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新生大鼠海马神经干细胞表达趋化因子受体CCR2的体外研究
目的 探讨趋化因子受体CCR2在体外培养神经干细胞的表达.方法 采用无血清方法分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,细胞免疫荧光方法检测神经干细胞标志巢蛋白(nestin)表达及干细胞多向分化为神经元及胶质细胞的能力,通过细胞免疫荧光及RT-PCR的方法检测神经干细胞表达趋化因子受体CCR2的情况.结果 体外培养新生大鼠海马神经干细胞呈nestin阳性,可分化为NF200阳性神经元、GFAP阳性星形胶质细胞及CNP阳性少突胶质细胞,CCR2细胞免疫荧光及RT-PCR证实神经干细胞表达趋化因子受体CCR2.结论 新生大鼠海马神经干细胞表达趋化因子受体CCR2,为进一步研究其体内、外迁移提供理论依据.
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趋化因子MCP-1体外趋化骨髓基质细胞迁移的实验研究
目的 探讨趋化因子MCP-1对骨髓基质细胞的体外迁移作用.方法 采用全骨髓法培养成年Wistar大鼠骨髓基质细胞,取第5代骨髓基质细胞行免疫荧光鉴定;后通过细胞免疫荧光及RT-PCR的方法检测骨髓基质细胞表达趋化因子受体CCR2的情况,利用Boyden小室法探讨趋化因子MCP-1对骨髓基质细胞的体外趋化作用及其特异性.结果 第5代骨髓基质细胞都表达间充质干细胞标记物Vimentin、Laminin及Fibronectin;细胞免疫荧光及RT-PCR结果证实骨髓基质细胞表达趋化因子受体CCR2,趋化因子MCP-1(5～500ng/mL)体外可趋化骨髓基质细胞迁移,抗MCP-1多克隆抗体可对抗其趋化迁移作用.结论 MCP-1/ CCR2通路参与骨髓基质细胞体外迁移,为进一步研究骨髓基质细胞的迁移机制提供了理论依据.
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雷公藤红素对破骨细胞及胶原诱导关节炎小鼠中趋化因子CXCL2表达的影响
目的：探讨雷公藤红素（Celastrol，Cel）通过抑制趋化因子CXCL2的表达减少大鼠骨髓诱导的破骨细胞形成及胶原诱导的关节炎小鼠（CIA小鼠）模型局部关节炎症及骨侵蚀的发生。方法体内实验制备CIA小鼠模型，分为空白对照组、CIA组及Cel组，以病理染色的方法观察小鼠关节炎症，以实时荧光定量PCR及ELISA的方法检测关节局部及血清的CXCL2表达的变化；体外实验诱导大鼠骨髓形成破骨细胞，加入不同浓度的Cel，通过实时荧光定量PCR检测CXCL2的变化。结果破骨前体细胞及CIA小鼠中CXCL2高表达，且Cel能够抑制其表达，且成剂量依赖性。结论 Cel可能通过抑制趋化因子CXCL2的表达，抑制炎性细胞对组织的浸润，从而减少组织破坏。
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趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制研究
目的 研究趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制.方法 采用RT-PCR检测20例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞株CAOV3、血管内皮细胞株HUVEC和20例正常卵巢组织中CXCL12的mRNA表达及卵巢癌腹膜后淋巴组织和输卵管平滑肌组织中CXCL12的表达,ELISA法检测20例卵巢癌患者腹水中趋化因子CXCL12表达水平,比较不同浓度CXCL12对CAOV3及HUVEC细胞迁移能力及其表面相关黏附分子表达水平的影响.结果 20例卵巢癌组织、卵巢细胞CAOV3、内皮细胞HUVEC、转移的淋巴组织中CXCL12mRNA相对表达量分别为2.41±1.05、1.92±1.17、1.73±1.12、1.68±1.13,而正常组未检出,各组比较有显著性差异(F=2.907,P=0.032).20例卵巢癌患者腹水中有19例检测到趋化因子CXCL12,检出率95.0%,CXCL12水平为(6 552.7±476.5)pg/mL.与对照组相比,CAOV3细胞经CXCL12处理后,与细胞外基质的粘附能力相对粘附率由(22.65±2.3)%上升至(51.47±2.7)%(t=4.696,P<0.05).卵巢癌细胞株CAOV3与内皮细胞HUVEC中,加入CXCL12处理后,经Tramswell法检测,结果显示细胞数显著增加(t值分别为3.326、3.897、3.215、3.168,均P<0.05),提示细胞的侵袭与迁移能力明显增强,其中浓度为100ng/mL的趋化活性高,CAOV3 与HUVEC细胞趋化指数分别为4.0±1.5、4.3±1.7,对照组趋化指数分别为1.1±0.5、1.2±0.6,比较差异有统计学意义(t值分别为2.687、2.938,均P<0.05).结论 趋化因子CXCL12通过调控卵巢癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,进而提高CAOV3、HUVEC细胞活性,参与卵巢癌细胞的侵袭和转移.
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趋化因子及其受体与滋养细胞的侵蚀
趋化因子及其受体,除了具有免疫调节功能外,还与滋养细胞侵蚀等密切相关,该文就近年来有关趋化因子及其受体的研究进展综述如下.
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趋化因子及其受体与子宫内膜异位症
趋化因子是一类可以趋化并激活免疫细胞的可溶性小分子细胞因子,具有广泛的生物学活性,参与了包括自身免疫性疾病、艾滋病、子宫内膜异位症等多种疾病的发生.趋化因子通过与其受体结合而发挥生物学效应.该文拟就趋化因子及其受体在子宫内膜异位症的发生发展中所起的作用作以综述.
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趋化因子与早产的诊断
早产是常见的妊娠并发症,发病率约为10%左右.早产妇女中,20%～33%合并有羊膜腔感染.如果能早期发现尚处于亚临床期的羊膜腔感染,予以相应的治疗,就能避免相当一部分早产的发生.随着人们对炎症性疾病的病理生理过程研究的深入,发现趋化因子在炎症的发展以及分娩发动过程中扮演了重要角色.该文将就趋化因子在早产早期诊断中的作用做一综述.
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趋化因子与女性生殖活动
趋化因子是一类作用于白细胞迁移、活化和功能发挥的小分子蛋白.在女性生殖活动中,趋化因子直接或通过影响白细胞作用于卵巢、子宫内膜等,对卵巢、子宫内膜生理、病理及宫颈成熟和分娩起重要作用.
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趋化因子与先兆子痫
趋化因子及其受体除在自身免疫及炎症反应发挥作用外,还可能是免疫反应的主要管理者,在妊娠局部免疫反应中发挥重要作用.在女性生殖活动中,趋化因子直接或间接通过影响白细胞作用于子宫内膜,参与胚胎着床、胎盘血管重铸、分娩等生理过程,在母胎免疫平衡失调性病理妊娠如先兆子痫、习惯性流产的发病机制中也起重要作用.
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趋化因子及其受体与子宫内膜异位症的关系
子宫内膜异位症在腹腔内环境变化和异位灶本身特性是其研究的聚集点.当子宫内膜粘附性和侵袭性增加,腹膜间皮的防御功能下降,同时腹腔液中的微环境改变时有利于异位灶的形成和发展;腹腔内免疫细胞的活化是EM发生发展的中心环节,趋化因子及受体参与腹腔免疫活性细胞的招募,致使患者的血清和腹腔液中多种免疫成分发生变化,从而降低了盆腹腔微环境对异位子宫内膜的监视,识别和破坏,逃避机体的免疫攻击,并可能促进异位子宫内膜的增殖.
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外周血内皮祖细胞可增强骨髓间充质干细胞SDF-1和MCP-1的分泌并促进其归巢
目的 本研究旨在探讨兔外周血内皮祖细胞(PB-EPC)对骨髓间充质干细胞(BMSC)体内归巢的影响及其作用机制.方法 应用增强型绿色荧光蛋白(E GFP)慢病毒表达载体感染BMSC,构建生物骨移植修复兔桡骨缺损模型,实验组采用BMSC和PB-EPC(1∶1)联合培养细胞生物骨;对照组采用BMSC生物骨;空白组仅制作骨缺损不进行任何修复处理.三组均在2、4、8周,实时定量PCR检测骨缺损组织基质细胞衍生因子1(SDF-1)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA的表达,ELISA检测血清SDF-1、MCP-1的蛋白水平;免疫组织化学染色检测骨缺损部位2、4、8周EGFP染色阳性率.结果 在2、4、8周,实验组SDF-1、MCP-1的表达高于对照组和空白组;4周后实验组骨缺损部位EGFP表达阳性率高于对照组和空白组.结论 PB-EPC可促进骨缺损部位BMSC SDF-1、MCP-1的表达且骨缺损部位EGFP表达阳性率增高.
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PPAR-γ激动剂抑制IFN-γ和TNF-α诱导的肾小管上皮细胞趋化因子表达
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPAR-γ)激动剂15-脱氧-12,14-前列腺素J2(15 d-PGJ2)对IFN-γ和TNF-α共同诱导HK-2肾小管上皮细胞趋化因子表达的影响.方法 在IFN-γ和TNF-α联合刺激HK-2细胞的同时加入不同浓度的15d-PGJ2共同作用48 h,用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA分别检测CXCL9、CXCL10和CXCL11的mRNA表达和蛋白分泌水平.结果 在HK-2细胞中,IFN-γ和TNF-α联合刺激能够诱导趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA表达和蛋白分泌;经不同浓度的15d-PGJ2干预后,CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA表达和蛋白分泌均被抑制,在15d-PGJ2浓度为2.0 ng/mL时,15d-PGJ2对CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA和蛋白分泌的影响大,与IFN-γ联合TNF-α组(15d-PGJ2浓度为0 ng/mL)相比,CXCL9、CXCL10、CXCL11的mRNA分别下降76.8％、78.7％和81.9％,培养上清中趋化因子蛋白分泌分别下降66.9％、86.6％和39.9％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PPAR-γ激动剂可抑制IFN-γ和TNF-α联合作用诱导的肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 趋化因子 人肾小管上皮细胞 细胞因子 -
SNL大鼠CD4+ T细胞脊髓浸润及其分子机制研究
目的:研究脊神经结扎后,外周CD4+ T细胞迁移浸润至腰段脊髓及其分子调控机制.方法:选择健康成年清洁级雄性SD大鼠,随机分为脊神经结扎组(Tx 组)、假冒手术组(S组)、对照组(C组),用up-down方法测定50％机械缩足阈值(50％ MWT),并用FACS检测腰段脊髓CD4+ T细胞的浸润情况,RT-qPCR法测定脊髓中趋化因子CCL2、CCL5、CXCL10mRNA的表达水平,ELISA检测血清中相关细胞因子的含量.结果:与S组、C组相比,术后3 d,Tx组50％ MWT明显降低(P＜0.01),至术后14 d达低值,S组与C组在各时间点均无明显差异(P＞0.05)；术后7d,Tx组腰段脊髓浸润的CD4+ T细胞明显增加(P＜0.01),同时伴有CCL2、CCL5mRNA 的表达增加(P＜0.05)；术后14 d,Tx组浸润的CD4+T 细胞较术后7d减少,虽高于S组、C组,但无统计学意义,上述各趋化因子的表达水平也无明显差异；术后7d、14 d,血清中各细胞因子的含量三组均无统计学意义.结论:神经损伤后,脊髓中高表达的趋化因子促进了外周CD4+ T细胞的中枢浸润,脊髓浸润的CD4+T 细胞可能与神经病理性疼痛的维持有关.
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人CXCR3B基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究
目的:克隆人CXCR3B基因,并构建含有该目的基因的真核表达载体,获得稳定表达人CXCR3B分子的基因转染细胞株L929-huCXCR3B.方法:采用PCR方法从pMD19-T/huCXCR3A质粒中扩增人CXCR3B基因,通过双酶切装入真核表达载体pIRES2-EGFP中；脂质体法转染L929细胞,G418加压筛选阳性克隆；分别用RT-PCR方法与免疫荧光技术分析阳性克隆中人CXCR3B在mRNA和蛋白水平的表达.MTT分析基因转染细胞株 L929-huCXCR3B 在Mig( monokine induced by IFN-γ,IFN-γ诱导的单核因子)作用下的增殖能力.结果:成功克隆了人CXCR3B基因并构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/huCXCR3B,转染该载体后获得了稳定表达人CXCR3B的基因转染细胞株L929-huCXCR3B,膜表面CX-CR3B分子的阳性表达率为93％.该基因转染细胞与其配体Mig共培养24、48及72 h,抑制率分别为41.44％、44.01％和24.80％.结论:L929-huCXCR3B细胞株的建立为研究CXCR3B信号转导及制备相应的单克隆抗体(mAb)奠定了基础.
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腺病毒细菌重组系统表达Crg-2蛋白的实验研究
目的:利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白.方法:首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Western blot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性.结果:穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Western blot检测有一接近Mr10 000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用.结论:采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2.
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小鼠SLC基因真核表达载体的构建及其趋化活性鉴定
目的:克隆小鼠次级淋巴样组织趋化因子(secondary lymph-oid-tissue chemokine,SLC)基因,并构建真核表达载体.在体内外检测该表达载体表达产物的免疫趋化功能.方法:用RT-PCR从C57BL/6小鼠胸腺组织中克隆小鼠SLC基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-mSLC.在体外,用基因枪转染小鼠黑色素瘤B16F10细胞;RT-PCR检测转染细胞有SLC的表达;利用趋化小室法,检测表达产物针对淋巴细胞的趋化活性.在体内,用基因枪通过小鼠皮肤局部转染SLC基因,观察转染局部淋巴细胞的浸润.结果:克隆的基因经测序证实,为小鼠SLC基因Scya21b型.转染SLC基因的B16F10细胞体外培养48 h后,RT-PCR检测到SLC的表达,同时培养基上清具有针对淋巴细胞的趋化活性.通过基因枪局部转染小鼠皮肤,24 h后皮肤病理检查显示,局部皮内有明显的淋巴细胞浸润.结论:从小鼠胸腺组织中克隆到小鼠SLC基因,构建的真核表达载体pcDNA3.1-mSLC在体内外均可以表达,并具有针对淋巴细胞的趋化活性.
关键词： 趋化因子 次级淋巴样组织趋化因子 基因枪 -
CXC趋化因子CRG-2真核表达载体的构建及表达
CRG-2属于趋化因子家嗾中的CXC亚族,人源类似物称为IP-10,其受体CXCR3主要分布于激活的T细胞[1].趋化因子是一类在炎性因子刺激下表达的小分子分泌蛋白,参与淋巴细胞的定向迁移、渗出与激活,在伤口愈合及炎症中有重要作用[2].初认为,趋化因子主要对不同的淋巴细胞亚群有作用,随后发现其也参与其它的生理及病理过程,如趋化因子受体可作为HIV感染的辅助受体参与艾滋病的发病,以及血管生成的调节等[3].为探讨趋化因子作为候选分子在肿瘤抑制疗法中的应用,我们选择了对T细胞有特异性趋化作用的鼠CRG-2分子,构建真核表达载体,转染了Lewis肺癌细胞系.
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TRGV及预后相关趋化因子/受体基因在T细胞淋巴瘤中的表达变化
目的 分析非γδ T细胞型的T细胞淋巴瘤患者外周血中T细胞受体γ(TCR γ)亚家族可变区Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(TRGV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)基因和预后相关趋化因子及其受体基因(CCL20、CCR6、CCL17、CCL22以及CCR4)的表达情况,探讨γδ T细胞与趋化因子/受体表达的相关性及其与疾病转归的相关性.方法 收集27例非γδ T细胞型的T细胞淋巴瘤患者外周血样本,同时收集9例健康志愿者外周血样本作为对照.采用荧光实时定量PCR检测T细胞淋巴瘤患者以及正常人外周血中TRGV Ⅰ～Ⅲ亚家族基因以及CCL20/CCR6、CCL17/CCL22/CCR4基因的表达水平.结果 初发组、难治复发组和缓解组的TRGV Ⅰ～Ⅲ亚家族的表达水平与正常组相比均有不同程度的增高,且TRGV亚家族表达模式发生改变.初发组和难治复发组的CCL22和CCR4的表达水平显著高于正常组,而CCL17表达水平显著低于正常组.初发、缓解和难治复发组的患者外周血中TRGV各亚家族基因与各趋化因子及受体基因表达水平的相关性模式也发生改变.初发组和难治复发组存在低表达的TRGVⅡ亚家族,治疗缓解后TRGV Ⅱ亚家族的表达升高.结论 TRGV Ⅱ亚家族可能是抗T细胞淋巴瘤的T细胞功能亚群,可能与疾病的发病和转归相关.T细胞淋巴瘤中高表达水平的CCL22/CCR4,可能与疾病的发病有关.
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慢性乙型肝炎患者外周血趋化因子和炎症因子的水平
慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染而导致的炎症性疾病.是以局部单核细胞、淋巴细胞及中性粒细胞浸润为主的感染性疾病[1].HBV感染宿主细胞后可诱导宿主细胞中趋化因子分泌及其受体表达,趋化因子/受体的相互作用进一步介导中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等向炎症部位聚集,参与组织损伤[2].白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)是第一个被发现的CXC趋化因子,CXC趋化因子配体1[chemokine(C-X-C motif) ligand 1,CXCL1]和CXCL2也属于趋化因子CXC 族,它们都是中性粒细胞趋化因子.中性粒细胞趋化因子在慢性乙型肝炎患者外周血的水平尚不清楚.
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Eotaxin处理的黑色素瘤小鼠的肿瘤组织及细胞因子研究
目的:探讨嗜酸性粒细胞(EOS)趋化因子局部注射后观察小鼠的肿瘤生长情况,肿瘤组织细胞因子的变化.推测EOS和肿瘤之间的相互关系.方法:用BALB/c小鼠建立黑色素瘤小鼠模型,并在种瘤部位附近局部注射eotaxin(EOS趋化因子,100 μg/L),隔天注射1次.于第16天处死小鼠,取其肿瘤组织做HE染色,观察肿瘤组织局部形态结构的变化.以放射免疫法检测黑色素瘤小鼠血清以及肿瘤组织匀浆中TNF-α和IL-10的含量.结果:(1)非EOS趋化因子组和EOS趋化因子组肿瘤称重显示组间无统计学意义.(2)HE染色显示,EOS趋化因子组镜下观察到在肿瘤组织间质周围可见大量的坏死组织和炎症细胞浸润,在肿瘤组织内有较多嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞浸润.而在非EOS趋化因子组肿瘤组织内及周围EOS浸润较少,巨噬细胞也较少.(3)放射免疫法结果显示EOS趋化因子处理组肿瘤组织匀浆中TNF-α、IL-10含量明显高于非EOS趋化因子处理组肿瘤组织匀浆中TNF-α、IL-10含量.而血清中两个组的TNF-α、IL-10含量无明显差别.结论:用EOS趋化因子局部注射后,在肿瘤组织中EOS和巨噬细胞浸润明显增加,EOS对肿瘤生长无明显抑制作用.
