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老龄雄性SD大鼠血清睾酮水平变化及海洋胶原肽对其影响的研究
目的 探讨老龄雄性SD大鼠血清睾酮水平变化及海洋胶原肤对其血清睾酮水平的影响.方法 48只SPF级健康初断乳雄性SD大鼠,随机分为对照组和海洋胶原肤剂量组(饲料中海洋胶原肽含量分别为2.25%、4.50%和9.00%),每组12只,长期单笼喂养,测定12、18、24月龄时血清中睾酮水平及12、18月龄时血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肤过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 对照组在12、18、24月龄时血清睾酮含量分别为0.89±0.16、0.58±0.23和0.30±0.11 ns/ml;海洋胶原肤干预后,12月龄时,4.50%剂量组血清睾酮含量显著高于对照组,而9.00%剂量组却显著减少;18月龄时各组血清睾酮含量较12月龄时均显著降低.12月龄时,与对照组相比,各剂量组血清MDA含量显著降低,SOD及GSH-Px活性显著升高.18月龄时,4.50%、9.00%剂量组血清MDA含量显著低于对照组,3个剂量组血清SOD活性仍显著高于对照组.随年龄增长,各组血清MDA含量均呈现上升趋势,SOD和GSH-Px活性均呈现下降趋势.结论 老龄雄性SD大鼠血清睾酮水平呈增龄性递减趋势,海洋胶原肽可通过其抗氧化作用影响雄性SD大鼠老年时血清睾酮含量.
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基于蛋白质组学、肽组学的中药动物药活性组分的研究
动物药是我国传统中药的重要组成部分,但由于其组成复杂,分离较困难,与植物药相比动物药的研究相对落后.动物药组成中蛋白质占很大比例,目前已从动物药中发现许多蛋白质和多肤类活性组分.蛋白质组学、肤组学技术是快速发展的大规模表征蛋白质、肽的技术,借助蛋白质组学、肽组学快速、高效的特点,将蛋白质组学、肽组学技术应用于动物药中蛋白质和肽类活性组分的研究是动物药新的研究方向.本文综述了近年来应用蛋白质组学和肤组学技术研究动物药中蛋白质和肽类活性组分的进展.
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应用噬菌体随机肽库研究丙型肝炎病毒核心蛋白B细胞抗原表位
目的 探索利用特异多克隆抗体结合噬菌体递呈(phage display)随机肽库,进行病原体蛋白质的B细胞抗原表位研究.方法 采取特异抗原→特异多克隆抗体→相应抗原表位的技术路线.所选研究对象为丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白.实验分三步:(1)抗HCV核心蛋白多克隆抗体的制备.用活化的Sepharose 4B耦联重组的HCV核心蛋白,亲和层析纯化丙型肝炎病人血清中特异的抗核心蛋白多克隆抗体.(2)随机肽库的生物淘洗(biopanning).以纯化的多克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体递呈的随机七肽库.(3)阳性噬菌体克隆的鉴定.将筛选的噬菌体克隆进行ELISA检测、DNA测序以及竞争抑制试验等,后分析所获资料.结果 七肽氨基酸序列分析表明,HCV核心蛋白存在着至少3个B细胞抗原位点,其中19～25aa间(PQDVKFP)的线性表位是该蛋白的优势表位,证实了本研究策略的可行性.结论 本技术路线可以有效地进行HCV核心蛋白的B细胞抗原表位研究.由此推论,此方法也可移植于其它病原微生物抗原或自身抗原的表位研究,继而为基于抗原表位水平的特异诊断试剂的研制、疫苗的设计提供依据.
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用竞争结合法检测HLAⅠ类分子抗原呈递能力
目的建立弱酸处理后荧光素标记肽竞争结合法分析MHCⅠ类分子抗原呈递能力的方法,并评估其实用性.方法pH2.7～3.1的柠檬酸缓冲液对B淋巴母细胞进行短时处理后,即用IMDM培养液中和pH,然后加入β2微球蛋白、荧光素标记的9肽及竞争肽共同孵育,FACs检测细胞表面的平均荧光强度,以达到50%抑制所需的竞争肽浓度作为衡量竞争肽与MHC分子结合能力的指标.结果通过不同pH的柠檬酸缓冲液处理、处理后不同时间加β2微球蛋白和/或荧光素标记肽、加入不同稀释度的竞争肽等角度,对方法进行评估,结果显示本方法操作简便、结果可靠、非特异性吸附小.结论在排除其它MHCⅠ类分子的干扰后,本方法适合在国情条件下广泛开展MHCⅠ类分子抗原呈递能力及T细胞肽表位筛选等研究.
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靶向肿瘤血管多肽显像的研究进展
肿瘤细胞如正常组织一样,存活需要氧气和代谢, 而血管生成对于肿瘤的生长是一个重要的过程.新生肿瘤血管与正常血管相比有独特的特点:新生肿瘤血管结构排列紊乱,扭曲并且扩张,它们在其内膜的表面表达特异性标记物,可以利用其表面的特异性标记物选择性靶向肿瘤血管.本文对近年来有关特异性靶向肿瘤血管的多肽显像,尤其对三肽序列精氨酸-精氨酸-亮氨酸(Arg-Arg-Leu, RRL)进行详细的介绍.
关键词： 肽 肿瘤 血管 精氨酸-精氨酸-亮氨酸 -
18F标记肽类正电子示踪剂制备与应用研究进展
随着PET的广泛应用,正电子核素[18F]氟标记肽类示踪剂受到关注.目前已有多种18F标记多肽的方法,其中18F标记辅基法为常用,Al18F络合法及点击化学法被认为有发展前景.迄今为止,18F标记肽类正电子示踪剂种类较少,主要集中于受体PET成像,部分已进入临床研究阶段,显示出良好的临床应用前景.本文对此类示踪剂的制备方法与应用研究进展做一综述.
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卵巢癌抗独特型抗体6B11特异性表位肽在体内诱导抗原特异性体液免疫应答
目的探讨卵巢癌抗独特型抗体6B11表位多肽与诱导免疫应答之间的关系.方法采用化学合成的方法,合成抗独特型抗体6B11轻重链可变区的六条CDR区,分别以三种不同浓度免疫BALB/c小鼠.采用ELISA的方法检测免疫鼠血清,进行体内免疫学功能研究.结果 6B11抗独特型抗体的六条CDR肽分别加入佐剂免疫小鼠后,其中有两条肽可以诱导出Ab3,分别为重链的CDR2区和轻链的CDR2区.结论这两条肽作为后选肽有可能是6B11抗独特型抗体特异性的CTL表位.
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子痫前期患者胎盘组织中松弛素受体的表达
目的 探讨子痫前期患者胎盘组织中松弛素受体LGR7表达与子痫前期发病的关系.方法 应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法和RT-PCR技术检测20例正常孕妇(正常组)及26例重度子痫前期孕妇(子痫前期组)胎盘组织中松弛素受体LGR7蛋白及mRNA的表达.结果 (1)两组孕妇的胎盘组织中均有松弛素受体LGR7表达,主要定位于胎盘绒毛滋养细胞的细胞膜上,在细胞滋养细胞、合体滋养细胞中都有较高的表达水平.(2)正常组胎盘组织中松弛素受体LGR7蛋白的表达水平为0.912±0.003,子痫前期组为0.625±0.037,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)正常组胎盘组织中松弛素受体LGR7 mRNA表达水平为0.776±0.021,子痫前期组为0.393±0.075,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 子痫前期患者胎盘组织中松弛素受体表达水平下降,可能与子痫前期的发病有关.
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天蚕素 B-黄体生成素释放激素结合部位重组基因的构建及其抑癌功能的研究
目的 构建天蚕素B-黄体生成素释放激素结合部位(CB-LHRH')重组基因,探讨CB-LHRH'蛋白成为新型抗肿瘤靶向药物的可能性.方法 设计并人工合成CB-LHRH'重组基因序列,应用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达目的 蛋白并通过蛋白斑点印迹法鉴定,采用二甲氧唑黄(XTT)比色法检测不同剂量的目的 蛋白对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3(LHRH受体阴性)和子宫内膜癌细胞株HEC-1B(LHRH受体阳性)细胞的生长抑制率,并进行镜下形态观察.结果 蛋白斑点印迹法检测结果显示,重组杆状病毒感染的Sf9细胞裂解液呈现棕色,证实CB-LHRH'蛋白已表达.重组杆状病毒感染的昆虫细胞系Sf9细胞裂解液对SKOV3及HEC-1B细胞的生长抑制率,随作用时间的延长和剂量的增加而增加,SKOV3细胞的生长抑制率从(5.03±0.08)%增加至(53.24±1.22)%,HEC-1B细胞的生长抑制率从(5.13±0.37)%增加至(56.16±1.08)%.相同剂量的重组杆状病毒感染的St9细胞裂解液,作用相同时间,其对HEC-1B细胞的生长抑制率高于SKOV3细胞,差异有统计学意义(P＜0.01).经重组杆状病毒感染的Sf9细胞裂解液作用后,镜下可见癌细胞出现明显改变甚至成片坏死崩解为无定形的颗粒状物质.结论 CB-LHRH'蛋白可有效杀伤LHRH受体阳性的HEC-1B细胞,有望成为治疗表达LHRH受体的肿瘤的抗肿瘤靶向药物.
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脂质运载蛋白2及其受体与子痫前期发病的关系
目的 研究脂质运载蛋白2(LCN-2)及其受体(NGALR)与子痫前期发病的关系.方法 选择2010年12月至2011年4月在青岛大学医学院附属医院住院分娩的轻度子痫前期孕妇26例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇38例(重度子痫前期组)；以同期正常晚期妊娠妇女25例为对照组.采用ELISA方法检测各组孕妇血清LCN-2水平,采用逆转录PCR技术检测各组孕妇胎盘组织中LCN-2、NGALR mRNA的表达水平,采用蛋白印迹法检测胎盘组织中LCN-2、NGALR蛋白的表达水平.结果 (1)轻度及重度子痫前期组孕妇血清LCN-2水平分别为(58 ±20)、(90±18) μg/L,均明显高于对照组的(19±6) μg/L,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期组,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LCN-2 mRNA表达水平分别为0.55±0.14、0.61 ±0.14,均明显高于对照组(0.28±0.16),分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LCN-2蛋白表达水平分别为2.2±0.4、2.4±0.5,均明显高于对照组的1.4±0.4,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中NGALR mRNA表达水平分别为0.46±0.11、0.46±0.14,对照组为0.45±0.15,分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)；轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中NGALR蛋白表达水平分别为2.7±0.8、3.0±0.9,对照组为2.7±0.9,分别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(4)轻度及重度子痫前期组孕妇血清LCN-2水平与胎盘组织LCN-2mRNA、蛋白的表达水平及收缩压、舒张压均无明显相关性(P＞0.05),与24h尿蛋白总量及血尿酸水平有相关性(r=0.565、0.476,P＜0.01).结论 血清LCN-2水平与子痫前期病情进展密切相关；胎盘组织LCN-2表达增高可能是对子痫前期的代偿反应.
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婴儿全身性玻璃样变性一例并文献复习
目的 总结婴儿全身性玻璃样变性(ISH)的临床、病理及基因突变的特点.方法 报道2015年海口市人民医院儿科1例婴儿全身性玻璃样变性的临床病例,结合文献,分析婴儿全身性玻璃样变性的诊断及鉴别诊断.结果 患儿男,1岁1月龄,生后1个月开始出现四肢关节僵硬,活动受限,双膝关节屈曲状并呈内翻样改变,生后3个月,全身出现红色皮疹,皮疹逐渐变为紫红色,以背部为主,高于皮肤表面,触之硬,压之不褪色.双膝X线示双膝关节内翻样改变.颈部病变皮肤组织病理为真皮呈玻璃样变性.基因检测:ANTXR2基因外显子13,c.1073delC/c.1074delT缺失突变,为ISH的热点突变,确诊ISH.分别以“婴儿全身性玻璃样变性”“infantile systemic hyalinosis"为关键词,在万方网、PubMed及中国知网上检索1978至2015年国内外相关文献,检索到国外病例48例,中国台湾病例1例.病例均有关节挛缩、关节活动受限及身材矮小,另有皮肤丘疹及色素沉着(40例)、牙龈增生(36例)、肛周结节(32例)、皮肤增厚(31例)、骨质疏松(30例)、迁延性腹泻(30例)、反复感染(25例).39例皮肤病理检查均有玻璃样变性.其中18例有基因检测资料,致病基因均位于染色体4q21位置,被编码为CMG2/ANTXR2,其中移码突变9例,错义突变8例,剪接位点突变1例.发病年龄多于生后4个月内,大多因反复感染而在2岁左右死亡.结论 ISH表现为关节挛缩、活动受限、皮肤特殊皮疹及色素沉着;病理检查可见真皮呈玻璃样变性;ISH致病基因位于染色体4q21,多于婴幼儿期死于反复感染.
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肾上腺髓质素及其受体在增生性玻璃体视网膜病变前膜中的表达
目的探讨肾上腺髓质素(ADM)及其受体(ADMR)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)前膜中的表达.方法标本取自2001年7～11月在我院眼科研究所确诊为孔源性视网膜脱离合并PVR行玻璃体手术的10例连续病例,PVR均为C级以上,采用原位杂交法对术中所取标本的ADM和ADMR mRNA表达情况进行观察.结果10例增生性玻璃体视网膜病变前膜中有7例ADM和ADMR mRNA阳性.阳性细胞内分布不均匀,部分细胞以胞质阳性为主,部分细胞的阳性主要出现在胞核.结论ADM和ADMR在PVR前膜中表达,PVR的发病过程中有ADM和ADMR的参与.(中华眼科杂志,2004,40:317-320)
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人源肽抗生素hPAB-β突变体及其重组杆状病毒的构建
确定人工合成的人肽抗生素hPAB-β的抗菌活性.利用已知肽抗生素hBD-2的晶体结构坐标进行hPAB-β的同源模建;设计hPAB-β突变体;用PCR法生成hPAB-β突变体基因,分别构建转移载体和重组杆状病毒.结果表明,合成肽hPAB-β在正确复性后具有较好的杀菌活性,将4种突变体基因插入转移载体pFAST HTa,筛选阳性重组子pFAST-hPAB-β并转化DH10Bac大肠杆菌,获得了重组杆状病毒,为筛选活性强而结构更为简单的hPAB-β突变体奠定了基础.
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人肽抗生素hPAB-β重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达
目的构建人肽抗生素hPAB-β重组质粒,并在大肠杆菌中进行表达,为大量制备hPAB-β奠定基础.方法通过PCR将hPAB-β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解,将修改的目标片段克隆到pFAST-HTa质粒中,挑取阳性重组子,酶切出目标片段再亚克隆到pQE32-CP中,含阳性重组子的工程菌用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,进一步以亲和层析纯化融合蛋白,用羟胺裂解分析.结果构建的pFAST-hPAB-β重组质粒经酶切可得到约230bp的片段,与预期大小相符,测序结果表明其序列正确;构建的pQE32-CP-hPAB-β重组表达质粒酶切亦可切出230bp的片段,测序结果表明序列和阅读框均正确;重组表达质粒在大肠杆菌中能表达出Mr约27×103大小的蛋白,表达量约占细菌总蛋白的43%,该融合蛋白以包涵体形式存在,通过亲和层析可获得该蛋白,纯度为80.4%,该融合蛋白经羟胺裂解1h即可得到与合成肽大小相符的小肽.结论本研究成功构建了含hPAB-β重组质粒的工程菌,为进一步研究和大量制备hPAB-β创造了前提.
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人源性多肽pCM-19抗菌机制的初步研究
目的:初步分析人源性多肽pCM-19的抗菌作用机制.方法:利用荧光素掺入破损细胞膜的原理,采用流式荧光激活细胞分析(FACScan)和扫描电子显微镜分析pCM-19对靶菌膜的作用机制.结果:FACS分析法结果显示pCM-19处理后的大肠杆菌PI着染细菌比例明显高于未处理组,并且随作用时间的延长,PI着染BL-21菌比例增大,20 min时达高水平,20 min以后反而降低;扫描电子显微镜观察到pCM-19处理后的大肠杆菌有明显的表面形态学的改变,如细菌体积缩小、细菌表面出现皱缩、凹陷似有孔洞形成.结论:人源性多肽pCM-19可能作用于细菌细胞壁和(或)细胞膜,通过改变其通透性而发挥杀菌作用.
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液质联用技术鉴定rLTB的结构
目的利用电喷雾离子化为接口(ESI)的高效液相色谱/质谱联用技术(HPLC-MS),鉴定重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)氨基酸序列结构的正确性.方法利用SDS-PAGE分离、呈现蛋白混合物,胰蛋白酶原位水解rLTB,HPLC-MS联机制备肽指纹图,分析肽指纹图获得rLTB氨基酸全序列信息.结果 rLTB的全序列结构与理论的全序列结构完全一致.结论改进的HPLC-MS测定条件稳定,提高了质谱灵敏度,结合肽指纹图的分析结果,可以验证蛋白质的氨基酸序列.
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脑蛋白水解物组份测定及对小鼠缺氧和东莨菪碱所致记忆障碍的影响
目的:研究脑蛋白水解物的组份测定及小鼠缺氧和记忆障碍的疗效.方法:用氨基酸分析仪、高效液相色谱仪、SDS凝胶电泳和琥珀酸脱氢酶法测定脑蛋白水解物的组成与活性.用常压耐缺氧实验和记忆获得障碍法测定脑蛋白水解物的疗效.结果:脑蛋白水解物的氨基酸与小分子肽的比例分别为80%与20%左右.脑蛋白水解物能增强脑细胞琥珀酸脱氢酶活性并对动物缺氧及记忆再现障碍有明显的改善作用.结论:脑蛋白水解物富含人脑必须氨基酸及小分子肽,能改善脑细胞功能活性.
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短肽在靶向药物递送系统中的研究进展
近年来研究发现许多肿瘤细胞表面高表达一些肽类受体,这些肽类受体与相应的配体亲和性高,能以配体-受体方式特异性结合.以小片段活性肽作为导向物形成复合物而发展的靶向药物递送系统,能够将药物定向转运到靶细胞内,显示了良好的研究价值和应用前景.如蛙皮素/胃泌素释放肽受体介导的靶向药物递送系统、生长抑素受体介导的靶向药物递送系统、十肽SynB,受体介导的靶向药物递送系统、黄体酮释放激素受体介导的靶向药物递送系统及其他肽类受体介导的靶向药物递送系统,其中短肽作为靶向基团与阿霉素、吡咯阿霉素、甲氨蝶呤、顺铂和喜树碱等结合形成高效的复合物,用于表达有相应受体的肿瘤,获得靶向治疗的研究非常有意义.
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三维氨基酸结构描述子矢量SVRDF及其在肽QSAR中的应用
为了建立一种新型氨基酸结构描述子并用于多肽定量构效关系研究,本研究从天然氨基酸150个radial distribution function (RDF)指数经主成分分析得出一种新3D氨基酸描述子-SVRDF(principal component scores vector of radial distribution function),应用该描述子并通过偏小二乘(PLS)对苦味二肽、催产素及促凝血酶原激酶抑制剂3个体系建立定量构效关系模型.对3个体系建模复相关系数(R2cum)与交互检验复相关系数(Q2cum)分别为0.766和0.724;0.941和0.811;0.996和0.919.研究结果表明,SVRDF描述子能够系统地表征肽与生物活性相关的结构信息,有望成为多肽定量构效关系研究中一种有效的结构表征方法.
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T7肽修饰的载长春新碱低密度脂蛋白纳米粒的制备及脑胶质瘤靶向性和治疗作用评价
本研究的目的是制备T7肽修饰的载长春新碱低密度脂蛋白(T7 peptide modified vincristine loaded low density lipoprotein,T7-LDL-VCR)纳米粒,用于血脑屏障(blood brain barrier,BBB)和脑肿瘤细胞双级靶向药物递送.首先通过超速离心法从人血浆中提取LDL纳米粒,然后采用干膜法将药物载入纳米粒脂质内核,再将T7肽共价修饰于纳米粒表面,表征其粒径、包封率和靶头连接效率.以DiR为探针,通过活体成像观察T7-LDL-VCR纳米粒在荷脑胶质瘤小鼠脑部中的分布情况,通过核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)观察纳米粒对脑胶质瘤的治疗作用,后对小鼠的相对肿瘤体积和生存曲线进行测定.结果表明:制备的T7-LDL-VCR纳米粒粒径约30 nm,包封率为30.1％,T7-VCR-LDL的靶头连接效率为63.88％;在小鼠体内的脑靶向性及对脑胶质瘤治疗作用良好:T7-VCR-LDL、LDL-VCR和VCR的相对肿瘤体积分别为30％,51.50％和79.25％;中位生存期为36天,高于VCR-LDL 1.38倍、游离VCR 1.85倍和对照组2倍.本研究表明,T7-LDL-VCR具有BBB和脑肿瘤细胞双级靶向能力,是一种有前景的靶向治疗制剂.
