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结核分支杆菌毒力相关基因mig的克隆研究
在结核病的发生过程中,毒力其着重要的作用,因为只有毒力菌株才可致病.结核菌的毒力可以理解为其引起结核病的能力.而致病性与毒力因子总是联系在一起的.结核菌是典型的胞内寄生菌,但只有有毒株才能在细胞内存活和繁殖.可以推测毒力因子在毒力株的巨噬细胞复制中起关键作用,而目前对毒力因子的分子机制-毒力相关基因知之甚少.为了在分子水平了解毒力因子的作用机制,我们克隆了与结核分支杆菌在巨噬细胞内复制有关的基因mig(macrophage induced gene),以期在分子水平研究结核分支杆菌的致病机理.
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幽门螺杆菌毒力基因与胃癌发病机制的关系
自1983年Warren和Marshall报道了幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp)以来,就受到了医学界和生物学界的普遍关注.1994年世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)将其列为人类Ⅰ类致癌原[1].Hp致病性的差异与其基因型的多态性有关,与胃癌发生相关的特定基因则为Hp毒力基因.本文就Hp的毒力基因及其对宿主细胞的致癌作用作一综述.
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LasI/rhlI基因缺失和阿奇霉素对铜绿假单胞菌毒力基因的影响
目的 探讨lasI/rhlI基因缺失和阿奇霉素对铜绿假单胞菌(PA)毒力基因表达的影响.方法 将野生型及lasI/rhlI基因缺失的PA菌株(PA-ΔlasI,PA-ΔrhlI,PA-ΔlasIrhlI)培养6 h,同时以2μg/mL的阿奇霉素处理上述菌株6 h,采用荧光定量PCR技术观察lasI/rhlI基因缺失以及阿奇霉素对铜绿假单胞菌QS系统及其毒力基因表达的影响.结果 缺失lasI基因后,其下游毒力基因lasA、aprX、rhlA、rhlB、phnA及phnB的表达水平均下调(P<0.05,P<0.01),而上述毒力基因在rhlI基因缺失后表达水平则无明显变化.阿奇霉素处理PA后,lasI基因的表达水平明显下降(P<0.01),而lasI下游毒力基因的表达水平明显增高(P<0.01,P<0.001),QS系统抑制剂qscR的表达水平也显著上调(P<0.001).结论 lasI基因缺失可以明显抑制铜绿假单胞菌QS系统毒力基因的表达,阿奇霉素可能通过抑制qscR而促进毒力基因的表达.
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2016年成都市淡水鱼及其生存环境中致病性弧菌分布及毒力基因特征分析
目的 了解成都市淡水鱼及环境中致病性弧菌分布的变化及毒力基因特征.方法 从养殖场、销售及餐饮场所采集淡水鱼、相关水体和水底沉积物样品,依据国家食品安全评估中心发布的《2014年淡水动物性水产品专项监测手册》分离霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌,荧光PCR法检测霍乱毒素CTX基因、副溶血性弧菌tdh、trh和tlh基因.结果 2016年3—11月采集样品381份,检出致病性弧菌91株,检出率23.89%;副溶血性弧菌检出率9.72%、霍乱弧菌检出率7.62%、创伤弧菌检出率3.68%、溶藻弧菌检出率2.89%;不同环节致病性弧菌的检出率差异有显著性(χ2=5.18;P>0.05);所有样品毒力基因检测均为阴性.结论 成都市2016年淡水鱼及其生存环境中致病性弧菌的检出率较2014年有所降低,但污染分布更广,且嗜盐性弧菌已污染或生长于养殖环境中.
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梧州市外环境水及海、水产品霍乱弧菌监测分析
目的 了解本市外环境水及海、水产品霍乱弧菌污染状况,为制订防控策略、措施提供科学依据.方法 对市区、市郊外环境池塘及河水,养殖场及集贸市场海、水产品及其养殖水采样进行霍乱弧菌检测.结果 检测各类标本共411份,21份检出霍乱弧菌,总阳性率为5.1%;其中以蛙类阳性率高18.3%(11/60),其次为龟类11.1%(2/18);养殖池水6.5%(5/77),贝类2.6%(1/38),鱼(淡水)类1.5%(2/130).外环境池塘、河水71份及蟹17份全阴性;检出菌株稻叶型占71.4%(15/21),小川型占28.6%(6/21);两型菌株均不含霍乱毒素毒力基因(CT),而小带联结毒素毒力基因(Zot)前者46.7%(6/15),后者16.7%(1/6).结论 梧州市外环境水及海、水产品的监测中检出霍乱弧菌且分布广,应予足够重视.
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南宁市O157大肠埃希菌的监测研究
目的 探讨南宁市肠出血性O157大肠埃希氏菌人感染、动物和媒介昆虫带菌状况.方法 2008年所采集的腹泻病人粪便、动物粪便和苍蝇等标本,经处理后接种mEC肉汤增菌,先用免疫胶体金标法做初筛,阳性标本用免疫磁珠浓缩目标菌,划线接种CHROMagarO157显色琼脂平板,纯化后进行血清学诊断,然后集中进行系统生化鉴定和毒力检测等.结果 共检测1 083份标本,检出10株0157大肠埃希菌,总阳性率为0.92%,其中猪粪便为9.38%,牛粪为4.00%,苍蝇为4.35%,鸡粪为0.49%,腹泻病人粪便和鸭粪均未能出O157大肠埃希菌,部分标本中检出与O157大肠埃希菌有相关抗原的致病性大肠埃希菌(EPEC)和未能定型的大肠埃希氏菌;对所检出10株O157菌做SLT1、SLT2、eaeA、hly44种毒力基因的检测,发现3株菌(同一猪场的1份猪粪便和2份苍蝇中检出)eaeA+hly44阳性,未见含有SLT1 SLT2基因,其他菌株SLT1SLT2 eaeA hly44均为阴性.结论 南宁市养殖场部分动物体携带有一定程度致病力的O157大肠埃希菌,并已造成了周围环境污染,威胁人们的生命健康,提示加强宿主动物O157大肠埃希菌监测和研究是防止未来大流行的关键.
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杭州市93株O139群霍乱弧菌携带毒力基因及药敏研究
目的 研究2004-2007年杭州市O139群霍乱弧菌毒力基因携带情况及其药物敏感性. 方法 分别采用PCR法和K-B法,检测分离得到的93株O139群霍乱弧菌株携带ctxA、tcpA毒力基因,并测定对12种常用抗生素的耐药性.结果 所检菌株中,91.40%的菌株携带ctxA、tcpA毒力基因.所有菌株均对丁胺卡那和环丙沙星敏感,而对氨苄青霉素耐药率高,并且携带毒力基因的菌株耐药率均高于未携带毒力基因菌株.结论携带ctxA、tcpA毒力基因的O139群霍乱弧菌致病性与耐药性更强,提示多重耐药现象与毒力基因相关.
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携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛大肠杆菌的毒力基因分析
目的 探索HPI毒力岛阳性大肠杆菌的毒力基因存在情况.方法 使用PCR和杂交技术对152株HPI毒力岛阳性的大肠杆菌进行相关毒力基因检测.结果 在152株携带HPI毒力岛的大肠杆菌中,基本上未检出常见的5类致泻性大肠杆菌的毒力基因,但是部分菌株检出泌尿道致病性大肠杆菌PAI毒力岛基因yc73和prrA以及RTX毒力岛基因rtx615.结论 这些大肠杆菌和已知的致泻性大肠杆菌有明显不同,携带HPI毒力岛的大肠杆菌可能包括几个不同的群,可能存在其它的尚未发现的毒力因子,有必要继续进行进一步研究.
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多重PCR检测蜡样芽胞杆菌的研究
目的 建立多重PCR方法检测蜡样芽胞杆菌.方法 根据蜡样芽胞杆菌(B.cereus)的hblA、hblC、nheA、nheB、cytK、cer、entFM、bceT基因和苏云金芽胞杆菌(B.thuringiensis)的cry基因设计引物,优化反应条件.应用单一引物PCR和国标法对多重PCR反应结果进行确认.结果 蜡样芽胞杆菌溶血性基因hblA和hblC检出率为57.5％和25.0％,非溶血性基因nheA、nheB检出率分别为75.0％和80.0％,细胞毒素cytK基因检出率为37.5％.肠毒素entFM和bceT检出率分别为28.7％和18.7％.蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌cer基因检出率分别为97.5％和100.0％,cry基因检出率为分别为0.0％和100.0％.cer基因和cry基因同时检测,条带区分清晰,可作为蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌快速鉴别的首选方法.结论 三重PCR结果非常好,三对引物所扩增出的DNA条带明显区分开,电泳条带清晰,敏感度高,特异性强.单重PCR和三重PCR检测结果没有显著性差异.
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一起多型别副溶血性弧菌引起的食物中毒病原学研究
目的 对一起由多种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究. 方法 参照国家标准方法对事件中可疑样品进行病原菌分离鉴定,对分离的副溶血性弧菌进行血清学试验,采用荧光定量PCR检测菌株的毒力基因耐热直接溶血素基因(tdh)、耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh)与不耐热溶血素基因(tlh),并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对分离到的菌株进行分子分型. 结果 从24份病人标本和1份剩余食品中检出副溶血性弧菌25株；血清型分布为O4:K8 4株,O3:K6 19株,O4:KUT 1株和O3:KUT 1株；分离到的25株副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh+tlh+trh-; PFGE聚类分析显示,不同血清型菌株分为不同的簇,同一血清型菌株的PFGE条带型间存在1～2个条带的差异,菌株间存在关联. 结论 这是一起由多种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒.
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广西2000～2010年O139群霍乱弧菌毒力检测及耐药性分析
目的 研究广西O139群霍乱弧菌毒力基因携带情况及其药物敏感性.方法 采用PCR方法检测广西2000～2010年分离到的14株O139群霍乱弧菌霍乱肠毒素(ctxA)毒力基因,同时用K-B法对10种推荐用抗生素氟哌酸(NOR)、庆大霉素(GEN)、复方新诺明(SXT)、四环素(TET)、氨苄青霉素(AMP)、阿米卡星(AMI)、环丙沙星(CIP)、强力霉素(DOX)、氯霉素(CHL)和链霉素(STR)进行耐药性检测.结果 64.29％的菌株携带ctxA毒力基因,其中病人株携带ctxA毒力基因为100％；所有菌株对氟哌酸、阿米卡星和环丙沙星敏感,对其余7种抗生素高度耐药；病人及病家环境菌株的耐药性高于外环境菌株.结论 庆大霉素、复方新诺明、四环素、氨苄青霉素、强力霉素、氯霉素和链霉素7种传统药物已不宜用于临床病人治疗,提示在疫情监测中应关注试验检测结果,指导临床用药,及时做好防控工作.
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中山地区铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统毒力基因表达差异的检测
目的 分析中山地区铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统(TTSS)毒力基因表达及耐药情况,为临床抗感染治疗提供依据.方法 对中山市人民医院2016年7-11月临床分离的铜绿假单胞菌随机选取76株,采用PCR法检测分离菌株exoU、exoS、ex-oT、exoY 4种毒力基因;采用Vitek2 Compact全自动微生物鉴定仪测定细菌对抗菌药物的敏感性.结果 exoS、exoY检出率高,分别为52.6%(40/76)、63.2%(48/76);主要为exoU(-)exoS(+)exoT(-)exoY(+)基因型,占59.26%;多重耐药及非多重耐药铜绿假单胞菌株4种毒力基因的阳性率无显著性差异;TTSS阳性组对13种药物的耐药率普遍低于TTSS阴性组,差异无统计学意义(P>0.05).结论 铜绿假单胞菌毒力基因携带存在一定的地域性差别;多重耐药及非多重耐药铜绿假单胞菌株毒力基因携带情况相似.
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肺炎克雷伯菌肝脓肿微生物学特征和耐药情况分析
目的 探讨肺炎克雷伯菌肝脓肿患者的临床特征,以及肺炎克雷伯菌的微生物学特征和耐药情况.方法 收集110例肺炎克雷伯菌肝脓肿患者的临床资料,分为有其他肝胆疾病组和无其他肝胆疾病组进行研究,采用黏液丝试验确定肺炎克雷伯菌的高黏液性状,采用PCR扩增法进行毒力基因检测及荚膜分型,选用纸片扩散法进行药敏试验,并对结果进行统计学分析.结果 肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于40~80岁的中老年男性,50.00%患者有糖尿病基础.110株肺炎克雷伯菌中,86.36%的菌株具有高黏液表型,荚膜分型以K1、K2血清型为主.无其他肝胆疾病组高黏液表型菌株、携毒力基因rmpA及气杆菌素的检出率明显高于有其他肝胆疾病组,差异有统计学意义(P<0.01).肺炎克雷伯菌对12种常见的抗菌药物的耐药率均较低.结论 肺炎克雷伯菌肝脓肿常见于中老年男性,高黏液、携带毒力基因rmpA和气杆菌素的高毒力肺炎克雷伯菌是肝脓肿的主要病原菌,对常见抗菌药物的耐药率较低.
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尿培养产CTX-M大肠埃希菌的种系分型及耐药和毒力特点分析
目的 分析尿培养产CTX-M大肠埃希菌的种系分型,耐药及毒力特点.方法 收集该院2014年尿培养大肠埃希菌,环扩散法测定细菌的敏感性,ESBLs确定分析细菌产ESBLs的情况;采用肠杆菌属重复基因间隔共有序列-PCR(ERIC-PCR)对细菌进行遗传相关性分析;PCR扩增CTX-M编码基因和毒力基因iutA,ompT,fyuA,fdeC,fimH,traT,cvaC,pap,kpsMT,pAI,usp,aer,hlyA,cnf,和chuA;多重PCR分析产CTX-M大肠埃希菌的种系分型;依据PCR对菌株的CTX-M编码基因的检验结果,将细菌分为产CTX-M组和非产CTX-M组,对比分析两组之间在抗菌药物耐药性和毒力基因之间的差异.结果 162株尿培养大肠埃希菌中没有遗传相关性,126株ESBLs阳性菌株中,有91株细菌产CTX-M,其中,57株产CTX-M大肠埃希菌属于D型,16株属于B2型.统计学分析发现,产CTX-M组细菌的耐药率显著高于不产CTX-M组细菌(除外亚胺培南),毒力基因iutA、chuA和traT在产CTX-M细菌组中的流行显著高于非产CTX-M组,P值分别依次为:0.001、0.006和0.000.结论 产CTX-M大肠埃希菌是本院尿路感染的主要致病菌,大多属于D型,其耐药率显著增高,且与毒力基因iutA、chuA和traT密切相关,是尿路感染患者临床治疗的一个潜在威胁.
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不同消化性疾病患者幽门螺杆菌毒力基因类型及意义研究
目的 分析用不同消化性疾病来源的幽门螺杆菌(Hp)毒力基因的检测结果及其意义.方法 收集该院胃镜室于2015年1月至2016年7月采集的628例患者胃活检标本,分离培养Hp,检测其携带的毒力基因,并探讨Hp与慢性萎缩性胃炎(CAG)、慢性浅表性胃炎(CSG)、消化性溃疡(PUD)的相关性.结果 628份胃活检标本中成功分离出214株Hp,选取其中172株提取DNA,发现Hp携带cagA、vacA、dupA、iceA、oipA、luxS多种毒力基因,其中vacA s1m1是CSG的危险因素,vacA s1m2与iceA1+/iceA2+提高PUD的发生率,dupA+提高十二指肠溃疡危险度.结论 不同消化性疾病与Hp感染密切相关,dupA可考虑作为Hp致十二指肠溃疡的标记基因,vacA s1m2与iceA1+/iceA2+增加了发生PUD的危险性.
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临床副溶血弧菌血清型及基因分型特征研究
目的：了解本地区腹泻患者中副溶血弧菌（VP）血清型及分子分型特征，为 VP感染的防控提供科学参考。方法对2010～2014年收集到的62菌株进行血清型分型；采用 PCR检测溶血素相关毒力基因（tdh和 trh）；利用多位点序列分型（MLST）进行分子分型。结果62株菌株分属7种不同的血清型，O3∶K6型居首，共46株，占74．19％，其次是O4∶K68（6株）。毒力相关基因检测发现tdh阳性株占95．16％（59株），而trh阳性者仅3株。分子分型确定7种STs ，其中ST3型占85．50％（53株），其他ST型散在分布。结论 O3∶K6血清型VP是本地区主要的分离株，大多携带 tdh毒力基因，ST3型是优势流行型别。
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化脓性链球菌高毒力株特异基因文库的构建和分析
目的 构建化脓性链球菌毒力基因文库,克隆和筛选化脓性链球菌高毒力株特异表达基因.方法 采用抑制消减杂交方法,以从患者体内分离的链球菌作为毒力菌株,分离毒力基因,将其与PMD18-T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物转化感受态大肠杆菌TOP10进行文库扩增后,将转化菌液涂布于LB固体平板,构建化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库,用斑点杂交初步筛选后,将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析.结果 酶切产物为100～2 000 bp,连接效率大于50%,成功构建了化脓性链球菌毒力基因消减文库,所得阳性克隆经斑点杂交筛选后测序,与Genebank数据库进行同源性比对,5个未知序列可能为新基因,7个与已知基因有高度的同源性.结论 用抑制消减杂交技术及T/A克隆技术成功构建了化脓性链球菌毒力基因文库;5个未知的新序列可能与化脓性链球菌的高毒力有关.
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体内表达细菌毒力基因分析
面对复杂的宿主环境,细菌在体内是通过调节表达不同的毒力基因建立并延续其感染过程的.目前已建立起多种方法去分析鉴定体内特异表达的细菌毒力基因.其中体内表达技术的应用为鉴定细菌毒力基因以及揭示细茵致病机理开辟了有力的途径.本文对此作一综述.
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肺炎克雷伯菌生物膜形成的相关因素研究
目的 探讨毒力荚膜血清型、常见毒力基因、耐药基因、碳青霉烯类耐药以及生物膜培养时间等因素与肺炎克雷伯菌生物膜形成的关系.方法 比较结晶紫染色定量检测法检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌组(CRKP组)和肺炎克雷伯菌组(KPN组)的吸光度值(A值),并在生物膜培养的不同时间进行A值比较.PCR扩增6种常见高毒力荚膜血清型基因(K2、K5、K16、K20、K54、K57)、5种常见毒力基因[magA(K1)、rmpA、mrkD、wabG、allS]以及8种耐药基因(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaOXA-M).结果 两组肺炎克雷伯菌菌株生物膜形成能力A值为0.454～0.936,在培养12 h时,两组生物膜形成能力差异无统计学意义(P>0.05).在培养18 h时,CRKP组形成生物膜的能力较KPN组强(P<0.05).比较培养12 h和18 h两个时间段生物膜的A值,CRKP组培养18 h的生物膜形成能力较12 h更强(P<0.05);KPN组结果相同.24份标本均未检出毒力荚膜血清型基因(K2、K5、K16、K20、K54、K57),5种常见毒力基因[magA(K1),rmpA、mrkD、allS、wabG]仅检出1例(4％).耐药基因blaTEM占54％ 、blaSHV占42％ 、blaK PC占46％ 、blaIM P占4％.结论 培养时间影响结晶紫染色法在临床观察生物膜形成试验中的结果,影响生物膜形成的其他因素以及深层次的原因有待进一步研究和更多实验结果的支持.
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一起多血清型副溶血性弧菌聚集性腹泻事件的病原分析
目的 了解一起聚集性腹泻事件中副溶血性弧菌的主要血清型、生物学特征的相关性和同源性,为流行病学调查提供实验室依据.方法 采用流行病学方法调查聚集性腹泻事件,参照WS271-2007附录B3分离检测病原菌,聚合酶链反应测定毒力基因,小抑菌浓度测定17种药物敏感度,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因分型,BioNumerics软件进行聚类分析.结果 该次事件分离得到21株副溶血性弧菌,其中20株来源于患者肛拭样品,1株分离自餐厅从业人员肛拭样品;以O3:K615株(71.43％)为优势血清型,均为耐热直接溶血素、toxRS-new、orf8-up阳性,耐热直接溶血素相关溶血素、toxRS-old阴性;O4:K84株(19.05％);O3:KUT和O4:KUT均仅有1株,各占4.76％.药敏试验结果基本一致,对两种药物(氨苄西林、头孢唑啉)100％耐药.PFGE分型按100％ 相似度分为7个型别.结论 该次聚集性腹泻事件是以O3:K6血清型为主的不同克隆株副溶血性弧菌混合感染所致.
