首页 > 文献资料
-
PTEN与p53基因功能的相互作用
PTEN和p53是两个重要的抑癌基因,他们在细胞周期调控、细胞凋亡以及肿瘤发生发展过程中均发挥重要作用.尽管二者功能及机制各异,p53主要是阻滞细胞周期或诱导细胞凋亡,PTEN主要是阻断细胞接受的外界生存增殖信号,但二者在功能上有交互作用.
-
miR-200a通过调节PTEN影响小鼠肝细胞中AKT/GSK信号通路活性
目的 肝胰岛素抵抗能够导致严重的糖脂代谢紊乱,同2型糖尿病的发病密切相关.miR-200a属于miR-200家族,广泛表达于各个组织中,在许多癌症细胞中高表达.此研究探讨miR-200a通过下游靶基因PTEN调节AKT/GSK信号通路活性的机制,从microRNA角度阐明肝胰岛素抵抗的机制,为胰岛素抵抗的防治提供新的思路.方法 ① 脂质体在小鼠肝脏细胞株HEP1-6中转染miR-200a mimic和miR-200a inhibitor,用Real-time PCR检测细胞中miR-200a水平,并且检测AKT/GSK信号通路;② 用生物信息学方法预测miR-200a的下游靶基因;以双荧光素酶报告分析和Western印迹明确miR-200a的下游基因PTEN.③ 在HEP1-6细胞中共同转染miR-200a和si-PTEN,验证miR-200a通过PTEN调节AKT/GSK信号通路活性.结果 ① 用miR-200a mimic转染HEP1-6细胞,miR-200a水平升高,AKT/GSK信号通路活性增强;用miR-200a inhibitor转染HEP1-6细胞,miR-200a水平降低,AKT/GSK信号通路活性受到抑制;② 双荧光素酶报告分析和Western印迹结果表明,miR-200a能够直接同PTEN3′-UTR结合,抑制PTEN蛋白表达;③ 在HEP1-6细胞中沉默PTEN促进AKT/GSK信号通路活性;同时转染miR-200a和si-PTEN,能够逆转miR-200a inhibitor对AKT/GSK信号通路的抑制作用.结论 在HPE1-6细胞中miR-200a通过调节下游靶基因PTEN影响AKT/GSK信号通路活性.
关键词： miR-200a PTEN基因 AKT/GSK信号通路 肝胰岛素抵抗 糖尿病 -
胆囊癌组织中nm23H1和PTEN基因蛋白表达及其临床意义
目的:探讨nm23H1和PTEN基因蛋白在胆囊癌中表达的意义.方法:应用免疫组化方法,检测52例胆囊腺癌、20例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎组织中nm23H1和PTEN表达水平.结果:在胆囊癌中nm23H1和PTEN表达阳性率分别为51.9%和42.3%,其表达阳性率均明显低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎(P＜0.05).nm23H1和PTEN表达与胆囊癌的分化程度、浆膜浸润和转移密切相关(P＜0.05).nm23H1和PTEN蛋白表达呈正相关(γ=0.56,P＜0.05).结论:检测nm23H1和PTEN基因蛋白表达可作为评价胆囊癌生物学行为的参考指标.
-
PTEN基因的沉默对骨髓间充质干细胞体外生物学特性和体内移植治疗心肌梗死的影响
目的:研究PTEN基因沉默对骨髓间充质干细胞生物学性状的影响,并观察其在心肌梗死区域的存活和增殖情况.为干细胞移植治疗心肌梗死提供更优良的种子细胞.方法:通过脂质体法将PTEN基因特异的siRNA转染入骨髓间充质干细胞.RT-PCR法和Western blot法检测PTEN基因RNAi前后的mRNA和蛋白表达的变化.体外实验采用MTT法描绘细胞生长曲线,流式细胞仪(PI单染法)检测细胞周期,制备细胞缺血缺氧模型,流式细胞仪(Annexin V和PI双染法)检测各组细胞对缺血缺氧的耐受情况.体内实验通过制备动物心肌梗死模型,移植骨髓间充质干细胞,采用荧光显微镜观察细胞的存活和增殖情况.结果:RNAI组的PTEN基因的mRNA和蛋白表达均明显下降,PTEN基因被明显抑制.体外实验:MTT法显示RNAI组的细胞生长活力明显增强.RNAI组的细胞周期向右偏移.RNAI组对缺血缺氧的耐受能力明显增强.体内实验:荧光显微镜显示RNAI组移植的骨髓间充质干细胞在心肌梗死区域的数量明显增多.结论:PTEN基因的沉默能有效地促进骨髓间充质干细胞的增殖,使细胞周期向右偏移,同时能抑制细胞凋亡,增强细胞对缺血缺氧的耐受能力.体内实验也证实,PTEN基因的沉默后的骨髓间充质干细胞更容易在心肌梗死区域存活和增殖,为干细胞移植治疗心肌梗死提供新的思路.
-
PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响
目的 研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响.方法 将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定;pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT法分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素(MMC)、羟基喜树碱和吡柔比星的敏感性变化. 结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达.PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物敏感性明显提高.对吡柔比星和羟基喜树碱的药物敏感性无明显变化. 结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对抗癌药物MMC的敏感性.
-
PTEN基因表达变化在三羟异黄酮抑制肝癌增长中的作用
目的 探讨PTEN基因表达变化在三羟异黄酮(genistein)抑制裸鼠移植入肝癌增长中的作用及其机制.方法 将移植入肝癌裸鼠分为2组,对照组腹腔注入含0.04％二甲基亚砜(DMSO)的RPMI 1640培养基每天0.05 ml/g,Genistein组腹腔注入genistein每天1 mg/kg,3周后观察肝癌增长,并应用同位素试剂盒检测肝癌组织三磷酸肌醇( IP3)含量,逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)分析癌组织PTEN mRNA表达,Western blot分析肝癌组织PTEN蛋白表达.结果 Genistein组肝癌体积和重量均显著低于对照组,其中体积为(12.6±11.6) mm3比(52.3±26.5) mm3,重量为(42.7±27.8) mg比(91.3±31.4) mg,IP3含量显著低于对照组,为(13.4±1.4) pmol/mg蛋白比(35.3±6.6)pmol/mg蛋白,PTEN mRNA表达显著高于对照组,灰度与面积之积的相对强度(RI)为0.81±0.24比0.36±0.09,PTEN蛋白表达显著高于对照组,RI值为3.14±0.13比1.08±0.15.结论 PTEN基因表达上调在Genistein抑制裸鼠移植人肝癌增长中发生一定作用,其机制可能与抑制磷酸肌醇通路信号转导、抑制IP3生成有关.
-
野生型PTEN基因在乳腺癌细胞中对表阿霉素的增敏作用
目的 探讨野生型PTEN基因在人乳腺癌细胞系MCF-7和ZR-75-1中对表阿霉素的增敏作用.方法 腺病毒介导野生型PTEN基因导入人乳腺癌细胞系MCF-7和ZR-75-1,RT-PCR检测PTEN mRNA的表达,Westem blot检测转染后PTEN蛋白的表达；Ad-PTEN感染联合不同浓度的表阿霉素处理细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率和联合效应.结果 腺病毒介导的PTEN基因导入法可明显地增加细胞中PTEN基因的表达,野生型PTEN基因转染联合表阿霉素使乳腺癌细胞MCF-7对表阿霉素的敏感度增加了两倍,而使乳腺癌细胞ZR-75-1对表阿霉素的敏感度增加了十倍.结论 腺病毒重组的野生型PTEN基因联合表阿霉素对人乳腺癌细胞增殖具有显著的协同抑制效应.
-
PTEN/PI3K/Akt信号通路对K562细胞凋亡调控的研究
目的 探讨PTEN/PI3K/Akt信号传导通路对人慢性粒细胞白血病细胞系K562的增殖、凋亡调控的研究及可能的分子作用机制.方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒(AdPTEN-GFP)及空载体(Ad-GFP)腺病毒,转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562.通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时用细胞光镜、电镜形态等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL、Bax mRNA水平变化,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平变化.结果 与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP转染K562细胞后,细胞增殖受抑,增殖指数降低,凋亡率增加,p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL mRNA表达降低,促凋亡基因Bax mRNA表达增加.结论 过表达PTEN可能通过抑制PI3K/Akt通路抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡.
-
PTEN在胃癌细胞中的表达及其CpG岛甲基化状态的研究
目的 检测抑癌基因PTEN在四种胃癌细胞中mRNA和蛋白表达水平及其5'启动子区CpG岛甲基化状态.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测四种不同分化程度的胃癌细胞(HGC-27,MGC-803,BGC-823,SGC-7901)中PTEN基因启动子区域甲基化状态,RT-PCR和Western blot法分别检测其mRNA和蛋白表达水平.结果 除SGC-7901外,其他三种细胞可检测到PTEN基因启动子的甲基化.PTEN mRNA和蛋白表达水平依次为:SGC-7901高(P＜0.01),BGC-823、MGC-803次之(两者间无显著性差异,P＞0.05),HGC-27表达水平低(P＜0.01),其表达与细胞分化程度呈正相关趋势.结论 PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其蛋白表达减少甚至缺失,这可能是导致胃癌发生、发展的原因之一.
-
E-上皮钙黏附素和PTEN在胆管癌中的表达
0 引言E-上皮钙黏附素(E-cadherin,ED)和PTEN抑癌基因表达均与许多肿瘤的发生、侵袭和预后密切相关.我们采用免疫组化方法,探讨上述两种基因蛋白表达与胆管癌临床预后的关系,为判断肿瘤预后提供参考指标.
-
转PTEN基因对人结肠癌细胞的抑制作用
目的探讨PTEN基因转染对结肠癌LoVo细胞的抑制作用. 方法将人野生型及突变型PTEN cDNA通过脂质体导入结肠癌细胞LoVo中,并用RT-PCR、Western blot、流式细胞术检测细胞的PTEN mRNA和蛋白质表达.用流式细胞仪、DNA梯形带和MTT法分析5-Fu对转染前后LoVo细胞抑制周期和诱导凋亡的能力.结果转染野生型PTEN基因可明显增强结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,5-Fu对转染后的LoVo细胞抑制细胞周期和诱导凋亡的作用明显增强.突变型在结肠癌细胞LoVo中有表达但无明显抑制作用.结论转染的PTEN基因可显著上调结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,促进细胞凋亡,联合应用PTEN基因转染和5-Fu可获得协同的细胞毒作用.
-
食管癌组织中PTEN基因启动子区高甲基化的临床特征
目的 探讨PTEN基因的甲基化状态与食管癌发生、发展的关系,以及PTEN基因的甲基化与其mRNA表达的关系.方法 首先采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)方法,检测94例食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者PTEN基因启动子区的甲基化状态,分析其与食管癌发病、淋巴结转移、浸润深度及临床病理分期的关系.其次应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法检测PTEN基因mRNA表达情况,分析PTEN基因甲基化状态与其基因mRNA表达的关系.结果 食管癌组织中,PTEN基因的甲基化发生率为45.7％(43/94),而相应的病变周围的正常食管组织中甲基化频率为11.7％(11/94),PTEN基因的甲基化在食管癌组织中显著高于食管正常组织(P=0.00);食管癌中,淋巴结转移阳性组PTEN基因甲基化频率为62.9％(22/35),显著性高于阴性组(35.6％,21/59) (P=0.01);浸润深度T1+T2组和T3+T4组PTEN基因甲基化频率以及临床病理分期Ⅰ+Ⅱ期组和Ⅲ+Ⅳ期组PTEN基因甲基化频率差异均无统计学意义(P=0.23和P=0.14).PTEN mRNA表达阴性的肿瘤组织中,74.2％ (23/31)发生了PTEN基因的甲基化,PTEN基因mRNA阴性表达与其甲基化状态有显著的相关性(Ph1=-0.40,P=0.00).结论 食管癌组织中PTEN基因的甲基化高频率与食管癌的发生和淋巴结转移密切相关;此外,PTEN基因甲基化是引起其mRNA阴性表达(失表达)的重要原因.
-
急性白血病PTEN的表达及甲基化状态
0引言急性白血病(Acute leukemia,AL)的发生涉及多种抑癌基因和癌基因的异常表达.PTEN基因是一种广泛的抑癌基因,在多种肿瘤中存在失活现象,其失活原因除突变、缺失外,DNA异常甲基化可能是其失活的第三条途径.本研究采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及甲基化特异性聚合酶链反应( MSP)技术检测AL患者骨髓单个核细胞中PTEN基因mRNA的表达及其启动子甲基化状态,探讨其与AL的关系,为AL的发生、发展机制提供分子生物学依据.
-
MicroRNA-21对儿童中耳胆脂瘤细胞增殖和凋亡的调控作用
目的 探讨MicroRNA-21(miR-21)及其靶基因第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白在儿童中耳胆脂瘤细胞增殖和凋亡中的调控作用.方法 选取2013年8月至2015年3月儿童中耳胆脂瘤患者手术标本23例,提取并培养其中耳胆脂瘤角质细胞,分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组以介导miR-21抑制体的慢病毒载体转染中耳胆脂瘤角质细胞,阴性对照组转染空慢病毒载体,空白对照组不进行处理,利用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中miR-21和PTEN基因、PDCD4蛋白的表达,利用EdU和TUNEL法检测各组细胞的增殖和凋亡情况.结果 实验组胆脂瘤角质细胞中miR-21表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),PTEN基因和PDCD4蛋白的表达明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),EdU阳性细胞显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),TUNEL阳性细胞显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论 MiR-21可负性调控其靶基因PTEN和PDCD4的表达,miR-21抑制体可有效抑制儿童胆脂瘤角质细胞的增殖活性,促进细胞的凋亡.
关键词： MicroRNA-21 儿童 中耳胆脂瘤 PTEN基因 PDCD4蛋白 -
中耳胆脂瘤上皮PTEN基因的表达及意义
目的探讨PTEN基因在中耳胆脂瘤形成机制中的作用.方法应用免疫组化染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测32例中耳胆脂瘤组织和10例正常外耳道皮肤组织中PTEN的表达情况.结果中耳胆脂瘤组织和正常外耳道皮肤组织均有PTEN mRNA和蛋白的表达,且两组间无统计学差异(P>0.05).结论在胆脂瘤形成过程中,PTEN的作用更趋向于维持上皮细胞的正常生理状态,而不是发生基因异常导致细胞非正常增殖.
-
PTEN基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞增殖的影响
目的:探讨PTEN抑癌基因联合多西环素(Dox)对黏液表皮样癌细胞系增殖的影响.方法:用脂质体将野生型PTEN基因导入人黏液表皮样癌细胞系,再用不同浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,应用HE染色判定细胞形态,用流式细胞仪检测细胞周期,用免疫组化染色检测细胞PCNA和EGFR蛋白表达.结果:PTEN基因转染联合Dox组癌细胞增殖抑制显著,细胞出现空泡变性和凋亡,多数癌细胞阻滞于G1期,癌细胞中PCNA和EGFR蛋白的表达显著减弱,比PTEN基因转染或Dox单用作用更强.结论:PTEN抑癌基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞系增殖具有显著的协同抑制效应.
-
MSP法检测胃癌的PTEN基因甲基化改变
目的:检测胃癌中抑癌基因PTEN启动子区域甲基化状况,并探讨其甲基化改变的特点与临床病理特征的关系.方法:采用甲基化特异的PCR法(MSP)检测胃癌组织及相应癌旁组织(各35例)中PTEN启动子区域甲基化状态.结果:35例癌旁正常胃组织未发现有PTEN基因启动子的甲基化,16/35例胃癌组织检测到PTEN基因启动子的甲基化,癌组织PTEN基因启动子甲基化率显著增高(P＜0.05).有淋巴结转移的19例胃癌组织中,有12例PTEN基因启动子甲基化,有淋巴结转移的PTEN基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05).结论:PTEN基因启动子的甲基化与胃癌的发生、转移相关.甲基化特异的PCR法(MSP)是检测胃癌抑癌基因PTEN启动子区域甲基化状况的一种较新且特异的实验方法,可用于胃癌的辅助诊断和预后判断.
-
抑癌基因PTEN及P53在肝外胆管癌的表达
目的:探讨PTEN及P53的表达与肝外胆管癌发生、发展的关系,两者表达的相关性及其临床意义.方法:应用免疫组织化学SABC法检测40例肝外胆管癌标本及10例正常胆管组织PTEN及P53蛋白表达情况,应用RT-PCR方法分析肝外胆管癌细胞P53 mRNA的表达情况,同时结合临床资料进行分析.结果:①肝外胆管癌中PTEN及P53蛋白的阳性表达率分别为30%(12/40),47.5%(19/40),而正常胆管组织PTEN及P53蛋白的阳性表达率分别为90%(9/10),0%(0/10);②两者的表达与肝外胆管癌部位无关,但均与胆管癌的病理分级相关;③PTEN的表达与胆管癌的转移情况相关,而P53的表达与转移情况无关;④PTEN与P53蛋白在肝外胆管癌中表达具有相关性;⑤本研究选用引物扩增出的P53 cDNA为431bp,电泳结果与预期结果一致.结论:PTEN蛋白在肝外胆管癌中低表达而P53蛋白在肝外胆管癌中高表达,提示PTEN及P53在肝外胆管癌的发生发展中起重要作用.P53突变可能下调PTEN的表达.
-
外源性PTEN基因转染对炎性乳腺癌MDA-MB-468细胞株体外生物学行为的影响
目的研究外源性PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)基因表达对炎性乳腺癌MDA-MB-468细胞株体外生物学行为的影响.方法应用基因重组技术构建并鉴定pcDNA3.1-PTEN真核表达质粒,重组质粒被BglⅡ酶切线性化后运用脂质体介导基因转染法,将外源性PTEN基因导入乳腺癌细胞系MDA-MB-468中,经G418筛选阳性克隆,空载体pcDNA3.1(-)转染入细胞作为对照,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分析目的基因及蛋白表达,膜联蛋白Ⅴ-FITC(FITC-Annexin Ⅴ)和碘化丙啶(PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡.结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-PTEN经限制性内切酶Xba Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,电泳后显示约1.4kb的PTEN目的片段和5.4kb的pcDNA3.1(-)载体片段,证明重组质粒连接正确.RT-PCR、Western blot均显示pcDNA3.1-PTEN转染组有PTEN mRNA及其蛋白表达,流式细胞分析显示恢复PTEN蛋白表达后其凋亡率较其它两组细胞凋亡率增高(均P＜0.01).结论成功地构建了pcDNA3.1-PTEN真核表达质粒,外源性PTEN基因可通过诱导细胞凋亡而抑制乳腺癌细胞的增殖.
-
PTEN基因在膀胱癌组织中的表达和突变
目的检测抑癌基因PTEN在膀胱癌组织中的表达和突变情况.方法分别应用免疫组化和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术对62例膀胱癌及18例膀胱良性病变组织(对照组)中PTEN的表达及其第1和第7个外显子的突变情况进行检测.结果在62例膀胱癌组织中,PTEN表达的阳性率为53.2%,而对照组全部为阳性表达;62例膀胱癌组织中,第7外显子突变率为25.8%,第1外显子未发现突变,在对照组织中,未发现有指示突变的异常带型;膀胱癌PTEN的突变率可能与肿瘤的病理学分级有关.结论PTEN基因突变所致表达障碍可能在膀胱癌的发生、发展中有着重要的作用.
