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八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活性
目的:内毒素血症时单核-巨噬细胞释放过量炎症介质是导致休克甚至多器官衰竭的主要病理学基础.肺组织中存在3种巨噬细胞:肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)、肺间质巨噬细胞(interstitial macrophage,IM)和肺血管内巨噬细胞.近来研究表明,内毒素血症时IM较AM更早受到LPS攻击,其吞噬功能、对补体的趋化作用及产生氧自由基的能力明显强于AM,在肺组织炎症反应中起重要作用.因此,有效控制肺IM的过度激活将对减轻肺组织炎症反应起到积极的保护作用.我们以往的研究表明八肽胆囊收缩素(cholecystokinin oct apeptide,CCK-8)具有明显的抗内毒素休克(endotoxic shock,ES)作用,可减轻ES大鼠肺、肝、肾组织炎症反应,抑制肺组织核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)活性.原位PCR及免疫组织化学实验显示肺巨噬细胞有CCK受体表达,因此推测C CK-8可能通过与其受体相互作用来干预LPS激活肺巨噬细胞的过程.为深入探讨CCK-8抗ES 作用的分子机制,本研究以体外培养的大鼠肺IM为对象,观察CCK-8对脂多糖(lipopolysac charide,LPS)作用下NF-κB活性的影响.方法:分离大鼠肺IM,加入LPS ( 10 mg/L)、CCK(10-8、10-7、10-6 mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺(2 mg/L)及溶剂单独或共同孵育2 h.用电泳迁移率变动分析技术(electrophoretic motility shift assay,EMSA),检测肺IM NF-κB 活性,用免疫组织化学技术观察p65、p50在肺IM中的表达及分布.结果:(1) CCK-8(10-8、10-7、10-6 mol/L)可明显抑制LPS诱导的肺IM NF- κB活性,并呈明显的剂量依赖性,用丙谷胺预孵育肺IM可拮抗CCK-8的作用;(2)LPS作用2 h,肺IMp65、p50核内表达明显增加,而CCK-8预孵育肺IM则可显著减少p65、p50核移位.结论:CCK-8可抑制LPS诱导的肺I M NF-κB活性,该作用是由CCK受体介导的,在减轻ES时肺组织炎症反应中具有重要意义.
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八肽胆囊收缩素对内毒素血症大鼠CD14表达的抑制作用
目的:CD14是宿主识别细菌脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)的关键受体,以膜结合型(me mbrane-associated CD14,mCD14)和可溶性(soluble CD14,sCD14)两种形式存在.CD14结合LPS的脂质A介导信号传递,诱生大量炎症介质.而LPS又可直接或间接上调CD14的表达, 促进炎症反应,终引起多器官衰竭.应用CD14抗体可明显减轻细胞对LPS的反应,提高内毒素血症家兔的生存率.目前CD14已成为治疗内毒素休克的新靶子.我们以往的研究表明八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)具有明显的抗内毒素休克(endotoxic shock,ES)作用,可减轻ES大鼠肺、肝、肾组织炎症反应,降低肺动脉压,提高平均动脉压,改善生存率,但其作用机制尚未完全阐明.为深入探讨CCK-8抗ES作用的机制,本研究观察了CCK-8对内毒素血症大鼠肺组织及血清中CD14蛋白表达的影响.方法:静脉注入LPS(5 mg/kg dw)6 h复制大鼠内毒素血症模型,用Western blot技术检测血清中sCD14蛋白的表达, 用免疫组织化学技术检测肺组织中CD14的表达及分布.静脉预注入CCK-8(40 μg/kg dw)和/或CCK受体拮抗剂丙谷胺(1 mg/kg dw)10 min后注入LPS 6 h,观察上述指标.结果:(1)大鼠血清中sCD14蛋白存在两种分子形式:sCD14α(49kD)及sCD14β(55kD),注入LPS后6 h二者表达均明显增加,静脉预注入CCK-8则可显著抑制其表达,且该作用可被丙谷胺拮抗;(2)对照组大鼠肺组织CD14只表达在巨噬细胞,而在内毒素血症大鼠肺组织中,不仅巨噬细胞上的CD 14阳性信号增强,表达CD14的巨噬细胞增多,而且在支气管上皮细胞表面也检测到CD14阳性信号;静脉预注入CCK-8则明显减少了CD14的表达,丙谷胺可拮抗CCK-8的作用.结论:CCK- 8对内毒素血症大鼠肺组织CD14及血清sCD14的表达具有抑制作用,降低大鼠对LPS的敏感性 ,可能是CCK-8抗ES作用的重要机制之一.
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CCK-8对内毒素休克大鼠肺泡巨噬细胞吞噬及p38MAPK表达的影响
目的: 研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)引起的内毒素休克(ES)大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能、支气管肺泡灌洗液(BALF)中MDA含量变化以及大鼠肺泡巨噬细胞p38MAPK表达的改变.方法: 使用生理多道记录仪,观察尾静脉注入LPS(8 mg/kg iv) 复制的大鼠ES模型、LPS注入前10 min尾静脉注入CCK-8(40 μg/kg iv)、单独注入CCK-8( 40 μg/kg iv)或生理盐水(对照)的四组大鼠血压的改变,于LPS注入2 h进行支气管肺泡灌洗,获BALF,从中分离肺泡巨噬细胞,检测吞噬白色念珠菌能力的改变,以吞噬率和吞噬指数表示;分离正常大鼠肺泡巨噬细胞,体外刺激30 min后,免疫组化观察p38MAPK表达的变化.结果:[ HTSS〗 CCK-8可逆转LPS引起的大鼠平均动脉血压的下降.LPS注入2 h肺泡巨噬细胞吞噬能力显著增强,吞噬指数由对照组的2.43±0.41增加到3.80±0.60(P＜0.05),CCK-8抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞吞噬能力增强,但与对照组相比,CCK-8可增强吞噬能力.LPS组BALF中MDA含量显著增加( P＜0.05),CCK-8±LPS组MDA含量明显低于LPS组.免疫组化显示LPS可激活p38MAPK,CCK -8可增强p38MAPK的表达.讨论和结论: LPS致BALF中MDA含量增高,提示LPS 刺激下肺泡巨噬细胞激活,吞噬功能增强,引起一系列过强的炎症反应.CCK-8可明显减少BALF中MDA含量,抑制 LPS引起的巨噬细胞吞噬功能的增强,但本身可增强巨噬细胞吞噬功能,其机制可能与p38MA PK途径有关.p38MAPK为多种信号传导途径的交汇点.CCK-8可能通过激活p38MAPK途径调节E S大鼠的免疫功能,二者可能存在微妙的平衡.
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八肽胆囊收缩素在ONOO-介导内毒素致肺动脉内皮细胞损伤中的保护作用
目的和方法:我们以往的实验显示,内皮源性过氧亚硝基阴离子(ONOO-)参与介导LPS引起的培养肺动脉内皮细胞损伤;在离体血管水平,CCK对LPS损害肺动脉内皮功能有保护作用.本实验在培养的牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)水平,进一步观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱生内皮源性ONOO-和对LPS诱导BPAEC损伤的影响,旨在初步探讨CCK的保护作用机制.结果:(1)CCK可抑制LPS诱导的BPAEC生成ONOO-增多的标志物硝基酪氨酸(NT)的荧光强度由LPS组的6.55±0.30降低至4.37±0.08(P＜0.01),但仍明显高于溶剂组的3.27±0.15(P＜0.01);NT阳性细胞数和百分率仅有减少或降低趋势(P＞0.05),表明CCK抑制了LPS诱导BPAEC生成ONOO-能力.加用CCK受体非特异抑制剂丙谷胺(Proglumide, Pro)后,前述诸指标均略升高,但未见显著变化(P＞0.05).(2)CCK明显抑制LPS引起的培养上清中MDA含量增多,由4.14±0.07 nmol/mL减至3.20±0.22 nmol/mL(P＜0.01),Pro逆转CCK的保护作用,MDA含量增加至4.00±0.12 nmol/mL(P＜0.01);与LPS组相比,LPS+CCK组培养上清LDH活性降低,由85.30±8.66 U/L降至71.33±4.07 U/L(P＞0.05),LPS+Pro+CK组升至81.00±6.35 U/L,但与LPS+CCK组比较无明显差异(P＞0.05).(3)CCK明显抑制LPS引起的BPAEC凋亡百分率增加,由LPS组的13.50%±0.60%降低至5.35%±0.25%(P＜0.01);此作用为Pro翻转,BPAEC凋亡百分率增加至11.45%±0.68%(P＜0.05).结论:CCK对培养BPAEC有一定保护作用,可减轻LPS引起的过氧化损伤、抑制内皮细胞凋亡;CCK的保护作用可能由CCK受体介导;并与其抑制LPS诱生ONOO-有关.
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八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导大鼠肺组织NF-κB活性增高的抑制作用
研究证实, 内毒素激活核转录因子κB(nuclear transciption factor kappa B, NF-κΒ),进而诱导前炎性因子大量生成,是内毒素休克和急性肺损伤的关键发病学环节.
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cAMP-PKA信号通路在CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活化中的作用
目的:探讨cAMP-PKA信号通路对八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapetide,CCK-8)抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages,PIMs)核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活性的影响.
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CCK－8对脂多糖诱导的脓毒症小鼠CD4＋T淋巴细胞的调节作用
目的：观察八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide， CCK－8）对脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）诱导的脓毒症小鼠CD4＋T淋巴细胞分化的影响，探讨CCK－8治疗脓毒症的免疫调节机制。方法：将C57BL／6小鼠随机分为正常对照组、脓毒症组、CCK－8对照组和CCK－8治疗组，每组26只。以腹腔注射LPS （20 mg／kg ）复制脓毒症模型；正常对照组腹腔注射生理盐水，每只100 L；CCK－8对照组腹腔注射CCK－8（20μg／kg）；治疗组于注射LPS 30 min后腹腔注射CCK－8（20μg／kg）。观察小鼠72 h存活率（n＝20）；其余动物24 h后HE染色观察小鼠肺组织病理学变化；流式细胞术检测CD4＋T细胞和Treg细胞数量，实时荧光定量RT－PCR检测CD4＋T细胞不同亚群特异性转录因子T－bet、GATA3、Foxp3和RORγt mRNA表达。结果：正常对照组和CCK－8对照组小鼠72 h时全部存活，脓毒症模型组小鼠全部死亡，CCK－8可以显著提高脓毒症小鼠的存活率，肺组织损伤明显减轻；与对照组相比，脓毒症组CD4＋T细胞数量减少，Treg细胞数量增多；T－bet和RORγt mRNA表达减少，GA－TA－3和Foxp3 mRNA表达增加。经CCK－8治疗后，CD4＋T细胞增多，CD4＋CD25＋Treg细胞数量减少；同时，T－bet和RORγt mRNA表达增多，而GATA－3和Foxp3表达降低。结论：CCK－8对脓毒症小鼠具有一定的治疗作用，其机制可能与调节CD4＋T细胞向Th1和Th17细胞分化，抑制Th2和Treg细胞分化有关。
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嗅三针对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马八肽胆囊收缩素含量的影响
目的:探讨嗅三针对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马八肽胆囊收缩素含量的影响作用.方法:成年SD雄性大鼠40只,体重300±10g.随机分为4组,每组10只.①正常对照组,②VD模型组,③VD嗅球损毁模型组,④嗅三针组.制作VD大鼠模型和VD并损毁嗅球大鼠模型,通过嗅三针电刺激方法,测试大鼠水迷宫学习记忆能力并测定海马八肽胆囊收缩素含量.结果:定位航行试验显示,平均逃避潜伏期比较,VD模型组明显长于正常对照组(P<0.01);嗅三针组明显短于VD模型组(P<0.01);嗅三针组也明显短于VD嗅球损毁模型组(P<0.01);VD嗅球损毁模型组与VD模型组之差异无显著性意义(P>0.05).空间探索试验显示,原平台象限跨越相应平台的次数比较,VD模型组明显少于正常对照组(P<0.01);嗅三针组明显多于VD模型组(P<0.01);嗅三针组也明显多于VD嗅球损毁模型组(P<0.01);VD模型组与VD嗅球损毁模型组之差异无显著性意义(P>0.05).海马八肽胆囊收缩素含量比较,VD模型组低于正常对照组(P<0.05);嗅三针组高于VD模型组及VD嗅球损毁模型组(P<0.05):VD模型组与VD嗅球损毁模型组之差异无显著性意义(P>0.05).结论:嗅三针能够显著增强血管性痴呆大鼠学习记忆功能、能提高海马八肽胆囊收缩素的含量,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路密切相关.
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小儿厌食症动物模型血浆八肽胆囊收缩素、β-内啡肽含量和红细胞C3b受体花环率及其相关研究
观察特制饲料喂养造成的厌食动物模型血浆β-内啡肽、八肽胆囊收缩素含量和红细胞C3b受体花环率的变化,并对其进行了相关研究.结果显示:模型组动物血浆β-内啡肽浓度、红细胞C3b受体花环率均明显下降,二者之间呈正相关关系(r=0.68, P＜0.05).提示β-内啡肽不仅是影响患儿食欲的重要因素之一,可能也与厌食患儿免疫力下降有关.
关键词： 厌食 动物模型 八肽胆囊收缩素 β-内啡肽 红细胞C3b受体花环率 -
八肽胆囊收缩素对大鼠大脑皮质蛋白激酶C活性的影响
目的探讨胆囊收缩素受体(CCK r eceptor)在中枢神经系统的信号传递机制.方法采用分离的大鼠大脑皮质神经细胞,观察CCK8、CCKA受体拮抗剂L-364,718和CCKB受体拮抗剂L-365,260对大鼠大脑皮质蛋白激酶C(PKC)活性的影响.结果 CCK8在10-11～10-6mol/L范围内可刺激PKC活性的增加,超过10-6mol/L后,逐渐趋于饱和.CCKA受体拮抗剂L-364,718、CCK B受体拮抗剂L-365,260均可根据剂量的大小不同程度地抑制CCK8引起的PKC活性改变, 但两者IC50相差60倍,L-365,260在较低浓度时即能明显拮抗CCK8引起的PKC活性变化. 结论本研究结果提示,CCK8可能通过CCKB受体引起PKC活性变化,而 PKC可能是CCKB受体的重要信号传递机制之一.
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运脾复方对幼龄大鼠厌食症模型胃肠激素的影响
目的研究运脾复方对小儿厌食症动物模型胃肠激素的影响,探讨运脾复方治疗小儿厌食症的机制.方法模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄大鼠厌食模型,用运脾复方儿宝颗粒灌胃,用放免分析法测定模型下丘脑、胃窦部和外周血CCK-8和β-EP的含量.结果模型动物下丘脑和血浆CCK-8浓度(123±32)pmol.g-1和(507±113)ng.L -1, 高于对照组的(89±18)pmol.g-1和 (254±95)ng.L-1 (P<0.05);模型动物胃窦部和血浆β-EP浓度(1.4±0.6)μg.g-1和(6.3±1.7)ng.L-1,低于对照组的(6.3±1.4)μg.g-1和(10.2±4.9)ng.L-1 (P<0.05).运脾复方治疗组CCK-8 恢复正常,β-EP 浓度显著增加.结论儿宝颗粒能明显抑制模型动物中枢和外周CCK-8分泌,促进β-EP分泌,从而达到促进动物摄食的目的.
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运脾散对厌食症动物模型大鼠血浆脑肠肽的影响
目的 探讨运脾散预防和治疗小儿厌食症的机理.方法 病因模拟法制作幼龄厌食症大鼠模型,经运脾散治疗后,用放射免疫检测技术测定外周血浆八肽胆囊收缩素(CCK-8)和β-内啡肽(β-EP)的含量.结果 与空白组比较,模型大鼠血浆CCK-8含量均显著增高(P＜0.05),血浆β-EP含量显著减低(P＜0.01);与模型组比较,治疗组血浆CCK-8含量显著降低(P＜0.05),血浆β-EP含量显著增加(P＜0.05).结论 运脾散能在一定程度上防治小儿厌食症,与调节该模型外周血浆β-EP和CCK-8的分泌与释放有关.
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运脾散对厌食大鼠下丘脑和血浆CCK-8的调节作用
目的:观察运脾散对厌食大鼠下丘脑和血浆中八肽胆囊收缩素(CCK-8)分泌的调节作用,探讨运脾散防治小儿厌食症的机理.方法:将24只大鼠随机分为空白组、模型组、治疗组,用特制饲料饲养大鼠1周进行厌食模型制备后,用运脾散灌胃治疗3周,然后取下丘脑和采集血浆,用放射免疫检测技术测定CCK-8的含量,比较空白组、模型组、治疗组3组间的异同.结果:造模7 d时模型组和治疗组大鼠进食量均低于空白组,第21 d、27 d时治疗组与空白组比较差异无显著性.与空白组比较,模型组下丘脑及血浆中CCK-8含量均增加(P＜0.05);与模型组比较,治疗组下丘脑及血浆中CCK-8含量降低(P＜0.01或P＜0.05).结论:运脾散能改善厌食大鼠进食量,可能是通过调节中枢和外周血中的CCK-8分泌,从而影响食欲中枢功能,增强摄食行为,起到防治小儿厌食症的作用.
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CCK-8s对急性酒精依赖大鼠的记忆与自主行为影响的研究
目的:探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8s)对急性酒精依赖大鼠记忆与自主行为的影响.方法:采用水迷宫对大鼠在产生酒精依赖前后的记忆行为进行测试.结果:CCK-8s可以减少急性酒精依赖大鼠的自主行为次数,缩短水迷宫爬台测试时间.结论:CCK-8s能够减少急性酒精依赖大鼠的自主行为次数,并对其记忆改善有作用.
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CCK-8通过胆碱能通路对急性胰腺炎合并肺损伤的影响
目的:通过建立大鼠急性胰腺炎(AP)模型,并给予八肽胆囊收缩素(CCK-8)干预,观察CCK-8一种新的抗炎抗休克途径:胆碱能抗炎通路,对急性胰腺炎合并肺损伤的影响.方法:选取SD大鼠72只,将SD大鼠随机分为4组(n=18),假手术组(SO组)、模型组(AP组)、AP+CCK-8组(CCK-8组)、AP+膈下迷走神经(VN)切断+CCK-8组(VN切断组).结果:CCK-8组较AP组,CCK-8能明显降低AP大鼠血清中IL-1β的浓度(p<0.05),而VN切断组,大鼠血清中IL-1浓度较CCK-8组升高(p<0.05),差异显著,证实CCK-8可以激活迷走神经胆碱能抗炎途径,发挥抗炎、休克作用.
关键词： 八肽胆囊收缩素 急性胰腺炎肺损伤胆碱能通路
