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疏风解毒胶囊HPLC指纹图谱研究
目的 建立疏风解毒胶囊(SJC) HPLC指纹图谱分析方法,为全面有效控制其质量提供依据.方法 采用HPLC法建立SJC指纹图谱,色谱条件:Unitary C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长250 nm,进样量10μL;对所建指纹图谱进行相似度分析及主成分分析(PCA),并对共有峰进行药材归属及成分指认.结果 建立了SJC HPLC指纹图谱共有模式,确定了22个共有峰;14批SJC相似度在0.915～0.977,PCA表明前3个主成分代表了原始HPLC指纹图谱的主要信息;在指纹图谱所标定的22个共有峰中,8、12、13、14、15、16、21、22号峰来自虎杖,1、2、3、7、9、10号峰来自连翘,5、6、11号峰来自马鞭草,4号峰来自败酱草,18、19号峰来自甘草,17、20号峰未能归属到具体药材;通过质谱数据比对,共指认出16个共有峰,分别为1号峰(连翘酯苷E)、5号峰(戟叶马鞭草苷)、6号峰(马鞭草苷)、7号峰(5'-羟基连翘酯苷A)、8号峰(虎杖苷)、9号峰(连翘苷)、10号峰(连翘酯苷A)、11号峰(毛蕊花糖苷)、12号峰(异连翘酯苷A)、13号峰(芦荟大黄素)、14号峰(大黄素-8-O-葡萄糖苷)、15号峰(大黄酸)、18号峰(甘草酸单铵盐)、19号峰(3-羟基光甘草酚)、21号峰(大黄素)、22号峰(大黄酚).结论首次建立了SJCHPLC指纹图谱分析方法,该法操作简单、准确,精密度、重复性好,可较全面地反映SJC中化学成分的信息,为SJC质量控制提供了可靠的科学依据.
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HPLC法同时测定疏风解毒胶囊中7种活性成分
目的 建立同时测定疏风解毒胶囊中戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐和大黄素的RP-HPLC方法.方法 采用RP-HPLC法测定,色谱柱为Unitary C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长250 nm;进样量10μL.结果 戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐和大黄素分别在0.096～1.920、0.089～1.784、0.119～2.348、0.059～1.176、0.021～4.224、0.206～4.120、0.053～1.064 μg与色谱峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为98.43％(RSD 2.13％)、98.30％ (RSD 2.68％)、99.31％ (RSD 2.76％)、101.64％ (RSD 2.37％)、97.47％ (RSD 2.05％)、100.89％ (RSD1.98％)、99.05％ (RSD 2.21％).结论 该方法简单、快速、准确,为疏风解毒胶囊的质量控制提供一种可靠的参考方法.
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超高效液相色谱法测定热炎宁颗粒中大黄素、咖啡酸、绿原酸、野黄芩苷、木犀草素和虎杖苷
目的：建立超高效液相色谱（UPLC）同时测定热炎宁颗粒中大黄素、咖啡酸、绿原酸、野黄芩苷、木犀草素、虎杖苷6种成分的方法。方法采用UPLC法，Acquity UPLC HSS C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）；流动相为[甲醇–乙腈（35∶65）]–0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，体积流量0.5 mL/min，分段变波长测定，柱温35℃；进样量1.0μL。结果6种成分在选定的范围内线性关系良好（r≥0.9993）；平均加样回收率在99.08%～102.31%，RSD值均小于2.53%（n=6）。结论采用UPLC法对热炎宁颗粒中大黄素、咖啡酸、绿原酸、野黄芩苷、木犀草素、虎杖苷6种成分进行测定，方法操作快速，高效，准确，可用于热炎宁颗粒的质量控制。
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HPLC法测定益肺通络胶囊中虎杖苷的含量
目的:建立益肺通络胶囊中虎杖苷含量测定的方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为Inerterc18柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈水(23∶ 77);检测波长为306 nm.结果:虎杖苷在0.148 ～0.740 μg范围内线性良好(r=0.9999),平均回收率为101.4％,RSD为1.5％(n=6).结论:本法简便、准确、可靠,可用于益肺通络胶囊的质量控制.
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虎杖苷对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用及机制探讨
目的 探讨虎杖苷对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用,并探讨其机制.方法 以肺癌A549细胞为研究对象,以不同浓度虎杖苷(0、10、20、50、100、200 mg/L)处理24、48和72 h后,四氮唑盐(MTS)实验检测虎杖苷对肺癌A549细胞体外增殖的作用,以确定后续实验浓度;经不同浓度虎杖苷(0、10、20 mg/L)处理48 h后,Transwell实验检测虎杖苷对肺癌A549细胞体外侵袭的作用;Western blot和Real-time PCR检测基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)、整合素β4(integrinβ4)、Toll样受体3(TLR3)和分化抗原44(CD44)的表达以及丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化(p-AKT)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养基中转化生长因子β(TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;报告基因技术检测核因子(NF)-κB启动子活性.结果 在0、10、20、50、100、200 mg/L浓度范围内,虎杖苷处理肺癌A549细胞后,细胞体外增殖率显著下调(以10 mg/L和20 mg/L处理48 h作为后续实验的药物浓度和时间).虎杖苷处理48 h后,肿瘤细胞体外侵袭能力显著下降,TGF-β和TNF-α含量显著下调,MMP-2/9、integrinβ4、TLR3、CD44、p-AKT蛋白及mRNA水平以及NF-κB启动子活性显著下调(均P<0.05).结论 通过调控肿瘤相关基因表达和ART/NF-κB信号通路活性,虎杖苷可显著抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭.
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虎杖苷抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受器反射的研究
目的 观察虎杖苷(PD)对颈动脉窦压力感受器反射的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将大鼠随机分为正常组、PD 50μmol/L组、PD 100μmol/L组和PD 200μmol/L组.应用隔离灌流麻醉大鼠颈动脉窦区的技术,观察不同浓度的PD(50,100,200μmol/L)对颈动脉窦压力感受器反射(CSB)的影响.结果 与正常组大鼠相比,PD组大鼠压力感受器曲线明显向右上方移位,且具有剂量依赖性.压力感受器反射曲线大斜率(PS)和MAP反射性下降的大值下降.Bay K8644(500nmol/L)预处理后,PD抑制CSB的效应被完全阻断.结论 PD可抑制CSB,并且此效应与阻断钙通道有关.
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虎杖苷抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受器活动观察
目的 观察虎杖苷(polydatin,PD)对颈动脉窦压力感受器活动的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 在麻醉大鼠隔离灌流颈动脉窦的技术下,记录窦神经放电,观察PD对颈动脉压力感受器活动的影响.结果 与正常组大鼠相比,PD组大鼠窦内压-窦神经放电积分关系曲线向右下方移位,且具有剂量依赖性.用L型钙通道开放剂Bay K 8644(500nmol/L)预处理后,PD的抑制效应被阻断.结论 PD抑制颈动脉窦压力感受器活动,此作用可能与Ca+2内流减少有关.
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虎杖苷对急性百草枯中毒大鼠肺损伤的干预研究
目的 观察虎杖苷对百草枯中毒大鼠肺损伤的影响,探索其对百草枯中毒急性肺损伤的保护作用.方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组、染毒组和虎杖苷干预组,每组20只.给药后测定不同时间点的肺组织湿干比、血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的表达水平.结果 染毒组和虎杖苷干预组肺湿干比、血清MDA、MPO和TNF-α、IL-6水平均高于正常对照组,血清SOD水平均低于正常对照组(P＜0.01).与染毒组比较,虎杖苷干预组肺湿干比、血清MDA、MPO和TNF-α、IL-6水平降低,SOD水平明显增高(P＜0.01).结论 虎杖苷可以通过减轻炎性反应和提高抗氧化应激能力来减轻百草枯所致的急性肺损伤反应.
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虎杖苷在心血管方面作用的研究
虎杖苷(polydatin, PD),也称为白黎芦醇苷,是从蓼科蓼属虎杖的干燥根茎中提取的第4种单体,故又名虎杖结晶4号.它是白藜芦醇与葡萄糖结合的产物,属于芪类化合物,即羟基二苯乙烯类化合物,化学名称为3,4′,5-三羟基芪-3-B-单-D-葡萄糖苷[1].
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虎杖苷治疗老年冠心病的临床疗效及对病人NF-κB、炎症因子的影响
目的 探讨虎杖苷治疗老年冠心病的临床疗效及对病人核因子-κB(NF-κB)、炎症因子的影响.方法 选择2015年1月-2016年10月于我院就诊的120例冠心病病人作为研究对象,分为试验组和对照组,各60例.对照组给予冠心病常规治疗,如阿司匹林、美托洛尔;试验组在对照组基础上给予虎杖苷治疗.观察两组病人临床疗效,比较两组治疗前后心功能指标[心脏指数(CI)、心排血量(CO)、左室舒张末期内径(LVEDd)、左室射血分数(LVEF)],NF-κB,炎症因子[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)]变化.结果 试验组总有效率高于对照组(91.67％与76.67％,P ＜0.05).治疗后,两组CI、CO、LVEF较治疗前均明显升高(P＜0.05),LVEDd较治疗前明显降低(P＜0.05);治疗后,试验组CI、CO、LVEF水平显著高于对照组(P＜0.05),LVEDd显著低于对照组(P＜0.05).治疗后,两组NF-κB、MCP-1、TNF-α和IL-6水平较治疗前均明显降低(P＜0.05);且试验组显著低于对照组(P＜0.05).结论 虎杖苷治疗老年冠心病,可降低NF-κB和炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-6水平.
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肝舒健丸的质量标准研究
目的:建立肝舒健丸的质量标准.方法:用薄层色谱法(TLC)对人参/三七、虎杖、丹参、白花蛇舌草、当归进行定性鉴别;用高效液相色谱法(HPLC)测定虎杖中虎杖苷的含量.结果:薄层色谱图斑点清晰,阴性对照无干扰;虎杖苷的线性范围为0.038 ～0.38μg,r =0.9999,平均回收率99.1％,RSD为0.82％(n=6).结论:该方法专属性强,灵敏度高,重现性好,可有效地控制肝舒健丸的质量.
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复方虎杖颗粒质量控制方法研究
目的:对复方虎杖颗粒进行质量标准研究,建立该制剂的定性、定量检测方法.方法:采用薄层色谱法(TLC)对复方虎杖颗粒中主要药味虎杖、黄柏、茵陈、五味子进行定性分析;采用高效液相色谱法(HPLC)对方中君药虎杖中虎杖苷进行含量测定,色谱条件为色谱柱:Alliima C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水溶液(20:80),流速:1.0 mL·min-1,柱温:35℃,进样量20μL,检测波长306 nm.结果:TLC定性鉴别中,虎杖、黄柏、茵陈、五味子的薄层鉴别分别在对应位置斑点清晰,阴性无干扰,专属性强.HPLC含量测定中,虎杖苷在0.070 ～0.700 μg范围内,峰面积与进样量有良好的线性关系(r=0.999 5);平均加样回收率为99.90％(RSD=1.2％］n=6).结论:所建立的定性、定量方法操作简单、重复性好、专属性强,可用于复方虎杖颗粒的质量控制.
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虎杖苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响及其作用机制
目的:探讨虎杖苷(polydatin,PD)对于小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响及其作用机制.方法:培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞,添加不同剂量虎杖苷分别处理24、48 h,用MTT法检测细胞增殖;在诱导3T3-L1前脂肪细胞分化的过程中添加不同剂量虎杖苷处理48 h,继续培养6d后油红O染色观察脂肪细胞的分化程度;采用荧光定量PCR技术检测各组过氧化物酶体增殖物激活受体γy(PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBPα)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)和瘦素(Leptin)的mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)分析3T3-L1分化过程中虎杖苷对MCP-1蛋白分泌的影响.结果:PD显著促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,并呈现一定的时间、剂量依赖效应.与对照组相比,PD抑制3T3-L1细胞分化;低剂量PD(20 μmol·L-)导致脂肪细胞中分化相关基因PPARγmRNA表达水平下降,并且可以抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化过程中炎症相关因子MCP-1的mRNA表达和蛋白分泌.高剂量PD(100 μmol·L-1)对于PPARγy mRNA表达水平影响不明显,不过可以使3T3-L1细胞分化过程中MCP-1的mRNA表达和蛋白分泌水平升高.添加低剂量和高剂量的PD导致成熟脂肪细胞中Leptin mRNA表达水平升高.结论:PD可以促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,抑制前脂肪细胞分化,其机制可能是通过抑制PPARγ的表达.在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,PD通过抑制脂肪细胞中炎症相关因子MCP-1的表达及分泌,及增加Leptin基因表达,可能可以通过调控炎症状态影响肥胖.
关键词： 虎杖苷 脂肪细胞 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 单核细胞趋化因子-1 瘦素 -
虎杖苷对急性脊髓损伤大鼠氧化应激反应和炎症反应影响
目的 探讨虎杖苷对急性脊髓损伤大鼠氧化应激反应和炎症反应的影响.方法 将54只雄性Sprague-dawley大鼠随机分入3组,每组18只:假手术对照组(Sham组),仅行单纯T10椎板摘除;急性脊髓损伤组(SCI组),行单纯T10椎板摘除后,以改良Allen′s法制备大鼠急性脊髓损伤模型;虎杖苷治疗组(P组),同SCI组制备大鼠急性脊髓损伤模型后,于术后即刻和术后第1、3、5、7天给予大鼠腹腔注射虎杖苷(20 mg/kg).比较3组大鼠术后第1、3、7、14天的BBB运动功能评分和斜板实验评分;术后第7天,行苏木素-伊红(HE)染色,观察3组大鼠术后脊髓形态学改变;术后第7天,Western blot法检测3组大鼠脊髓沉默调节蛋白1(SIRT1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平.结果 术后第1、3、7、14天,SCI组的BBB运动功能评分和斜板实验评分均显著低于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);与SCI组比较,P组的BBB运动功能评分和斜板实验评分均显著高于SCI组,差异有统计学意义(P<0.05).HE染色结果显示,与Sham组比较,SCI组大鼠脊髓中神经元数量和突起锐减,细胞核肿胀且核膜明显,可见明显间质水肿和中性粒细胞浸润;与SCI组比较,P组大鼠脊髓神经元数量和突起明显增多,间质水肿和中性粒细胞浸润明显减轻.与Sham组比较,SCI组大鼠脊髓SIRT1蛋白表达水平显著降低,iNOS、COX-2、IL-6及TNF-α蛋白表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与SCI组比较,P组大鼠脊髓SIRT1蛋白表达水平显著升高,iNOS、COX-2、IL-6及TNF-α蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 虎杖苷可改善急性脊髓损伤并促进运动功能恢复,其机制可能与抑制脊髓氧化应激反应和炎症反应有关.
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HPLC法测定除湿止痒软膏中虎杖苷含量
目的:建立除湿止痒软膏中虎杖苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为AgilentTC-C18柱(250 mm× 4.6 mm,5μm),以乙腈∶水(23∶77)为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长为306 nm.结果:虎杖苷在0.0384～0.192μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,S=0.0005m+0.0009(r=0.9999)；平均回收率为100.02％,RSD为1.96％,n=6.结论:该方法简便、可靠、准确,专属性强,可用于该制剂的质量控制.
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虎杖生品及不同炮制品中虎杖苷、白藜芦醇和大黄素含量
目的:测定虎杖生品与炮制品中虎杖苷、白藜芦醇和大黄素的含量.方法:采用HPLC法进行测定,色谱柱为Diamonsil C18(200 mm× 4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液,进行梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为306 nm.结果:不同炮制品中虎杖苷含量由高到低的顺序:盐制＞醋制＞酒制＞豆汁制,而白藜芦醇和大黄素的含量由高到低的顺序为:豆汁制＞酒制＞醋制＞盐制.结论:此方法简便,准确可靠,虎杖苷、白藜芦醇和大黄素的同时测定,可为虎杖药材的质量控制提供可靠的参考.不同的炮制方法对虎杖苷、白藜芦醇和大黄素的含量影响较大,其中豆汁制对3种成分的含量影响大,其虎杖苷含量明显降低,而白藜芦醇和大黄素则升高显著.
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正交试验法优选护肝颗粒水提工艺
目的:优选护肝颗粒水提工艺.方法:应用HPLC和正交试验,以护肝颗粒中活性成分虎杖苷提出量、全方收膏率的综合评分为考察指标,以提取时间、提取次数、加水量3个因素设计L9(34)正交试验优选护肝颗粒水提工艺.结果:佳水提工艺为加10倍量水回流提取2次,每次1h.结论:优选的提取工艺稳定可靠,可用于护肝颗粒的生产制备.
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清热利湿方及虎杖苷对SD大鼠肛旁创面肉芽组织血管通透性及Src、VE-cadherin细胞因子表达的动态影响
目的 研究清热利湿外洗方(虎杖、蒲公英、苦参、黄柏)及虎杖苷对SD大鼠肛旁创面肉芽组织血管通透性及Src、VE-cadherin细胞因子表达的动态影响.方法 以SD大鼠肛旁创面模型为研究对象,肉眼及电镜观察创面渗出、炎症及愈合情况;在术后第3、7、11天通过伊文氏蓝染色法观察创面毛细血管通透性情况;同时通过Elisa法检测创面肉芽组织Src、VE-cadherin含量.结果 肉眼观察发现与生理盐水相比,清热利湿外洗方与虎杖苷均能更有效控制创面炎性渗出,促进创面愈合.造模后第3天清热利湿方组与虎杖苷组伊文氏蓝渗出情况比较差异无统计学意义(P>0.05),但二者渗出均少于生理盐水组(P<0.05);第7,11天3组伊文氏蓝渗出比较差异无统计学意义(P>0.05).Elisa结果显示术后各阶段生理盐水组创面肉芽组织Src含量均高(P<0.05);第3、7天清热利湿方组与虎杖苷组比较差异无统计学意义(P>0.05),术后第11天清热利湿方组Src含量高于虎杖苷组(P<0.05).术后第3、7天各组肉芽组织中VE-cadherin浓度比较差异无统计学意义(P>0.05);术后第11天,生理盐水组VE-cadherin浓度低于其他2组(P<0.05),虎杖苷组VE-cadherin浓度低于清热利湿组(P<0.05).结轮 清热利湿方与虎杖苷可能通过抑制Src表达,调控Src/VE-cadherin信号通路,进而降低血管通透性,控制创面炎性渗出,促进创面愈合.
关键词： 清热利湿方 虎杖苷 创面愈合 血管通透性 Src/VE-cadherin信号通路 -
RP-HPLC测定调脂积颗粒中虎杖苷的含量
目的:建立调脂积颗粒中虎杖苷含量的测定方法.方法:采用RP-HPLC法,Lichrospher C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(23:77),检测波长为306nm.结果:虎杖苷在0.0472～0.2360μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9).平均回收率为99.09%,RSD=0.39%(n=6).结论:该方法简便,准确,重现性好,可用于调脂积颗粒的质量控制.
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不同产地虎杖中各成分含量的比较
目的:比较不同产地虎杖中各成分的含量.方法:采用梯度洗脱的高效液相色谱法测定虎杖苷、白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素及大黄素甲醚的含量,色谱柱为C18柱,检测波长为306nm,流速为1.0mL/min,柱温为30℃;采用显色法测定虎杖中总黄酮含量.结果虎杖苷进样量在0.1452 ～1.4520μg(r =0.9999)范围内、白藜芦醇在0.01525 ～0.1525μg(r =0.9998)、白藜芦醇苷在0.01253～0.6265μg(r =0.9998)、大黄素在0.02358 ～ 0.2358(r=0.9998)范围内、大黄素甲醚在0.004892～0.2446μg(r =0.9999)范围内线性关系良好,各成分平均回收率分别为98.2％(RSD=1.0％,n=3)、98.5％(RSD=2.0％,n=3)、99.0％(RSD=1.5％,n=3)、100.2％ (RSD=1.9％ ,n=3)、99.7％(RSD=1.0％,n=3);总黄酮的测定以芦丁为对照,测定波长500nm,在7.24 ～ 43.44g/L范围内线性关系良好(r =0.9999),平均回收率为98.5％ (RSD=1.5％,n=3).结论:不同产地虎杖中各成分的含量是有差别的.
