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Syk(SYK-mRNA)在乳腺癌和非癌组织中的表达及其意义
目的:探讨乳腺癌研究领域中的新分子Syk及其编码基因SYK-mRNA在乳腺癌和非癌组织(乳腺纤维腺瘤和癌旁乳腺组织)中的表达及其意义.方法:分别采用免疫组化S-P法和原位RT-PCR方法检测52例乳腺侵袭性导管癌和39例非癌组织(包括乳腺纤维腺瘤22例和癌旁乳腺组织17例)中Syk和SYK-mRNA的表达.结果:乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和癌旁乳腺组织中Syk表达率分别为42.3%(22/52例)、100%(22/22例)和100%(17/17例);SYK-mRNA的表达率分别为38%(20/52例)、91%(20/22例)和100%(17/17例).Syk在乳腺癌中的阳性表达率和表达量均显著低于非癌组织(x2=31.01,P＜0.05;F=52.384,P＜0.05);SYK-mRNA在乳腺癌中的表达率和表达量也都显著低于非癌组织(x2=30.64,P＜0.05;H=35.08,P＜0.05).Syk和SYK-mRNA表达的一致性为91%(x2=57.50,P＜0.01;kappa=0.815,P＜0.01).结论:乳腺癌的发生和癌细胞的生长可能与Syk(SYK-mRNA)的低表达或缺失有关,提示SYK基因可能是乳腺癌的一种候选抑癌基因.
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H2-Calponin蛋白在4种癌组织的表达及临床意义
目的 探索肿瘤相关抗原H2-Calponin mRNA及其蛋白在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达及其临床意义.方法 用免疫组织化学和原位RT-PCR检测癌组织中H2-Calponin蛋白及其mRNA的表达分布和定位情况.结果 H2-Calponin蛋白主要分布在胞质；在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中阳性率分别为30.0％、27.5％、45.0％和51.8％,肝癌组织阳性率高.H2-Calponin mRNA定位主要在细胞核周；H2-Calponin mRNA在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达阳性率分别为17.5％、10.0％、20.0％和50.0％,在肝癌组织阳性率高(P＜0.05).H2-Calponin在伴有转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无转移的肝癌组织中的阳性表达率(P＜0.05),但该蛋白在4种不同癌组织中的表达与患者的性别、年龄及癌组织的病理分级等因素无关.结论 肝癌组织高表达H2-Calponin蛋白和mRNA,可能具有肝癌特异性且与肝癌是否伴有转移相关.
关键词： H2-Calponin 肝癌 免疫组织化学 原位RT-PCR -
原位RT-PCR测定雄性幼鼠肾上腺中Ⅰ、Ⅲ型17β羟甾脱氢酶的表达
目的探讨生后5d小鼠肾上腺X带细胞的功能及其与雄性性分化的关系. 方法应用原位RT-PCR技术分别测定5?d小鼠肾上腺中Ⅰ、Ⅲ两型17β HSD的表达. 结果在肾上腺皮、髓质交界的X带细胞中有Ⅰ、Ⅲ两型17β HSD的表达 . 结论未成年小鼠肾上腺X带细胞能合成雄激素,并与睾丸合成的雄激素共同促进雄性性分化.
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直接原位RT-PCR检测人成骨肉瘤MG-63细胞株雌激素受体亚型表达
目的观察人成骨肉瘤MG-63细胞株雌激素受体亚型mRNA表达特征.方法用直接原位RT-PCR及激光共聚焦显微镜观察MG-63细胞株在培养第6及第9天ERα、ERβ mRNA表达.结果各检测点均见一定量的荧光弥散于细胞内.阳性对照点荧光较其他两点强,阴性对照点荧光明显减弱,仅见少量背景荧光.ERα的荧光强度强于ERβ.结论(1)MG-63细胞株作为成骨细胞模型,存在ERα和ERβ基因的mRNA表达.(2)骨基质成熟早期阶段MG-63细胞株的ERα表达比ERβ丰富,这表明两者在功能上存在差异.
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尼尔雌醇联合左炔诺孕酮对人成骨肉瘤MG-63细胞株雌激素受体亚型表达作用
目的 观察NYL(尼尔雌醇)联合LNG(左炔诺孕酮)干预培养人成骨肉瘤MG-63细胞株在雌激素受体(ER)亚型mRNA表达过程中是否存在正性协同作用.方法 用直接原位RT-PCR及激光共聚焦显微镜观察不同药物干预组的MG-63细胞株ERα、ERβ mRNA表达.结果 NYL及LNG两种药物联合干预培养组的ERα或ERβ的荧光强度均明显超过两种药物单独干预培养组.结论 NYL和LNG在诱导MG-63细胞株ER亚型表达上调过程中具有正性协同作用,LNG可具有独立预防骨质疏松作用.
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非霍奇金淋巴瘤中HCV感染、p53和bcl-6表达及其相关性研究
目的:探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)与丙型肝炎病毒(HCV)感染的相关性及其可能发病机制.方法:应用免疫组织化学S-P法对133例NHL和25例良性淋巴组织病变(BLPC)进行p53、bcl-6及HCV TORDJI-22蛋白的检测,对其中58例NHL和全部BLPC进行HCV RNA的原位RT-PCR检测.结果:NHL中HCV感染阳性率12.8%(17/133),BLPC中HCV感染阴性,两组比较差异有显著意义,P<0.05.NHL中p53阳性71例(53.4%),bcl-6阳性52例(39.1%);BLPC中p53为阴性,bcl-6阳性10例(40.0%).17例HCV阳性NHL中p53阳性13例,P<0.05,bcl-6阳性8例.结论:1)HCV感染与NHL之间有关;2)HCV可能通过调控p53的表达而与NHL的发生有一定的关系;3)NHL中HCV的感染和bcl-6的表达可能是两个独立的事件.
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用原位RT-PCR技术检测大肠癌组织中相关新基因SNC66的表达
目的:探讨在肿瘤组织石蜡切片标本中原位检测内源性基因表达产物的灵敏方法,研究大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌组织中的表达情况以及与大肠癌的相关性.方法:经原位逆转录后进行原位PCR扩增,在扩增过程中掺入地高辛标记的核苷酸(Dig-UTP)并加以检测.比较SNC66在大肠粘膜和大肠癌组织中的表达情况.结果:25个循环时,37例大肠癌组织标本有10例阴性不表达,27例强阳性表达.10个循环时,则14例呈阴性,18例弱阳性,5例强阳性.配对的37例大肠粘膜标本则都呈强阳性表达.结论:原位RT-PCR是一种检测内源性基因低拷贝转录产物mRNA的较灵敏的方法.SNC66基因在大肠癌组织中存在明显的表达降低或缺陷,可作为侯选的抑癌基因加以进一步研究.
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原位RT-PCR法检测柯萨奇B病毒RNA的实验研究
目的建立定位检测细胞或组织中柯萨奇B病毒RNA的原位RT-PCR方法(直接法).方法对柯萨奇B病毒(1～6型)感染HeLa细胞,经核酸酶(DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行原位RT-PCR检测.结果经扩增后,病毒感染的HeLa细胞呈蓝黑阳性信号;并且这种阳性信号经RNase A作用而消失,却不受DNase作用的影响;而非感染的HeLa细胞则不着色.结论原位RT-PCR法可特异地检测柯萨奇B病毒感染HeLa细胞中的病毒RNA,是一种特异和敏感的定位检测方法,可应用于研究该病毒的持续性感染及其与克山病等相关疾病的关系.
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钙结合蛋白S100A13在肝癌组织中的表达及其临床意义
目的:探索钙结合蛋白S100A13(S100 calcium binding protein A13,S100A13)在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义.方法:收集广西医科大学第一附属医院34例HCC及相应癌旁组织、18例正常肝组织标本,商业购置197例肝癌及相应癌旁高密度组织芯片.应用原位RT-PCR技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13 mRNA的表达,使用免疫组织化学技术检测HCC组织、癌旁组织、正常肝组织中S100A13蛋白的表达,并用Image-ProPlus软件分析免疫组织化学光密度值.结果:S100A13 mRNA在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为70.21%、51.06%和33.33%;S100A13 mRNA定位主要在胞核,多表达于核膜.S100A13蛋白在HCC、相应癌旁和正常肝组织中表达的阳性率分别为55.84%,38.96%及26.32%,HCC组织中的平均D值高(0.038±0.051),其次是癌旁组织(0.022±0.034),正常肝组织(0.01±0.009)低(P<0.05);S100A13蛋白主要表达于HCC细胞的胞质中,部分细胞核偶见表达,此外在癌旁次生胆小管中及部分炎细胞中也存在高表达.S100A13蛋白在HCC中的表达与患者的性别、年龄及病理分级无关.结论:HCC组织高表达S100A13蛋白,S100A13可能具有作为肝癌治疗靶点的潜力.
关键词： S100A13 肝细胞性肝癌(HCC) 原位RT-PCR 免疫组织化学 -
bcl-6阳性无特殊性外周T细胞淋巴瘤伴HCV感染
bcl-6基因首先在伴有3q27转位的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBL)中发现,编码一个由706个氨基酸组成的锌指蛋白.该蛋白异常表达被认为是相关淋巴细胞恶性转化的机制之一.在淋巴瘤中,bcl-6主要表达于B细胞性淋巴瘤,在T细胞淋巴瘤(TCL)中,鲜见有表达.
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用原位RT-PCR对BHK-21细胞中的FMDV检测和定位
目的为了明确FMDV在BHK-21细胞中的复制和增殖部位,建立原位检测FMDV的方法.方法以地高辛标记的寡核苷酸作为探针,用间接原位RT-PCR技术对实验接种FMDV的BHK-21细胞中的FMDV RNA进行检测和定位.结果在接毒细胞的细胞质中有大量强阳性蓝染颗粒,阴性对照细胞中没有蓝染颗粒出现,也没有明显的背景染色.结论结果表明FMDV RNA在细胞的细胞质中进行复制和增殖,同时也表明原位RT-PCR是检测细胞内病毒的一种敏感、特异的方法.
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原位RT-PCR检测革螨体内HFRSV的实验研究
目的确定肾综合征出血热病毒(HFRSV)在革螨体内分布和定位,进一步证明革螨作为HFRS传播媒介的意义.方法采用原位RT-PCR分子杂交技术检测鼠肺组织细胞内和革螨体内的HFRSV-RNA.结果阳性信号呈弥散分布,多见于鼠肺吞噬细胞、血管内皮细胞等组织细胞内;革螨体内的阳性信号主要分布于卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞中,前体组织细胞较少.结论地高辛素标记的核酸探针原位RT-PCR分子杂交的阳性信号具有HFRS病毒特异性和RNA特异性.
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TMEM135在人体组织中的表达
目的：研究TMEM135 mRNA及蛋白在人体多种正常及肿瘤组织的表达。方法原位RT-PCR及免疫组化技术检测TMEM135在正常组织118例、良性肿瘤组织18例、恶性肿瘤组织55例中的表达。结果 TMEM135 mRNA和蛋白在人体组织中普遍表达；TMEM135 mRNA主要分布在核膜上，而TMEM135蛋白主要分布在胞质，且多为颗粒状分布；正常组织与恶性肿瘤间TMEM135蛋白表达有统计学差异（P＜0．05）。结论 TMEM135可能是一种与肿瘤相关的蛋白质。
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瘦素受体异构体ob-Ra和ob-Rb在胃腺癌组织中的表达
目的:研究瘦素受体异构体ob-Ra、ob-Rb mRNA在胃腺癌组织及细胞中表达,探讨瘦素受体异构体ob-Ra、ob-Rb表达在胃腺癌发生、发展过程中作用和意义.方法:采用RT-PCR方法检测26例具有瘦素和瘦素受体蛋白双重表达的胃腺癌组织标本中瘦素受体异构体ob-Ra、ob-Rb mRNA的表达情况,同时采用组织原位RT-PCR方法检测胃癌细胞中瘦素受体ob-Ra、ob-Rb mRNA的表达定位情况.结果:26例胃腺癌组织标本ob-Ra、ob-Rb mRNA表达均为阳性,ob-Ra、ob-Rb mRNA表达定位于胃腺癌细胞,表现为细胞质染成紫蓝色颗粒.结论:胃腺癌组织中有瘦素受体异构体ob-Ra、ob-Rb的表达,可以通过激活胃腺癌细胞上ob-Ra、ob-Rb受体下游的信号通路介导其促进肿瘤生长的生物学效应.
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原位RT-PCR检测血管瘤组织Ang2 mRNA及其受体Tie2 mRNA的表达
目的:探讨Ang2及其受体Tie2与血管瘤发生、发展的关系.方法:采用原位RT-PCR方法,对临床收集的62例手术切除的先天性皮肤血管标本(其中增生期血管瘤26例,消退期血管瘤24例,静脉型血管畸形12例)进行Ang2 mRNA,Tie2 mRNA表达水平的检测.结果:增生期、消退期血管瘤及静脉型血管畸形均有Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的阳性信号,但是三者阳性信号强弱有显著性差异(P﹤0.01),即静脉型血管畸形Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的表达较不同生长时期血管瘤低,增生期血管瘤二者的表达高于消退期.结论:Ang2及其受体Tie2可能与血管瘤及静脉型血管畸形的发生、发展有关.
