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儿童促甲状腺素抵抗综合征的临床特点及文献复习
目的：探讨儿童促甲状腺激素抵抗综合征(RTSH)的临床特点。方法：回顾性分析 RTSH 患儿的临床资料。结果：临床表现甲状腺功能正常的高TSH血症及甲状腺功能低下两种表现型。实验室检查以异常的血清促甲状腺激素水平升高伴或不伴甲状腺激素水平低下为特点。结论：RTSH 临床表现主要为无症状或甲低。促甲状腺素受体(TSHR)基因被认为是RTSH的候选基因之一。
关键词： 儿童 促甲状腺素抵抗综合征 促甲状腺素受体 -
甲状腺功能异常患者血清肿瘤坏死因子α的检测及其分析
细胞因子是介导免疫反应的重要调节因子,它和自身免疫性甲状腺疾病的免疫病理过程密切相关,细胞因子不仅参与形成甲状腺的免疫紊乱,而且影响着甲状腺细胞的多种功能活动,如摄碘、碘的有机化,甲状腺球蛋白、甲状腺过氧化物酶、促甲状腺素受体的合成等功能及代谢过程[1].
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TSH受体抗体的测定与临床意义
促甲状腺素受体(TSH-R)位于甲状腺滤泡上皮细胞质膜上,由糖蛋白和神经节苷脂组成.TSH-R具有高、低两种亲和力,糖蛋白为高亲和力的识别部位,也是一种异质性受体,能特异地与TSH结合,可以代替TSH抗体,建立放射受体分析(RRA),检测待测物生物活性,而RIA测定待测物免疫活性.1 TSH-R的制备取人或牛的新鲜甲状腺,剪碎,组织匀浆,用0.1mol/L二碘水杨酸锂,处理甲状腺滤泡上皮细胞膜,获粗制受体液.再行蔗糖密度梯度离心,得分子量为280、160、75、15-30kD的四种具有结合TSH活性的TSH-R,又称为增溶受体.后经胰蛋白酶水解成15-30kD的纯TSH-R蛋白.
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甲状腺瘤促甲状腺素受体的测定及临床意义
我院自1989年1月至1998年1月,经手术及病理证实的甲状腺瘤100例,用S*#-P法测定促甲状腺素(TSH)受体,连续切片病理检查瘤体及其周围甲状腺组织,了解有无微小瘤灶,现报告如下.资料和方法1.临床资料:100例甲状腺瘤中,男11例,女89例,年龄10～72岁,平均30岁.均因为颈前肿块就诊,其中伴有甲状腺机能亢进症状4例,肿块隐痛8例,呼吸困难4例;肿块位于甲状腺右叶57例,峡部6例,左叶37例;肿块单发97例,多发3例.T3、T4升高4例,正常71例,低于正常25例;TSH正常82例、升高18例;吸碘率升高3例,正常97例;131I甲状腺扫描96例,其中冷结节25例,凉结节22例,温结节45例,热结节4例;手术方法:肿瘤摘除术25例,患叶次全切除术33例,患叶切除术40例,双侧叶次全切除术2例.
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主要组织相容性复合物Ⅱ对Graves病发病影响的研究
目的 应用主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ与人TSH受体(TSHR)共表达细胞(hM12细胞)模拟Graves病(GD)时的甲状腺细胞,免疫C57BL/6小鼠,诱导GD动物模型,以研究异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC-Ⅱ分子是否是GD的致病因素.方法 试验组C57BL/6小鼠8只,用hM12细胞进行腹腔免疫,每2周1次,共6次,对照组C57BL/6小鼠5只,用M12细胞免疫,方法同试验组.受试小鼠末次免疫5周后,检测以下指标:甲状腺激素水平;甲状腺刺激性抗体(TSAb);甲状腺组织学检查.结果 C57BL/6小鼠试验组2/8小鼠诱导为Graves甲亢.C57BL/6小鼠的T细胞(MHC-Ⅱ为H-2b)不能识别由hM12细胞(H-2d)提呈的抗原,C57BL/6小鼠出现GD样变化可能是hM12细胞表达的TSHR被小鼠体内职业性抗原递呈细胞(APCs)获取,经加工处理提呈给T细胞,诱发自身免疫反应的结果.结论 异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC-Ⅱ分子可能与GD的发病无关,而是一种自身免疫反应的继发现象.
关键词： 主要组织相容性复合物Ⅱ 促甲状腺素受体 M12细胞 格雷夫斯病 -
从Graves病患者的淋巴细胞中提取的重组单克隆抗促甲状腺素受体抗体(TSHRAbs)的性质
抗促甲状腺素受体的自身抗体(TSHRAb)参与自身免疫性甲状腺疾病--Graves 病和特发性粘液性水肿的发病.在Graves病,TSHRAb与甲状腺功能亢进相关;而在特发性粘液性水肿,TSHRAb与甲状腺功能减低相关.TSHRAb在不同的自身免疫性甲状腺疾病中表现出相反的作用,这源于其功能的异质性:模仿促甲状腺素(TSH)的功能并刺激甲状腺细胞的自身抗体称为甲状腺刺激抗体(TSAb),阻断TSH作用的称为TSH受体阻断抗体(TSBAb).
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促甲状腺素受体抗体研究进展
促甲状腺素受体抗体(TRAb)是Graves病(GD)发病的一个重要因素.近年研究发现特异性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因是甲状腺自身抗体产生的易感基因,且与抗甲状腺药物治疗后TRAb水平下降有相关性.TRAb是异质性的抗体,可通过细胞内不同信号转导途径致细胞增殖与功能亢进.人们采用重组人的促甲状腺素受体和非同位素方法来检测TRAb,具有较高的灵敏度,并能区分不同类型的TRAb.
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Graves'病患者促甲状腺素受体抗体和甲状腺刺激免疫球蛋白水平的变化及临床意义
目的 探讨Graves'病患者促甲状腺素受体抗体(TRAb)和甲状腺刺激免疫球蛋白(TSI)水平的变化及临床意义.方法 对正常对照组、Graves'病发作组及缓解组、桥本甲状腺炎组分别进行TRAb、TSI及甲状腺功能检测,其中抗体检测采用酶联免疫法或放射免疫法,甲状腺功能检测采用微粒子发光技术.结果 Graves'发作组TRAb、TSI阳性率分别为86.67%和95.00%,桥本甲状腺炎组甲状腺球蛋白抗体(TGA)和甲状腺微粒体抗体(TMA)维持较高水平,阳性率分别达到85.29%和91.18%,与正常对照组比较均有显著性差异.结论 TRAb、TSI、TGA和TMA联合检测,结合甲状腺功能指标,对Graves'病的疗效监测和预后判断有着非常重要的使用价值,并对与桥本甲状腺炎病的鉴别诊断起着很重要的作用.
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正丁醇法制备大鼠脂肪组织细胞膜TSHR
目的:利用正丁醇对大鼠脂肪组织细胞膜上的促甲状腺素受体(TSHR)进行提纯,以获得膜受体的均一水溶性溶液.方法:使用差速离心法获得大鼠含TSHR脂肪组织细胞膜碎片后,用正丁醇进一步提纯;采用SDS-PAGE和ELISA法鉴定所得蛋白完整性、生物学活性,并用BCA法测定相关蛋白含量.结果:正丁醇提纯的大鼠TSHR结构完整:经正丁醇提纯后的TSHR包被酶标孔孔间测定值变异系数较未经正丁醇提取组以及阳性对照组低.结论:经正丁醇提纯后的大鼠TSHR可以满足临床ELISA法检测Graves病患者血清TRAb的要求,同时可以降低酶标孔间测定值的误差.
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促甲状腺素受体抗体两种亚型研究进展
1 促甲状腺素受体(TSHR)及其抗体(TRAb)TSHR为G蛋白偶联受体超家族的成员之一,具有7个跨膜结构域,长度为764个氨基酸.TSHR胞外域通过铰链跨膜与胞内域连接,其亚结构是异质二聚体,其中A亚单位通过二硫键结合至跨膜B亚单位.甲状腺细胞表面,铰链区的二硫键断裂导致A亚基脱落,成为Graves病(GD)的自身抗原,即促甲状腺素受体抗体(TRAb)[1].
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TSHR第三胞内袢基因突变与毒性多结节性甲状腺肿发病的相关研究
目的探讨促甲状腺激素受体(TSHR)第三胞内袢基因突变在毒性多结节性甲状腺肿(TMG)自主高功能性形成中的作用.方法将16例TMG患者手术切除标本及其作为对照的甲状腺正常组织,用酚-氯仿-异戊醇法提取基因组DNA,对目的基因片断进行聚合酶链反应(PCR)及行DNA测序.结果在16例TMG标本中,发现3例为622位密码子的点突变.异亮氨酸被苯丙氨酸置换(I622F,ATT→TTT),2例为单碱基插入性突变,在1 928位和1 929位核酸之间播入了一个鸟嘌呤核苷酸(G),使该密码子609位以后氨基酸发生了移码突变.在对照组中,未发现TSHR基因突变.结论TSHR第三胞内袢基因突变,可能在TMG发病中起重要作用.
关键词： DNA突变分析 毒性多结节性甲状腺肿 促甲状腺素受体 -
促甲状腺素受体在BALB/c小鼠主要组织和器官的分布及其意义
目的:研究正常BALB/c小鼠体内各主要组织、器官的促甲状腺素受体(thyrotrophin receptor,TSHR)mRNA的分布,为Graves病(GD)或/和甲状腺相关眼病(TAO)动物模型的制作提供病理学依据.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测BALB/c小鼠甲状腺及腺外部分组织、器官中TSHRmRNA表达水平.结果:以甲状腺组织TSHR mRNA表达水平为标准1,呈相对高表达组织依次为肾上腺、胸腺、睾丸、卵巢及眼外肌,呈相对低表达的组织依次为肾脏、脑组织、腹壁脂肪、下颌下腺、肺脏、腹壁皮肤、眼眶脂肪、肝脏直至脾脏,胰腺、心脏及腹直肌中未见TSHR mRNA表达.结论:BAL/c小鼠体内,TSHR除了在甲状腺中表达外,还广泛存在于甲状腺外组织,且全身各处的TSHR作用机制可能不同.
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甲状腺功能亢进症儿童促甲状腺素受体基因突变分析
目的 探讨中国广州地区甲状腺功能亢进症(甲亢)患儿促甲状腺素受体( thyroid stimulating hormone receptor, TSHR)基因突变特点.方法 2009年7月～2014年7月在我院诊断为甲亢的患儿90例,男28例,女62例,诊断年龄(7.5 ± 3.4)岁.提取患儿的外周血基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段并直接测序,对患儿的TSHR基因第10外显子进行突变检测分析,50例健康儿童作为正常对照.探讨TSHR基因与儿童甲亢的相关性.结果 在90例甲亢患儿中,检测到3种突变,1种同义突变(c.1842A＞G,p.V614V),2个错义突变(c.2119C＞T,p.R707W、c.2181G＞C,p.D727E). p.V614V没有改变氨基酸,不影响TSHR的结构和功能,无致病性. p. R707W 是与人类癌症发病相关的 SNP 位点.甲亢组D727E中C等位基因的发生频率为86.7%,正常对照组为55%,两组间D727E等位基因出现的频率有显著差异(P＜0.01).进一步的logistic回归分析发现,D727E与儿童甲亢可能具有一定的相关性(OR=18.86, P＜0.01).结论 本研究对中国广州地区90例甲亢患儿TSHR基因的第10外显子分析,发现3个突变位点(c.1842A＞G和p.V614V、c.2119C＞T和p.R707W、c.2181G＞C和p.D727E),p.V614V和p.R707W与甲亢无关,p.D727E与儿童甲亢可能具有一定的相关性.
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TSHR基因内含子1区域单核苷酸多态性与Graves病的相关性研究
目的 探讨中国山东临沂地区汉族人群促甲状腺素受体( TSHR)基因内含子1区域单核苷酸多态性(SNP)与Graves病的关系.方法 应用全基因组关联研究(GWAS)和TaqMan探针技术,对1759例GD患者和1740名健康对照者TSHR内含子1区域进行基因分型；同时检测甲状腺激素水平及促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平.结果 选取GWAS研究中发现的5个SNPs位点进入扩大样本的验证,发现rs12101261_T与GD关联性较强(OR=1.257,95％ CI.1.137～1.390,P=8.23× 10-6),logistic回归分析显示rs12101261是GD一个独立致病位点(P=1.61×10-3)；rs12101261_T与治疗1年后TRAb阳性的患者显著相关(OR=1.317,95％CI 1.171～1.481,P=4.14×10-4),与TRAb阴性者无相关性(OR=1.056,95％CI0.892～1.251,P=0.524).rs12101261的3种基因型在TRAb阳性和阴性组的分布差异有统计学意义(P=0.014),其他临床表现差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 TSHR基因内含子1区域5个SNP与山东临沂地区汉族人群GD相关,其中rs12101261是一个独立致病位点,该基因多态性与血清TRAb水平相关.
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乳头状甲状腺癌抑癌基因TSHR、P16和RAS启动子甲基化研究
目的 研究促甲状腺激素受体(TSHR)、P16和RAS 3个抑癌基因在乳头状甲状腺癌的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系.方法 对50例乳头状甲状腺癌组织和32例对照组织(20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)提取RNA后,以RT-PCR检测3个抑癌基因mRNA的表达情况,采用甲基化PCR(MSP)检测上述组织中3个抑癌基因启动子区甲基化的情况,并对3个抑癌基因甲基化和未甲基化的组织随机进行测序.结果 50例乳头状甲状腺癌组织中,有34例(68.0%)TSHR基因、27例(54.0%)P16基因、30例(60.0%)RAS基因启动子发生了甲基化;32例对照组织中,有7例(21.9%)TSHR基因、5例(15.6%)P16基因、10例(31.3%)RAS基因启动子发生了甲基化;乳头状甲状腺癌组TSHR、P16、RAS基因启动子甲基化率均显著高于对照组(均P<0.05).TSHR、P16和RAS mRNA在乳头状甲状腺癌中的表达量明显低于对照组织(0.41±0.11对0.63±0.08,0.51±0.17对0.72±0.22,0.56±0.10对0.67±0.16,均P<0.05).经DNA测序证实,3个抑癌基因启动子发生甲基化的其CpG岛碱基未发生改变,仍为CG;未发生甲基化的碱基由CG变为TG.结论 3个抑癌基因启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的发生和发展均相关.
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Graves病患者甲状腺激素水平正常后sTSH长期抑制机制的探讨
目的 探讨临床上部分Graves病(GD)患者经抗甲状腺药物(ATD)治疗后甲状腺激素水平达到正常,但促甲状腺素(TSH)仍长期处于被抑制状态的机制.方法 入选初发122例GD甲亢患者,予以初始等效剂量的ATD治疗,每月随访时根据甲状腺功能测定的结果酌情减量,并适时添加左旋甲状腺素(L-T4).当甲状腺激素(FT3、FT4)水平持续正常3个月即达随访标准,复查FT3、FT4、sTSH、TSH受体抗体(TRAb),并根据TRAb是否阳性分组比较.结果 122例GD甲亢患者经(7.1±1.1)个月的ATD治疗后,甲状腺激素水平均已经达到正常3个月.随访时,58例TRAb转为阴性,64例TRAb持续阳性.两组甲状腺激素水平无差异, TRAb阳性组的sTSH水平明显低于阴性组[0.044 mIU/L(0.001～4.163 mIU/L) vs 1.749 mIU/L(0.079～4.646 mIU/L),P＜0.01];血清sTSH水平与TRAb呈明显负相关(r=-0.539,P＜0.01),与FT3、FT4、年龄、病程、治疗时间、L-T4剂量、L-T4添加时间等均无相关性.结论 药物治疗过程中,甲状腺激素水平正常的GD患者,其TSH水平长期受抑制的原因与高水平TRAb相关,可能由于TRAb直接与垂体内TSH受体结合,通过超短环反馈抑制TSH的分泌所致.
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实验性猕猴Graves病模型的制备
目的 用表达TSH受体A亚单位的重组腺病毒(A-sub-Ad)免疫雌性猕猴制备Graves病动物模型,观察其TT4、FT4、促甲状腺素受体抗体(TRAb)水平及甲状腺组织增生等情况.方法 将3岁雌性猕猴随机分为实验组和对照组,每组各6只.用A-sub-Ad及对照腺病毒(EGFP-Ad)于两侧股四头肌处肌肉注射免疫猕猴,每3周免疫1次,共5次.在造模期间动态取血,检测其TRAb、TT4、FT4水平.每周测定猕猴体重、心率并记录其变化.末次免疫4周后安乐死取甲状腺行组织学检查.结果 实验组中全部猕猴TRAb水平显著升高,50％猕猴血清TT4、FT4明显升高,甲状腺组织病理切片显示75％猕猴甲状腺显著增生,但无淋巴细胞浸润.与正常猕猴相比,甲状腺功能亢进猕猴体重明显下降,心率明显增快.结论 利用表达TSH受体A亚单位的重组腺病毒免疫与人类基因同源性很高的猕猴,成功制备Graves病动物模型,为人类Graves病进一步研究提供了良好的工具.
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外周血促甲状腺激素受体mRNA鉴别甲状腺良恶性结节的研究
目的 检测甲状腺结节患者外周血促甲状腺素受体(TSHR) mRNA的表达水平,探讨其在甲状腺良恶性结节鉴别诊断中的价值.方法 以细针穿刺细胞学检查(FNAC)和(或)术后组织病理学结果为诊断标准,对33例甲状腺良性结节,39例恶性结节患者,以及20名健康对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其外周血TSHR mRNA表达情况.结果 对照组TSHR mRNA表达均为阴性,而良性结节组与恶性结节组术前外周血TSHR mRNA阳性率分别为48.5％和91.2％,二者差异具有统计学意义(P＜0.01).甲状腺癌组术前外周血TSHR mRNA表达水平明显高于对照组、良性组及甲状腺癌术后组(均P＜0.01).采用TSHR mRNA诊断甲状腺癌的敏感性、特异性及准确率依次为91.2％、51.5％和71.6％.采用外周血TSHR mRNA和FNAC二者分别及联合检测时,诊断甲状腺癌的敏感性依次为91.3％、86.9％和100.0％,而准确率依次为84.0％、80.0％和92.0％.外周血TSHR mRNA表达与性别、年龄、结节直径、结节数量之间无明显关联性(均P＞0.05),但在良恶性结节间明显不同(P＜0.01).结论 外周血TSHR mRNA表达水平可作为甲状腺癌的分子标志物,有助于甲状腺良恶性结节的鉴别诊断.
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TSHR基因多态性与山东沿海地区汉族人Graves病的相关性
目的 研究促甲状腺素受体(TSHR)基因与山东沿海地区汉族人群Graves病(GD)易感性之间的关系.方法 选取山东沿海地区471例汉族GD患者和472例健康体检者为研究对象,应用TaqMan探针技术,在Fluidigm EP1平台上对TSHR基因第一内含子区6个标签SNP位点进行分型检测,并构建单体型.结果 rs179247、rs12101261、rs4903964和rs17111394等位基因频率在GD组和对照组中有显著性差异(P=0.004、P=0.001 、P=0.005 、P=0.012).rs179247-A、rs4903964-A和rs17111394-C等位基因携带者发生GD的风险分别增加34％(OR=1.34,95％ CI 1.10 ～ 1.63)、30％(OR=1.30,95％ CI 1.08 ～1.57)和31％(OR=1.31,95％ CI 1.06～1.62).与对照组相比,GD组rs12101261-C等位基因频率显著降低(36.0％对28.9％,P=0.001),rs12101261-C等位基因携带者发生GD的风险降低28％(OR=0.72,95％ CI 0.60～0.88).Logistic回归分析显示,rs12101261是GD发病的一个独立的易感位点(P=0.033).单体型分析发现,G-G-C-G-T-T单体型频率在对照组明显高于GD组,差异有统计学意义(P=0.017,OR=0.762,95％ CI 0.609 ～0.953),而A-G-T-A-C-C单体型频率在GD组明显高于对照组(P=0.033),该单体型发生GD的风险增加63％(OR=1.630,95％ CI 1.035 ～2.567).结论 TSHR基因多态性及单体型与山东沿海地区汉族人GD的发生相关,rs12101261是独立易感位点.
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用中国仓鼠卵巢细胞测定甲状腺刺激性抗体实验条件的探讨
目的 探讨用中国仓鼠卵巢促甲状腺素受体细胞(Chinese hamster overy-thyrotropin receptor cell,CHO-TSHR细胞)测定甲状腺刺激性抗体(TSAb)的实验条件.方法 参照文献方法,观察不同培养稀释液、细胞浓度、细胞培养时间、IgG浓度及IgG刺激时间对CHO-TSHR细胞cAMP生成的影响.结果 无NaCl的Hanks液可提高cAMP的生成量;细胞浓度为1×105孔-1、细胞培养48h、IgG浓度为1.0g·L-1、IgG刺激时间为3h时cAMP生成量大.结论 用CHO-hTSHR细胞作TSAb测定的合适条件为:(1)采用无NaCl的Hanks液做培养稀释液;(2)细胞浓度为1×105孔-1;(3)细胞培养时间为48h;(4)IgG用量为1.0g·孔-1;(5)IgG刺激时间为3h.
