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在卵巢上皮性癌中PTEN及Survivin的表达及相关性
目的 研究在卵巢上皮癌中抑癌基因PTEN及凋亡抑制因子Survivin的表达及二者是否相关.方法 应用免疫组化SP法,检测PTEN、Survivin蛋白在46例良性上皮性卵巢肿瘤、40例正常卵巢组织、76例上皮性卵巢癌中的表达.结果 在卵巢上皮性癌中PTEN蛋白的表达水平明显低于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,差异有显著性(P＜0.05);Survivin蛋白的表达与PTEN蛋白相反,在卵巢上皮性癌中的表达明显高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,差异有显著性(P＜0.05),两者的表达呈负相关(r=-0.527,P=0.001).二者的表达与年龄及病理类型无关(P＞0.05),与临床分期、分化程度及是否转移相关(P＜0.05).结论 Survivin蛋白及PTEN的表达与卵巢上皮性癌的发生、发展有关;二者的联合检测有助于判断卵巢上皮性癌的恶性程度及预后.
关键词： 卵巢上皮性癌 PTEN基因 Survivin基因 -
PTEN基因转染对卵巢癌SKOV3细胞生长抑制和诱导凋亡的研究
目的 研究外源性PTEN基因转染对人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖抑制和凋亡诱导作用,探索卵巢癌的新治疗方法.方法 将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体pBP转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分组为pBP-FIZN、pBP和SKOV3组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察对SKOV3细胞的生长抑制作用.Annexin V/PI双标记流式细胞术检测转染后对SKOV3细胞的凋亡诱导作用,Annexin V/PI双染荧光显微镜观察细胞凋亡形态.结果 MTT检测.0.1、0.2和0.3μg/孔PTEN质粒DNA转染SKOV3细胞48 h,生长抑制率分别为13.31%、27.67%、42.25%,不同时间点(24、48和72 h)检测,细胞生长抑制率存在剂量-时间依赖关系.光镜观察,转染24 h后即可见明显的形态学改变.流式细胞术检测,4μg/孔PTEN 质粒DNA转染SKOV3细胞24和48 h后,细胞凋亡率分别达38.08%和65.60%(P<0.01).Annexin V/PI双染荧光显微镜观察,细胞凋亡率存在时间-剂量以来关系.结论 PTEN基因转染抑制人卵巢癌细胞增殖并显著诱导细胞凋亡.
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树舌多糖GF对抑癌基因PTEN影响的研究
目的:观察树舌多糖GF对PTEN基因的影响.方法:用打点法(dot blot)和蛋白印迹技术法(westernblot)检测PTEN在肿瘤组和树舌多糖组的表达情况.结果:PTEN在肿瘤组的表达为阴性,在树舌多糖组为阳性.结论:PTEN失表达是肿瘤发生的标志之一,通过诱导HepA瘤细胞PTEN的表达或阻止其缺失是树舌多糖抗肿瘤的作用机制之一.
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PTEN基因转染对人舌鳞癌细胞系SCC-4凋亡的影响及其作用机制
目的 探讨PTEN基因转染对人舌癌细胞系SCC-4凋亡的影响及其作用机制.方法 将转染PTEN的SCC-4(pEGFP-PTEN-SCC-4)细胞作为实验组,以SCC-4和pEGFP-SCC-4作为对照,流式细胞仪检测3组细胞凋亡情况；应用Western blotting法检测3组中Akt、p-Akt、Bim的表达情况.结果 流式细胞仪检测结果显示,实验组细胞凋亡率比对照组明显增高(P＜0.01)；Western blotting结果显示,各组细胞间总Akt水平差异不明显；p-Akt在实验组中表达明显低于对照组；Bim在实验组中表达明显高于对照组.结论 PTEN转染能够诱导SCC-4的凋亡,可能机制是负调控PI3K/Akt信号通路并上调Bim的表达.
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抑癌基因PTEN在急性白血病中的表达及意义
目的 研究在急性白血病(AL)中抑癌基因PTEN的表达情况,并对急性白血病发生与预后的关系进行探究分析.方法 使用聚合酶链式反应法(PCR)对2010年2月至2011年8月安徽医科大学第一附属医院血液科就诊的住院及门诊收治的111例急性白血病(AL)患者抑癌基因的表达情况进行检测,并分析PTEN表达情况与临床指标之间的相关性.结果 111例AL患者中检测到34例患者抑癌基因PTEN表达阴性缺失,AL患者中PTEN(-)患者的完全缓解率低于PTEN(+)的患者(P＜0.05);PTEN基因阴性缺失与骨髓原始细胞百分比、外周血白细胞计数存在正相关.结论 急性白血病的发生可能有抑癌基因PTEN的参与,其对急性白血病患者的转归和复发具有重要意义.
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PTEN在脑胶质瘤表达的定性研究
目的探讨抑癌基因PTEN在脑胶质瘤的表达情况及其临床意义.方法应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法,检测45例胶质瘤组织与23例正常脑组织PTEN基因外显子1-9、1-8、5-9、5-8 mRNA失表达情况.结果在45例肿瘤组织中,PTENmRNA平均失表达率为55.6%(25/45).正常脑组织无1例失表达.胶质瘤组织和正常脑组织中PTENmRNA失表达水平存在明显差别(P＜0.05).胶质瘤中PTENmRNA失表达水平与患者年龄、性别无关,但随着恶性程度分级增高其失表达水平明显升高(P＜0.05).结论 PTENmRNA表达水平的异常在胶质瘤的发生和发展过程中起着重要作用.
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AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义
目的 探讨脑膜瘤1(MN1)基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病(AML)病情发展及预后的关系.方法 采用RT-PCR技术检测38例AML病人(初治组16例,缓解组12例,复发组10例)骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组.结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%.初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降(F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P＜0.01);缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义(q=2.121、2.756,P＜0.05);在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(q=2.361、2.723,P＜0.05).MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关(r=-0.321,P＜0.05).结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标.
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Ad-PTEN对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制
目的 探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)和LY294002对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制.方法 在MCF-7中导入Ad-PTEN和PI3K抑制剂LY294002.Western blotting法检测PTEN/PI3K/AKT及其下游相关蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V法检测细胞凋亡率.结果 与DMSO组、空载病毒和LY294002组相比,联合组(LY294002+Ad-PTEN)PTEN 蛋白明显上调,而PI3K/AKT及下游蛋白水平显著下降;联合组细胞阻滞于G0/G1期;细胞凋亡率增加明显;自培养第2天起,联合组细胞生存率呈下降趋势.结论 Ad-PTEN联合LY294002通过阻滞细胞周期、促进细胞凋亡抑制MCF-7的增殖能力,两者具有正向协同作用;其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路下游蛋白有关.
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PTEN基因表达与胃癌细胞侵袭力的相关性研究
目的探讨PTEN基因mRNA表达与胃癌细胞体外侵袭力的关系.方法采用Boyden小室法测定四种胃癌细胞(SGC-7901、BGC-823、MGC-803、HGC-27)的体外侵袭力、运动力,RT-PCR法检测四种胃癌细胞的PTEN基因mRNA表达水平.结果胃癌细胞体外侵袭力为HGC-27(48±2)、MGC-803(28±2)、BGC-823(30±3)、SGC-7901(13±2);PTEN基因mRNA表达水平为SGC-7901(0.336±0.079)、BGC-823(0.232±0.063)、MGC-803(0.228±0.056)、HGC-27(0.113±0.047);两两比较,P＜0.01,＞0.05,＜0.05.相关分析显示,胃癌细胞体外侵袭力随PTEN基因mRNA表达增高而降低,PTEN基因mRNA表达及胃癌细胞体外侵袭力与细胞分化程度相关.结论 PTEN基因参与胃癌的发展过程,并与胃癌的部分生物学行为有关,PTEN基因mRNA表达水平对评价胃癌细胞体外运动侵袭力具有重要价值.
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人骨肉瘤组织PTEN蛋白的表达及临床意义
目的:探讨抑癌基因PTEN在人骨肉瘤及骨软骨瘤组织中的表达.方法:应用免疫组化(SP)法,检测36例骨肉瘤组织标本中PTEN蛋白的表达,并与15例骨软骨瘤进行对照研究.结果:36例骨肉瘤组织中,PTEN蛋白的阳性表达率为75%,骨软骨瘤组织中阳性率为93.33%,二组间差异无统计学意义.PTEN蛋白表达与骨肉瘤的Enneking分期及组织学分型也无相关性.结论:PTEN蛋白通过PTEN/Akt信号传导途径抑制肿瘤细胞凋亡的作用未在骨肉瘤中表达出来,表明PTEN/Akt信号传导途径不能控制骨肉瘤细胞的增殖与凋亡.
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支气管哮喘患儿PTEN基因突变分析
目的 探讨10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)与儿童支气管哮喘(哮喘)的相关性及其与嗜酸性粒细胞(EOS)的关系,为哮喘的发病机制及治疗提供理论依据.方法 30例哮喘复发患儿(临床缓解期)作为哮喘组,30例健康儿童设为健康对照组,2组儿童均于清晨空腹留取外周静脉血1mL,制备血涂片后提取全基因组DNA,应用聚合酶链反应及克隆、基因测序等方法分析2组儿童PTEN基因第5、第8外显子基因型.并于高倍镜下进行其外周血EOS计数.结果 哮喘组患儿PTEN基因第8内含子(intron8)发现突变,突变率为86.7％(26/30例),健康对照组未发现基因突变.哮喘组患儿外周血EOS计数明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.001)；发生基因突变的哮喘患儿外周血EOS计数高于无突变的哮喘儿童,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PTEN基因在哮喘儿童中存在突变,可能通过影响RNA的选择性剪切及抑制EOS的活化和趋化在哮喘的发病中发挥作用.
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PTEN基因在宫内发育迟缓大鼠肝脏胰岛素敏感性变化中的作用
目的 通过检测PTEN基因在宫内发育迟缓(IUGR)大鼠肝脏中的表达,探讨PTEN基因在IUGR致胰岛素抵抗(IR)中的意义.方法 通过孕期低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,检测90d雄性IUGR大鼠胰岛素敏感性,采用反转录(RT)-PCR技术检测90 d IUGR组及对照组仔鼠肝脏PTEN基因mRNA表达水平,Western blot检测肝脏组织中丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)蛋白及磷酸化AKT蛋白表达水平.采用SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果 与对照组比较,IUGR雄性仔鼠平均出生体质量显著降低(t=14.73,P＜0.05),空腹血糖显著升高(t=-3.11,P=0.011),空腹胰岛素显著升高(t=-5.01,P=0.001),胰岛素抵抗指数显著升高(t=-3.06,P=0.013),胰岛素敏感指数显著降低(t=2.80,P=0.019),PTEN基因mRNA表达显著升高(t=-2.40,P =0.04),AKT蛋白表达虽然无统计学差异,但磷酸化AKT蛋白表达显著下降(t=3.02,P=0.01),PTEN与胰岛素抵抗指数呈正相关(r=0.928,P ＜0.05),与磷酸化AKT的表达呈负相关(r=-0.411,P＜0.05).结论 PTEN可能是IUGR致IR的重要调节分子之一.
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抑癌基因PTEN与血液系统恶性肿瘤的相关性研究
作为继P53、PRb之后重要的抑癌基因,PTEN(phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten)的研究已成为肿瘤学研究的热点.已有研究报道了PTEN+/-小鼠易发生自发性血液系统肿瘤[1].现对PTEN抑癌基因与血液系统恶性肿瘤关系的新近研究进展作一综述.
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PTEN和p53在视网膜母细胞瘤中的表达及临床意义
目的 检测视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)组织中PTEN基因和p53基因的蛋白表达水平并探讨二者在RB发生发展中的作用以及相关性.方法 采用 PV-9000免疫组织化学二步法,检测40例RB组织和16例正常视网膜组织中PTEN和p53蛋白的表达,统计分析不同临床和病理阶段RB表达PTEN和p53的差异及其相关性.结果 (1)PTEN在正常视网膜组织中的阳性表达率为100%,显著高于RB 55%(P＜0.01);PTEN蛋白的阳性表达率与临床分期、病理分型以及是否伴有视神经浸润有关(P＜0 05);与性别差异无关(P＞0.05).(2)p53在正常视网膜组织中不表达,在RB组织中阳性表达率为57.5%,差异有统计学意义(P＜0 05);p53蛋白的阳性表达率与临床分期、病理分型以及是否伴有视神经浸润有关(P＜0.05);与性别差异无关(P＞0 05).(3)PTEN和p53在RB中的蛋白表达呈负相关(r=-0.371 0,P＜0.05).结论 PTEN 和p53可作为判断RB恶性程度和预后的指标.PTEN 可作为RB早期诊断的分子标记物之一.
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人PTEN基因RNA干扰及其RESC救援慢病毒载体的构建与鉴定
目的:构建人PTEN基因RNA干扰(RNAi)及其逃避RNAi策略结构(RESC)救援的慢病毒载体.方法:利用Invitrogen公司在线软件,针对已筛选确定的PTEN基因RNAi有效靶序列,设计并合成靶序列的oligoDNA,退火形成双链DNA,与经Xba I和XhoⅡ酶切后的pFLRu-GFP载体连接构建成pFLRu-U6-shPTEN慢病毒载体.在此基础上,引入外源设计的PTEN mRNA,与经EcoR I和BamH I酶切后的pFLRu-U6-shPTEN载体连接,从而产生在同一个载体内兼有人PTEN基因shRNA及其救援cDNA同时表达的RESC慢病毒载体pFLRu-U6-rrshPTEN.2者均转入到大肠杆菌XL10感受态细胞,制备质粒并用酶切及测序鉴定.分别用pFLRu-U6-shPTEN、pFLRu-U6-rrshPTEN与pCMV-dR8.2ΔR和pCMV-VSV-G质粒共转染293/包装细胞,包装产生2种慢病毒,收集病毒上清,系列稀释法检测病毒悬液的滴度.结果:氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆、酶切鉴定、U6前引物测序鉴定结果显示pFLRu-U6-shPTEN和pFLRu-U6-rrshPTEN均为阳性克隆,且2种慢病毒的滴度分别为6.6 × 105和5.6 × 105pfu/mL.结论:成功构建出人PTEN基因RNAi及其RESC慢病毒载体.有效地避免了由于脱靶效应所引起的假阳性结果对实验的干扰,为研究PTEN基因功能提供了稳定的转染细胞载体.
关键词： PTEN基因 慢病毒载体 RNA干扰 逃避RNA干扰策略结构 脱靶效应 -
食管鳞癌细胞中 PTEN基因表达水平及突变位点分析
目的：探讨PTEN基因在食管鳞癌细胞中的表达水平及突变情况。方法：采用RT-PCR技术检测高分化的Eca109、低分化的EC 9706和EC1食管鳞癌细胞株细胞中PTEN mRNA的表达水平，并克隆PTEN基因全长，与野生型PTEN基因序列比对，分析突变情况。结果：EC1、EC9706、Eca109细胞株中PTEN mRNA的表达水平分别为（0．06±0．02）、（0．24±0．02）、（0．41±0．01），3株细胞中PTEN mRNA 的表达水平差异有统计学意义（F ＝306．330，P＜0．001），Eca109细胞中PTEN mRNA的表达水平高于 EC9706和 EC1细胞（P＜0．05）。3株细胞中PTEN基因均存在不同程度突变，突变主要集中在外显子5和8。结论：食管鳞癌细胞中PTEN表达水平与细胞的分化程度有关，PTEN基因突变与食管鳞癌的发生发展有关。
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抑癌基因PTEN单核苷酸多态性与鼻咽癌的相关性
目的 探讨抑癌基因PTEN单核苷酸多态性与佳木斯地区汉族人群鼻咽癌的关系.方法 选取2008年9月至2018年1月佳木斯大学第一附属医院收治的132例鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和73例体检健康者(对照组)的血样,提取全基因组DNA,采用限制性片段长度多态性分析技术检测rs532678和rs701848的多态性,分析抑癌基因PTEN单核苷酸多态性与鼻咽癌的关系.结果 2组受试者rs532678和rs701848位点的基因型及等位基因频率分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05).对照组受试者PTEN基因rs532678位点的CC、CT、TT基因型频率分别为0.630、0.342、0.027,C、T等位基因频率分别为0.801、0.198;鼻咽癌组患者PTEN基因rs532678位点的CC、CT、TT基因型频率分别为0.716、0.265、0.015,C、T等位基因频率分别为0.852、0.147;2组受试者PTEN基因rs532678位点的基因型和等位基因频率分布比较差异均无统计学意义(P>0.05).对照组受试者PTEN基因rs701848位点的CC、CT、TT基因型频率分别为0.657、0.342、0.000,C、T等位基因频率分别为0.828、0.171;鼻咽癌组患者PTEN基因rs701848位点的CC、CT、TT基因型频率分别为0.424、0.500、0.075,C、T等位基因频率分别为0.674、0.325;鼻咽癌组rs701848位点CT、TT基因型频率和T等位基因频率显著高于对照组(P<0.05),CC基因型频率和C等位基因频率显著低于对照组(P<0.05).PTEN基因rs701848位点CT+TT基因型个体罹患鼻咽癌的风险较高(P<0.05,OR=2.606,95％可信区间下限为1.439,上限为4.720).携带CT+TT基因型个体的鼻咽癌发病风险是携带CC型个体的2.606倍.结论 抑癌基因PTEN rs532678位点多态性与鼻咽癌易感性无关;rs701848位点多态性与鼻咽癌易感性相关,携带CT+TT基因型的个体具有较高的鼻咽癌发病风险.
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食管癌中抑癌基因PTEN研究进展
目的了解抑癌基因PTEN在食管癌(EC)中的新研究进展.方法检索并分析近5年国内外有关PTEN与EC研究的文献.结果在EC组织中,PTEN基因突变发生频率比较低,但PTEN蛋白表达下调则很普遍,并且与EC的病理分级和预后相关.结论抑癌基因PTEN低表达可能参与了EC的发生发展,进一步研究EC与PTEN基因的关系有重要的价值.
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3'-大豆苷元磺酸钠对前列腺癌细胞及PTEN基因的影响
目的 通过观察3'-大豆苷元磺酸钠对前列腺癌细胞(PC-3)增殖和相关基因表达的影响,探讨预防前列腺癌发病的新药物.方法 将PC-3在F12培养基(含10%小牛血清)中采用开放式单层贴壁培养,实验设溶剂对照组、受试物各6个剂量组,采用MTT法对PC-3的增殖情况进行分析,对3'-大豆苷元磺酸钠作用后的雄激素非依赖型前列腺癌(PC-3)细胞的存活率、细胞毒作用进行了研究.结果 与双蒸水对照组相比,3'-大豆苷元磺酸钠对PC-3细胞抑制效应具有剂量依赖性,具有诱导前列腺癌细胞(PC-3)凋亡和引起坏死效应,同时诱导PC-3细胞的(PTEN基因)表达.结论 3'-大豆苷元磺酸钠具有明显抑制前列腺癌细胞PC-3增殖效应,并呈剂量依赖性.
关键词： 3'-大豆苷元磺酸钠 PC-3细胞 PTEN基因 -
华蟾素对两株子宫内膜癌细胞生物学行为的影响
目的 研究华蟾素对体外培养的两株子宫内膜癌细胞(PTEN表达完整的HEC-1A细胞和PTEN缺失的Ishikawa 细胞)生物学行为影响并探讨分子机制.方法 以不同浓度华蟾素作用两株子宫内膜癌细胞,MTT和克隆形成法检测细胞增殖;流式细胞法检测细胞周期及凋亡率;Transwell法检测侵袭;RT-PCR和Western blot法检测胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因和蛋白表达.结果 PTEN基因缺失的Ishikawa细胞随华蟾素浓度升高,增殖和侵袭能力明显降低,凋亡率显著升高,G1期细胞比例明显增多,IGF-1R基因和蛋白表达显著下降,HEC-1A细胞对华蟾素作用不敏感.结论 PTEN基因缺失可增强子宫内膜癌细胞对华蟾素的敏感性.
