长春新碱接触工人的遗传损伤研究

许多抗肿瘤药物被证明具有致突变性、致畸性和致癌性[1].长春新碱是一种抗有丝分裂剂,在体内和体外试验显示具有细胞遗传毒性作用[2].有研究显示长春新碱不能诱导中国仓鼠卵巢细胞二倍体细胞染色体畸变[3],而且大部分试验只采用微核试验来评价遗传效应[4].为此,笔者采用微核试验、彗星试验来研究单纯接触长春新碱的工人是否存在遗传损伤.

双顺反子载体pWISG的构建和共表达

肿瘤放、化疗对骨髓的抑制作用限制了其使用剂量,如何保护骨髓中的造血干细胞免受放化疗引起的杀伤和凋亡是研究热点之一.已知WEE1Hu可使细胞生长停滞于G2期检测点,以确保细胞在进入有丝分裂前完成DNA的复制和损伤修复[1],并且WEE1Hu可以抑制HIV、γ射线等诱导的细胞凋亡.人干细胞因子(hSCF)是一种重要的造血细胞生长因子,主要调控造血祖细胞的增殖、分化[2],并有一定的抗损伤作用.本实验采用核糖体插入位点(IRES)构建WEE1Hu、SCF/GFP双顺反子重组表达质粒pWISG,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)来研究两者的共表达,为进一步功能研究奠定基础.

注射重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)引起过敏性紫癜1例报告

国产重组乙型肝炎(乙肝)疫苗[中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)]以往少见严重不良反应报告.射阳县黄沙港镇卫生院在进行重组乙肝疫苗(CHO细胞)接种时发生1例过敏性紫癜,现报告如下.

治疗性抗体高表达CHO细胞株构建策略

单克隆抗体(MAbs)具有高度的特异性,因而被大量用于各种疾病尤其是癌症和自身免疫性疾病的治疗.2009年,包含生物抗体药物在内的重组蛋白获得了990亿美元的市场销售额[1],突出的重磅炸弹级药物包括:美罗华利妥昔单抗(rituximab,美国Genentech和BiogenIdec公司研制)、赫赛汀曲妥珠单抗(trastuzumab,美国Genentech公司研制)、阿伐斯汀贝伐单抗(bevacizumab,美国Genentech 公司研制)、艾比特思西妥昔单抗(cetuximab,美国ImClone 公司和Bristol-Myers Squibb公司研制)和修美乐阿达木单抗(adalimumab,美国Cambridge抗体公司和Abbott公司研制)等.表1为2011年部分单克隆抗体药物的全球销售情况[2].以上抗体均由大规模培养的经过基因改造的宿主细胞(host cell)来生产表达.对于治疗性抗体而言,为了满足其生物活性,需要进行正确的折叠和翻译后修饰,因此用于生产治疗性抗体的宿主细胞往往是哺乳动物细胞,主要包括:Sp2/0骨髓瘤细胞、NS0小鼠骨髓瘤细胞、HEK293人胚胎肾细胞和中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO),其中以CHO细胞用途为广泛.

电离辐射致中国仓鼠卵巢细胞DNA损伤效应

DNA在细胞内外各种因素的作用下可不断出现变化,DNA分子中发生任何非生理性的改变均可看作是DNA的损伤.然而DNA损伤后终导致的结局如何?过去人们围绕DNA损伤导致的致癌效应和遗传效应的研究较多[1-4],而用生殖细胞作为研究模型,研究其DNA损伤的遗传效应则报道的相对较少.与体细胞相比研究包括电离辐射在内的环境有害因素对生殖细胞DNA损伤效应也许更有价值,因为它涉及生殖细胞本身的遗传特性的稳定性,以及种属是否能够继续繁衍.本研究通过X射线对中国仓鼠卵巢(CH0)细胞DNA损伤反应的研究,探讨电离辐射致生殖细胞DNA损伤效应,以期为进一步研究环境有害因素的生殖毒性机理及辐射所致遗传效应提供一些有价值的依据.

抗风湿性关节炎新药——依他奈特

FDA于1998年11月2日批准的基因工程蛋白质依他奈特（etanercept），商品名Enbrel，是用于改善风湿性关节炎(RA)症状的第一个基因工程产品，由美国Immunex Corporation和Wyeth-Ayerst Laboratories共同开发研制。本品是利用基因重组技术在中国仓鼠卵巢细胞中表达生产。由934个氨基酸组成，相对分子质量为150 000［1］。1　作用机制　　已知RA发病率高达1%～2%，但其病因至今尚未阐明，一般认为是在各种因素的诱导下出现的一种慢性的、渐进的、炎症的自身免疫性疾病，其中肿瘤坏死因子（TNF）作为致炎细胞因子参与了炎症反应和免疫反应，并在RA患者的炎症进程中起着重要作用，是导致关节滑膜炎和骨侵蚀的一个重要因素［2］。已经发现RA患者的滑膜与滑液中TNF的水平升高［3］。

年龄相关性黄斑变性的药物治疗进展

伴随老龄社会的步入，一组在医药发展历程中不曾出现的疾病群，成为临床和社会关注的热点，包括年龄相关性视网膜黄斑病变（ age-related macular degeneration，AMD），归属于当前老年人致盲的重要原因。其中，湿性型（渗出型）视网膜黄斑病变以脉络膜新生血管（ choroidal neovascularization，CNV）异常增生为特征，以血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor，VEGF）过度生长为机制，以致盲与视力减退为疾病终点，严重影响着人们的生活质量。作为一种非侵入疗法，靶向药物（包括分子和抗体靶向药物）治疗为研发的重点，并成为了防治AMD的主要手段。康柏西普是中国获得世界卫生组织（ WHO）国际通用名的生物制品1类新药，为利用中国仓鼠卵巢细胞（ CHO细胞）表达系统产生的重组融合蛋白，与VEGF亲和力高，作用全面，可同时阻断VEGF所有亚型（VEGF-A、VEGF-B）和胎盘生长因子（placenta growth factor，PIGF）。在多项临床研究中，康柏西普显示出了良好的效果，为新型靶向药物的研发开创出一条科学、严谨并可借鉴的路径。

接种乙肝疫苗后影响人体免疫应答的因素分析

目前,我国用于人群的接种乙肝疫苗均为基因重组乙肝疫苗.该疫苗主要分为酵母细胞和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)两种,虽然具有良好的免疫原性,但按目前WHO推荐的0、1、6个月免疫程序接种,仍有近10%的人群乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)为阴性或达不到保护阈值(＜10 Mu/ml),用放射免疫法(RIA)检测时低应答或无应答者占15%～20%.现就影响乙肝疫苗免疫应答的因素及补救措施进行探讨分析.

中国仓鼠卵巢细胞表达系统在疫苗研制中的应用

分子生物学、分子免疫学等学科的发展使基因工程疫苗具有越来越重要的地位.在基因工程疫苗研究的动物细胞表达系统中,具代表性的就是中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamster Ovary,CHO).它是用来表达外源蛋白多也成功的一类细胞.本文就CHO细胞表达系统在疫苗研制中的应用做一综述.

对我国乙型肝炎疫苗扩大免疫的看法

我国血源性乙肝疫苗于1985年底问世,1995年酿酒酵母重组和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)重组乙肝疫苗也相继投产,投产前后都进行了以新生儿为主的临床观察,证明是安全有效的.10μg/mL血源性乙肝疫苗以0、1、6月程序免疫出生于表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)双阳性母亲的新生儿,母婴围产期传播阻断率为42.9%;20μg/mL 3针免疫后阻断率为67.4%;第一针30μg/mL,第二、三针10 μg/mL免疫后阻断率为75.6%;三针均用30μg/mL免疫的阻断率为82.3%,剂量效应明显(P＜0.05)[1].

LR8与疾病

LR8是低密度脂蛋白受体(Low density lipoprotein re-ceptor,LDLR)家族第三个被发现的成员[1].1992年和1994年Yanamoto和他的同事们分别克隆了兔和人LR8的互补DNA(complementaI DNA,cDNA).初,转染该cDNA的中国仓鼠卵巢细胞能结合极低密度脂蛋白(Very low density lipoprotem,VLDL)和具有β迁移率的极低密度脂蛋白(β-migrating very low density lipoprotem,β-VLDL)而不能结合低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL),便命名该受体为VLDL受体[2,3].

伟哥阻断延迟整流钾通道的快成分延长心脏复极

有几个病例报道反映，有发生心脏缺血事件倾向的病人用伟哥后意外死亡。虽然急性缺血事件发作可以引起这类病人死亡，作者提出假设，伟哥可能有某些电生理作用，使某些病人有促心律失常倾向。伟哥30μmol/L反向使用依赖性地使10只离体豚鼠心脏复极延长。250ms起搏时伟哥使动作电位时间增加15%，从基线的117±3增至134±2ms；而以150ms起搏时仅增加6%((从99±2增至105±2ms)。用人ether-a-go-go相关基因(HERG)转染的HEK293细胞(n=30)做实验，见到浓度依赖的延迟整流钾通道快速成分的阻断。100μmol/L时激活的电流减少50%。用HERG-转染无Ir样电流的CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)证实了上述效应。结论：伟哥有近似Ⅲ类抗心律失常药的直接心脏电生理效应。这种效应可能出现于药物清除不良造成浓度较高之时，如肾、肝功能不全、同服另一种CYP3A底物/抑制剂，或用药过量后。这提供了伟哥治疗时猝死的一个可能的新解释。(PGeelen,etal.Circulation，102:275.余国膺摘译)

cAMP及微管阻断剂对大鼠睾丸AQP7和EGFP融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞膜转运的影响

p62dok蛋白氨基酸和cDNA序列测定

目的:报道p62dok蛋白的纯化和氨基酸及cDNA序列的测定方法和结果,拟为研究p62dok在胰岛素信息传递中的作用提供必需的技术方法和试剂.方法:过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞(CHO/IR)细胞用含10%胎牛血清的Hams F-12培养12 h(37℃)后,加入胰岛素+Vanadate或Pervanadate处理.

无细胞百日咳疫苗生产用培养基的改进和培养条件优化

目的:改进无细胞百日咳疫苗生产用培养基并优化培养条件.方法:用不同浓度溶血(0.1％)赫氏琼脂及酸水解酪蛋白制备百日咳活性炭培养基,选择优培养条件;使用百日咳活性炭培养基成功复苏菌种后,优化传代代次和培养时间,评价百日咳活性炭培养基替代羊血包姜氏培养基的可行性;用酸水解酪蛋白代替自制50％酸水解酪蛋白制备改良SS液体培养基,并用ELISA、SDS-PAGE电泳和CHO细胞簇集等方法评价对菌种的培养效果.结果:溶血(0.1％)赫氏琼脂的加入量为33.2g/L、酸水解酪蛋白加入量为8g/L时,菌苔生长快;百日咳活性炭培养基培养第1代72 h、第2代48 h、第3代48 h、第4代24 h和第1代72 h、第2代36 h、第3代24 h的血凝(HA)和UV600均较高,这两组细菌生长状态较好;酸水解酪蛋白制备的百日咳活性炭培养基在优化条件后复苏菌种生长良好,和羊血包姜氏培养基没有明显差异;8g/L酸水解酪蛋白制备的改良SS液体培养基所得菌量优于50％酸水解酪蛋白制备培养基(P=0.001),改良SS液体培养基培养所得百日咳毒素纯度、产量和CHO细胞簇集活性均较好.结论:使用酸水解酪蛋白的百日咳活性炭培养基和改良SS液体培养基所得的百日咳杆菌纯度、产量、活性均较高,适用于无细胞百日咳组分疫苗的生产.