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铁强化常用评价指标比较
为了更好地评估机体铁营养状况和食物强化干预效果,本文阐述了各种常用的铁评价指标的代谢、功能及特点,比较了各指标判断铁缺乏的灵敏度和特异度,提出了评价人群铁营养状况的推荐指标组合.
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模拟微重力对K562细胞增殖和分化的影响
目的 在航天飞行条件下航天员会出现"航天飞行性贫血",其分子机制尚不明确,实验观察了美国国家航空航天局(NASA)旋转式细胞培养系统模拟的微重力环境对重组人红细胞生成素(Epo)诱导K562细胞增殖分化的影响.方法 利用NASA旋转式细胞培养系统模拟的微重力环境,细胞计数分析细胞增殖情况,联苯胺染色法检测血红蛋白合成情况,应用免疫荧光和流式细胞术检测血型糖蛋白A(GPA)和转铁蛋白受体CD71在细胞表面的表达情况,应用荧光染料标记的鬼笔环肽和紫杉醇分别显示纤维型肌动蛋白和微管.结果 旋转培养的K562细胞的细胞增殖速度显著低于地面对照组;旋转培养还显著抑制Epo诱导的血红蛋白合成,联苯胺阳性细胞从Epo处理常规培养组的(15.0±1.2)%降为旋转培养组的(9.0±0.9)%;旋转培养还抑制GPA和CD71在细胞表面的表达.此外,旋转培养还促进微管解聚.结论 结果表明,旋转培养模拟微重力环境能抑制Epo诱导的K562细胞的增殖和分化;而模拟微重力环境使细胞骨架解聚可能使定位于细胞表面的蛋白(如GPA、CD71以及Epo受体等)在运输到细胞表面的过程发生障碍,从而降低对Epo的反应能力.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对苯代谢物抑制K562细胞转铁蛋白受体表达的干预作用
目的 观察苯代谢物对K562细胞转铁蛋白受体表达的影响以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷的干预作用.方法 K562细胞用苯代谢物处理72 h,处理期间的后48 h加入5-氮杂-2'-脱氧胞苷进行干预,然后利用荧光标记抗体结合流式细胞技术分析细胞表面转铁蛋白受体的表达,应用半定量反转录PCR技术分析细胞转铁蛋白受体mRNA的表达水平.结果 苯代谢物苯酚(200～800 μmol/L)、氢醌(10～40μmol/L)和1,2,4-苯三醇(5～20 μmol/L)均能浓度和时间依赖性抑制转铁蛋白受体在细胞表面的表达和浓度依赖性抑制细胞内转铁蛋白受体mRNA表达;而5-氮杂-2'-脱氧胞苷可显著拮抗苯代谢物抑制转铁蛋白受体表达的作用.结论 苯代谢物可抑制红系祖细胞转铁蛋白受体的表达,而DNA甲基化可能参与其中,转铁蛋白受体的表达抑制会影响细胞铁的摄入,从而影响血红素合成,继而抑制血红蛋白合成影响红系分化.
关键词： 苯代谢物 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 转铁蛋白受体 -
育龄妇女与儿童转铁蛋白受体的比较研究
目的比较健康儿童和育龄妇女血浆转铁蛋白受体(TfR)、铁蛋白(SF)浓度及TfR/SF比值,研究血浆TfR与其它铁营养状况评价指标的相关性.方法以3组健康人群(3～6岁学龄前女童109名,11～12岁青春前期女孩133名,20～45岁育龄妇女115名)为研究对象,比较各组血浆TfR、铁蛋白(SF)浓度及TfR/SF比值,研究TfR与SF、血红蛋白(Hb)、总铁结合力(TIBC)及年龄相关性.结果血浆TfR浓度在学龄前女童高,青春前期女孩次之,育龄妇女低,分别为(23.34±6.78)、(21.33±5.30)和(19.86±4.83)nmol/L.青春前期女孩的血浆SF浓度高于育龄妇女,育龄妇女高于学龄前女童,分别为(60.37±33.39)、(57.17±29.81)和(47.83±24.49)μg/L.TfR/SF比值在学龄前女童高,青春前期女孩次之,育龄期妇女低,分别为(0.72±0.83)、(0.48±0.47)、(0.47±0.37).多元线性回归分析表明,SF、Hb、年龄对TfR有影响.结论血浆SF、Hb(即使SF、Hb在正常值范围内)及年龄均对TfR有影响,储备铁含量越低SF对TfR的影响越强.儿童血浆TfR含量高于成年人,表明儿童生理性储备铁含量低于成年人.
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rs855791和rs3811647多态性对8-14岁人群血清铁蛋白与可溶性转铁蛋白受体水平的影响
目的 探索TMPRSS6基因中rs855791和TF基因中rs3811647的多态性对青少年人群血清铁蛋白(SF)、可溶性转铁蛋白受体(sTfR)水平的影响.方法 抽取50名研究对象静脉血并进行DNA提取,经Sequenom MassArray系统对样本的2个目标位点进行多态性检测.应用t检验和卡方检验分别对2个多态性位点中不同等位基因携带者之间的SF、sTfR的水平进行比较,推测每个位点的多态性对SF、sTfR水平的影响.结果 rs855791位点中A等位基因携带者SF水平(54.0±28.2 ng/ml)较GG纯合子携带者SF水平(33.1±20.2 ng/ml)高(P＜0.05),未观察到不同等位基因携带者之间sTfR水平存在差异;rs3811647位点中未观察到不同等位基因携带者之间SF、sTfR水平存在差异.结论 TMPRSS6基因中rs855791位点的多态性对SF的水平可能存在影响,并且其影响作用可能高于TF基因中rs3811647位点的多态性.
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铜缺乏对大鼠铁代谢的影响
目的 研究铜缺乏对大鼠肝脏铁调节蛋白2(IRP2)、转铁蛋白受体(TfR)及铁蛋白(Fn)mRNA的影响.方法 40只雄性SD大鼠按体重随机分为4组,每组10只,对照组(Ⅰ组),铜完全缺乏组(Ⅱ组),铜边缘缺乏组(Ⅲ组),铁及铜边缘缺乏组(Ⅳ组).喂养8周后处死,取大鼠组织和血清,进行相关指标和基因表达检测.结果 与对照组比较,铜缺乏使大鼠血清铁和血清铁蛋白含量显著降低(P＜0.05),血清转铁蛋白受体水平明显升高,铜缺乏时大鼠肝脏IRP2、TFR mRNA表达水平明显升高,Fn mRNA明显降低(P＜0.05).结论 铜缺乏通过影响铁吸收、储存、转运而影响大鼠体内铁的营养状况.铜缺乏影响大鼠IRP2 mRNA表达与IRE-IRP结合活性,在转录后水平改变TfR和Fn mRNA的表达,影响机体的铁稳态.
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脑缺血大鼠海马CA2区转铁蛋白受体及膜铁转运蛋白的表达及脑泰方提取物干预研究
目的:研究脑缺血大鼠海马CA2区转铁蛋白受体(TFR)和膜铁转运蛋白(Fpn)随时间表达,及益气活血中药脑泰方提取物(NTE)干预对TFR及Fpn表达的影响,阐明脑缺血后铁代谢失调导致神经元损伤的新机制及益气活血中药NTE治疗通过调节细胞内铁代谢达到抗脑缺血损伤的作用机制.方法:第一部分实验:随机将SD大鼠分为2h、6h、12h、24h、72h组,采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)行大鼠局灶性脑缺血模型制备,分别在术后2、6、12、24、72h各时间点取海马,通过免疫组化及RT-PCR检测海马CA2区TFR、Fpn及TFR mRNA、FpnmRNA随时间表达.第二部分实验,随机将SD大鼠分为NTE低、中、高剂量组(3、9、27g/kg)、假手术组及模型组.各组大鼠预处理灌胃(ig)给药连续3d,每日1次,再行MCAO模型制备术,术后连续ig给药3d.术后第3天采用Zea Longa神经行为学评分标准记录大鼠的行为活动,尼氏染色观察海马CA2区神经元,免疫组化法及RT-PCR检测TFR、Fpn和TFR mRNA、Fpn mRNA表达.结果:12h、24h、72h组TFR表达明显增加(P＜0.05),12h组Fpn的表达明显增加(P＜0.05);NTE高剂量组神经行为学评分较模型组有显著降低(P＜0.05);NTE高剂量组尼氏体多,胞核、胞仁较清晰显示;与模型组比较,NTE高剂量组TFR和TFR mRNA表达明显减少(P＜0.05),与假手术组和模型组比较,NTE高剂量组Fpn和Fpn mRNA表达明显增高(P＜0.05).结论:铁调节失衡可能是导致脑缺血神经元损伤的新机制,脑缺血后NTE能通过干预大鼠海马CA2区TFR、Fpn的表达,调节神经元铁代谢,达到保护神经元,恢复神经功能的作用.
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生血宁治疗缺铁性贫血的临床研究
目的观察生血宁治疗缺铁性贫血的药效及对铁代谢平衡调节的分子机制.方法100例缺铁性贫血患者随机分为生血宁治疗组和葡萄糖酸亚铁对照组各50例,治疗组用生血宁0.1g,每天3次口服;对照组用葡萄糖酸亚铁0.1g,每天3次口服;均连续服用30天.治疗前后各检测1次血清铁(Fe)、总铁结合力(total iron binding capacity,TIBC)、转铁蛋白饱和度(transferrin saturation,TS)、铁蛋白(serum ferritin,SF)、转铁蛋白(transferrin,Tf)、血清可溶性转铁蛋白受体(soluble transferrin receptor,sTfR)、血常规,并进行中医气血两虚证候评分.结果治疗组总有效率为92%;表明生血宁能改善铁代谢,提高Fe、TS、SF,降低TIBC、Tf、sTfR;促进红细胞生成作用明显;尚能促进白细胞及血小板生成.对照组总有效率为32%.两组比较差异有显著性(P＜0.01).结论生血宁治疗缺铁性贫血及气血两虚证效果明显,能改善铁代谢,提高Fe、TS、SF,降低TIBC、Tf、sTfR.
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抗CD71抗体抑制移植物抗宿主反应的组织病理学研究
探讨抗CD71抗体在动物体内抗移植排斥反应的作用.采用D2C5.6细胞株表达并提纯抗CD71人-鼠嵌合抗体;将人外周血单个核细胞(PBMC)注射到裸鼠体内建立移植排斥反应动物模型;将造模裸鼠分成3组:抗CD71抗体组、抗CD4抗体组和Hanks液模型组,分别注射抗体及Hanks液;20天后处死,取裸鼠肝、肺、脾组织,常规组织病理学处理并进行图像分析.实验发现:Hanks液模型组动物的肝、肺组织有大量的淋巴细胞浸润、肝细胞坏死及脾脏巨噬细胞活化;抗CD71抗体组和抗CD4抗体组的炎症性病变轻于模型组,差异具有极显著的统计学意义(P＜0.01).提示:抗CD71抗体在动物模型体内具有抑制移植排斥反应的作用.
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转铁蛋白受体在血液系统恶性肿瘤治疗中的研究进展
铁是细胞生长增殖和机能活动所必需的元素之一.绝大多数细胞包括肿瘤细胞在内摄取铁主要通过转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)介导.研究显示,转铁蛋白受体在肿瘤细胞表面高表达,因而可与多种物质联合应用于恶性肿瘤的治疗.本文从转铁蛋白受体结合药物(青蒿素、多柔比星和藤黄酸等)、基因、抗体、聚乙二醇、纳米方面对近年来转铁蛋白受体在血液系统恶性肿瘤治疗方面的研究进展进行了综述.
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急性白血病患儿血清转铁蛋白受体的表达变化及其机制研究
目的:研究急性白血病(AL)患儿血清转铁蛋白受体(serum transferrin receptor,sTFR)的表达变化及其相关作用机制.方法:选取2016年6月至2017年6月在我院接受治疗的46急性白血病患儿纳入AL组,并募集同期体检健康儿童40例纳入对照组.记录患者的相关临床资料,分析血清转铁蛋白受体与患者临床特征的相关性.KG-1a和TCHu147细胞的TFR基因经RNA干扰技术沉默后,采用MTT法、流式细胞术检测TFR基因对KG-1a细胞和TCHu147细胞增殖、细胞周期的作用.采用Western blot法检测白血病细胞经siRNA干扰后相关细胞周期蛋白水平.结果:AL组sTFR水平显著高于对照组(P＜0.05),外周血白血病细胞中TFR的mRNA水平及TFR蛋白表达量均高于对照组(P＜0.05).sTFR水平与AL患儿的白细胞数、白血病细胞比例、白血病细胞绝对数、铁调素(Hepc)和危险等级等指标密切相关(P＜0.05).经TFR siRNA干扰后的KG-1a和TCHu147细胞增殖能力则受到明显抑制(P＜0.05).流式细胞术检测显示,转染TFR siRNA后,KG-1a和TCHu147细胞的G0/G1期比例分别为(62.51±5.39)％、(63.37±4.27)％,与对照组(空白对照和阴性对照)相比均显著增高(P＜0.05);KG-1a和TCHu147细胞的G2/M期的比例为(5.74±1.34)％、(7.37±1.56)％,与对照组(空白对照和阴性对照)相比均显著下降(P＜0.05).TFR siRNA转染后的KG-1a和TCHu147细胞中CyclinE和CDK2表达水平显著下降(P＜0.05);TFR siRNA转染后的KG-1a和TCHu147细胞中P27表达水平显著上升(P＜0.05).结论:AL患儿外周血白血病细胞可合成较多的TFR蛋白,转运至细胞外后导致sTFR水平上升,通过下调TFR基因的表达能有效干扰白血病细胞分裂.
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HL-60细胞IRP2 mRNA、TfR mRNA、Fn mRNA的表达关系研究
为了探讨白血病细胞铁代谢及其调节机制,以及铁调节蛋白2(IRP2)在HL-60细胞铁代谢中的作用,将FeCl3或去铁胺(desferrioxamine,DFO)加入含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下进行培养.分别于细胞培养后第12、24和48小时收集细胞,提取总RNA,采用RT-PCR半定量法测定IRP2 mRNA、铁蛋白(Fn)mRNA和转铁蛋白受体(TfR)mRNA等指标的相对表达量.结果表明:①各实验组之间IRP2mRNA的表达量变化不大,组间差异无统计学意义(F组间=1.199,P＞0.05);而细胞培养时间对IRP2mRNA的表达有影响,组内差异有统计学意义(F组内=43.418,P＜0.01),表现为随时间的延长,IRP2 mRNA的表达降低.②各实验组之间TfR mRNA的表达差异有统计学意义(F组内=7.184,F组间=113.926,P＜0.01).在加入DFO的两个实验组中,TfR mRNA的表达升高.在加铁的两个实验组中,与对照组相比较,于12小时时TfR mRNA的表达量上升,24时时达到高峰,之后迅速下降.③在加铁的两个实验组中,Fn mRNA的表达量较高,大约是对照组的2倍,它们与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);而在加入DFO的两个实验组中Fn mRNA的表达与对照组相比较,无明显的差异(P＞0.05).④IRP2 mRNA与TfR mRNA及Fn mRNA的表达均不相关(r=-0.005,r=0.074,P＞0.05).结论:①IRP2在转录水平上可能是通过自身不同片段的量的变化,而在转录后水平上是以氧化修饰的方式通过自身降解,对HL-60细胞的铁代谢进行调节.②Fn mRNA和TfR mRNA不同程度地参与了对HL-60细胞内铁的调控过程.
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黎族地中海贫血患者血清促红细胞生成素和转铁蛋白受体水平的研究
为研究地中海贫血患者与血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)和红细胞生成素(EPO)的关系,并估计地中海贫血骨髓红系增生程度,应用酶联免疫法检测50例地中海贫血患者和50例正常人对照的sTfR和EPO水平.结果显示,β-重型地中海贫血患者血清EPO和sTfR水平均明显高于正常对照组(P＜0.05),而轻型患者与正常人无显著差别.结论:黎族地中海贫血患者血清中EPO和sTfR水平升高与地中海贫血的类型有关.
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外吐小体在变应性疾病发病机制中的作用
外吐小体( exosome, EXO)为磷脂膜包被的大小为20~100 nm的内吞囊泡,可由培养后的大多数细胞分泌产生。Trams等[1]1981年初将其描述为肿瘤细胞系分泌的具有5′-核苷酸活性的微囊泡。随后,Pan等[2]的研究发现培养后的网织红细胞多囊内吞体中存在外吐小体,内含转铁蛋白受体--参与细胞内吞作用及回收细胞表面蛋白质。通过电镜观察发现,含有外吐小体的多囊内吞体通过膜融合将细胞内的物质释放至细胞外,继而,多囊内吞体与细胞膜的融合并向细胞外释放外吐小体的现象在几乎所有的细胞类型中发现,例如,细胞毒性 T 细胞、B 细胞、肥大细胞、树突状细胞、血小板、肿瘤细胞、上皮细胞[3]。 EXO广泛参与体内的免疫应答过程,与多种疾病的发生、发展密切相关。本文将对EXO的生物学特性及其在变态反应性疾病发病机制中的作用进行综述。
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腺病毒增强转铁蛋白受体介导的针对突变型P53的大酶转染可促进肝癌细胞凋亡
目的:通过腺病毒增强的转铁蛋白受体介导法(AVET)将针对突变型p53(mtp53)的大酶(Maxizyme)基因转入肝癌细胞后篌对肝癌细胞凋亡的影响,探索AVET用于肝癌基因治疗的可行性,为肝癌的基因治疗探索一条新途径.方法:以带有mtp53基因的人肝癌细胞株MHCC97细胞为模型,用腺病毒增强转铁蛋白受体介导法将针对mtp53的pEGFP-Maxizyme基因和空载体pEGFP分别导入MHCC97细胞,荧光显微镜观察细胞转染情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mtp53 mRNA表达水平的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测转染后对细胞凋亡的影响.结果:转染后48h荧光显微镜下可见呈细胞形态的绿色荧光.收集细胞检测,实验组mtp53 mRNA表达水平与空载体组和空白对照组相比,基因扩增条带亮度明显减弱,mRNA表达水平下降(P＜0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的凋亡梯带(DNA Ladder);流式细胞仪分析显示细胞凋亡水平增高,凋亡指数22.95%,显著高于对照组的2.37%(P＜0.05).结论:腺病毒增强转铁蛋白受体介导的基因转移系统可将pEGFP-Maxizyme有效的转染到肝癌细胞株MHCC97中,Maxizyme在细胞内成功的切割了mtp53 mRNA,促进了肝癌细胞的凋亡,这为腺病毒增强转铁蛋白受体介导法在肝癌基因治疗中的应用提供了实验依据,也为肝癌的基因治疗提供了一条新途径.
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转铁蛋白受体在肿瘤靶向治疗中的研究进展
转铁蛋白受体(Transferrin receptor,TfR)是参与体内铁代谢过程的重要蛋白质.研究表明,TfR在肿瘤细胞表面高度表达,因此以其作为靶点与药物结合可应用于肿瘤治疗.现对TfR的结构功能以及在肿瘤靶向治疗中的研究进展进行概述.
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不同浓度铁离子对成骨细胞铁离子通道蛋白的影响
目的 铁过载与骨代谢相关,在人成骨细胞(hFOB1.19)中,膜转铁蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体(TfR)和二价金属转运蛋白1(DMT1)是细胞内铁离子进入和排除的重要通道蛋白;本研究用不同浓度铁离子干预成骨细胞培养,观察成骨细胞铁离子通道蛋白基因表达变化和相互联系,了解铁过载对相关通道蛋白的影响意义.方法人成骨细胞在34℃下进行体外培养,以不同浓度枸橼酸铁铵FAC(50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L)干预成骨细胞培养,48小时后收集细胞,按不同干预组抽提总RNA,采用半定量RT-PCR法检测成骨细胞中TfR、DMT1、FPN1 mRNA的表达.结果①RT-PCR检测显示不同浓度FAC干预成骨细胞后,各组FPN1、TfR、DMT1 mRNA均有表达;②不同浓度组FPN1、TfR、DMT1 mRNA表达光密度比值不同,组间密度比值比较存在统计学意义(P<0.05);③培养环境铁离子浓度增高可以使得FPN1的mRNA表达上调,而TfR、DMT1的mRNA表达下调.结论 成骨细胞的铁通道蛋白受环境铁离子影响,在一定范围内随着细胞外铁离子浓度增加,细胞膜铁离子进入通道功能下调、排除通道功能上调,说明铁过载对成骨细胞内铁离子水平有明显影响.
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应用转铁蛋白受体和胎儿血红蛋白标记染色方法分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究
由于孕妇外周血中胎儿细胞的含量极少,Hahn, Holzgreve[1]和Bianchi等[2]报道,孕妇每毫升外周血中仅有1～2个完整胎儿细胞.所以采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记,并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术,是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的佳手段[3].但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体,故不同学者选用的标记性抗体也有所不同.本研究采用荧光激活细胞分离技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS ),通过对孕妇外周血及未孕妇女外周血中转铁蛋白受体(transferrin receptor, CD71)单标记染色和胎儿血红蛋白(fetal haemoglobin,HbF)单标记染色与双标记染色情况的比较,探讨CD71 与HbF染色法分选胎儿有核红细胞的价值.
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不同铁状态下HL-60细胞中IRP2 mRNA和TfR mRNA的表达
目的 探讨不同铁状态下IRP2 mRNA和TfR mRNA在HL-60细胞中的表达以及二者之间的关系.方法 将FeCl3或去铁胺(Desferrioxamine,DFO)加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,使HL-60细胞处于缺铁或富铁的状态下进行培养.于细胞培养后第12、24和48小时收集各组细胞,提取总RNA.采用RT-PCR半定量法测定IRP2mRNA和TfR mRNA的相对表达量.结果 ①各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大,无明显差异(F组间=1.199,P＞0.05).细胞培养时间对IRP2 mRNA的表达有影响,差异有显著性(F组内=43.418,P＜0.05),表现为随时间的延长,IRP2mRNA的表达降低.②各实验组之间TfR mRNA的差异有显著性(FW-S=7.184,F组间=113.926,P＜0.01).在加入DFO的两个实验组中TfR mRNA表达升高.在加铁的两个实验组中,与对照组相比较,在12 h时TfR mRNA的表达量上升,24h时达到高峰,之后迅速下降.结论 ①铁或去铁胺对HL-60细胞IRP2 mRNA的表达无直接影响.②当细胞内铁降低时,TfR mRNA的基因表达则增加;当细胞内铁增加时,TfR mRNA的基因表达则降低.
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转铁蛋白受体与血液系统肿瘤
铁是生命细胞生长增殖及机能活动所必需的元素之一.绝大多数细胞包括肿瘤细胞摄取铁主要通过转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)介导.近年来TfR与肿瘤的关系已受到广泛关注.研究发现,肿瘤细胞TfR高表达,且TfR表达的调节对肿瘤细胞的增殖分化及对肿瘤诊治有重要影响.现就TfR与血液系统肿瘤关系研究现状作一综述.
