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ASB及UTI患者尿液中分离的大肠埃希菌系统分群、毒力基因及耐药性分析
目的 对无症状菌尿(ASB)及症状性尿路感染(UTI)患者尿液中分离的大肠埃希菌进行系统分群、毒力基因及耐药性检测.方法 收集该院2014年5月至2016年3月从尿路感染患者尿液中分离的大肠埃希菌共145株,其中ASB组65株,UTI组80株.利用多重聚合酶链反应(PCR)对其进行系统分群及10种毒力基因表达检测;采用纸片扩散(K-B)法对其进行耐药性检测.结果 A SB组中,A、B1、B2、D群分别占10.77％ 、38.47％ 、43.07％ 、7.69％.U T I组中,A、B1、B2、D群分别占12.50％ 、10.00％ 、62.50％ 、15.00％,两组系统分群结果差异有统计学意义(P<0.05).ASB组黏附相关基因afa和sfa的表达率高于UTI组(P<0.05).UTI组细胞毒性相关基因细胞毒性坏死因子1(cnf1)和溶血素(hlyA),铁摄取相关基因fyuA和iutA的表达率高于ASB组(P<0.05).ASB组和UTI组对18种抗菌药物的耐药率及产超广谱β-内酰胺酶菌株阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论 ASB和UTI不同的系统分群特征,可能与其表现出不同的致病能力有关.ASB菌株毒力较UTI低,降低了其急性致病能力,但具有更高表达率的黏附相关基因,这可能有助于细菌实现持续定植.尿路感染大肠埃希菌的高耐药率必须引起临床重视.
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91株金黄色葡萄球菌毒力基因和耐药基因分布研究
目的 探讨91株金黄色葡萄球菌菌株的毒力基因和耐药基因分布.方法 采用PCR方法检测金黄色葡萄球菌30个毒力基因和13个耐药基因.结果 毒力基因除肠毒素基因see和sep,其他28个均可在91株金黄色葡萄球菌菌株中检测到,且某些毒力基因如溶血素基因hla、hld、hlg-v和杀白细胞毒素基因lukED的阳性率较高(>80%);耐药基因除氨基糖苷类耐药基因ant4′,其他12个均可在91株金黄色葡萄球菌菌株中检测到,特别是青霉素耐药基因blaZ,阳性率达100%.结论 金黄色葡萄球菌流行株均携带多个毒力基因和耐药基因.
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儿童肠道感染中致泻性大肠埃希菌的检测
目的了解儿童肠道感染中致泻性大肠埃希菌的感染情况。方法对95份腹泻患儿粪标本中分离出的大肠埃希菌，用荧光聚合酶链反应（PCR）的方法检测毒力基因，鉴定致泻性大肠埃希菌。结果检测出15株阳性菌株，阳性率为15．8％，其中肠聚集性大肠埃希菌（EAEC）6株、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）4株、弥散聚集性大肠埃希菌（DAEC）4株和肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）1株。结论致泻性大肠埃希菌是引起儿童腹泻的主要致病菌，临床实验室应加强对致泻性大肠埃希菌的检测。
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医院获得性尿路感染肠球菌耐药性与毒力基因型相关研究
目的：研究医院获得性尿路感染肠球菌毒力因子和耐药分布，以及两者间的关系，为临床合理使用抗菌药物和控制感染提供依据。方法分离出临床尿路感染标本中74株肠球菌进行菌株鉴定，采用纸片扩散法（K‐B法）做药物敏感试验；PCR检测cylL‐L、cylL‐S、cylL‐A、esp、acm、gelE、asa‐I、cpd、ace毒力基因。结果74株肠球菌中有粪肠球菌45株（60．8％），屎肠球菌29株（39．2％）。屎肠球菌对青霉素G、氨苄西林、环丙沙星耐药率分别为89．66％、89．66％、79．31％，明显高于粪肠球菌。粪肠球菌对庆大霉素120、四环素耐药率分别为46．67％、53．33％，略高于屎肠球菌。cylL‐L、cylL‐S、cylL‐A、esp、acm、gelE、asa‐I、cpd、ace 毒力基因的阳性率分别为24．32％、44．59％、22．97％、44．59％、60．81％、22．97％、25．67％、22．97％、9．46％。屎肠球菌毒力基因分布与耐药性间差异有统计学意义（P＜0．05）。结论粪肠球菌是医院获得性尿路感染的主要肠球菌，屎肠球菌表现为多重耐药，粪肠球菌携带更多的毒力因子，屎肠球菌毒力基因数与耐药性之间密切相关，临床应注意抗菌药物的合理应用，防止肠球菌耐药性的产生和传播。
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青浦区水产品中副溶血性弧菌污染状况与分子分型特征
目的：了解副溶血性弧菌在青浦区部分市售水产品中的污染情况及分子分型。方法于不同季度，分别从酒店、农贸市场和大型超市采取鱼类、虾和贝类等标本，参照 GB 4789．7，采用稀释培养计数（MPN）法进行副溶血性弧菌定量检测，并完成分离菌株毒力基因和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型的检测。结果144份水产品中共检出副溶血性弧菌68份，阳性率为47．00％，虾类、贝类和鱼类中副溶血性弧菌几何平均数分别为465．2、291．0、146．1 MPN ／g ；所检出菌株均不携带 TDH 和 TRH 2种毒力基因，68株副溶血性弧菌 PFGE 共分为63种带型，呈现明显多态性。结论青浦区市售水产品中副溶血性弧菌污染较严重，应采取有效措施防止由水产品引起的副溶血性弧菌食源性疾病，该地区菌株间遗传同源关系较远。
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临床肠球菌属耐药特点和毒力基因的研究进展
近年来，肠球菌引起的临床各系统感染正呈现逐年上升的趋势，已成为医院感染的重要致病菌，可引起肺炎、心内膜炎、菌血症、尿路感染等多系统感染，尤其在免疫力低下及高龄患者中发病率较高。美国已发生高耐药肠球菌（包括耐万古霉素屎肠球菌）的暴发流行，欧洲在近10年来肠球菌的感染率也在逐年上升。在我国，根据上海地区的耐药性检测报告［1］，临床分离的革兰阳性菌中，肠球菌属已成为第2位高发的致病菌。近年来，肠球菌对抗菌药物的耐药性增加，产β-内酰胺酶的肠球菌及耐高浓度氨基糖苷类肠球菌的比例增加，特别是出现耐万古霉素肠球菌，给临床治疗带来困难。
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肺炎克雷伯菌分离株的耐药性与毒力基因分布及相互关系研究
目的：研究肺炎克雷伯菌的耐药性与毒力基因的分布及二者间的关系，为临床合理使用抗菌药物和控制感染提供依据。方法分离出172株肺炎克雷伯菌，采用纸片扩散法（K‐B法）做药物敏感试验；聚合酶链反应（PCR）检测 rmpA、aer‐1、aer‐2、magA、gyrB‐2、ybt、wcaG毒力基因。结果172株肺炎克雷伯菌分离株对头孢菌素类头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻肟与头孢曲松的耐药率分别为38．4％、34．9％、33．1％、32．0％。 rmpA、aer‐1、aer‐2、magA、gyrB‐2、ybt、wcaG 毒力基因的阳性率分别为49．4％、55．8％、42．4％、16．3％、51．7％、53．5％、20．9％。肺炎克雷伯菌毒力基因分布与耐药性呈负相关，差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论肺炎克雷伯菌毒力基因数与耐药性密切相关，临床应注意抗菌药物的合理应用，防止肺炎克雷伯菌耐药性的产生和传播。
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宁夏地区小肠结肠炎耶尔氏森菌监测分析
目的:探讨宁夏地区小肠结肠炎耶尔森氏菌感染性腹泻及其合并症的流行状况、宿主分布情况、流行菌株的型别和毒力特征.方法:采集动物和腹泻患者粪便标本以及鼠疫自然疫源地野生鼠盲肠内容物进行小肠结肠炎耶尔森氏菌增菌培养,并对阳性菌株进行血清学分型和毒力基因检测.结果:样本分离出56株小肠结肠炎耶尔森氏菌,猪的带菌率高,总的阳性率9.4％,其余样本未分离到菌株.所分离菌株的血清型主要以O:3、O:5、O:8、O:9为主,其中致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌血清型以O:3为主,O:9次之,O:5、O:8为不致病或弱致病性菌株.对临床分离的56株菌进行ail、YstA、virF、YadA和YstB 5种毒力基因检测,其中0:3、0:9血清型菌株前4种毒力基因均为阳性.结论:本省小肠结肠炎耶尔森氏菌流行以0:3血清型为主,猪为主要宿主.其中O:3、O:9血清型携带4种毒力基因,为致病菌株.
关键词： 小肠结肠炎耶尔森氏菌 血清型 毒力基因 -
陕西省首株福氏4c志贺菌的发现及其耐药性和毒力基因型分析
[目的]报道陕西省首株福氏4c志贺菌的发现,并分析其耐药性和毒力基园型.[方法]生化反应、血清凝集试验、噬菌体裂解试验鉴定菌株,抗生素敏感试验采用生物梅里埃GNS药敏卡,PCR法检测ipalH、shet1、ial、sen基因.[结果]该株细菌生化反应及噬菌体裂解试验菌结果均为志贺菌,血清凝集反应特殊,确定为福氏4c志贺菌;对阿莫西林、培氟沙星、替卡西林等少数抗生素耐药,对复方新诺明等敏感;该菌4种毒力基因都阳性,属Ⅰ型福氏4c志贺菌.[结论]福氏4c志贺菌在陕西首次发现,属毒力较强的Ⅰ型福氏4c志贺菌,目前尚没有形成多重耐药.应加强对这类菌株的监测,以防其继续发生甚至流行.
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应用多重PCR技术检测120株蜡样芽胞杆菌毒力基因
目的 应用多重PCR技术对蜡样芽孢杆菌毒力基因进行快速检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据.方法 根据蜡样芽胞杆菌(B.cereus)的cer、hblA、hblC、nheA、nheB、cytK和bceT基因设计并合成引物,优化反应条件,应用多重PCR技术检测120株B.cereus毒力基因序列.结果 多重PCR检测结果非常理想,不同基因扩增条带清晰可辨,蜡样芽胞杆菌呕吐毒素基因cer携带率为96.66％(116/120),细胞毒素cytK基因携带率为42.37％(50/118),肠毒素bceT基因携带率为38.33％ (46/120),非溶血性基因nheA携带率为78.33％(94/120),非溶血性基因nheB携带率为83.05％(98/118),溶血性基因hblA携带率为55.0％(66/120),溶血性hblC基因携带率为27.96％(33/118).结论 多重PCR结果很好,7对引物所扩增出的DNA条带区分明显,电泳条带清晰,特异性强,敏感度高.本实验对120株蜡样芽胞杆菌7种毒力基因进行检测,为研究蜡样芽胞杆菌致病性提供有力依据.
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2011-2015年河南省细菌性痢疾病原学与耐药监测分析
目的 检测分析2011-2015年分离自河南省5家腹泻病监测哨点医院病人粪便中的516株志贺菌血清型别、毒力基因及耐药表型.方法 收集腹泻病人粪便,SS平板37℃分离培养18～ 24 h,疑似菌落进行API20E系统生化鉴定;阳性菌株进行志贺菌血清分型(玻片凝集法);多重PCR检测4种毒力基因(SHET-1B/SHET-2/ial/ipaH)并进行12种抗生素的药敏试验(K-B法,CLSI2015).结果 516株志贺菌分离自19 217份粪便,检出率2.7％;阳性病例男女比例1.4∶1(301/215),以低龄儿童和青少年为主;分离时间多集中于每年的6-10月,具有较典型的夏秋季特征.菌株分为福氏(335株)和宋内(181株)2个群共9个血清型;394株志贺菌携带4种毒力基因,1种组合型别,122株携带3种毒力基因,3种组合型别.516株志贺菌对12种抗生素具有不同的耐药率,多重耐药菌株(R＞3)为511株(99.1％),耐9种以上抗生素的菌株呈逐年上升趋势.结论 河南省自监测系统中分离的志贺菌以福氏(B群)和宋内(D群)血清群为主,包含多种血清型别;菌株携带有不同的毒力基因并存在较为严重的耐药和多重耐药问题.
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江西省2006-2008年人间霍乱弧菌致病力及药敏检测
目的 掌握江西省人群中霍乱弧菌菌型变迁、毒力基因、耐药情况,为霍乱防治提供科学依据.方法 采用血清学分型法对人群分离的霍乱弧菌进行分型,同时以主要毒力基因ctx为引物对分离的霍乱弧菌进行PCR扩增,并采用改良K-B纸片法对部分菌株进行10种抗生素的药物敏感试验.结果 2006-2008年期间,共从人群中分离到霍乱菌株139株(O139群136株,O1群小川型3株),其中从患者中分离到O139群41株、O1群小川型1株;从密切接触者中分离到O139群95株、O1群小川型2株.毒力实验结果显示O139群中除1株外,其余的均扩增出与阳性对照一致的毒力基因(ctx)条带,而O1群小川型均未扩增出毒力基因(ctx)条带,与阴性对照一致.药敏结果显示:O139群和O1群小川型霍乱弧菌均对利福平、丁胺卡那、氟哌酸、环丙沙星、头孢噻肟100％敏感,耐药性在90％以上的药物是四环素、强力霉素.结论 江西省2006-2008年间人群中分离到的霍乱弧菌中,O139群与O1群小川型并存,O139群为优势菌;O139群菌株绝大多数为产毒株,小川型均为非产毒株.药敏结果供霍乱治疗和必要时的预防药物选择提供依据.
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2009-2012年江西省外环境霍乱弧菌致病力及药敏检测
目的 掌握江西省外环境中霍乱弧菌菌型分布、毒力基因、耐药现状,为霍乱防治提供科学依据.方法 采用血清学分型法对外环境中分离的霍乱弧菌进行分型,同时以主要毒力基因ctx为引物对检索的霍乱弧菌进行PCR扩增,并应用K-B纸片法对部分菌株进行10种抗生素的药物敏感试验.结果 2009-2012年期间,共从外环境中分离到霍乱菌株156株.毒力实验结果显示37株O139群中15株扩增出与阳性对照一致的毒力基因(ctx)条带,而119株O1群除2株小川型外,其余均未扩增出毒力基因(ctx)条带,与阴性对照一致.药敏结果显示:O139群和O1群对丁胺卡那霉素、诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟90％以上敏感.结论 江西省2009-2012年间外环境中分离到的霍乱弧菌中,O139群与O1群并存,O1群为优势菌;水产品中O139群菌株绝大多数为产毒株,而O1群菌株绝大多数为非产毒株.应重点加强水产品的霍乱监测.药敏结果供霍乱治疗和必要时的预防药物选择提供依据.
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西安市O157出血性大肠杆菌监测研究
目的 为了解西安市O157大肠杆菌在腹泻病人中的感染、家禽家畜带菌以及食品污染情况,分析对人群可能造成的威胁.方法 在某市选择7家监测医院、6个区县和多个集贸市场,采集腹泻病人、动物粪便和食品标本,进行O157大肠杆菌监测,应用PCR技术对分离菌株进行毒力基因检测分析.结果 O157大肠杆菌在腹泻病人粪便中分离出1株,阳性检出率为0.16％；从动物粪便中分离出8株,阳性检出率0.80％,其中奶牛带菌率高,达4.29％；食品标本中未分离出阳性菌.全部检出菌均含有O157外膜蛋白O157 rfbe基因,阳性率100％.1株阳性菌4种毒力基因均为阴性,一株携带stx2毒力基因,其余7株均携带有stx2、eaeA、hlyA毒力基因.结论 西安市腹泻病人及宿主动物中存在O157大肠杆菌感染,有造成O157流行或局部暴发流行的潜在威胁,应进一步加强O157监测工作.
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市售甲鱼带菌引发霍乱疫情病原学研究
[目的]弄清O139群霍乱弧菌在我市引起突发公共卫生事件的原因及传播来源,找到防控措施.[方法]用碱性胨水对所采样品进行增菌,四号琼脂平板作病原菌分离,Cpi20E作生化学鉴定,O139诊断血清作菌群诊断,同时用PCR作菌株毒力测定,引物是CtxA,用KB法作药物敏感试验.[结果]我市O139群霍乱疫情共作样本215件,检出42株病原性弧菌,并从相关食物链甲鱼中检出3株,生化鉴定率为99.9%,从病人及甲鱼中捡出的O139群霍乱弧菌生化反应一致,毒力基因相同.对青霉素等数10种抗生素耐药、先锋类及复哌酸敏感.[结论]我市O139群霍乱疫情由外地输入甲鱼带染所致,病人及甲鱼中检出O139群霍乱弧菌具有同源性.
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广州市58株单增李斯特菌菌株特征分析
目的 了解广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况.方法 对广州地区365份动物源性食品中的单增李斯特菌分离鉴定,并进行血清分型,毒力基因鉴定和肠道细菌基因间重复序列扩增(Emc-PCR).结果 单增李斯特菌阳性率为15.89％ (58/365),其中生畜肉类检出率高,为25.38％ (33/130);血清型分析将58株单增李斯特菌分为4种血清型,分别为1/2b、1/2a、1/2c和4b,优势的血清型为1/2b(44.80％)和1/2a(32.80％);10株缺失毒力基因actA;ERIC-PCR扩增出9～18条100～8000bp之间的条带,将58株单增李斯特菌在相似系数为0.8处分为6个群19个类型.结论 广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株污染严重,优势血清型是与人或动物感染有关的致病血清型(1/2b和1/2a),大部分毒力基因均存在,ERIC-PCR结果显示分子型别呈多样性,应加强防控.
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2014-2015年烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株的生物学特征及分子分型研究
目的 了解烟台市副溶血性弧菌临床分离株的耐药特性、毒力基因分布情况以及分子分型特征.方法 对2014-2015年的副溶血性弧菌临床分离菌株按照美国临床实验室标准化协会(CLSI) 推荐的微量肉汤稀释法进行14种抗生素的药敏试验;通过实时荧光PCR检测tlh、trh、tdh、orf8 4种毒力基因;采用脉冲场凝胶电泳对菌株基因组DNA进行分子分型.结果 (1) 20株副溶血性弧菌仅对头孢唑啉耐药或处于耐受敏感之间,耐药率为5.0％,对其他13种抗生素100.0％敏感.(2) 20株副溶血性弧菌均携带特异性基因tlh,其他3种毒力基因trh、tdh、orf8的阳性率分别为30.0％(6/20) 、100.0％(20/20) 、65.0％(13/20),毒力基因组成以orf8-tdh型为主,占60.0％(12/20).(3) 20株菌被限制性内切酶NotⅠ切出6个PFGE types(PT),带型相似度60.7％～100.0％,根据PT相似系数大于80.0％的菌株,可以分成A群和B群2个聚类群.结论 烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株耐药较轻,毒力基因tdh、orf8的携带率较高,PFGE带型聚类群内相似度较高且存在优势明显的分子型别.
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贵州省死亡病例1型猪链球菌的分离及分子生物学特征分析
目的 对来自贵州省1例疑似人感染猪链球菌患者的血液标本进行细菌分离鉴定,了解该菌株的分子生物学特征,为病例的快速确诊提供病原学依据.方法 采用血培养法对疑似感染猪链球菌患者的血液进行细菌分离培养,对分离菌株采用细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增和DNA序列测定,将测序结果通过GenBank数据库的BLAST程序进行在线比对,再用猪链球菌种特异的16S rRNA基因进行猪链球菌种的鉴定,进一步分别采用PCR检测常见强致病性血清型1、2、7和9型特异的cps lj、cps 2j、cps 7h和cps9h基因以鉴定其血清型,并对菌株毒力基因gapdh、mrp 、sly和ef进行检测.结果 血培养分离出1株链球菌可疑菌株,序列比对结果显示该分离菌株16S rRNA基因与猪链球菌的同源性高,进一步的猪链球菌特异性PCR检测显示分离菌株16S rRNA基因为阳性,血清型特异PCR检测结果显示cps lj基因为阳性,而cps 2j、cps 7h和cps 9h基因为阴性,毒力基因检测结果显示分离菌株gapdh,sly和ef毒力基因为阳性,而mrp为阴性.结论 本次从疑似感染猪链球菌死亡病例分离的菌株为猪链球菌1型,其毒力特征为gapdh、sly和ef基因阳性,mrp基因阴性,该病例为1型猪链球菌感染所致,且菌株毒力较强.
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三亚地区副溶血性弧菌血清分型、毒力基因及药敏分析
目的 了解三亚地区副溶血性弧菌食物中毒分离株和海产品分离株的血清分型、毒力基因及药敏情况.方法 依照G B4789.7-2008方法进行血清分型、采用荧光定量PCR法检测毒力基因、K-B琼脂纸片扩散法进行药敏实验.结果 100菌株分属10个群14个血清型,以O4群为主,占32％,其次O2群(19％).40株中毒患者分离株以O4群(62.5％)为主,主要血清型是O4:K8;60株海产品分离株以O2群(31.7％)为主.100株VP均携带tlh,未携带trh.40株食物中毒患者分离株中,38株携带tdh,携带率为95 0％,海产品VP株均未携带tdh.均对青霉素G、苯唑西林、氨苄青霉素耐药.结论 三亚地区食物中毒的主要优势血清型为O4:K8,病人和海产品的分离株携带毒力基因不一致;药敏试验均对喹诺酮类和大部份氨基糖苷类抗生素高度敏感.
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泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染状况及病原学特征分析
目的 了解泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染状况、毒力基因、分子分型以及耐药性情况,为致泻大肠埃希氏菌防治提供依据.方法 对2013年泰州市215份腹泻病人粪便标本进行多重PCR鉴定和分离培养,并对分离的致泻大肠埃希氏菌菌株进行生化鉴定、脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分子分型以及药敏试验.结果 215份腹泻病人粪便标本共检测出致泻大肠埃希氏菌30株,其中EPEC 20株(占9.30％),EAEC 5株(占2.33％),ETEC 5株(占2.33％);PFGE结果表明,30株致泻大肠埃希氏菌PFGE带型种类多,各亲缘关系较近,但无100％的同源菌,同时PFGE分析结果表明在同一个粪便中有2种不同致泻大肠埃希氏菌感染情况存在;药敏试验表明,30株致泻大肠埃希氏菌对阿莫西林、四环素耐药性高,3耐以及以上占63.33％.结论 泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染普遍存在,并以EPEC、EAEC、ETEC感染为主,菌株的耐药性较强,耐药谱广;基因型呈多态分布,且具有流行相关性.
