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甲泼尼龙对受损脊髓组织中抗菌肽相关基因表达的调节
目的 探讨甲泼尼龙对受损脊髓组织中抗菌肽相关基因表达的影响.方法 6只成年家兔随机分为2组,即模型组(M组,n=3)和药物治疗组(D组,n=3).进行L4椎板切除术后采用Allen法建立外伤性脊髓损伤模型.药物组在造模后2h给予大剂量甲泼尼龙冲击治疗.于造模后8h处死所用家兔获取以创伤部位为中心长约8 mm的脊髓组织,分别提取总RNA.采用Agilent兔子全基因4×44K芯片进行检测,Genespring 11.0软件进行数据分析.结合P值和倍数变化(Fold Change,FC)筛选出差异表达基因.差异表达的筛选条件为P＜0.05且FC＞2.显著性差异表达的筛选条件为P＜0.01且FC＞ 10.结果 成功建立脊髓损伤模型.6个脊髓组织总RNA样本2100 RIN≥7.0并且 28S/18S≥0.7.全部基因芯片质控指标CV值均＜15％.D组和M组比较,共有477个探针呈现差异表达,抗菌肽相关基因中防御素NP-3、NP-4和CAP18呈现显著差异(P＜0.05).结论 大剂量甲泼尼龙对急性脊髓损伤中抗菌肽相关基因表达有显著的调节作用,防御素NP-3、NP-4和CAP18可能是其发挥神经保护作用的主效应分子.
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凋亡信号通路对创伤性深静脉血栓形成影响的实验研究
目的 探讨凋亡信号通路对创伤性深静脉血栓(TDVT)形成中的意义.方法 将150只SD大鼠随机分为正常对照(A组)和模型组.模型组根据造模后的不同生物学状态再分为7组:创伤即刻(B组)、血栓形成前期(C组)、高峰期血栓形成(D组)、高峰期血栓不形成(H组)、血栓消退期(E组)、血栓不消退(F组)和血栓不形成(G组),在相应时相点无创切取股静脉血管组织,随后抽取各组大鼠总RNA,用Genechip Rat Genome 4302.0芯片测定股静脉RNA表达,并分析凋亡信号通路基因表达变化情况.结果 凋亡信号通路中RIP1、PI3K、Akt/PKB、PKA、Cn、Calpain、IAP、CASP7、P53等关键基因均呈下调,调控细胞周期、血管内皮细胞数量等.结论 凋亡信号通路可能是调控血栓的生物学状态的重要信号通路之一.
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组织块移植法建立人肺癌裸鼠移植瘤模型
肺癌对人类的健康构成了严重的威胁,人肺癌裸鼠移植瘤模型的建立对于肺癌的研究是一项重要的工具.建立肺癌移植瘤模型的方法主要有细胞培养移植法、组织块移植法和匀浆液移植法.组织块移植法建立的模型能大限度地模拟人体内环境,是一种理想的模型.就组织块移植法建模的操作方法及当前研究进展作一综述.
关键词： 人肺癌裸鼠移植瘤模型 组织块移植法 IHC 基因芯片 -
参术胶囊治疗脾虚胃癌转移鼠模型的基因表达谱研究
目的:研究脾虚胃癌转移鼠模型的分子生物学特征;参术胶囊治疗脾虚胃癌转移鼠模型的基因表达谱变化,分析其治疗脾虚胃癌的分子机理.方法:在将BALB/c-nu/nu小鼠采用食醋法建立脾气虚证动物模型的基础上用外科原位移植方法,建立脾虚胃癌转移鼠病证结合动物模型;用基因芯片分别检测脾虚胃癌转移鼠模型组和胃癌细胞株,脾虚胃癌转移鼠模型组和空白对照组,参术胶囊治疗组和模型组,阳性药物的基因差异表达.结果:脾虚胃癌转移鼠模型中95条基因差异表达与代谢、免疫、离子通道和运输蛋白等有关;参术胶囊能逆向调节因脾虚胃癌引起的9条基因(代谢相关基因、离子通道和运输蛋白)的差异表达.结论:脾虚因素加重了脾虚胃癌的病情;参术胶囊是从多靶点出发来治疗脾虚胃癌和改善症状的.
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昆明女性生殖道人乳头瘤病毒感染状况调查
目的 了解昆明女性生殖道高危型人乳头瘤病毒的感染现状以及子宫颈癌和子宫颈上皮内瘤样病变的发病率.方法 采集昆明市1 499例女性子宫颈脱落细胞进行液基细胞学检查及第2代杂交捕获检测,并用亚能基因芯片技术进行人乳头瘤病毒DNA的分型,对于人乳头瘤病毒阳性和/或液基细胞学检查≥未明确诊断意义不典型鳞状上皮细胞的妇女进行阴道镜下活检,病理结果 作为诊断金标准.结果 第2代杂交捕获检测人群高危型人乳头瘤病毒总检出率为17.21%;高危型人乳头瘤病毒阳性人群中感染多的型别分别是16、52、58型,各年龄段人乳头瘤病毒感染率经比较差异有统计学意义(χ2=36.524,P<0.05).人乳头瘤病毒感染率随子宫颈病变级别的升高呈趋势性增加(P=0.040),宫颈癌和高度上皮内瘤样病变(≥Ⅱ)的发病率为2.20%.结论 高危型人乳头瘤病毒16、52、58型为昆明地区妇女常见的3种亚型.昆明地区的人乳头瘤病毒感染较高,宫颈癌和癌前病变的发病率处于中发水平,防癌的重点在于筛查早期癌和上皮内瘤样病变,预防人乳头瘤病毒感染,及时合理治疗上皮内瘤样病变.
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佛山地区人乳头瘤病毒感染亚型分析
目的 分析佛山地区人乳头瘤病毒感染亚型的分布情况.方法 对2008年11月～2009年10月在佛山市妇幼保健院宫颈疾病诊疗中心就诊的1 714例女性患者,采集宫颈脱落细胞,行反向点杂交人乳头瘤病毒基因分型检测和美国新柏氏细胞学检测.分析佛山地区人乳头瘤病毒亚型分布情况.结果 检测出570人(33.26%)感染了包括21种亚型的784个人乳头瘤病毒,其中HPV16亚型高(21.95%),其次为HPV52(16.70%).16～25岁患者人乳头瘤病毒感染亚型以HPV6(19.78%)和HPV11(10.07%)为主;26～35岁患者人乳头瘤病毒感染亚型以HPV16(19.30%)和HPV6(17.09%)为主;36～45岁患者人乳头瘤病毒感染亚型以HPV16(18.92%)和HPV52(16.89%)为主;46岁以上患者人乳头瘤病毒感染亚型以HPV52(19.6%)为主.结论 反向点杂交基因芯片法可有效用于人乳头瘤病毒的检测和基因分型,佛山地区人乳头瘤病毒感染亚型分布具有明显的地域性.
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基因芯片在妊娠相关疾病研究中的应用
基因芯片技术以信息量大、处理速度快、所需样品少、污染少等优点被广泛用于药物的筛选、新药的研制开发、疾病的诊断.该文通过几个方面对基因芯片在妊娠相关疾病中的应用加以综述.
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基因芯片技术在妇产科的应用
基因芯片技术是同时将大量的探针分子(DNA探针)有序地固定到固相支持物上,借助核酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行解读和分析.它具有多样品并行处理能力,分析速度快,所需样品少,极少污染等优点,可用于基因表达谱的分析、基因突变检测、多态性分析、基因测序和基因组文库作图等研究工作.近年来在临床诊断、药物筛查、疾病的预防等方面得到了广泛的应用.本文阐述了其在妇产科领域的应用及前景.
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基因芯片在子宫内膜容受性研究中的应用
基因芯片技术是一个大规模、高通量和高效率的基因组分析和基因表达研究的技术,可用于基因表达检测和疾病相关基因的筛选等方面.该文就应用基因芯片技术对子宫内膜容受性的研究加以综述.
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部队新生儿常见遗传性耳聋基因筛查分析
目的 了解部队新生儿耳聋易感基因的携带率及突变类型,并分析部队新生儿与普通人群新生儿之间耳聋基因突变率及突变类型的差异.方法 应用遗传性耳聋基因芯片技术,对2014年11月至2016年11月北部战区所属部队官兵所生新生儿937例进行GJB2(c.35delG、c.235delC、c.176del16、c.299 del AT)、SLC26A4(IVS7-2A>G和c.2168 A>G)、GJB3(c.538C>T)、线粒体12S rRNA (m.1494 C>T和m.1555 A>G)4个常见耳聋易感基因9个突变热点检测.结果 937例新生儿中,耳聋基因突变31例(3.31%).其中GJB2 13例,突变携带率为1.39%(13/937),包括c.176del16 2例(0.21%),c.235delC 6例(0.64%),c.299 del AT 5例(0.53%),而c.35delG 0例;SLC26A4基因突变13例,突变携带率为1.39%(13/937),均为IVS 7-2 A>G位点;GJB3基因突变2例(0.21%),皆为单基因杂合突变,无纯合突变;线粒体12S rRNA1555 A>G均质突变3例(0.32%),无异质突变.结论 与普通人群相比,部队新生儿耳聋基因突变类型相同,但携带率处于偏低水平,可能与样本量少引起的偏差有关,也可能与军人身体素质优于普通人群有关.耳聋基因筛查有利于药物性和迟发性耳聋的早期发现,是耳聋出生缺陷三级预防的重点.
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SHR大鼠前额叶皮层基因表达谱特征的初步分析
[目的]探讨注意缺陷多动障碍(attention-deficit hyperactivity disorder,ADHD)动物模型SHR(spontaneously hypertensive rats)大鼠与对照组WKY(Wistar-Kyoto rats)大鼠前额叶组织基因表达谱差异,试图从基因网络角度全面理解ADHD的分子机制及差异表达基因与其生物学特征间的关系.[方法]提取SHR/WKY大鼠前额叶组织mRNA,反转录成cDNA,体外转录并生物素标记cRNA,片断化后,分别与Affymetrix公司制备寡核苷酸RAE230A基因芯片杂交,对二者差异表达基因进行生物信息学分析.[结果]SHR大鼠与对照组WKY大鼠前额叶皮层组织中差异表达2倍以上的探针组数209个.对代表已知功能的67个独立基因进行分类,结果发现差异表达基因以神经发育相关、代谢相关、信号转导、免疫相关、转录调节相关基因为主,同时还涉及突触可塑性、髓鞘形成、学习记忆、高血压、细胞凋亡等不同层次、不同功能的基因群.[结论]SHR大鼠前额叶皮层组织的基因表达谱存在神经发育相关基因的表达异常、免疫相关基因的表达下调、多个转录因子的普遍上调和部分单胺类神经递质相关基因表达上调等特征.
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基因芯片与中医药抗肿瘤治疗的探讨
目的:探讨基因芯片与中医抗肿瘤治疗的可能性.方法:用肿瘤表达谱芯片研究中药土贝母作用后的胃腺癌细胞株RF21的基因表达变化.结论:加药组与对照组有多条基因变化,涉及细胞凋亡、抑制血管生成、免疫抑制、影响细胞骨架诸多方面.结论:可应用基因芯片进行中医抗肿瘤研究.
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槲皮素调节葡萄糖氧剥夺损伤的星形胶质细胞细胞周期基因的表达
目的 研究槲皮素对葡萄糖氧剥夺损伤星形胶质细胞基因表达的影响及作用机制.方法 将原代培养成熟的星形胶质细胞分为单纯葡萄糖氧剥夺组和葡萄糖氧剥夺联合槲皮素处理组(槲皮素处理组),用基因芯片筛查缺血缺氧4h后的槲皮素处理对星形胶质细胞基因表达变化的影响,并用实时定量PCR(qRT-PCR)对差异表达基因进行了验证.结果 与单纯葡萄糖氧剥夺组相比,槲皮素处理组基因表达谱芯片筛查出的31个基因与细胞周期及其相关调控密切相关,其中上调基因为5个,下调基因26个.用qRT-PCR对其中6个基因进行了验证,检测结果和基因芯片分析结果一致.结论 槲皮素能调控葡萄糖氧剥夺损伤的星形胶质细胞细胞周期相关基因的表达.
关键词： 星形胶质细胞 槲皮素 基因芯片 Real-time PCR 细胞周期 -
醛固酮致心肌纤维化相关基因的筛选
目的:寻找醛固酮独立致心肌纤维化(MF)的分子.方法:利用差速贴壁法分离培养胎儿心肌成纤维细胞(FCFs)；选择3～4代细胞给予醛固酮(ALD)处理8h、提取各组总RNA,用基因组芯片检测差异表达基因,利用Westernblot和RT-PCR对部分基因表达产物进行验证.结果:ALD处理后表达水平改变的基因共1 519个,其中上调的714个,下调的805个.选择与MF发生机制关系密切的趋化因子(C-C基元)配体7(CCL7)、基质金属蛋白酶26( MMP-26)及白细胞介素31受体α(IL31RA)等基因进行RT-PCR和Westernblot验证,结果与芯片检测一致.结论:利用基因芯片检测出ALD处理后FCFs多种基因表达发生改变,部分基因可能与MF有关.
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重组疫苗E.coli LLO/OVA经TLR4和NOD1受体诱导树突状细胞表达细胞因子
目的:探讨树突状细胞(DC)的模式识别受体(PPBs)活化与细胞因子表达的关系.方法:采用基因芯片及RT-PCR检测经E.coli LLO/OVA刺激后小鼠骨髓树突状细胞(bone marrw-derived dendritic cell,BMDC)的PPRs及其下游NF-KB信号通路相关分子mRNA的表达水平,并观察BMDC的活化状况及培养上清液内细胞因子含量.结果:经E.coliLLO/OVA刺激后2 h,BMDC出现短暂的TLR4 mRNA表达上调,其下游信号途径相关的Myd88、Rip2、Irak1、Imk2、Ikkα、NF-KB1和NF-KB2 mRNA均出现表达上调,黏附分子Icam1、细胞因子IL-1α、IL-1b、IL-6和TNF-α的mRNA也表达上调;经E.coli LLO/OVA刺激后4 h,BMDC出现Card4(NOD1)mRNA表达上调,其下游信号途径相关的Rip2、Ikkβ、NFkB1和NF-KB2 mRNA均出现表达上调,IFN-γ、TNF-β和CD40 mRNA也上调表达.经E.coli LLO/OVA刺激后24 h,BMDC表达共刺激分子及MHC-Ⅱ类分子上调;且培养上清液内IL-12和IFN-γ含量增高.结论:重组疫苗E.coli LLO/OVA经TLR4和NOD1受体激活NF-KB信号通路,诱导了小鼠BMDC成熟并表达一系列细胞因子尤其是IL-12和IFN-γ.
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乳杆菌肽聚糖调节小鼠免疫细胞基因表达的通路分析
目的:探索乳杆菌肽聚糖免疫调节作用的机制.方法:BALB/c小鼠腹腔注射乳杆菌肽聚糖,从腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞提取RNA,基因芯片分析基因表达情况,基于已知的基因网络数据库利用PathwayExplorer和GeneMAPP分析乳杆菌肽聚糖刺激特异性的基因网络.结果:PathwayEx-plorer分析得到的显著变化的基因网络是"细胞因子-细胞因子受体相互作用"和"辅助性T细胞表面分子".GeneMAPP分析得到显著基因网络是核糖体蛋白、炎性反应基因网络和血红素合成基因网络.结论:乳杆菌肽聚糖刺激引起大量蛋白表达,引起保护性炎性反应,激活Th细胞,可能引起Th1免疫反应.
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肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响
目的: 探讨肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响.方法: 采用脂质体法, 以重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染肝癌细胞系SMMC-7721, 经G418稳定筛选、克隆及扩增, 采用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学(ICC)染色法, 检测目的基因及其蛋白的表达.用FACS检测细胞周期的变化;电镜技术观察细胞的超微结构;体外运动、侵袭实验检测细胞运动及侵袭能力;并应用基因芯片技术检测相关基因的差异表达.结果: RT-PCR检测显示, 转染pcDNA3.1-OVA66的细胞中OVA66基因呈高表达.Western blot显示, 在OVA66蛋白处出现明显的条带.电镜和FACS检测表明, 该基因可增强肿瘤细胞的增殖能力.体外运动、侵袭实验证实, 该基因可促进肿瘤细胞的迁移、侵袭.基因芯片显示, 该基因的高表达可促进Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)等基因的表达, 影响肿瘤的侵袭和转移.结论: OVA66基因及其蛋白可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等一系列生物学功能.
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外源质粒DNA经胃肠道途径对小鼠免疫基因的调控作用
目的: 研究外源质粒DNA经胃肠道途径对小鼠免疫基因表达的调控作用.方法: 给BALB/c小鼠灌胃质粒pcDNA3 200 μg,分别在灌胃后4 h和18 h分离脾脏,提取脾脏总RNA.利用Affymetrix基因表达谱芯片对灌胃质粒pcDNA3后的BALB/c小鼠脾脏进行基因表达谱研究.采用Genmmapp和MAPPFinder软件进行功能聚类分析.结果:灌胃质粒pcDNA3后,大量与免疫应答相关的基因发生上调,这些基因包括转录因子、细胞因子和细胞因子受体、主要组织相容性基因、蛋白酶体基因、补体分子基因和细胞凋亡相关基因;下调的基因主要是免疫球蛋白基因.MAPPFinder分析结果显示大量免疫应答过程发生上调.结论:外源质粒DNA通过胃肠道途径可调控大量免疫基因的表达,对相关基因及免疫应答过程的研究有助于在分子水平上深入了解外源质粒DNA的胃肠道作用机制.
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类风湿关节炎滑膜组织中多种G蛋白偶联受体mRNA的检测
在多数动物体内,G蛋白偶联受体(G proteincoupled receptors,GPCRs)构成了绝大部分的基因家族,并且绝大部分的细胞表面受体家族属于GPCRs[1].通过与相应的配体结合,GPCRs可以被激活并启动细胞内的信号转导系统,将配体包含的胞外信息传递到胞内,从而成为细胞内外的一个"门户"[2].由于GPCRs具有广泛存在性,多样的分子识别功能和信号始动等作用,使其成为临床治疗的重要靶标,在目前的药物市场份额中,靶向GPCRs的药物占据了约40％的市场份额[3].GPCRs在先天性、获得性和病理性的免疫系统反应中都具有重要作用,可以被广泛的免疫炎症调节因子,如前列腺素、白细胞三烯和组胺等调控[4].类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性滑膜炎和侵袭性关节炎为主要表现的慢性自身免疫性疾病,其基本的病理改变是关节滑膜炎[5-6].
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基因芯片技术检测子宫内膜异位症相关细胞因子及其受体基因的表达谱
目的:研究与子宫内膜异位症(EM)发生和发展相关的细胞因子(CK)基因的表达, 进一步阐明子宫内膜异位症的发病机制.方法: 应用含有1 200条基因的基因芯片, 用同位素探针标记, 探讨EM组织与正常子宫组织相关CK基因的表达谱.结果: 在3例EM组织与3例正常的子宫内膜组织中, 共筛选出差异表达基因119条, 其中CK及CKR基因表达上调15条, 包括IL-1、 IL-2、 IL-6、 IL-8、 VEGFR、 TGF、 EGF、 FGF和EPOR等.结论: 表达差异基因有助于揭示EM发生发展的分子机制, 基因表达谱芯片能有效地筛选EM相关的CK及CKR基因, 为了解疾病发生机制提供了高效、准确的研究工具.
