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琼脂糖凝胶电泳及SSCP法在淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排检测中的应用
目的 比较琼脂糖凝胶电泳和单链构象多态性分析(SSCP)法对淋巴瘤克隆性T细胞受体(TCR)γ基因重排的检测结果,探讨TCRγ基因重排的有效检测方法.方法 从T、B细胞淋巴瘤及反应增生性淋巴组织中提取DNA,分别用两组TCRγ基因重排通用引物进行PCR扩增,扩增产物分别进行琼脂糖凝胶电泳和SSCP.结果 T、B细胞淋巴瘤均出现克隆性TCRγ基因重排.SSCP法两组PCR产物在T细胞淋巴瘤中的阳性率分别为77.6%和75.9%,B细胞淋巴瘤均为10%;与SSCP相比,琼脂糖凝胶电泳中两组PCR扩增产物的假阳性率分别为15.3%和14.4%,所有反应增生性淋巴组织均出现假阳性.结论 T、B 细胞淋巴瘤中都存在克隆性TCRγ基因重排,仅用琼脂糖凝胶电泳检测可能出现假阳性,SSCP灵敏性较高.
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细胞遗传学特点
981年Rowley等首先观察到治疗相关性骨髓增生异常综合征/急性髓细胞白血病(t-MDS/t-AML)中5、7染色体的异常,可能为SL的标志.Takeyame发现189例t-MDS/t-AML患者中77%有5、7或11染色体异常,11/58有MLL基因重排.1987年Ratain先发现拓扑异构酶Ⅱ抑制剂引起的t-AML中11q23的易位,其断点在MLL基因的BCR区.
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PCR检测急性淋巴细胞白血病微小残留病38例临床分析
微小残留病(Minimal residual disease,MRD)是指白血病患者诱导化疗完全缓解后,体内残留微量白血病细胞的状态.MRD是白血病复发的根源,因此检测MRD对白血病判断预后、预防复发及个体化治疗都有重要意义.作者应用PCR检测了38例急性淋巴细胞白血病(ALL)的IgH和TCRγ基因重排,现报道如下.
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极限稀释法对急性淋巴细胞白血病IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测及其意义
目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)IgH和Vδ2Sδ3基因重排微小残留病(MRD)值在判断预后的意义.方法运用极限稀释法对ALL完全缓解期(CR)后不同时期的骨髓标本进行IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测.结果24例初诊时存在IgH或Vδ2Dδ3基因重排的ALL患者CR后不同时期51份骨髓标本中,MRD＞0.1%者3例,其中2例复发,1例失访,复发率为75%.MRD为0.002%～0.1%者6例,1例复发,复发率为17%.MRD＜0.002%者15例,无复发.复发组3例MRD均值为0.239%,未复发组20例MRD均值为0.004%.复发组MRD明显高于未复发组,P＜0.05.结论 ALL时IgH和Vδ2Dδ3基因重排的定量检测的MRD增高,则病人的复发危险率随之增高.加强化疗后化疗药物对白血病细胞的杀伤效应使MRD减少,CR后MRD定期监测对指导化疗药物的选择、观察疗效、判断预后有指导意义.
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急性白血病患儿混合谱系白血病基因重排阳性的生物学和临床特征
目的 探讨儿童AL巾混合谱系白血病(mixed lineage leukemia,MLL)基因重排的发生率、融合基因的常见类型及临床特征.方法 利用巢式反转录聚合酶链反应检测MLL融合基因,对87例阳性患儿的骨髓细胞形态学、免疫学、分子生物学、染色体特征以及临床表现进行回顾性分析.结果 儿童AL 1209例中87例有MLL基因重排,其中ALL发生率为6.41％,AML发生率为9.36％.58例ALL均为B-ALL,28例AML中M5 17例,M4 5例,M2 4例,M3、M6各1例,混合性白血病1例,为髓系伴T淋巴系表达.76例进行染色体核型分析,45例(59.21％)可检出克隆性染色体异常,其中28例累计11q23 (36.84％).检测到7种融合基因亚型:MLL-AF9及dupMLL各25例,MLL-AF4 17例,MLL-AF10 9例,MLL-ENL 8例,MLL-AF1q 2例,MLL-AF6 1例.MLL-AF4、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ENL及dupMLL在白血病类型、年龄及WBC计数比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 儿童MLL基因重排白血病ALL中以B-ALL多见,AML以M5、M4多见；常见的融合基因亚型为MLL-AF9、MLL-AF4和dupMLL.MLL融合基因类型不同,可能表现为不同的临床特征,其中MLL-AF4、MLL-ENL可能多见于ALL,初诊WBC较高,发病年龄较小.
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B细胞淋巴瘤患者外周血免疫球蛋白重链基因重排检测
目的:评价B细胞淋巴瘤(B-NHL)患者外周血免疫球蛋白重链(IgH)基因重排检测的应用价值.方法:收集慢性淋巴结炎患者(10例)、健康体检者(16例)和病理活检确诊为B-NHL的患者(28例)外周血,PCR法检测IgH基因重排,观察B-NHL患者治疗前后IgH基因重排的变化.结果:B-NHL患者IgH基因重排阳性率为67.9%(19/28),高于骨髓涂片细胞形态学检查阳性率32.1%(9/28),差异有统计学意义(P＜0.05),健康体检者及慢性淋巴结炎患者均为阴性.15例外周血单克隆IgH基因重排阳性者,治疗后10例完全缓解(CR).10例CR中,9例IgH基因重排转阴.结论:外周血IgH基因重排在B-NHL辅助诊断和预后评估等方面具有重要的临床价值.
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非霍奇金淋巴瘤基因重排检测
目的:应用PCR检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)基因重排进行疗效及预后评估.方法:应用PCR和100 g/L聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色对5例非霍奇金淋巴瘤化疗前后外周血标本基因重排情况进行检测.结果:化疗前5例均有重排带,化疗后除有2例重排带消失外,其余3例仍有重排带,有重排带者2例已复发;复发的2例中,1例行自体造血干细胞移植支持下的大剂量化疗,另1例进行了二线化疗,现存活.另外1例仍有重排带的低度恶性NHL一直采用维持治疗,现仍存活.无重排带出现的2例一直未复发,存活已分别达1.5 a,2 a.结论:检测NHL基因重排,可以评估疗效和预后,指导临床治疗.
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前列腺癌起因新发现
美国密歇根大学医学院教授Chinnaiyan等发现,前列腺癌细胞内数个基因重排对前列腺癌的发生和发展有重要作用.研究人员发现了2个新融合基因(TMPRSS2-ERG和TMPRSS2-EVTl),这2个基因是由TMPRSS2基因与ERG基因或EVTl基因融合生成的,ETVl基因和ERG基因是前列腺癌的重要致癌基因,TMPRSS2基因与前列腺特异相关.该研究10月28日发表在Science[2005,310(5748):644 ]上.
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H9N2禽流感病毒反向遗传系统转录/表达载体的构建和验证
设计带有BsmBI、BsaⅠ或AarⅠ酶切位点的引物,用RT PCR扩增H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的8个基因全长片段,克隆入双向转录/表达载体pHW2000,并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签.将其2个表面基因(HA和NA基因)加上任意1个内部基因,而其它5个内部基因来自A/WSN/33,进行了6种3+5组合形式的基因重排,把相应组合的转录/表达质粒共转染COS-1细胞,均产生了预期组合、有感染性的H9N2亚型流感病毒,表明亲缘关系遥远的流感病毒可以互相获取基因片段产生重组病毒,提示表面结构基因和单个内部基因不足以限制H9N2 AIV在哺乳动物细胞上的宿主范围,同时也验证了构建的8个转录/表达载体均能有效工作,为进一步研究H9N2亚型AIV基因结构与功能、AIV与宿主之间的关系打下了基础.
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白血病MLL基因重排及其融合基因检测的临床意义
目的:研究白血病MLL(mixed lineage leukemia)基因重排及其融合基因的检测及其临床意义.方法:采用荧光原位杂交(FISH)检测70例白血病患者MLL基因重排,对于MLL基因重排的患者,用巢式RT-PCR方法检测常见6种MLL融合基因类型.结果:9例白血病有MLL基因重排,发生率为12.86%,5例B细胞系急性淋巴细胞白血病(B-ALL),其中融合基因2例为MLL/ENL,1例MLL/AF4,2例未扩出融合基因产物;3例为急性髓细胞白血病M5(AML-M5),其中2例融合基因均为MLL/AF9,1例未扩出融合基因产物;1例为幼年型粒单核细胞白血病(JMML),其融合基因为MLL/ENL.结论:巢式RT-PCR是检测MLL基因重排及其融合基因类型简便有效的方法,MLL基因重排见于B-ALL、AML-M5、JMML,预后差.
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15例急性混合细胞白血病的临床与实验研究
目的:研究急性混合细胞白血病(MAL)的临床特征、实验室指标、治疗及预后.方法:对15例MAL骨髓标本分别进行光镜细胞形态学及相关细胞化学染色观察,以确定其FAB类型,应用流式细胞仪做免疫分型检测一系列相关单抗,同时采用G显带技术进行核型分析;应用PCR基因扩增方法检测TCRδ/IgH CDRⅢ2基因重排;运用急性粒细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)或兼顾二者的治疗方案.结果:MAL患者的临床表现与AML及ALL患者的差异无显著性意义,形态学上MAL表现为AML的多为M2a、M1、M4,表现为ALL的多为ALL-L2;免疫分型显示MAL患者中以三系共表达者多见.另外,CD117、HLA-DR在MAL中呈高表达.提示MAL的白血病细胞可能起源于早期造血细胞;核型分析可见异常染色体出现,但无特异性;基因重排显示部分患者TCRδ/IgH CDRⅢ2为阳性;患者对治疗反应差,生存期相对较短.结论:MAL具有独特的临床、实验室检查指标及预后.
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急性淋巴细胞白血病IgH和Vδ2Dδ3基因重排检测在微小残留病监测中的意义
目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)IgH和Vδ2Dδ3基因重排分布频率及定量检测在微小残留病(MRD)监测中的意义.方法:对初诊ALL患者及ALL完全缓解期(CR)后不同时期的骨髓标本及脑脊液标本进行IgH和Vδ2Dδ3基因重排检测及定量计算MRD值.结果:102例初诊ALL患者骨髓标本IgH和Vδ2Dδ3基因重排阳性率分别为49.0%和36.3%.诱导缓解期与完全缓解期脑脊液IgH基因重排分别有7例和3例,Vδ2Dδ3基因重排分别为5例和2例.MRD值>0.1%者3例,复发率为66.7%. MRD为0.002%～0.1%者6例,复发率为17.0%;MRD<0.002%者9例,无复发.复发组MRD明显高于未复发组(P<0.05).结论:动态PCR检测ALL患者脑脊液IgH和Vδ2Dδ3基因重排比细胞学检测更灵敏.IgH和Vδ2Dδ3基因重排MRD值增高,复发危险率增高.MRD定期定性定量监测对指导化疗药物的选择、疗效观察及判断预后有指导意义.
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急性白血病受体基因重排的研究
目的:探讨急性白血病微小残留病(MRD)与化疗效应差异及受体基因重排,在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)中序列交叉现象及意义.方法:应用聚合酶链反应技术对免疫球蛋白(IgH)及T细胞受体(TCR)基因重排进行定量测定.结果:45例急性淋巴细胞白血病(ALL)中阳性率84.4%(38/45),完全缓解(CR)后180 d检测,阳性率仍55.6%(25/45),20例ANLL中5例检测到IgH受体基因重排,观察60 d有复发迹象,但白细胞数持续＜1×105,无复发.结论:IgH、TCR 基因重排是检测残留白血病的敏感指标,但在ANLL中有失真现象.化疗效应的定量评价,有助于制定个体化的治疗方案.
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不明原因发热患者检测淋巴细胞IgH和TCR基因重排的意义
目的:探讨不明原因发热(FUO)患者淋巴细胞免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体-γ(TCR-γ)基因重排的临床意义.方法:采用半巢式PCR方法检测110例FUO患者骨髓淋巴细胞IgH和TCR-γ基因重排的阳性率.结果:84例淋巴瘤发热患者中,IgH基因重排阳性34例,TCR-r基因重排阳性29例,两者阳性率达75％;26例非淋巴瘤发热患者中,IgH基因重排阳性0例,TCR-r基因重排阳性1例,基因重排阳性率3.8％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:对于FUO患者行基因重排有助于淋巴瘤的早期诊断,特别是对无法取得病理组织的患者意义更大.
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免疫组化联合基因重排检测对发热待查伴骨髓分类不明细胞的诊断价值
目的:探讨发热待查伴有骨髓中发现分类不明细胞免疫组化联合基因重排检测的诊断价值.方法:对23例长期发热并骨髓或外周血中有分类不明细胞浸润的患者分离骨髓或外周血的单个核细胞进行免疫组化染色和基因重排检测.结果:23例患者中,诊断为非霍奇金淋巴瘤12例,其中滤泡性淋巴瘤(FL)3例、套细胞淋巴瘤(MCL)1例、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)2例、间变性大细胞淋巴瘤-T(ALCL)3例、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITCL)1例,侵袭性NK细胞白血病/淋巴瘤(ANKCL)1例,恶性组织细胞病1例;2例结合脾脏病理学诊断SLE;诊断为骨髓转移癌5例;4例未能确诊.结论:联合运用免疫组化和基因重排技术对长期发热并骨髓分类不明细胞浸润患者有一定的诊断价值.
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HyTK基因逆转录病毒重组质粒的构建及其在PA317细胞中的高表达
目的:为开展逆转录病毒介导的HyTK基因治疗恶性肿瘤奠定实验基础.方法:利用逆转录病毒载体与潮霉素磷酸转移酶和单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶的融合基因(HyTK)连接构建重组质粒pL(HyTK)SN,应用新一代的非脂质体基因转导系统FuGENETM6将构建的pL(HyTK)SN导入Ψ2单嗜性包装细胞并获得瞬间表达,继而再转染PA317双嗜性细胞.结果:获得高滴度重组病毒,上清逆转录病毒滴度为5.4×106 cfu/ml.结论:所构建的HyTK基因可用于治疗恶性肿瘤.
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间变性淋巴瘤激酶基因重排在肺外炎性肌纤维母细胞瘤中的表达及其临床意义
目的 探讨间变性淋巴瘤激酶(ALK)蛋白在肺外炎性肌纤维母细胞瘤(IMT)中的表达情况,并分析其与临床复发之间的关系.方法 回顾性分析2008年1月1日至2012年12月31日期间在我院外科诊治并经病理诊断的肺外IMT 14例,分别采用免疫组织化学技术Envision法染色和双色原位杂交技术,了解本组患儿标本中ALK表达情况,分析ALK阳性表达与局部复发之间的关系,确定ALK表达的临床意义.结果 本组14例中,男10例,女4例;年龄2个月～13岁;肿瘤大30 cm×25 cm×15 cm,来源于腹膜后;肿瘤小0.8cm×0.8cm×0.5cm,来源于膝部.免疫组织化学结果:ALK(+)11例,同时行FISH检测,其中有2例发现有ALK基因重排,都是局部复发病例.再次手术切除复发病变,其免疫组织化学ALK仍为阳性表达.术后辅以化疗,随访2年未见复发.结论 IMT发病率较低,手术切除是治疗IMT的可靠方式;ALK蛋白表达可以证实IMT诊断,而ALK基因重排与肿瘤局部复发可能相关.
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用IgH、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变
目的探讨IgH 、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变的意义.方法采用IgH、TCR-β、TCR-γ基因重排标志检测,36例经常规HE、免疫组化不能诊断的疑难淋巴组织增生性病变,并进行克隆性分析.结果 29例淋巴组织增生性病变呈克隆阳性,其中IgH、TCR双重排阳性者为13例,IgH单一阳性8例,TCR单阳性为8例.克隆阳性病例与免疫组化结果一致的为24/29例,7例阴性者,4例为反应性增生,2例经随诊为猫抓病淋巴结炎,1例为不典型增生.结论 IgH、TCR基因重排技术对于疑难淋巴组织增生性病变的诊断和鉴别诊断有较大的意义.
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乳腺癌BRCA1/2基因大片段重排的研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,BRCA1与BRCA2是乳腺癌重要的易感基因,携带BRCA1/2胚系突变的女性,其乳腺癌的终身患病风险显著增高.BRCA1/2致病性突变多为单个或数个碱基改变引起的移码突变和无义突变,但常规的Sanger测序筛查方法尚不足以发现BRCA1/2其他胚系缺陷类型,如大片段重排.随着基因检测方法的进步,多种BRCA1/2基因重排被发现,在遗传性乳腺癌家族接受常规BRCA1/2基因测序未发现突变的情况下,应认真考虑检测大片段重排,以免漏诊.
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甲型H1N1流感研究进展
2009年,一个新的A型流感病毒H1N1亚型出现,迅速地在人类之间传播,2009年6月,该病呈爆发状态在全球播散.这种三重基因重排的病毒出现在20世纪90年代末,并逐渐从两个病毒RNA节段发展到具有6个病毒RNA节段猪流感病毒.大部分导致人类感染的病毒是温和的,但若发生在某些高危人群中,可导致严重致死性的感染.目前并未研究出这些高危人群所具有的已知的危险因素.在这里,我们总结了甲型H1N1流感病毒的进化过程,流行病学及临床特点,同时还讨论了可用于预防和治疗病毒感染的抗病毒药物和疫苗.
