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连环蛋白及其在白血病细胞中的表达和临床意义
连环蛋白是一组分布和作用十分广泛的细胞内糖蛋白,是细胞与细胞之间相互粘附结构的一种重要成份,磷酸化后又可作为细胞内信号传导因子和基因转录调节因子,在恶性肿瘤的发生、发展、转移和转化机制中发挥重要作用.近年来发现其与白血病细胞恶性行为密切相关.EGF、TGFa 、PDGF、HGF和CSF-1等细胞因子均能使连环蛋白磷酸化,磷酸化后的连环蛋白成为白血病细胞逃避杀伤的生存信号.因此,抑制连环蛋白的磷酸化可望成为肿瘤治疗的一种新方法.
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转录因子在哮喘发病中的作用及靶向治疗
支气管哮喘是一种慢性炎症性疾病.大多数哮喘患者对吸入激素和β2受体激动剂治疗反应较好,然而有5%～10%的患者治疗反应欠佳.随着对哮喘分子机制的认识,研究者开始探索哮喘的靶向治疗.转录因子调节多种炎症基因的表达,并在哮喘发病中起重要作用,可能成为新的哮喘治疗靶点.
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丙型肝炎病毒核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性的调控作用
目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性的调控作用.方法 对于瞬时转染pIRES-Core/Neo载体的L02细胞采用双荧光素酶报告基因系统检测核心蛋白对转录因子ETF和TxRE活性影响,并提取2株细胞的核蛋白和RNA,分别以Western blot试验和实时荧光定量PCR检测2种转录因子的表达量.结果 双荧光素酶报告基因检测在L02-Core和L02-Neo细胞中转录因子ETF和TxRE的活性比值分别为2.981和3.063.Western blot试验灰度值分析2株细胞的核蛋白提取物中这2种蛋白表达量的比值分别为1.510和2.717.实时荧光定量PCR检测这2株细胞中ETF和TxRE的核酸水平比值分别为4.123和3.703.结论 在表达HGV核心蛋白的L02细胞中,转录因子ETF和TxRE转录表达水平及转录活性均较高,HCV核心蛋白可能具有增强转录因子ETF和TxRE转录活性的作用.
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低氧诱导因子-1的低氧调节及其信号转导通路
低氧诱导因子-1是调节氧稳态的核转录因子.在缺氧条件下它与相应的靶基因相结合,通过转录及转录后的调控,使机体对缺氧、缺血产生适应,是近年来低氧适应研究的关注焦点.由α和β亚基组成异二聚体,其中α亚基受低氧调节.现就低氧诱导因子-1的低氧调节机制及其低氧信号转导通路作一综述.
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转录因子BTEB2与血管平滑肌细胞增殖
转录因子是一类脱氧核糖核酸(DNA)结合蛋白,它们与基因启动子中特定序列结合,从而调节基因的表达.血管平滑肌细胞(VSMC)增殖是血管成形术,特别是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄(RS)的主要病理特征.近年来,许多研究表明某些转录因子在VSMC增殖及RS形成的过程中起重要调控作用.在各种外界剌激的作用下,细胞外信号经过细胞内信号传递系统到达核内,诱导一系列VSMC增殖相关基因的表达,启动细胞周期,从而推动VSMC分裂、增殖.而这些基因表达又受某些核内转录因子的调控.对早期生长反应因子-1(Egr-1)、生长停止特异性同源框蛋白(Gax)和GATA结合蛋白-6(GATA-6)等转录因子的干预实验成功地抑制了VSMC的增殖和血管新生内膜形成.这些研究为制定新的RS防治策略提供了有用的线索.本文对新发现的转录因子BTEB2(基本转录元件结合蛋白2)的研究进展及其与VSMC增殖的关系作一综述.
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c-fos与心血管疾病
立早基因c-los属核内蛋白类细胞癌基因,膜信号通过第二信使激活细胞浆内转录因子,促进e-los基因转录.c-fos转录产物FOS蛋白与另一核内原癌基因c-jun的产物JUN通过"亮氨酸拉链"形成异源二聚体,构成转录因子,与核内DNA结合,调节种种晚期基因的转录,发挥第三信使作用[1-3].
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NF-κB与心血管疾病
本文就NF-κB与IκB的一般特征;NF-κB在某些心血管病变中的作用;药物和基因产物抑制剂对NF-κB的作用;NF-κB的检测方法等方面进行了综述.
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核因子-κB与氧化应激
核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)是一种多效性的转录因子,人们对其结构、功能、激活途径的研究已比较深入.NF-κB在机体免疫、急慢性炎症、细胞发生与凋亡等病理生理过程中的作用逐渐得以认识.大量资料显示NF-κB激活的具体信号机制错综复杂,表现出刺激信号、细胞类型的差异性.机体在许多病理生理状态下易出现氧化应激,如缺血/再灌注损伤、心脏手术、移植手术、缺血预处理、肿瘤、急慢性炎症、糖尿病、动脉粥样硬化等.
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博来霉素和石棉对肺泡巨噬细胞转录因子的活化作用
目的研究博来霉素和石棉对THP-1和肺泡巨噬细胞内转录因子核因子-κB (NF-κB)和环磷酸腺苷效应元件(CREB)的活化作用,探讨肺泡巨噬细胞内转录因子在肺间质性疾病中的作用.方法用磷酯酰多糖(LPS)或石棉刺激THP-1细胞,提取细胞核蛋白质,以电泳迁移率变动分析方法检测NF-κB和CREB的活性.采用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗收集健康非吸烟者的肺泡巨噬细胞,用LPS、博来霉素及石棉分别或共同刺激细胞,提取核蛋白质,用电泳迁移率变动分析方法检测NF-κB的活性.以竞争抑制实验检测DNA结合蛋白的特异性.结果 THP-1细胞未受到刺激时,转录因子NF-κB和CREB均具有一定的基础活性;在LPS或石棉刺激后3、6及24 h后,NF-κB的活性进一步增强,但CREB的活性无明显变化. 在未刺激的肺泡巨噬细胞中,存在NF-κB的基础活性,在LPS刺激后NF-κB的活性明显增强,3 h为肺泡巨噬细胞NF-κB活化增强的佳时间,24 h时NF-κB活性下降.博来霉素(10-2 mmol/ml)或石棉(100 μg/ml)均可诱导NF-κB的活性增强,LPS可进一步增强博来霉素或石棉对NF-κB的活化作用.结论在博来霉素或石棉引起的肺间质疾病中,肺泡巨噬细胞转录因子NF-κB的活化可能具有重要的作用.
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转录因子LAP反式激活α1(I)胶原基因在肝脏星状细胞中的表达
目的了解激活的肝脏星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)中一种肝脏组织特异的转录因子肝脏激活蛋白(liver activator protein, LAP)在α1(I)基因表达调控中的作用.方法采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注、Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC,并进行体外培养使之活化.构建含人α1(I)胶原基因启动子片段(-804～+1 452或-804～+222碱基)的荧光素酶报告基因质粒.用构建的报告基因质粒与LAP表达质粒一起,用阳离子脂质体介导的方法,瞬时共转染激活的HSC细胞.α1(I)基因启动子的活性通过测定荧光素酶活性来确定.结果构建的含α1(I)基因第一内含子片段的荧光素酶报告基因(PGL3-col)比不含α1(I)基因第一内含子的报告基因[PGL3-col(△intron)]在HSC中有较强的表达(荧光素酶活性为315±45 U/mg蛋白与220±70 U/mg蛋白,P＜0.05).瞬时共转染LAP表达质粒可明显增强PGL3-col及PGL3-col(△intron)报告基因在HSC中的表达(荧光素酶活性分别为587±62 U/mg蛋白与315±45 U/mg蛋白及326±52 U/mg蛋白与220±70 U/mg蛋白,两者比较,P＜0.05).结论 LAP可以反式激活(诱导)α1(I)基因在活化的HSC中表达,在其转录调控中起重要作用.
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异位骨化发病机制的研究进展
目的 总结异位骨化(heterotopic ossification,HO)发病机制的研究进展. 方法 查阅近年有关HO危险因素及发病机制的文献,并综合分析. 结果 HO发病机制尚未明确,但对HO相关的细胞外因子、信号通路、转录因子等有了更深入了解,如BMP、Smad信号通路、核心结合因子αl/成骨特异性转录因子2等可能参与了HO的形成,而一些相关的微小RNA也有可能参与HO形成. 结论 通过对HO发病机制进一步研究,为有效防治HO奠定基础.
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Oligofectamine介导转录因子SP1诱骗性寡核苷酸转染猪内皮细胞系条件的优化研究
目的 确定SP1诱骗性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)在Oligofectamine介导下转染猪血管内皮细胞系SV-40-PED的佳转染条件和效果.方法 以SV-40-PED为转染对象,在6孔培养板中,接种SV-40-PED细胞2×105/孔,将4 μl Oligofectamine和不同浓度的SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5 μl)分别溶于100 μl无血清、无抗生素的DMEM培养基,室温放置20 min后转染细胞,SP1 ODNs终浓度分别为50、100、150、200和250 nmol/L、转染26 h检测不同浓度转染情况,确定佳SP1 ODNs与Oligofectamine的比率、转染时间;流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度及摄取率评价转染效率;荧光显微镜观察细胞内荧光分布;测定细胞上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量,观察细胞损伤情况. 结果 SV-40-PED在Oligofectamine的介导下可以摄取SP1 ODNs.SP1 ODNs终浓度为50、100、150 nmol/L 组细胞形态无明显变化,终浓度为200、250 nmol/L组细胞收缩、变圆后逐渐恢复;SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L时, 转染26 h时细胞形态也无明显变化,48、72 h时有细胞漂浮现象.荧光下观察,转染成功各组荧光物质分布于细胞核内,其中SP1 ODNs终浓度为200、250 nmol/L组可见清晰核仁,浓度越高,荧光强度越强,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核.SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L时,转染72 h组LDH浓度为137.12±3.92 U/L,显著高于26 h的49.61±17.13 U/L和48 h的120.26±8.42 U/L,均有统计学意义(P＜0.01);当转染时间为26 h时,各浓度组上清液LDH值差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L、转染26 h时可以为SV-40-PED转染提供良好效果.
关键词： SP1诱骗性寡核苷酸 转录因子 转染 猪内皮细胞系 -
Twist与E-cadherin在子宫内膜样腺癌中的表达及意义
目的:检测转录因子(Twist)及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在子宫内膜样腺癌中的表达水平,探讨两者在子宫内膜样腺癌的发生发展中的作用.方法:利用免疫组化方法检测36例子宫内膜样腺癌及20例正常子宫内膜组织中Twist及E-cadherin的表达情况,分析两者与子宫内膜样腺癌临床病理参数的关系.结果:Twist在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率(91.7％)显著高于正常子宫内膜组织(35.0％),其差异有统计学意义(U=3.856,P=0.000)；而E-cadherin在正常子宫内膜中的阳性表达率(100.0％)明显高于在子宫内膜样腺癌组织(44.4％),差异有统计学意义(U=3.725,P=0.000).Twist在子宫内膜样腺癌组织中的表达与组织学分级(x2=8.806,P=0.012)及肌层浸润程度(U=2.31,P=0.021)有关.E-cadherin的表达与子宫内膜样腺癌组织学分级(x2=7.069,P=0.029)、肌层浸润深度(U=2.086,P=0.037)、临床FIGO分期(U =2.569,P=0.010)及有无淋巴结转移(U=2.263,P=0.024)有关.Twist表达与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.446,P=0.006).结论:Twist在子宫内膜样腺癌的表达增高,而E-cadherin的表达降低.两者在子宫内膜样腺癌发生发展过程中起着一定的作用,两者之间存在着一定的联系.
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复发性流产患者外周血T细胞亚群变化及相关转录因子的表达
目的:检测复发性流产患者外周血中Th1、Th2和Th17细胞的变化情况及相关转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA的表达水平.方法:对30例复发性流产(RSA)非孕期患者和30例正常非孕(NNP)妇女抽取抗凝静脉血5ml,Ficoll分离外周血单个核细胞(PB MC),采用流式细胞术检测Th1、Th2和Th17细胞的比例,PBMC培养5小时后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-17的水平,同时检测T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA的表达水平.结果:RSA患者Th1细胞的百分比和Th17细胞的百分比均高于NNP组(P＜0.05),Th2细胞的百分比低于NNP组(P＜0.05).RSA组PBMC培养上清中1L-4水平低于NNP组(P＜0.05),而IFN-γ和IL-17水平明显高于NNP组(P＜0.05).RSA患者GATA-3 mRNA表达较NNP组减少(P＜0.05),而T-bet和STAT-3 mRNA明显高于NNP组(P＜0.01).结论:RSA患者PBMC合成IFN-γ和IL-17的水平明显增高,合成IL-4的水平明显降低,表明存在T细胞亚群的分化失衡状态.这种失衡状态可能受到相应的核转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3的调控.
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转录因子Snail与肿瘤的上皮细胞间质化
肿瘤对人体的危害极大,其引起的死亡大多是因为肿瘤转移.肿瘤的转移是一个十分复杂的过程,它是多种基因参与的结果,不仅仅是遗传性状的改变,还包括细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间的相互作用.
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Nrf2在肿瘤化学防御方面的研究进展
诱导正常细胞产生各种抗氧化酶、金属结合蛋白、药物代谢酶、药物转动蛋白及分子伴侣是防止肿瘤发生的有效措施之一.Nrf2(NF-E2-relatedfactor 2)是肿瘤化学防御的一个重要细胞保护因子.许多细胞保护基因启动子区均有抗氧化反应元件ARE(antioxidant response ele-ment,ARE),Nrf2通过与细胞保护基因的ARE序列结合调节基因表达.正常条件下Nrf2位于细胞质,与氧化还原敏感性底物Keap1(Kelch-like ECH-associated protein 1)形成结合物并迅速通过泛素化途径降解.肿瘤化学诱导剂使Keap1巯基氧化后使Nrf2从Nrf2-Keap1结合物中释放并转入细胞核,诱导各种细胞保护基因表达.本文旨在对Nrf2转录因子近几年在肿瘤化学防御方面的研究进展加以综述.
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p300/CBP与肺癌
细胞核内DNA绝大多数时间缠绕并结合在组蛋白上,储藏在高度压缩的染色质中,处于非激活状态.细胞如需要激活一些基因,转录因子则协同将相关基因(DNA片段)从组蛋白上解离下来.
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HIF-1α的研究进展及与肺癌的关系
缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物及人体的一种转录因子.研究证实HIF-1在动物及人体许多肿瘤中大量表达,对肿瘤的生长、血管形成、转移、凋亡及耐药皆有影响.
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E2F圈套寡核苷酸抑制人视网膜色素上皮细胞增生的实验研究
目的观察转录因子E2F的圈套寡核苷酸(decoy ODNs)对培养的人视网膜色素上皮(HRPE)细胞增生的影响. 方法在脂质体lipofectamineTM2000介导下将不同浓度的E2F decoy ODNs或错义decoyODNs转人培养的HRPE细胞中,甲基四唑盐比色(MTT)法检测其对HRPE细胞增生活性的影响,凝胶迁移率变动分析(EMSA)法检测E2F decoy ODNs与转录因子E2F的竞争结合活性.结果0.2μmo1/LE2F decoy ODNs显著抑制HRPE细胞的增生(P=0.002),并在低浓度时呈剂量依赖关系.错义decoy则无此作用.EMSA检测结果显示,E2F decoyODNs拮抗转录因子E2F的结合活性.结论E2F decoyODNs能序列特异性地抑制转录因子E2F的结合活性,进而抑制HRPE细胞的增生活性.
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血清诱导人视网膜色素上皮细胞中转录因子E2F1的表达及活化
目的探讨转录因子E2F1在人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中的表达及活化.方法培养的人RPE细胞经同步化后分为两组:无血清组和含20%新生牛血清的血清组.采用Western blot蛋白印迹法检测两组细胞中转录因子E2F1蛋白的表达.用凝胶迁移率变动分析法(EMSA)检测其与DNA的结合活性.结果在RPE细胞核抽提物中检测到相对分子质量为60×103的E2F1蛋白,血清刺激使其表达增加(P＜0.001).EMSA分析示在血清刺激下,E2F1核蛋白与DNA的结合活性增强.结论转录因子E2F1存在于人RPE细胞的细胞核中,血清刺激可诱导其表达增加,并增强其与DNA的结合活性,发挥其调控基因转录的作用.
