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双歧杆菌黏附素对嗜酸乳杆菌抑制白色念珠菌黏附肠上皮细胞的促进作用
目的：探讨双歧杆菌黏附素对嗜酸乳杆菌(L.acidophillus)抑制白色念珠菌(C.albicans)黏附肠上皮Lovo细胞的促进作用。方法：分离2株 L.acidophillusⅠ、Ⅱ，分别将 C.albicans、C.albicans+L.acidophillus、C.albicans+不同浓度黏附素、C.albicans+L.acidophillus+不同浓度黏附素与肠上皮Lovo细胞混合孵育后，计数肠上皮Lovo细胞上黏附C.albicans的个数。结果：双歧杆菌黏附素对L.acidophillus抑制C.albicans黏附肠上皮细胞的作用与L.acidophillus的种类和黏附素浓度都有关。C.albicans+L.acidophillusⅡ+黏附素比C.albicans+L.acidophillusⅠ+同浓度黏附素效果好。结论：双歧杆菌黏附素能促进L.acidophillus抑制C.albicans黏附肠上皮细胞的作用。
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补中益气丸对IEC-6细胞损伤模型NLRP3炎性体及相关细胞因子的影响
目的:探讨补中益气丸含药血清对炎症刺激引起的大鼠小肠隐窝上皮细胞(ICE-6)损伤模型中NOD样受体-3(NLRP3)炎性体复合物及相关细胞因子的影响.方法:根据中药复方血清药理学实验方法,以IEC-6细胞为研究对象,设立胎牛血清组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、空白组、模型组,补中益气丸组、柳氮磺吡啶组.先用10％2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)大鼠模型血清或者TNF-α(质量浓度100 μg· L-1)刺激IEC-6细胞24 h,然后加入10％药物血清继续培养24 h后,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)方法检测IEC-6细胞活率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定NLRP3炎性体的相关蛋白表达量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的含量.结果:与空白组比较,TNF-α组及模型组均可引起IEC-6细胞增殖率显著下降(P＜0.01),细胞内NLRP3炎性体的相关蛋白表达显著增高(P＜0.01),细胞因子IL-1β,IL-18含量显著增高(P＜0.01);与模型组比较,各给药组细胞增殖率显著增加(P＜0.01),NLRP3炎性体复合物蛋白表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),IL-1β,IL-18分泌显著降低(P＜0.01).结论:补中益气丸含药血清可通过调节肠上皮细胞NLRP3炎性体复合物蛋白及细胞因子分泌,减轻炎症刺激引起的肠上皮细胞损伤.
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紫芪方含药血清对肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护效应
目的:探讨紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护效应.方法:建立IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型;采用血清药理学方法,在细胞培养液中加入不同给药剂量制备的紫芪方药物血清(给药1次和间隔1 h两次给药10 g·kg-1 DJ-1,SJ-1;给药1次和间隔1 h两次给药20 g·kg-1;DJ-2,SJ-2),和参附药物血清(间隔1 h两次给药20 g·kg-1 SF)及对照血清(C).测定LDH漏出量和其细胞生长曲线.结果:与对照组比较,SJ-1,SJ-2两组制备的药物血清能明显减少IEC-6细胞LDH的漏出量,其中SJ-1(P＜0.05),SJ-2(P＜0.01);SJ-2组24 h细胞活力明显高于缺氧复氧细胞损伤组及参附血清组(P＜0.05),并随时间而逐渐增强.结论:紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤具有显著保护效应.
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缺氧复氧对肠上皮细胞凋亡指数及线粒体膜电位的影响
观察缺氧复氧对IEC-6(肠上皮)细胞凋亡和线粒体膜电位的影响,探讨其细胞损伤的机制.建立IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型;用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,采用激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位变化.结果表明IEC-6细胞缺氧复氧损伤后,细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),线粒体膜电位明显降低(P<0.01).
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自噬在肠黏膜屏障功能作用机制的研究进展
自噬是细胞通过膜囊泡结构降解胞质内大分子物质和受损细胞器维持机体稳态的生物学过程.在肠黏膜屏障功能发生障碍过程中,自噬对于维持肠上皮细胞的存活起关键性作用.负调控自噬可导致肠道炎性反应和肿瘤的发生.
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中华大蟾蜍小肠黏膜上皮斯钙素-1基因表达与质膜Ca2+-ATP酶活性分析
目的 探讨小肠黏膜上皮斯钙素-1(STC1)基因表达与质膜Ca2+-ATP酶活性的关系.方法 基于耐受实验结果,将72只成体中华大蟾蜍随机分为高钙环境组(加0.1 mol/L CaCl2的自来水)、低钙环境组[加0.03mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)的自来水]及正常对照组(自来水),分别于暴露前及暴露后12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h取血浆和小肠黏膜,利用比色法和半定量RT-PCR法分别检测血浆钙水平、质膜Ca2+-ATP酶活性和STC1 mRNA表达水平.结果 0.1mol/L氯化钙暴露致中华大蟾蜍血浆钙水平在12h和24h时显著高于对照组水平(1.9mmol/L)(P<0.05),48h时回复至正常,72h后持续升高;而12 ～ 48h内小肠黏膜上皮质膜Ca2+-ATP酶活性增强和STC1 mRNA水平上调,72h后回复至正常水平.0.03mol/L EDTA暴露则使中华大蟾蜍血浆钙水平下降,但质膜Ca2+-ATP酶活性和STC1 mRNA水平与对照组相比未出现明显变化.结论 血浆钙水平升高致小肠黏膜上皮质膜Ca2+-ATP酶活性升高,进而增强STC1表达,而STC1表达上调又以负反馈方式抑制质膜Ca2+-ATP酶的活性.
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壳寡糖对脂多糖诱导肠上皮细胞炎症的保护作用
目的：研究壳寡糖对脂多糖（LPS）诱导肠上皮细胞炎症的影响。方法肠上皮细胞Caco?2分为5组：正常对照组、模型组、壳寡糖高、中、低浓度组。以1μg/L LPS刺激细胞48h建立炎症模型。药物干预组于LPS刺激前2 h，分别以0.25，0.5和1.0 g/L壳寡糖预处理细胞。MTT法检测细胞活力。以ELISA法检测培养上清中炎症相关因子肿瘤坏死因子（TNF）?α，白介素（IL）?8和前列腺素（PG）E2水平。以Western印迹法检测细胞Toll样受体（TLR）4、核因子κB（NF?κB）及环氧酶（COX）2的表达变化。结果壳寡糖和/或LPS处理后Caco?2细胞存活率不受影响。与模型组相比，壳寡糖在0.25，0.5和1.0 g/L剂量下呈浓度依赖性地降低Caco?2细胞TNF?α（352.5±21.6，298.4±25.1，203.4±20.0 vs 436.8±38.7μg/L）和PGE2的释放（632.2±35.6，522.6±26.7，402.4±30.2 vs 822.3±23.5μg/L）（P<0.05；P<0.01），0.5和1.0 g/L壳寡糖可降低细胞COX?2表达水平（P<0.05；P<0.01）。壳寡糖中、高浓度组TLR4表达明显低于模型组（P<0.05），壳寡糖各剂量组NF?κB的表达水平显著降低（P<0.05；P<0.01）。结论壳寡糖可对抗LPS诱导的肠上皮细胞炎症，对炎性肠病具潜在保护作用。作用机理可能与TLR4\NF?κB信号通路抑制有关。
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旋毛虫幼虫侵入小鼠肠上皮细胞后细胞蛋白变化的研究
目的 观察旋毛虫幼虫侵入前后小鼠肠上皮细胞蛋白的变化,筛选幼虫侵入相关蛋白.方法 将旋毛虫感染性幼虫接种至小鼠小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)单层,于37℃5％ CO2条件下培养2h,提取细胞蛋白,进行SDS-PAGE与Western blot分析,并与正常IECs细胞蛋白比较.结果 SDS-PAGE分析表明,IECs与感染性幼虫共孵育后的IECs蛋白带数为44条,与正常IECs对照组的相同;Western blot显示,正常IECs蛋白不能被旋毛虫感染鼠血清识别,与幼虫共孵育后的IECs蛋白有16个组分带能被旋毛虫感染鼠血清识别,分子质量单位分别为125、118、106、98、70、64、50、47、46、40、34、33、31、29、27、26 ku.结论 小鼠IECs与旋毛虫幼虫共培养可产生能被旋毛虫感染鼠血清识别的细胞蛋白,该组蛋白可能是旋毛虫侵入相关蛋白.
关键词： 旋毛虫 侵入相关蛋白 肠上皮细胞 Western blot -
利用巨大芽孢杆菌进行艰难杆菌肠毒素A表达、鉴定
艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)是一种芽孢结构的革兰阳性厌氧杆菌,能引起抗生素相关性腹泻或伪膜性结肠炎,又称医院内相关性腹泻[1].肠毒素A(TcdA)是艰难梭状芽孢杆菌的主要毒力因子,也被认为是引起艰难芽孢杆菌性腹泻(CDAD)的主要因素[2].TcdA能使宿主肠上皮细胞的Rho-Rac家族中小GTPase上特定苏氨酸残基糖基化,导致肠壁细胞骨架肌动蛋白结构改变、肠道分泌物增多、急性炎症和结肠黏膜坏疽[3].
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大黄素对脂多糖诱导肠上皮细胞缺氧诱导因子-1α/环氧化酶-2通路的干预
目的 观察脂多糖(LPS)处理肠上皮细胞对缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)及下游炎症相关靶基因环氧化酶-2 (COX-2)表达的影响,探讨大黄素干预的可能作用靶点.方法 建立LPS处理人肠上皮细胞的体外实验模型.①用Western blot检测LPS不同剂量和不同时间处理组的HIF-1α和COX-2蛋白表达的变化趋势;检测LPS和不同剂量大黄素共同干预组的HIF-1α、COX-2、Phospho-IκB-α和Phospho-NF-κB p65蛋白表达的变化趋势.②用PCR检测LPS处理组与LPS和大黄素共同干预组HIF-1α的mRNA水平.③用MTT法检测大黄素对肠上皮细胞增殖情况的影响.数据采用单因素方差分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①LPS可引起HIF-1α表达升高,且有时间和剂量效应关系.随LPS质量浓度的增加,HIF-1α的表达量先增高后降低,在质量浓度为10-3 mg/mL时HIF-1α表达量高(P＜0.05);HIF-1α表达首先在0.5h达峰值,而后到4h下降至低,后又增高(P＜0.05).COX-2蛋白表达变化趋势与HIF-1α基本一致(P＜0.05).大黄素可抑制LPS诱导的HIF-1α、COX-2、Phospho-IκB-α和Phospho-NF-κB p65的表达,并有明显量效关系(P＜0.05).②PCR检测LPS刺激后HIF-1α的mRNA水平增高,而大黄素抑制其增高.③MTT法检测不同浓度的大黄素(0μmol/L、20 μmol/L、40μmol/L、60 μmol/L、80 μmol/L)对细胞增殖无明显影响(0.95 ±0.02、0.89±0.03、0.88 ±0.04、0.91 ±0.03、0.83±0.03,P＞0.05).虽然大黄素在此浓度范围产生了生物学效应,但对肠细胞无药物毒性.结论 LPS激活肠上皮细胞HIF-1α/COX-2信号通路,且具有时间和剂量依赖性.大黄素可能通过阻断LPS/HIF-1 α/COX-2的缺氧通路和LPS/IκB-α/NF-κB/COX-2的炎症通路而对肠上皮细胞起到保护作用.
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蛋白磷酸酶2A诱导肠上皮细胞凋亡机制研究进展
蛋白磷酸酶2A是细胞内重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,通过可逆性磷酸化使已磷酸化的蛋白质脱磷酸,参与细胞内众多信号通路和生理生化过程的调节.其生理活性的改变与肠上皮细胞损伤后凋亡、再生的发生密切相关,可能是肠上皮细胞凋亡与再生达到平衡的一个调节因子.
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PI3K/Akt通路在中子和γ线致大鼠肠上皮细胞损伤中的变化及IL-11的调控作用
目的 复制中子和γ线致肠道损伤的体外模型,探讨PI3K/Akt通路的变化规律及IL-11对其调控作用,为阐明中子和γ线致伤差异的分子机制并寻找有效的防治措施提供依据.方法 采用4Gy中子和10 Gy γ射线照射IEC-6大鼠肠上皮细胞,并于照射前12h或照射后即刻给予100ng/ml的rhIL-11,采用Western blot和图像分析技术检测IEC-6细胞PI3K、PDK1、PTEN和Akt表达及活化的变化.结果 γ射线照射后6h,IEC-6细胞PI3K表达和Akt活化减弱,Akt表达、PDK1及PTEN活化增加;IL-11处理组PI3K表达和Akt活化增加,Akt表达、PDK1及PTEN活化减弱.中子照后6h,IEC-6细胞PI3K表达减少,24 h恢复;照后6～24 h,PDK1及PTEN活化增加,Akt活化减弱,程度较γ线更重;IL-11处理组照后6～24 h,PI3K表达和Akt活化增强,PDK1和PTEN活化减弱,但效果不如在γ线时显著.结论 中子射线对肠上皮细胞PI3K/Akt通路活化作用较γ射线更重,且IL-11对抗PI3K/Akt通路抑制效果不如γ线时显著.这可能是中子和γ线致伤差异的分子机制,也是中子辐射防护更难的原因.
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不同营养支持途径给予谷氨酰胺对烧伤大鼠肠上皮细胞线粒体呼吸功能的影响
目的:观察不同营养支持途径给予谷氨酰胺对烧伤大鼠肠上皮细胞线粒体呼吸功能的影响.方法:Wistar大鼠160只采用30%体表面积Ⅲ°烧伤大鼠模型,随机分成正常对照(C)组、烧伤对照(B)组、经静脉补充谷氨酰胺(PN+Gln)组和经肠道补充谷氨酰胺(EN+Gln)组.各组烧伤大鼠采用等氮、等热卡的营养支持,谷氨酰胺使用剂量为1.0 g/(kg·d),B组使用同等剂量的酪氨酸.观察烧伤后1,3,5,7,10 d线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)、肠道氧摄取率(Oext)及肠黏膜血流量(IMBF)的变化及不同途径给予谷氨酰胺对其的影响.结果:烧伤后各组线粒体Ⅲ态呼吸率(ST3)明显下降(PBD3:54.4±8.5 vs 70.2±7.4,P＜0.05;PBD5:61.2±7.5 vs 72.7±8.2,P＜0.05;PBD7:67.2±7.6 vs 75.6±6.2,P＜0.05;PBD10:69.4±6.5 vs 71.2±7.5,P＜0.01),Ⅳ态呼吸率(ST4)升高(PBD5:24.5±2.2 vs 21.3±2.0,P＜0.05;PBD7:24.1±2.8 vs 22.2±2.1,P＜0.05;PBD10:25.4±2.3 vs 20.2±1.8,P＜0.05),RCR显著降低(PBD1:3.2±0.3 vs 3.4±0.3,P＜0.01;PBD3:3.1±0.2 vs 4.0±0.3,P＜0.01;PBD5:2.7±0.2 vs 3.5±0.2,P＜0.01;PBD7:2.9±0.2 vs 3.6±0.3,P＜0.01;PBD10:2.9±0.2 vs 3.6±0.3,P＜0.01),同时P/O(PBD3:1.78±0.22 vs 2.25±0.2,P＜0.01;PBD5:2.04±0.21 vs 2.58±0.18,P＜0.01;PBD7:2.14±0.23 vs 2.81±0.25,P＜0.01;PBD10:2.02±0.16 vs 2.55±0.18,P＜0.01)、Oext(PBD5:0.31±0.04 vs 0.37±0.03,P＜0.01;PBD7:0.33±0.02 vs 0.44±0.02,P＜0.01;PBD10:0.31±0.02 vs 0.41±0.04,P＜0.01)及IMBF(PBD3:98.35±11.54vs 125.36±13.00,P＜0.01;PBD5:118.75±10.45 vs 138.52±11.33,P＜0.01;PBD7:135.40±13.60 vs 152.77±13.21,P＜0.01;PBD10:142.30±13.006 vs 162.37±12.00,P＜0.01)均明显降低.与B组比较,使用Gln的两组各项指标均低于烧伤对照组(P＜0.05()0.01),与经静脉补充Gln相比,通过肠道补充Gln的疗效更好(P＜0.05→0.01).结论:严重烧伤后使用谷氨酰胺能改善肠道血供,增加氧摄取率,减轻肠上皮细胞线粒体呼吸功能受抑程度.相比而言,通过肠道给予谷氨酰胺的疗效更佳.
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肠缺血灌流时异丙酚对肠上皮细胞凋亡的影响
目的:研究缺血再灌流时异丙酚对肠上皮细胞凋亡的影响及可能机制.方法:96只成年♂ Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌流+生理盐水组(I/R+NS)和I/R+异丙酚组(I/R+Pr).采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)的方法制作肠缺血再灌流模型.以上各组分别在再灌流后0,30,60,120和240 min(每时间点8只)处死动物取肠袋组织.采用病理学方法观察肠上皮细胞损伤指数;原位DNA末端标记法(TUNEL)检测肠上皮细胞凋亡率的变化;免疫组化法检测肠上皮细胞Caspase-3,bcl-2表达的变化.结果:I/R+Pr组与I/R+NS组相比,肠上皮细胞病理变化较轻,肠上皮细胞的凋亡率明显下降(P＜0.01),再灌流后0,30,60,120和240min肠上皮细胞中Caspase-3阳性细胞数明显减少(104.4±5.3 vs 146.4±7.6;97.4±6.2 vs 130.4±7.4;134.4±5.1 vs 170.4±8.1;125.4±6.2 vs 160.4±9.5;101±5.8 vs 120.4±8.2,均P＜0.01),而bcl-2阳性细胞数明显增加(13.34±4.12 vs 6.72±2.59;14.96±4.85 vs 8.24±3.13;15.29±5.28 vs 9.63±2.89;10.39±3.61 vs 9.63±2.89;10.39±3.61 vs 5.96±1.93;11.08±4.83 vs 6.87±2.43,均P＜0.01).结论:异丙酚能抑制缺血再灌流时肠上皮细父胞Caspase-3表达,而增加bc1-2表达,减少肠上皮细胞的凋亡.
关键词： 缺血-再灌流 异丙酚 肠上皮细胞 凋亡 原位DNA末端标记法 -
大鼠肠上皮细胞缺血缺氧损伤后基因表达谱变化的实验研究
目的:研究大鼠肠上皮细胞(IEC)缺血缺氧后基因表达谱的改变,寻找与IEC损伤相关的基因.方法:建立缺血缺氧大鼠IEC的实验模型,实验分为对照组、缺血组、缺氧组和缺血缺氧组.荧光逆转录标记mRNA,采用大鼠基因表达谱芯片检测正常IEC与缺血组、缺氧组及缺血缺氧组IEC基因表达谱,并对比分析检测结果.结果:与正常IEC相比,缺血组基因表达有差异的共207组,其中132组下调,75组上调;缺氧组基因表达有差异的共168组,其中84组下调,84组上调;缺血缺氧组基因表达有差异的共321组,其中97组下调,224组上调.结论:应用基因芯片技术筛选了与IEC缺血缺氧损伤密切相关的差异表达基因,为阐明这方面的机制提供了新的线索.
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幼年大鼠内毒素血症对小肠上皮细胞凋亡及PCNA表达的影响
目的:探讨幼年大鼠内毒素血症对小肠细胞凋亡与增生的影响,为抗凋亡或促增生治疗提供理论依据.方法:用内毒素(4 mg/kg大肠杆菌脂多糖)ip制备幼年大鼠内毒素血症模型,同等量生理盐水ip为对照组,分别在注射后0 h(只限于对照组)或死后10 min(只限于内毒素组),2,4,6,24,72 h取4 cm远端回肠,HE染色观察小肠绒毛的病理变化,原位末端标记法(TUNEL)检测小肠上皮的细胞凋亡,免疫组织化学方法测定增生细胞核抗原(pCNA)的表达.结果:内毒素组各时间点小肠绒毛上皮细胞凋亡指数均明显高于对照组(分别为37.4±7.1,44.1±9.3,46.6±8.2,54.7±9.0,45.3±7.2,33.9±6.1 vs 0.02±0.01,P＜0.01),PCNA表达均明显低于对照组(P＜0.05).注内毒素后2 h上皮细胞凋亡指数明显增加,随着时间延长,逐渐增加,于24 h达高峰,72 h恢复到6 h的水平;PCNA的表达于2 h(30.2±8.3 vs 74.6±16.2,t=6.874,P＜0.01)明显降低,4 h(21.4±6.7 vs 74.6±18.7,t=7.566,P＜0.01)和6 h(23.9±14.7 vs 73.6±13.7,t=6.999,P＜0.01)达低水平,24 h(35.8±11.4 vs76.3±11.8,t=7.010,P＜0.01)恢复到2 h的水平,72 h(59.6±18.0 vs 78.7±16.9,t=2.185,P=0.046＜0.05)仍未达到正常.死亡组细胞凋亡指数(33.9±6.1)和PCNA表达(20.2±9.2)分别与注内毒素后2 h和4 h的接近.将同一时间点的PCNA表达与细胞凋亡指数的比值进行比较发现,内毒素组的比值(分别为0.8±0.3,0.5±0.1,0.5±0.3,0.6±0.2,1.3±0.3,和0.6±0.2)明显低于正常[(3.2±0.8)×103-(3.7±0.7)×103](P＜0.01),死亡组比值与注内毒素后4,6,24 h的接近,近于低点.结论:幼年大鼠内毒素血症时小肠上皮细胞凋亡增加,PCNA表达降低,细胞凋亡与细胞增生之间的平衡破坏是严重感染时肠屏障破坏的病理机制之一.
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高氧对肠上皮细胞表达分泌片的影响
目的:研究高氧对肠上皮细胞分泌片(SC)表达的影响.方法:采用细胞计数和Giemsa染色方法检测不同氧浓度对细胞生长和细胞分裂能力的影响,采用免疫组织化学方法检测不同氧浓度对Caco-2表达SC的影响.结果:细胞计数显示400 mL/L氧浓度利于细胞生长:600、900 mL/L氧浓度导致细胞迅速死亡.不同氧浓度干预细胞3 d细胞分裂指数有明显不同,分裂细胞百分数分别为正常氧浓度2.5%;400 mL/L氧浓度为3.3%;600 mL/L氧浓度为1.3%:900 mL/L氧浓度大部分细胞死亡.与正常氧浓度相比,氧浓度为400、600mL/L时Sc表达增强,900 mL/L氧浓度时SC表达明显减弱,甚为阴性,但600 mL/L氧浓度SC表达较400 mL/L氧浓度减弱.结论:适度的高氧促进细胞生长和促进肠上皮细胞表达SC,严重高氧则抑制肠上皮细胞SC表达及肠上皮细胞生长,肠上皮细胞SC表达增多有助于保护肠黏膜及平衡肠黏膜作用,阻滞细菌入侵肠道.
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大鼠肠巨噬细胞TREM-Ⅰ表达对其侵袭力和肠上皮细胞增殖的影响
目的:探讨肠巨噬细胞髓系细胞触发受体-l(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的表达对肠巨噬细胞侵袭力和肠上皮细胞增殖的影响,进一步明确肠巨噬细胞在肠屏障功能障碍(intestinal barrier dysfunction,IBD)中可能的作用.方法:体外培养肠巨噬细胞及肠上皮细胞,逆转录-多聚酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠肠巨噬细胞的TREM-1和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因表达水平,用Tanswell板将二者共培养,MTT法绘制肠上皮细胞生长曲线,Matrigel侵袭实验检测肠巨噬细胞对肠上皮细胞的侵袭力.结果:脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组TREM-1及TNF-α的基因表达水平高于LPS+LP17组和空白对照(Control)组(均P＜0.05); LPS+LP17组与Control组相比无差异.与Control组相比,两实验组的肠上皮细胞的生长均受到抑制(均P＜0.05); LPS组肠上皮细胞生长的抑制大于LPS+LP17组(P＜0.05).侵袭实验中3组平均穿膜细胞数分别为29.3±2.1、46.0±3.6和34.7±3.1.LPS组与Control组比较差异具有明显统计学意义(P＜0.01),LPS组与LPS+LP17组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:LP17不但能抑制肠巨噬细胞TREM-1的表达及炎症介质的释放,还可以抑制肠巨噬细胞对上皮细胞的侵袭.利用LP17阻断TREM-1信号转导可减轻肠巨噬细胞对肠上皮细胞的损害,有望成为治疗IBD的新靶点.
关键词： 肠巨噬细胞 髓系细胞触发受体-1 肠上皮细胞 -
缺血-再灌流时卡巴胆碱对大鼠肠上皮细胞的保护作用
目的:研究缺血/再灌流(I/R)时卡巴胆碱(Ca)对肠上皮细胞的保护作用及可能机制.方法:阻断Wistar大鼠SMA血量建立I/R模型,并以肠袋内注射卡巴胆碱进行处理.采用病理学方法观察不同时间肠上皮细胞损伤指数,免疫组化法检测肠上皮细胞TNF-α表达的变化;生化法检测肠组织中DAO含量(nkat/gpro)的变化.结果:I/R+Ca组再灌流各时间点肠上皮细胞病理变化较I/R+NS组轻(P＜0.01);I/R+Ca组再灌流各时间点肠袋组织DAO含量较I/R+NS组显著增加(0 min:42.01±7.17 vs 18.50±7.83;30 min:44.51±8.00 vs 20.00±5.83:60 min:35.67±7.00 vs 16.34±8.17:120 min:39.00±7.33 vs 21.84±6.67:240 min:53.34±8.17 vs 45.68±6.00;均P＜0.01),而I/R+Ca组再灌流各时间点肠上皮细胞中呈TNF-α阳性细胞数较I/R+NS组明显减少(0 min:204.4±12 vs 246.4±15.6;30 min:198.4±11.2 vs 230.4±14.4;60 min:234.4±12.1 vs 270.4±17.1;120 min:225.4±10.2 vs 260.4±18.5;240 min:196.4±10.8 vs 220.4±1 8.2;均P＜0.01).结论:卡巴胆碱能抑制缺血-再灌流时肠上皮细胞中TNF-α表达,减轻病理损害,对肠上皮细胞具有保护作用.
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CRF通过CRF2受体介导肠上皮细胞中TLR4的表达
目的:研究促肾上腺皮质释放因子(CRF)介导肠上皮细胞中Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)的表达,并探讨其可能通过的受体途径.方法:常规培养人结肠上皮细胞株HT-29细胞,将HT-29细胞分为正常对照组(不加刺激剂),脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激组(LPS 20 μg/L刺激24 h),促肾上腺皮质释放因子(corticotrophin-releasing factor,CRF)刺激组(CRF 20 μg/L刺激24 h),CRF+LPS刺激组(预先CRF 20 μg/L刺激12h,更换细胞液后再与LPS 20 μg/L刺激12 h),CRF+Antalarmin组(CRF与Antalarmin 20 μg/L共刺激24 h),CRF+LPS+Antalarmin组(CRF与Antalarmin 20μg/L共刺激12h后再以LPS刺激12 h),CRF+Astressin2B组(CRE与Astressin2B 20 μg/L共刺激24 h),CRF+LPS+Astressin2B组(CRF与Astressin2B 20 μg/L共刺激12 h后再以LPS刺激12h).刺激结束后,收取各组HT-29细胞,RT-PCR法和免疫印迹法检测各组上皮细胞中TLR4 mRNA和蛋白的表达.ELISA法检测各组细胞上清液中IL-8的表达.结果:CRF可以诱导人结肠上皮细胞株HT-29细胞中TLR4表达导致IL-8分泌增多(P＜0.05),CRF1受体拮抗剂不能有效地阻滞CRF对TLR4的诱导(P＞0.05,CRF+LPS组vsCRF组),CRF2受体拮抗剂可阻滞CRF对TLR4的诱导(P＜0.05,CRF+LPS组vsCRF组).结论:CRF通过CRF2受体通路介导肠上皮细胞中TLR4的表达.
关键词： 促肾上腺皮质释放因子 Toll样受体 肠上皮细胞
