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Calsenilin蛋白研究进展
1998年Buxbaum等[1]用早老素2(presenilin2,PS2)的C末端40个氨基酸残基作为"诱饵"进行酵母双杂交筛选,发现了一种新的钙结合蛋白,命名为Calsenilin.继Calsenilin发现不久,Carrión等[2]于1999年对人前强啡肽原(preprodynorphin,PPD)通过基因缺失分析的方法和定点突变实验,鉴定出一段具有位置依赖性的转录沉默子,命名为DRE( downstream regulatory element),进一步利用编码DRE序列的双链寡核苷酸作为探针,分离得到一个32 kDa的蛋白质,该蛋白结合于DRE序列可以抑制PPD的基础转录水平,DREAM(downstream regulatory element antagonist modulator)由此得名.
关键词： Calsenilin蛋白 神经突触 转录因子 神经元 -
诱导多能干细胞的研究
干细胞(stem cell)不仅可用于细胞分化、基因表达调控、胚眙发育等生物发育机制的研究,而且可应用于药物研制、细胞替代治疗和基因治疗等研究.一直以来都是生命科学领域的研究热点.根据细胞来源可将干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞.
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口腔扁平苔藓中cyclinD1和E2F-1的表达及意义
目的研究转录因子E2F-1和细胞周期蛋白cyclinD1在口腔扁平苔藓(OLP)损害部位的水平及在其发病中的意义.方法应用免疫组化法检测E2F-1和cyclinD1在OLP中的水平,运用计算机图像分析系统进行灰度分析.结果E2F-1和cyciinD1在OLP中的水平明显高于正常组织.结论E2F-1和cyclinD1在OLP中的变化,与造成上皮细胞抗原性的改变及免疫活性细胞增殖有关,从而导致自身免疫反应.E2F-1和cyclinD1的相互作用,导致角质形成细胞周期紊乱、细胞凋亡,造成基底膜损伤.细胞凋亡可能对OLP处于低恶变状态有意义.
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NB-UVB治疗前后特应性皮炎患者外周血Th17/Treg细胞及其转录因子的变化
目的 观察窄谱中波紫外线(NB-UVB)对特应性皮炎(AD)患者外周血辅助性T细胞17 (Th17)/调节性T细胞(Treg)和转录因子RORγt,Foxp3 mRNA水平的影响,探讨NB-UVB治疗AD的作用机制.方法 选取52例AD患者,使用NB-UVB照射治疗8周,采用流式细胞术检测光疗前后外周血Th17细胞和Treg细胞百分比,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)方法,检测光疗前后外周血单一核细胞中转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平.采用欧洲AD评分标准(SCORAD)判断疾病严重程度.另选35例健康体检者作为正常对照组.结果 治疗前,AD患者外周血Th17细胞百分比、Th17/Treg比值及RORγt mRNA水平高于正常对照组,而Treg百分比及Foxp3 mRNA的表达低于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).治疗后,Th17百分比、Th17/Treg比值及RORγt mRNA水平明显降低,与治疗前相比差异有统计学意义(P＜0.01);而Treg百分比及Foxp3 mRNA的水平明显升高,与治疗前相比差异也有统计学意义(P＜0.01).经NB-UVB治疗8周后,SCORAD评分明显下降(P＜0.01).结论 AD的发生及病情严重程度与外周血Th17细胞、RORγt mRNA水平的高表达及Treg细胞、Foxp3 mRNA水平的低表达有关;NB-UVB可能通过调节患者外周血Th17/Treg细胞失衡及其特异性转录因子表达水平而发挥其治疗作用,这可能是NB-UVB治疗AD的机制之一.NB-UVB治疗AD安全有效.
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Runx3对寻常性银屑病患者Th17/Treg细胞分化的影响及其作用机制
目的 探讨Runx3对银屑病患者Th17,Treg细胞分化的影响及作用机制.方法 收集58例银屑病患者和50例健康对照者血液样本,应用密度梯度离心法分离外周血CD4+T细胞,qRT-PCR检测Runx3的mRNA水平;采用RNA干扰法下调Runx3的表达水平,流式细胞仪检测Th17和Treg细胞水平;ELISA法测定外周血IL-17,IL-23,TGF-β,IL-10含量;实时定量PCR法检测RORγt,Foxp3的mRNA水平.结果 与对照组相比,银屑病患者外周血CD4+T细胞中Runx3的表达明显升高.Runx3-siRNA转染后,Th17 /Treg细胞比值降低,同时伴随有Th17型炎性因子IL-17,IL-23表达下降以及Treg型抗炎因子TGF-β,IL-10的上调.机制分析证实,Runx3沉默后,细胞中Th17转录因子RORγt明显下降,而Treg转录调节因子Foxp3水平增加.结论 Runx3可通过RORγt,Foxp3调控CD4+T细胞向Th17,Treg型细胞的分化,影响银屑病患者Th17/Treg比例的失衡,提示其可作为银屑病防治的新方向.
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益气养阴活血方治疗系统性红斑狼疮的探讨
目的 探讨益气养阴活血方对系统性红斑狼疮患者治疗的免疫学基础和临床变化.方法 利用实时荧光定量PCR技术检测SLE患者治疗前后外周血单核细胞(PRMC)中Foxp3 mRNA的表达；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SLE患者治疗前后血清中IL-10和TGF-β水平变化；观察SLE患者治疗前后临床症状和实验室指标的改善情况.治疗组应用糖皮质激素加用益气养阴活血方；对照组应用糖皮质激素.结果 治疗组治疗后Foxp3 mRNA和TGF-β表达较对照组上升明显,差异有统计学意义(P均＜0 05),IL-1O表达较对照组下降明显,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组治疗后患者皮损、关节痛、乏力的症状较对照组改善明显,差异有统计学意义(P均＜0.05)；而光敏感和脱发两组间差异无统计学意义.治疗组治疗后ESR较对照组降低明显,差异有统计学意义(P＜0.05)；Hb,WBC两组治疗后均上升,差异有统计学意义,但组间比较无差别；补体C3两组治疗前后均无明显变化.患者激素的用量及复发率治疗组均较对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05和P＜O.01).结论 加用益气养阴活血方可通过调节SLE相关的转录因子及细胞因子的分泌,调动了机体免疫系统,发挥其临床治疗效应.
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皮肤肿瘤
20120310转录因子Oct-4在皮肤鳞状细胞癌、脂溢性角化病的组织表达及其意义/李毓阳(海南农垦三亚医院皮肤科),戴永江…//南方医科大学学报.-2011,31(5).-917 ～918采用免疫组化法检测Oct-4在35例鳞状细胞癌(SCC),21例脂溢性角化病(SK)及15例正常对照皮肤组织中的表达.结果:Oct-4在正常皮肤组织表达为阴性,在SCC和SK表达差异有统计学意义(P＜0.05),间接反映SCC和SK的恶性程度不同.提示SCC和SK中表达Oct-4基因的细胞很可能是SCC和SK的干细胞,这将为其终分离和鉴定人SCC和SK干细胞提供重要基础,有助于揭示SCC和SK的肿瘤起始细胞,从而对预防和治疗SCC和SK有重大意义.
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转录因子 lslet-1在氧诱导血管增生性视网膜病变中的表达
目的：研究高氧诱导的视网膜新生血管模型鼠中转录因子Islet-1的表达差异。
方法：采用高氧诱导的方法制作鼠视网膜新生血管模型,运用荧光造影视网膜铺片及视网膜切片苏木精-伊红染色观察视网膜新生血管的形态。于小鼠出生后第7,12,14,17,26 d取视网膜组织,采用Real-time PCR及Western blot技术测定视网膜组织中Islet-1的表达水平。
结果：模型组视网膜铺片及组织切片可见大量视网膜新生血管形成。小鼠出生后第7d,模型组与正常组视网膜组织中Islet-1表达水平无明显差异；小鼠出生后第12~14d,模型组视网膜组织中Islet-1表达水平明显上调；出生后17d,模型组视网膜组织中Islet-1表达水平仍高于正常组；出生后26d,随着视网膜新生血管消退,视网膜组织中Islet-1表达水平降至正常水平。
结论：模型鼠视网膜新生血管发生过程中,持续缺氧的视网膜组织通过增加转录因子Islet-1的表达,从而诱导视网膜新生血管的发生。 -
口腔扁平苔藓患者外周血T-bet和GATA-3mRNA表达及意义
目的:探讨转录因子T-bet及GATA-3在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)发病中的作用及意义.方法:采用RT-PCR技术测定30例OLP患者以及30例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet和GATA-3 m RNA的表达水平.结果:OLP组及分型后各组T-bet mRNA的表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);OLP组及糜烂型OLP组GATA-3 mRNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),非糜烂型OLP组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);T-bet/GATA-3比值各组差异均无统计学意义(P>0.05).结论:T-bet和GATA-3 mRNA的表达增高可能是OLP发病的重要原因,且GATA-3mRNA的表达变化与OLP临床类型有关.
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转录因子T-bet和GATA-3在口腔扁平苔藓患者外周血单核细胞中的表达
目的:探讨转录因子T- bet和GATA- 3在口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血单核细胞(PBMCs)中的表达及意义.方法:通过密度梯度离心法分离充血糜烂型及光滑型OLP患者和对照组受试者PBMCs,采用RT- PCR和Western blot法分别检测PBMCs中T- bet、GATA- 3 mRNA和蛋白的表达.结果:充血糜烂型、光滑型OLP和对照组外周血单个核细胞中T- bet mRNA表达的相对光密度值分别为0.12±0.04、0.34±0.06和0.57±0.07,T- bet蛋白表达的光吸收度值分别为0.11±0.02、0.40±0.05和0.78±0.07,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);GATA- 3 mRNA表达分别为0.83±0.09、0.54±0.07和0.26±0.07,GATA- 3蛋白表达分别为0.83±0.06、0.55±0.05和0.16±0.03,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论:转录因子T- bet/GATA- 3表达失衡是OLP免疫失衡的重要原因之一.
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慢性牙周炎病人基础治疗前后Th17型细胞因子及RORC的表达变化
目的:研究慢性牙周炎(CP)病人牙周基础治疗前后龈沟液(GCF)中的Th17型细胞因子及其外周血特异性转录因子RORC的表达变化规律.方法:选择CP病人30例,使用ELISA检测牙周基础治疗前后GCF中Th17型细胞因子(IL-17、IL-21)的水平变化,并利用荧光定量PCR检测牙周基础治疗前后外周血CD4+T细胞中特异性转录因子RORC的表达水平.结果:牙周基础治疗后龈沟液中的Th17型细胞因子IL-17、IL-21水平以及外周血CD4+T细胞中特异性转录因子RORC表达水平均较治疗前显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:Th17型细胞因子在慢性牙周炎发生发展中发挥重要的致炎作用.
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HLH家族转录因子与牙齿发育调控
当前对牙齿发育机制的探讨日渐深入,尤其是对牙齿发育中转录因子的研究进展极为活跃,已经明确同源异形盒基因(Homeobox)家族中的多个成员,是启动和促进牙齿发育过程不可缺少的信号分子.HLH(helix-loop-helix)家族,作为与Homeobox并列的另一大类转录因子,因其在神经、肌肉发生,心脏发育等过程中所起的关键作用而备受关注,关于它们在牙齿发育中的作用,国外已见报道.本文试图对HLH家族做一简要介绍并就其与牙齿发育的关系进行综述.
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关于细胞生长因子、转录因子等等各家族中序号写法的建议
现在由于分子生物学、免疫学等飞跃发展,新的专业名词不断出现,其中包括各种细胞因子、生长因子、信号传导因子等等,名目繁多,而且有些已形成某一家族,但因这些都是新出现的新名词,以致书写很紊乱,尤其与有些汉字、阿拉伯字、英文字母混淆不清,为了避免误写、误读,建议统一使用下列书写方法:
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早期生长反应基因1对成骨肉瘤Saos-2细胞Stathmin基因的表达调控
目的:观察甲期生长反应基因1(Egr1)对成骨肉瘤细胞Saos-2中stathmin基因表达调控的影响.方法:构建Egr1真核表达载体,应用脂质体转染人成骨肉瘤Saos-2细胞,采用RT-PCR检测转染细胞的Egr1及stathmin mRNA表达的变化;Western Blot和免疫细胞化学染色检测stathmin蛋白表达;MTT法检测转染细胞生长状况;原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡情况.结果:RT-PCR榆测发现Egr1表达水平明显高于空白对照组,stathmin mRNA表达水平显著降低,转染细胞stathmin蛋白表达水平明显降低.MTT法结果显示Egr1可显著抑制Saos-2细胞的生长,TUNEL阳性细胞明显增加.结论:转录调控因子Egr1参与stathmin基因转录调控并可抑制其表达,进而促进Saos-2细胞凋亡.
关键词： 转录因子 成骨肉瘤 基因转染 Stathmin基因 基因表达调控 -
诱骗寡核苷酸下调MKN-45细胞OP18基因表达及对细胞增殖的影响
目的:探讨转录因子E2F哑铃形诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)对MKN-45细胞中op18基因转录调控的影响及对细胞增殖的抑制作用.方法:设计合成针对op18启动子上E2F的结合位点序列的哑铃形Decoy ODNs,然后将合成的序列进行退火、连接,使其形成哑铃形的结构,再应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将哑铃形Decoy ODNs转染MKN-45细胞中.TRIzol法提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测细胞中op18 mRNA表达水平的变化.通过MTT实验监测细胞的生长增殖状况并绘制生长曲线,后用TUNEL法观察细胞的凋亡的情况.结果:哑铃形Decoy ODNs被成功转染MKN-45细胞,并成功提取了细胞总RNA.RT-PCR检测发现哑铃形Decoy ODNs转染后的MKN-45细胞中op18 mRNA表达水平明显低于空白对照组,MTT实验所作的生长曲线显示转染细胞增殖速度与空白对照组相比较明显减慢,TUNEL凋亡染色可见凋亡细胞.结论:哑铃形Decoy ODNs能特异性抑制E2F转录因子对op18基因的转录调控,进而抑制op18基因表达及MKN-45细胞增殖.
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T-bet/GATA-3的比值在哮喘大鼠免疫失衡中的意义
目的:探讨转录因子T-bet/GATA-3比值在支气管哮喘免疫失衡中的意义.方法:SPF级SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,每组12只.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法和Western blot法分别检测T-bet,GATA-3 mRNA和蛋白在肺组织的表达.结果:大鼠肺组织中对照组和哮喘组T-bet mRNA表达分别为0.71±0.19,0.08±0.12;T-bet蛋白表达分别为0.72±0.22,0.18±0.06,两组比较均有显著性差异(P＜0.01).大鼠肺组织中对照组和哮喘组GATA-3 mRNA表达分别为1.06±0.25,1.56±0.28;GATA-3蛋白分别为1.04±0.44,2.25±0.74,两组比较均有显著性差异(P＜0.01);对照组T-bet/GATA-3 mRNA表达量的比值0.73±0.32,明显高于哮喘组0.06±0.09 (P＜0.01),对照组T-bet/GATA-3 蛋白表达量的比值0.75±0.25,高于哮喘组0.09±0.04 (P＜0.01).结论:转录因子T-bet/GATA-3 mRNA和蛋白表达量比值在哮喘中明显降低,可作为评价哮喘免疫失衡的客观指标之一.
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B细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-κB的活化
目的: 研究细胞表面B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen, BCMA)在B细胞激活因子刺激下,对转录因子NF-κB是否具有激活作用. 方法: 采用电转移基因转染和卤化钙基因转染方法,将BCMA和C末端缺失80个氨基酸残基的BCMA基因(BCMAΔC80)分别转染3T8细胞及kb gfp细胞,观察与NF-κB启动子下游的报告基因表达水平的变化. 结果: BCMA在3T8细胞中经BAFF激活后可上调报告质粒中CD14基因的表达,而C末端缺失80个氨基酸残基的突变BCMA(BCMAΔC80)则不具备此功能. 同时在另一报告细胞系kb gfp中亦观察到类似作用. 结论: 细胞表面的BCMA在被B细胞激活因子刺激后,可引起NF-κB的活化,这一作用依赖于BCMA的C末端的80个氨基酸残基.
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人端粒酶逆转录酶启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗的研究进展
端粒酶与肿瘤发生发展的关系是近年来肿瘤研究领域的热点之一.端粒的磨耗限制大多数体细胞的复制,肿瘤细胞主要通过转录上调端粒酶限制成分催化亚基端粒酶逆转录酶(hTERT)维持端粒长度.由于hTERT启动子区域已被克隆,其特点也已被鉴定,hTERT启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗成为研究的热点.我们综述了hTERT启动子介导的靶向性肿瘤基因治疗新研究进展.
关键词： 人端粒酶逆转录酶启动子 转录因子 靶向性 基因治疗 -
肝纤维化发生中的MAPK信号传导通路
慢性肝病的重要病理基础是肝纤维化,慢性肝病通过纤维化的发展走向肝硬化.近年来丝裂原激活蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)通路是激活后向核内转移,作用于核内转录因子的一个蛋白激酶家族.MAPKKK对MAPKK的丝氨酸、苏氨酸双位点磷酸化而将其活化;进而MAPKK对MAPK进行苏氨酸、丝氨酸双位点磷酸化活化,活化后的蛋白激酶转移至核内激活相应的基因受体,进而促进相应基因的表达.
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IL-25在支气管哮喘中的表达变化及其机制
目的 探讨 IL-25 在支气管哮喘中的作用及其分子机制.方法 采用卵清白蛋白(OVA)致敏复制大鼠哮喘动物模型,Real-time PCR和 ELISA法检测肺内 IL-25 mRNA表达和蛋白水平变化,采用 OVA处理人支气管上皮细胞并观察其对 IL-25 表达的影响,并通过网站预测和转录因子抑制剂初步探讨调控 IL-25 表达的转录因子.结果 动物实验结果发现,OVA致敏哮喘大鼠肺组织IL-25 mRNA和蛋白表达显著增加.细胞实验发现,OVA可剂量依赖性地增加人支气管上皮细胞培养上清液 IL-25 蛋白含量,OVA 亦可上调转录因子 AP1 的表达.通过网站预测发现, IL-25的启动子区域存在 5 个AP1 的结合位点,采用AP1 阻断剂(T5224)可显著性降低OVA诱导的人支气管上皮细胞 IL-25 的表达.结论 哮喘时 IL-25 表达增加的分子机制与转录因子 AP1 的表达增加有关.
