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新生期大鼠反复惊厥后皮层微管相关蛋白1轻链3的表达及干预
目的 研究新生期大鼠反复惊厥后皮层中微管相关蛋白1轻链3(LC-3)的表达及3甲基腺嘌呤(3-MA)对表达的调控作用.方法 生后6 d的SD大鼠随机分成3组,每组24只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作5次,每次间隔30min,连续9d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚;3-MA组惊厥前腹腔注射3-MA(总量2μl),同样方法 吸入三氟乙醚诱导惊厥,方法 同惊厥组.3组大鼠于后一次惊厥后分别按1.5、3、6、24 h后断头取脑,采用蛋白质免疫印迹技术(Western blot)分别检测3组大鼠大脑皮层中LC-3的表达.结果 惊厥组(1.5、3、6 h)LC-3的表达明显高于对照组(t=2.483,2.599,6.937,1.280均P＜0.05),3-MA组LC-3的表达明显低于惊厥组(t=2.243,7.775,5.887,4.245均P＜0.05).而24h惊厥组LC-3的表达并不明显高于对照组(t=1.280,P＞0.05).结论 惊厥后自噬途径被激活;3-MA参与了自噬途径的调控.
关键词： 惊厥 新生大鼠 微管相关蛋白1轻链3 自噬 3甲基腺嘌呤 -
LC3在早期糖尿病大鼠视网膜的表达和意义
目的 探讨微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)在糖尿病大鼠视网膜中的表达及其意义.方法 将24只雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(C组,n=8),糖尿病组(D组,n=8),非诺贝特干预组(F组,n=8).利用10 g/L链脲佐星(STZ)建立糖尿病大鼠模型.成模后给予药物干预,并在第4周末时取出大鼠眼球.将眼球置于中性甲醛固定后作免疫组织化学检测,分离视网膜抽提蛋白,采用免疫印迹技术检测视网膜组织中LC3蛋白的表达.采用TUNEL法测定4周时大鼠视网膜各层细胞凋亡情况.结果 成功构建糖尿病大鼠模型.苏木素-伊红(HE)染色显示3组大鼠视网膜各层细胞无明显改变.3组大鼠视网膜LC3蛋白均有表达,免疫组织化学和Western印迹法检测结果一致.糖尿病大鼠视网膜中有LC3蛋白的表达,且明显高于正常对照组.LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值,C组明显低于D组和F组(P＜0.05),F组高于D组(P＜0.05),说明非诺贝特干预后,F组LC3 Ⅰ向LC3Ⅱ的转化表达增加.免疫组织化学与Western印迹法结果一致.建模4周,仅D组见极少量细胞质呈绿色的凋亡阳性细胞.结论 糖尿病大鼠视网膜自噬增加,非诺贝特能增强自噬,且未见明显细胞凋亡.在糖尿病性视网膜病变中,自噬作为保护机制,早于细胞凋亡的发生.
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血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3的表达
目的 观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用.方法 大鼠随机分为假手术组(sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)和Wortmannin自噬抑制剂组(WM组),每组又随机分为模型制备后1、2、4、8、12周5个亚组.采用四血管阻断法制作血管性痴呆模型,Morris水迷宫法检测学习记忆能力,透射电镜观察自噬体的形成,蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值作为自噬活性的指标.结果 与假手术组相比,VD组大鼠平均逃避潜伏期延长(P＜0.05或0.01),穿越平台次数减少(P＜0.05或0.01);与VD组比较,WM组大鼠逃避潜伏期缩短(P＜0.05或0.01),穿越平台次数增加(P＜0.05或0.01).VD组大鼠海马CA1区1周时神经细胞核膜凹陷,胞核浓缩,线粒体肿胀,可见自噬体、溶酶体;4周时自噬体、溶酶体数量显著增多;12周时仍可见自噬体.WM组神经元损伤较VD组减轻,自噬体数量减少.VD组大鼠海马CA1区LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值在1周时升高,4周时达到高峰,8周时开始下降,12周时仍较高.WM组各时间点LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值较VD组低,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬活性被激活,可能参与了血管性痴呆的发生发展.
关键词： 血管性痴呆 海马 自噬 微管相关蛋白1轻链3 -
A型主动脉夹层组织Beclin1及微管相关蛋白1轻链3的表达及意义
目的 探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(LC3)在A型主动脉夹层组织中的表达及意义.方法 选取因A型主动脉夹层(AD)而于我院行手术治疗患者术中切除的主动脉壁组织标本20例作为AD组,以尸检者的正常胸主动脉(NA)壁组织标本10例作为对照.采用免疫组化染色及蛋白质印迹技术检测血管组织中Beclin1及LC3蛋白的定位及表达差异.结果 A型主动脉夹层主动脉壁组织中Beclin1及LC3蛋白主要定位表达于血管平滑肌细胞,且含量高于正常对照组织(P＜0.05).结论 A型主动脉夹层主动脉壁中血管平滑肌细胞的自噬活性明显增强,可能与疾病的发生发展相关.
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丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤中自噬潮的影响
目的 研究丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)期间自噬潮的影响及其机制. 方法 采用大鼠在体心肌I/R损伤模型,将90只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为5组(每组18只):①假手术组(Sham组),只穿线不结扎;②I/R组;③丙泊酚预处理组(P+I/R组);④Ⅰ型磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂A66预处理组(A+I/R组);⑤丙泊酚+A66预处理组(P+A+I/R组).采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心肌I/R模型.除Sham组外,其余各组均缺血30 min,再灌注120 min.缺血前15 min,P+I/R组通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h1;A+I/R组缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg;P+A+I/R组在缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg,缺血前15 min再通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h-1.模型制备后取心肌,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyhetrazolium chloride,TTC)法染色并计算梗死面积百分比,酶标法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydwgenase,LDH)活性,Western bolt法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ、P62蛋白的表达量,电子显微镜定性观察自噬体、自噬溶酶体的数量.结果 与I/R组比较,P+I/R组与P+A+I/R组梗死面积[(50.1±-3.9)％比(26.5±1.3)％、(42.6±1.9)％]显著减小(P＜0.05),血清LDH活性降低,LC3-Ⅱ表达水平降低,P62表达水平升高(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体明显减少.与P+I/R组比较,P+A+I/R组梗死面积[(26.5±1.3)％比(42.6±1.9)％]显著增加(P＜0.05),血清LDH活性升高,LC3-Ⅱ表达水平升高,P62表达水平降低(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体增加. 结论 丙泊酚预处理激活PI3K/蛋白激酶B(pmtein kinase B,Akt)通路,抑制I/R心肌中自噬潮进行,对大鼠心肌I/R损伤产生保护作用.
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丙泊酚对大鼠心肌缺血/再灌注损伤中微管相关蛋白1轻链3变化的影响
目的 观察丙泊酚(propofol,P)对大鼠急性心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light 3,LC3)的影响,探讨P心肌保护的可能机制. 方法 采用大鼠在体心肌I/R损伤模型,84只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为6组:假手术组(Sham组)、I/R组、脂肪乳组(Int组)、P低剂量组(P1组)、P中剂量组(P2组)、P高剂量组(P3组).除Sham组外,其余各组均缺血30 min,再灌注2h.Int、P1、P2、P3组分别依次经股静脉输注脂肪乳2.4 ml· kg-1·h-1、P6、12、24 mg·kg-1·h-1.连续记录功能学指标;2,3,5氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测心肌梗死面积,酶标仪法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性,Western blot分析LC3、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和蛋白激酶B(Akt)的表达水平. 结果 与I/R组比较,P1、P2、P3组心功能明显改善,心肌梗死面积[(33.8±2.7)％、(27.1±1.9)％和(36.2±3.2)％vs(50.3±4.2)％,P＜0.05]和血浆LDH水平都显著降低,心肌损伤减轻,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率[(0.97±0.03)、(0.76±0.08)和(0.93±0.04) vs (1.15±0.07),P＜0.05]减低,p-Akt表达[(1.69±0.43)、(2.51±0.15)和(1.95±0.41)vs (1.00±0.13),P＜0.05]增加,而Int组则差异无统计学意义(P＞0.05);与P1组比较,P2组心功能明显改善,心肌梗死面积[(27.1±1.9)％vs(33.8±2.7)％,P＜0.05]和血浆LDH水平均显著降低,心肌损伤更轻,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率[(0.76±0.08) vs(0.97±0.03),P＜0.05]减低,p-Akt表达[(2.51±0.15) vs (1.69±0.43),P＜0.05]增加,而P3组差异没有统计学意义(D0.05). 结论 P通过抑制LC3的表达,对心肌发挥保护作用,且可能与磷脂酰肌醇-3.激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3 kinase/Akt,PI3K/Akt)信号通路有关.
关键词： 丙泊酚 心肌 再灌注损伤 自噬 微管相关蛋白1轻链3 磷脂酰肌醇-3-激酶 -
自噬在血管性痴呆发病中的作用研究
目的 研究自噬在血管性痴呆(VD)发病中的作用及自噬抑制剂对其的影响.方法 180只SD大鼠随机分为假手术组、VD组和自噬抑制剂干预组(自噬抑制剂组),每组又分为术后1、2、4、8、12周亚组.采用四血管阻断法制作VD大鼠模型,自噬抑制剂组大鼠在术前1h给予渥曼青霉素0.5 mg/kg腹腔注射.用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力;免疫组化SP法检测大鼠海马CA1区自噬相关蛋白Bec-lin-1、Cathepsin B的表达,Western-blotting法检测自噬活性微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ与Ⅰ的比值.结果 与假手术组比较,VD组和自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显降低;海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值明显升高(P ＜0.05 ～0.01),并均以术后第4周为高.而自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显好于,海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值明显低于VD组(P ＜0.05～0.01).结论 VD大鼠的认知功能减退,海马自噬相关蛋白表达及自噬活性明显增高;自噬抑制剂对其有改善及抑制的效果.自噬在VD发病中起了重要的作用.
关键词： 血管性痴呆 自噬 自噬相关蛋白 微管相关蛋白1轻链3 自噬抑制剂 -
活化的自噬在2周糖尿病大鼠和糖尿病患者心肌缺血后适应中作用研究
目的:研究自噬在2周糖尿病大鼠和糖尿病患者心肌缺血后适应(IPost)中活性的变化及其作用.方法:采用2周糖尿病(D)大鼠和2周糖尿病胰岛素治疗(D+I)大鼠建立心肌缺血再灌注模型,计算心肌梗死面积,行电镜和Western blot检测自噬活性变化,运用自噬抑制剂(3-MA)研究自噬在IPost中的作用;用RT-PCR检测患者自噬相关基因表达水平.结果:IPost能升高大鼠心肌自噬活性,显著减少大鼠心肌梗死面积;3-MA抑制自噬活性后,大鼠心肌梗死面积显著升高(P<0.05),Bad表达显著升高,而Bcl-2表达明显降低(P<0.05).IPost升高患者术后自噬相关基因表达水平(P<0.05),48 h达到高峰.结论:IPost活化的自噬在2周D大鼠和2周D+I大鼠对心肌起保护作用;IPost升高患者自噬相关基因表达水平.
关键词： 自噬 心肌缺血后适应 糖尿病 微管相关蛋白1轻链3 Beclin1 -
小鼠脑出血后自噬相关蛋白表达及NF-κB信号通路对其调节作用的研究
目的 研究小鼠脑出血(ICH)后自噬是否被激活及NF-κB信号通路对ICH诱发的自噬相关蛋白表达的影响.方法 正常昆明小鼠纹状体注射胶原酶Ⅳ建立脑出血模型,或于脑出血模型建立前5 min,侧脑室给药SN50(0.1μg/μl)或生理盐水1 μl,随机分为脑出血组、SN50处理组和生理盐水处理组,同时设立空白对照组.每组分别于脑出血1 h,6 h,24 h,48 h,7 d后(5只/时间点)断头取脑,脑出血各组取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测Beclin-1、Bcl-2、LC3蛋白表达水平或激活情况,SN50处理组和生理盐水处理组各时间点取出血区及周边脑组织进行免疫印记实验检测LC3蛋白激活情况.结果 小鼠脑出血后出血区及出血周边脑组织Beclin-1蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调,以6-48 h时为显著(P＜0.05);Beclin-1/Bcl-2比值随时间变化逐渐增高,以6～48 h时为显著(P＜0.05);LC3被激活,随时间变化蛋白表达逐渐增加,48 h时达高峰,至7 d时仍较空白对照组有显著差异(P＜0.05).脑出血后,SN50处理组LC3蛋白激活高于生理盐水处理组,以6～48 h时为显著(P＜0.05).结论 脑出血后自噬被激活,这种激活的机制之一涉及到Beclin-1/Bcl-2比值的增加;NF-κB特异性抑制剂 SN50 促进了脑出血后自噬相关蛋白的上调表达.
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NSCLCCT影像学表现与癌组织Beclin1、LC3表达的关系
目的 研究自体吞噬相关基因Beclin 1与微管相关蛋白1轻链3(LC3)在NSCLC(NSCLC)组织中的表达,并分析其与NSCLC CT影像学表现的关系.方法 选择2016年4月-2017年12月我院收治的并确诊的NSCLC 90例为病例组,另以距NSCLC肿物边缘大于3 cm的肺组织,且经病理HE染色确诊为非肿瘤组织55例作为正常对照组,运用免疫组化(SP)法测定两组标本组织中的Beclin1、LC3表达情况,分析NSCLC患者CT征象,采用Spearman相关分析Beclin1与LC3表达的相关性.结果 病例组癌组织中的Bec-lin1、LC3阳性表达率均明显低于对照组癌旁正常组织(P<0.05).Beclin1、LC3表达与肿瘤大小、TNM分期、分化程度均相关(P<0.05),而与患者性别、年龄、病理类型、淋巴结转移均无关(P>0.05).病例组NSCLC患者癌组织中Beclin1、LC3表达均与有无深分叶征、棘突征、血管集束征、纵隔淋巴结肿大及胸膜外脂肪线是否消失相关(P<0.05),而与有无毛刺征、空洞征无关(P>0.05).Spearman相关分析显示,病例组NSCLC患者癌组织中Beclin1与LC3表达呈正相关(r=0.478,P=0.037).结论 Beclin1、LC3在NSCLC组织中呈低表达,且Beclin1、LC3表达水平与NSCLCCT影像学表现密切相关.运用CT影像学表现可以在一定程度上评估Beclin1、LC3在NSCLC组织中的表达水平,将NSCLC的CT影像学表现与自噬分子Beclin1、LC3结合研究,有益于此类患者临床诊断及预后前瞻性的评估.
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脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成
目的 构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程.方法 根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-C1 /LC3B重组质粒;脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264.7细胞株,荧光显微镜观察及Western blot鉴定LC3B-GFP融合蛋白表达;LPS刺激稳定转染的RAW264.7细胞株,激光共聚焦显微镜检测不同时间绿色荧光聚集体的分布.结果 成功构建真核表达质粒pEGFP-C1 /LC3B,并获得稳定表达LC3B-GFP融合蛋白的RAW264.7细胞株,荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光蛋白分布,Western blot鉴定表达LC3B-GFP融合蛋白,激光共聚焦结果 显示LPS刺激前融合蛋白呈弥散性分布在胞浆中,而LPS刺激后细胞内有明显绿色荧光聚集体形成并呈时间依赖性逐渐增加.结论 成功构建pEGFP-C1/LC3B,转染RAW264.7细胞可正确表达LC3B-GFP融合蛋白,LPS刺激后显示绿色荧光聚集体形成.
关键词： 巨噬细胞RAW264.7 微管相关蛋白1轻链3 绿色荧光蛋白 -
微管相关蛋白1轻链3在乳腺癌组织中的表达及意义
1 微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的发现自噬是普遍存在于真核细胞的一种生物现象,是细胞在某些刺激因素(如DNA损伤、营养缺乏和缺氧等)作用下,细胞内膜性结构包绕损伤的蛋白或细胞器,并通过与溶酶体融合降解损伤的蛋白或细胞器的过程,降解产物可被循环利用[1].过去十年的相关研究表明,细胞的自噬存在于肿瘤发展的不同阶段,以及在肿瘤细胞对抗抗癌治疗过程中[2-4].然而自噬在癌症中的作用仍然争议不断.一方面,它参与基因组的完整性和稳定性的保护,起到肿瘤抑制基因的作用[5];另一方面,一些研究已经表明,自噬造成的细胞成分降解,可以提供ATP和癌症细胞的分子合成所需的氨基酸、核苷酸和脂质[6].因此,自噬可以抑制或者促进细胞存活,决定这2个相反过程的阈值取决于细胞降解过程的程度[7],以及许多其他的因素,例如细胞的遗传物质,可以降低细胞存活能力的刺激性质及强度[8].
关键词： 微管相关蛋白1轻链3 乳腺肿瘤 -
急性胰腺炎患者血清微管相关蛋白1轻链3水平变化及意义
目的 观察急性胰腺炎(AP)患者血清微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)水平变化,探讨其临床意义.方法 选择轻型AP患者(MAP组)31例和重症AP患者(SAP组)31例,于发病24 h内抽取血清样本,另选择31例健康者作为对照组.检测血清淀粉酶(Ams)、MAP1-LC3水平,对AP患者的腹部CT进行评分.结果 与对照组比较,MAP组、SAP组血清Ams、MAP1-LC3水平及腹部CT评分均升高(P均<0.05),其中SAP组较MAP组上述指标升高(P均<0.05);血清MAP1-LC3水平与腹部CT评分呈正相关(r=0.977,P<0.01),与Ams呈正相关.结论 AP患者发病早期血清MAP1-LC3水平明显升高,并与AP的病情严重程度呈正相关关系;血清MAP1-LC3可能是早期预测AP严重程度的有效标记物.
关键词： 急性胰腺炎 自噬 微管相关蛋白1轻链3 -
葛根素对MC3T3-E1成骨前体细胞增殖能力的影响及其机制
目的 探讨葛根素对MC3T3-E1成骨前体细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制.方法 取对数生长期的MC3T3-E1细胞,加入不同浓度葛根素作用不同时间,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;结果显示,葛根素浓度为0.1 μmol/L、作用时间为48 h时细胞增殖能力强(以下实验采用葛根素浓度为0.1 μmol/L、作用时间为48 h).将MC3T3-E1细胞随机分为空白对照组、葛根素组和雌激素组,分别加入α-MEM完全培养基、0.1 μmol/L葛根素和0.01 μmol/L雌激素.作用48 h,电镜下观察细胞自噬情况,Western blotting法检测磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(p-AMPK)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3Ⅰ表达.观察干扰AMPK对葛根素作用后MC3T3-E1细胞自噬及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达的影响.结果 空白对照组细胞器、细胞核和染色体形态正常;葛根素组和雌激素组细胞质内可见较多环状结构物质,该物质具有自噬体特异性的双层膜结构.葛根素组、雌激素组p-AMPK及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显高于空白对照组,雌激素组均明显高于葛根素组(P均<0.01).干扰AMPK表达可减轻葛根素介导的MC3T3-E1细胞自噬程度,并降低细胞 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达(P均 <0.01).结论 葛根素可增强MC3T3-E1细胞增殖能力;激活AMPK/LC3信号通路介导的自噬水平是其可能的机制之一.
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维拉帕米对脓毒症大鼠心肌细胞自噬水平的影响
目的 观察钙通道阻滞剂维拉帕米对脓毒症大鼠心肌细胞自噬水平的影响.方法 将54只大鼠随机分为对照组、模型组、干预组,每组18只.模型组和干预组采用盲肠结扎穿孔术制作脓毒症模型,对照组取出盲肠不结扎穿孔仍放回腹腔.三组术后均给予生理盐水腹腔注射,干预组另给予盐酸维拉帕米注射液5 mg/kg腹腔注射.于术后6、12、24h各组分别处死6只大鼠,取心肌组织,采用HE染色法观察组织形态学变化;取心脏血,离心分离血清,酶联免疫吸附法测定肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB);Western blotting法、qRT-PCR法分别检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和mRNA表达.结果 模型组、干预组心肌组织HE染色见心肌细胞排列紊乱、明显肥大;模型组、干预组CK-MB、cTnT较对照组升高;模型组LC3、Beclin-1表达高于对照组,且随时间延长逐渐增高,Bcl-2表达低于对照组,且随时间延长逐渐降低;干预组12、24 h时LC3表达低于模型组,6、12、24h时Beclin-1表达低于模型组,6、12、24h时BCL-2表达高于模型组(P均＜0.05).结论 脓毒症可有效激活心肌自噬,自噬水平在24h内呈上升趋势;维拉帕米干预可抑制自噬,保护心肌组织.
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饥饿对大鼠大脑皮质自噬相关蛋白 LC3、Beclin 1表达的影响
目的：观察饥饿对大鼠大脑皮质微管相关蛋白1轻链3（ LC3）、Beclin 1自噬相关蛋白表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为3组，对照组10只、短期组30只（饥饿1、2、3 d各10只）、长期组30只（饥饿5、7、9 d各10只）。对照组正常饮食，短期组和长期组均采取全饥饿处理。对照组于饥饿起点、短期组与长期组分别于相应饥饿终点断头取脑，采用Western blot法检测大脑皮质的LC3与Beclin 1。结果短期组饥饿3 d大脑皮质LC3与Beclin 1较对照组表达上调（P＜0．05、0．01），长期组较对照组及短期组大脑皮质LC3与Beclin 1表达上调（P均＜0．01）。短期组饥饿1 d与2 d时大脑皮质LC3、Beclin 1表达比较，P均＞0．05；长期组饥饿7 d与9 d时大脑皮质Beclin 1表达比较，P＞0．05。结论短期饥饿2 d内大鼠大脑皮质LC3、Beclin 1表达未发生明显改变，随饥饿时间延长，大鼠大脑皮质LC3与Beclin 1表达上调。
关键词： 自噬 饥饿 大脑皮质 微管相关蛋白1轻链3 自噬相关蛋白 -
MAP1LC3在宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢上皮癌、乳腺癌发病中作用的研究进展
MAP1LC3是一种自噬体标记蛋白,存在Ⅰ型和Ⅱ型两种形式,细胞自噬未发生时以Ⅰ型MAP1LC3形式存在,细胞自噬发生时以Ⅱ型MAP1LC3形式存在.MAP1LC3参与细胞自噬,并通过细胞自噬发挥肿瘤促进和抑制两种作用.MAP1LC3在宫颈癌组织中呈低表达,与肿瘤复发率呈负相关,其表达降低预示宫颈癌患者预后不良.MAP1LC3在子宫内膜癌组织中低表达,并与肿瘤进展及恶性程度有关,部分化疗药物可促使Ⅱ型MAP1LC3积累,通过调节细胞自噬而促进肿瘤生长和耐药.MAP1LC3在卵巢上皮癌组织中的表达变化及意义存在争议,可能与检测方法不一致、样本量不同、卵巢上皮癌组织选取及实验过程中不可避免的系统误差等多种因素有关.MAP1LC3在乳腺癌组织中高表达,且乳腺癌分级越高其阳性表达率越高.MAP1LC3在上述不同肿瘤组织中表达过高或过低均可影响细胞自噬水平,并对肿瘤的发生、发展及化疗耐药产生影响.
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发育期大鼠癫痫脑损伤中自噬相关基因的变化
目的 探讨Beclin-1、P62/SQSTM1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和unc-51样自噬活化激酶1 (ULK-1)等自噬相关分子mRNA水平在发育期大鼠癫痫脑损伤前后的变化.方法 21日龄雄性Sprague Daw-ley(SD)大鼠72只,按随机数字表法随机分为对照组和癫痫组.每组按时间点不同(3 h、6 h、12 h和48 h)随机分4个亚组,每个亚组9只大鼠.癫痫组采用腹腔注射卡因酸(12 mg/kg)诱导癫痫发作建立癫痫动物模型,对照组予等量9 g/L盐水腹腔注射.2组大鼠分别于注射卡因酸3 h、6 h、12 h和48 h后,予水合氯醛麻醉,处死并取出脑组织.Nissl染色法检测大鼠大脑皮层神经元损伤情况;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测癫痫大鼠大脑神经元凋亡情况;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测Beclin-1、P62/SQSTM1、LC3、ULK-1 mRNA水平.结果 Nissl染色显示:随时间推移,癫痫组大鼠大脑皮层神经元尼氏体颜色变浅,结构紊乱;癫痫48 h组Nissl染色阳性细胞数[(82 ± 8)个]明显少于对照组[(122 ± 8)个],差异有统计学意义(F＝3. 768,P＝0. 01).TUNEL方法显示癫痫48 h组大鼠大脑皮层凋亡神经元[(13 ± 7)个]明显高于对照组[(2 ± 1)个],差异有统计学意义(t ＝ -3. 821,P ＝0. 003).qPCR显示 Beclin-1、P62/SQSTM1、LC3、ULK-1 mRNA水平在癫痫组12 h组(1. 70 ± 0. 75、1. 75 ± 0. 77、1. 52 ± 0. 43、7. 48 ± 6. 12)和癫痫48 h组(1. 63 ± 0. 43、1. 48 ± 0. 74、1. 74 ± 0. 55、7. 69 ± 5. 65)均明显高于对照组(1. 00、1. 00、1. 00、1. 00),差异均有统计学意义(F＝2. 820、3. 452、5. 811、5. 002,均P＜0. 05).结论 自噬的活化先于凋亡发生,自噬相关分子可能参与发育期大鼠癫痫所致脑损伤的发病过程.
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肠道病毒71型诱导人恶性胶质瘤细胞U251自噬的研究
目的 初步研究肠道病毒71型(EV71)诱导人恶性胶质瘤细胞U251的自噬现象及其对微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的影响.方法 RPMI 1640培养U251细胞24h后随机分为实验组和对照组,实验组按感染复数(MOI)值为1加入EV71,EV71感染12h后采用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色标志细胞自噬泡,荧光显微镜观察自噬泡的形成.EV71感染24 h后细胞免疫荧光检测LC3,荧光显微镜观察LC3在U251细胞内的分布.EV71感染2、4、8、12、24、48 h采用Western blot检测LC3-I和LC3-Ⅱ蛋白的表达,并对LC3-Ⅱ蛋白进行半定量分析.结果 自噬泡经过MDC染色后,荧光显微镜观察发现自噬泡呈点状结构.与对照组比较,实验组在EV71感染12 h,U251细胞内自噬泡明显增多；EV71感染24 h,U251细胞皱缩、变小、形态不规则,LC3蛋白表达明显增多,主要分布在细胞质和细胞核周围；EV71感染4h后,LC3-Ⅱ蛋白表达开始增加,明显高于对照组(P＜0.01).结论 EV71能有效诱导U251细胞自噬,发挥其溶瘤作用.
关键词： 自噬 微管相关蛋白1轻链3 肠道病毒71型 人恶性胶质瘤 U251细胞 -
喉癌组织LC3转录水平的表达及其意义
目的:探讨喉癌中微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA的表达及其意义.方法:RT-PCR法检测41例喉癌组织,癌旁组织及11例声带息肉组织中LC3 mRNA的表达.结果:喉癌组织中LC3 mRNA表达量明显低于癌旁及声带息肉组织,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:LC3基因的表达水平下调与喉癌的发生密切相关,可能在喉癌的发生、发展中起重要作用.
关键词： 喉肿瘤 鳞状细胞癌 自噬 微管相关蛋白1轻链3
