0.062％～0.725％,绿原酸0.277％～2.450％,隐绿原酸0.096％～0.694％,异绿原酸B 0.046％～0.867％,异绿原酸A0.157％～0.772％,异绿原酸C 0.135％～1.821％,6个酚酸之和在1.182％～6.668％.结论:该方法可为甜叶菊进一步开发利用提供质量控制方法.
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HPLC-MS/MS法同时测定山银花中7个有机酸的含量
目的:建立HPLC-MS/MS法同时测定山银花中7个有机酸(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸)的含量,并对其在3种不同植物来源的药材中的含量进行比较.方法:采用Shiseido Capcell Pak-C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,加柱后分流器,使约30％洗脱液进入质谱仪,柱温30℃,进样量5μL;质谱采用ESI-多反应监测(MRM)模式扫描,以水杨酸为内标,脱溶剂温度350℃,脱溶剂气流(N2) 600 L· h-1,雾化器压力0.2 MPa,毛细管电压4 kV.结果:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸质量浓度分别在0.032～32.224μg·mL-1(R2=0.999 5)、0.168～16.800μg· mL-1(R2=0.999 4)、0.038～15.104μg·mL-1(R2=0.999 8)、0.010～4.064μg· mL-1(R2=0.999 2)、0.013～5.372μμg·mL-1(R2=0.999 5)、0.079～39.840 μg·mL-1(R2=0.999 5)和0.041～16.208μg·mL-1(R2=0.999 3)范围内线性关系良好;定量限(LOQ)为10.0～19.9 ng· mL-1,平均回收率在94.01％和105.0％之间.样品测定结果显示,山银花中绿原酸和3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸含量较高,分别为1.262％～7.408％和0.636％～4.803％;咖啡酸含量较低,为0.003％～0.022％.通过比较不同植物来源的样品,发现其在有机酸的含量和比例方面存在较大差异.结论:本实验建立的方法灵敏、准确,可用于山银花药材中有机酸的含量测定,测定结果可为该药材质量标准的完善提供依据.
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一测多评法测定艾叶中6个有机酸类成分的含量
目的:建立同时测定艾叶中6个有机酸类成分含量的一测多评法.方法:采用Thermo Syncronis C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 mL· min-1,检测波长325 nm,柱温30℃.以绿原酸为内参物,分别计算与新绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的相对校正因子,实现一测多评.同时利用外标法和一测多评法测定6个有机酸类成分的含量.比较2种方法的测定结果是否存在差异.结果:一测多评法与外标法测定结果无显著差异.实验所测得的相对校正因子重复性良好.6批不同产地艾叶样品中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量范围分别为0.15～0.58、0.50～2.65、0.27～0.89、0.62～4.29、1.18～10.72、0.99～6.69 mg·g-1.结论:一测多评法可以用于艾叶中6个有机酸类成分的含量测定,且具有可行性与经济性.
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HPLC法同时测定双金连合剂中11种成分的含量
目的:建立反相高效液相色谱法同时测定双金连合剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘苷、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、牡荆素和黄芩素的含量.方法:采用Phenomenex ODS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.4％磷酸(B)为流动相,梯度洗脱(0～10 min,5％A→9％A;10 ～ 30 min,9％ A;30～60 min,9％A→30％A;60 ～ 90 min,30％ A→50％A),流速1.0mL·min-1,大吸收波长下检测(新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸:327 nm;异绿原酸B、A、C:330 nm;芦丁、黄芩苷和黄芩素:280 nm;连翘苷:277 nm;牡荆素:350 nm).结果:11种待测成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好线性关系(r≥0.999 0),平均回收率为96.7％～ 101.6％(RSD≤2.8％).结论:该方法经方法学验证可为更好地控制双金连合剂的质量提供参考依据.
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大菟丝子生品和盐炙品HPLC-UV特征图谱及7个有机酸含量变化研究
目的:建立大菟丝子生品和盐炙品的特征图谱,探讨大菟丝子炮制前后化学成分的变化规律,对其中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸7个有机酸类成分进行定量分析比较.方法:采用HPLC-UV法,选用Odyssil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.05％磷酸溶液(B),梯度洗脱(0 ～5 min,5％ A→13％A;5～20 min,13％ A→13％A;20 ～ 25 min,13％A→20％A;25 ～45 min,20％A→40％A),流速1 mL·min-,检测波长325 nm,柱温35℃;用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A”处理分析.结果:指标性成分在测定范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9970);不同来源的大菟丝子生品或盐炙品间的特征图谱相似度较高,但炮制前后指标性成分含量差异显著,呈现炮制后新绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸呈倍数增长,而绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸呈倍数下降的趋势.指纹图谱评价生品(S1～S8)、盐炙品(S9 ～S16)、药房样品(S17 ～ S25)特征图谱相似度发现生品与盐炙品间差异相对较大,而盐炙品与药房样品的相似度小.结论:采用特征图谱结合7个有机酸指标性成分含量测定的方法可以较好地控制大菟丝子生品、盐炙品的质量,并可用于生、盐炙品的区分.
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一测多评同时测定款冬花中10个成分的含量
目的:建立款冬花中10个活性成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C及款冬酮)的一测多评含量测定方法.方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm,5μm);以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相;梯度洗脱(0→10→25→30→35→40 min,10％→16％→30％→90％→95％→95％乙腈);分段变波长测定(0～15 min,326 nm,检测新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸及咖啡酸;15 ～ 20 min,254 nm,检测芦丁、金丝桃苷;20 ～ 30 min,326nm,检测异绿原酸B、异绿原酸A及异绿原酸C;30～40 min,220 nm,检测款冬酮);流速1.0 mL· min-1;柱温30℃.以绿原酸为参照物建立与其余成分的相对校正因子,并计算其含量,实现一测多评.同时采用外标法测定该10个成分的含量,并比较二者的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性.结果:在一定的线性范围内,绿原酸与新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁、金丝桃苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C及款冬酮的相对校正因子分别为0.997、0.998、1.762、0.601、0.865、1.229、1.232、1.233、0.743;且在不同实验条件下重现性良好[相对校正因子的RSD(n=6)＜2.4％];6批款冬花中10个成分的计算值与实测值间无显著差异.结论:本文建立的一测多评法控制款冬花的质量可行、准确.
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HPLC法同时测定草珊瑚中7个活性成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定草珊瑚药材中反丁烯二酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸含量.方法:采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为乙腈-甲醇(1:9),流动相B为0.5％的甲酸水溶液,梯度洗脱(0 ～ 20 min,20％A;20 ～30 mim,20％A→30％A;30 ～60 min,30％A),流速为0.8mL·min-1,检测波长为228 nm(检测反丁烯二酸)、344 nm(检测新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸),柱温为40℃.结果:反丁烯二酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异嗪皮啶、落新妇苷、迷迭香酸浓度分别在24.12 ～ 180.90、1.01 ～101.00、1.75 ～175.04、2.19～219.20、1.27～127.20、1.57 ～157.08、2.93～ 193.28 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)均在93.92％～103.0％范围内,RSD均小于3.0％.结论:该方法准确,灵敏度高,重复性好,适用于草珊瑚药材中7个有效成分的含量测定.
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一测多评法在肿节风注射液6个成分检测中的应用研究
目的:将一测多评方法应用于肿节风注射液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异嗪皮啶、迷迭香酸6个成分的HPLC含量测定,并建立其方法学的考察模式.方法:以乙腈(A)-0.1％甲酸(B)为流动性,梯度洗脱(0～8 min,8％A;8 ～60min,8％A→30％A;60～ 75 min,8％A),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长330 nm.在一定的线性范围内以异嗪皮啶为对照品,建立肿节风注射液中该成分与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的相对校正因子(分别为1.0657、1.0559、1.0621、1.8497、0.8797),利用相对校正因子计算新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸的含量,同时用外标法测定6个成分的绝对含量;以验证一测多评的准确性和科学性.结果:建立的校正因子经不同厂家的仪器及色谱柱在不同的实验室考察,重现性良好,肿节风注射液中采用校正因子计算的含量与外标法实测值之间没有明显差异(P＞0.05),且2种方法所得的含量值相对偏差都在3％以内.结论:在对照品缺乏的情况下,该方法可以作为新模式用于中药制剂的多成分定量,为肿节风注射液的多指标质量评价及控制提供科学依据.
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HPLC同时测定苍耳子中6个化学成分的含量
目的:用HPLC同时测定苍耳子中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸6个化学成分的含量.方法:采用Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1％磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长254 nm,柱温35℃.结果:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸色谱峰分离良好.进样量分别在0.012 ～1.2、0.028～2.8、0.012 ～1.2、0.014 ～1.4、0.024～2.4、0.011 ～1.1 μg范围内线性关系良好.平均回收率(n=6)分别为102.3％、96.4％、99.1％、103.1％、103.0％、103.4％,RSD分别为1.8％、1.1％、1.8％、1.5％、2.0％、1.9％.结论:建立的苍耳子HPLC含量测定方法可用于苍耳子的质量控制.
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HPLC同时测定口炎清颗粒中7个有机酸的含量
目的:建立HPLC同时测定口炎清颗粒中7个有机酸(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸)含量的方法.方法:采用AkzoNobel Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,以乙腈-0.1％磷酸水溶液进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长326 nm.结果:7个成分的线性关系良好,精密度、稳定性、重复性的RSD均低于3％,加样回收率为97.75％ ～99.33％.结论:该方法可用于口炎清颗粒多指标质量控制.
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HPLC-DAD法同时测定清开灵注射液中7个酚酸类成分
目的:建立同时测定清开灵注射液中7个酚酸类成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸)含量的方法.方法:采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.5 mL·min-1,检测波长327 nm,柱温30℃.结果:80min内7个待测组分分离度良好,在各自的检测范围内与峰面积呈良好的线性,其相关系数均大于0.9998,加样回收率为96.1％ ～ 103.9％.应用所建立的方法同时测定了清开灵注射液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸共7个成分的含量,并对5个不同批次的注射液进行了含量测定,其结果有一定的差异.结论:本法可为清开灵注射液中酚酸类成分的质量控制提供参考.
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HPLC同时测定青银注射液中8种活性成分的含量
目的:建立HPLC同时测定青银注射液中8种活性成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C及蒿酮)含量的方法.方法:色谱柱:AkzoNobel Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相:乙腈-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱；分段变波长测定；柱温:30℃；流速:1.0 mL·min-1.结果:8种成分的线性关系良好,精密度、稳定性、重复性的RSD均低于3％,平均加样回收率为97.8％～99.2％.结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于青银注射液的质量控制.
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不同加工方法对泸州山银花品质影响的研究
目的:探讨不同加工方法对泸州山银花品质的影响,为泸州山银花加工方法的筛选提供依据.方法:采用阴干、晒干、真空干燥、远红外干燥、微波干燥、烘干6种方法加工山银花,对外观性状进行描述,采用高效液相色谱法测定山银花中新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C的含量.色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长326 nm;柱温30℃;流速1 mL·min-1;进样量10 μL.结果:6种加工方法中,真空干燥样品中新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C的含量分别为0.094％、2.982％、1.804％、0.255％,高于其他5种方法所得样品;外观颜色和油润度均比其他5种方法好.结论:真空干燥方法得到的样品外观品相好,测得的新绿原酸、绿原酸、异绿原酸A及异绿原酸C含量高,明显优于其他干燥方法.
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花红胶囊中咖啡酰奎宁酸类成分的识别和含量测定
目的:分析花红胶囊醇提物中的咖啡酰奎宁酸类成分,并建立同时测定花红胶囊中新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸含量的高效液相色谱法.方法:超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS/MS):采用ThermoBEH C18(2.1 mm×l00 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.1％甲酸乙腈溶液(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.4 μL· min-1,柱温40℃;运用电喷雾离子源(ESI源),负离子模式检测(m/z100～1500),毛细管电压2.5 kV,锥孔电压40kV,离子源温度120℃,脱溶剂温度450℃,碰撞能量15 ～40 eV,对花红胶囊中的咖啡酰奎宁酸类成分进行快速表征、鉴定.高效液相色谱法:采用Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,4μm)色谱柱,以0.1％甲酸乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱(0 ～7 min,5％ A→8％A;7～ 17 min,8％A→15％A; 17 ～ 45 min,15％ A→30％A;45 ～ 55 min,30％A→50％A;55～60min,50％ A→100％A),流速1.0 mL·min-1,检测波长326 nm,柱温30℃.结果:采用UPLC/Q-TOF-MS/MS对该制剂的甲醇提取物进行分析,鉴定了4个咖啡酰奎宁酸类化合物,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸A.采用HPLC法测定新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸,它们的浓度分别在3.54 ～ 176.80 μg·mL-1(r=0.9999)、6.98 ～ 348.80 μg· mL-1(r=0.9999)、4.06～202.80 μg·mL-1(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好的线性关系;方法的平均加样回收率(n=6)为101.5％ ～ 102.2％,RSD为1.9％ ～2.4％.结论:该方法为花红胶囊化学成分的快速鉴定奠定了基础,为花红胶囊的质量控制提供参考依据.
