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葡萄膜黑色素瘤瘤体生长对视网膜和巩膜浸润的影响
目的 分析葡萄膜黑色素瘤瘤体的生长对视网膜浸润和巩膜浸润程度的影响.方法 回顾性系列病例研究.收集2001年6月至2013年4月首都医科大学附属北京同仁医院眼科病理室确诊的102例葡萄膜黑色素瘤患者的组织病理切片和临床病理资料,重点对瘤体形态、肿瘤大小、肿瘤细胞类型、视网膜浸润、巩膜浸润等指标进行统计,并对视网膜浸润率与巩膜浸润率进行趋势x2检验.结果 在102例葡萄膜黑色素瘤患者中,男性44例,女性58例,年龄15～78岁,平均(45.6±12.4)岁.102例葡萄膜黑色素瘤中大肿瘤占68例(66.7％),中等大小肿瘤27例(26.5％),小肿瘤7例(6.8％);梭形细胞型76例(74.5％),上皮样细胞型6例(5.9％),混合细胞型16例(15.7％),其他4例(4.0％);睫状体黑色素瘤3例(2.94％),睫状体和前部脉络膜黑色素瘤28例(27.5％),脉络膜黑色素瘤71例(69.6％).视网膜浸润共86例(84.3％)分为5级,其中无浸润16例(15.7％)、浸润至外核层20例(19.6％)、浸润至内核层12例(11.8％)、浸润至神经节细胞层30例(29.4％)、浸润至内界膜24例(23.5％).巩膜浸润55例(53.9％),在102例葡萄膜黑色素瘤中,瘤体细胞浸润至视网膜不同层次的巩膜浸润率:无浸润11例(68.8％)、浸润至外核层13例(65.0％)、浸润至内核层5例(41.7％)、浸润至神经节细胞层15例(50.0％)、浸润至内界膜11例(45.8％);并对其中76例梭形细胞型的巩膜浸润进行了单独统计:瘤体细胞浸润至视网膜不同层次的巩膜浸润率:无浸润8例(72.7％)、浸润至外核层10例(71.4％)、浸润至内核层5例(62.5％)、浸润至神经节细胞层14例(53.9％)、浸润至内界膜8例(47.1％).视网膜浸润率与巩膜浸润率的趋势x2检验γ值为-0.21,P=0.127.结论 葡萄膜黑色素瘤的视网膜浸润率随着肿瘤浸润巩膜深度的增加而呈现下降趋势,其虽有趋势性改变,但无统计学意义.
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26例结膜黑色素瘤的临床和病理学特点
目的 总结结膜黑色素瘤临床和病理学特点,以利于早期正确诊断和治疗.方法 回顾性系列病例研究.对天津市眼科医院从1985年5月至2007年6月间收治的26例结膜黑色素瘤的临床和病理学特点进行回顾性分析.病理学检查采用常规石蜡切片、HE染色,S-100蛋白和HMB-45免疫组织化学染色.结果 26例患者年龄30.0～83.0岁,平均53.4岁;均为单眼发病.26例中,11例起源于结膜原发性获得性黑变病恶变、8例起源于结膜色素痣或黑色素细胞瘤恶变、7例为原发性结膜黑色素瘤;14例肿瘤累及到睑结膜和球结膜、6例肿瘤位于球结膜、4例肿瘤位于睑结膜、2例肿瘤位于角膜缘;22例为上皮样细胞型黑色素瘤、4例为上皮样瘤细胞和梭形瘤细胞混合型.7例原发性黑色素瘤中有3例为无色素性黑色素瘤,瘤细胞对S-100蛋白和HMB45呈阳性表达.大多数肿瘤表面和邻近的结膜上皮内伴有瘤细胞侵犯.术后随访到14例,随访时间为1～18年.其中12例在肿瘤切除术后有1～3次肿瘤复发,3例有耳前淋巴结转移,1例有同侧耳前淋巴结和双侧颌下淋巴结转移,4例死于肿瘤全身扩散或肝转移.结论 结膜黑色素瘤主要是起源于结膜原发性获得性黑变病或色素痣恶变,大部分为上皮样细胞型黑色素瘤,伴有邻近结膜上皮内侵犯.术后复发比较常见,尤其肿瘤范围较大或伴有PAM者.
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蛋白激酶C对腺样囊性癌细胞侵袭行为的影响
目的 探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)与涎腺腺样囊性癌侵袭转移的关系及PKC抑制剂抗肿瘤侵袭转移的可行性.方法 采用从牛精子中提纯的内源性PKC大分子抑制剂(proteinkinase C inhibitor of bovine spermatozona,BS-PKCI)及外源性抑制剂H7作用于人涎腺腺样囊性癌SACC-83系细胞,观察两种PKC抑制剂对肿瘤细胞与基底膜的粘附性、移动性(用移出琼脂糖滴数及远距离表示)及体外侵袭力的影响.结果 ①两种PKC抑制剂可明显降低肿瘤细胞对基底膜的粘附性(P＜0.05);②两种PKC抑制剂可明显地降低肿瘤细胞的移动性(P＜0.05);③两种PKC抑制剂可明显降低肿瘤细胞的体外侵袭力(P＜0.01).结论 PKC与涎腺腺样囊性癌侵袭转移有密切的关系;PKC抑制剂BS-PKCI及H7可明显地降低SACC-83系细胞粘附性、移动性及体外侵袭力.
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信号传导及转录激活因子调控微RNA-21影响人舌鳞状细胞癌细胞侵袭能力的体外研究
目的 探讨信号传导及转录激活因子3 (signal transducers and activators of transcription,STAT-3)调控微RNA-21影响人舌鳞状细胞癌侵袭能力的效果和机制.方法 实验共分3大组:空白对照组、二甲基亚砜组(DMSO组)、小分子抑制剂组(WP1066组).采用STAT-3小分子抑制剂WP1066下调STAT-3表达；甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定Tscca和Tca8113P160舌癌细胞WP1066的半数抑制浓度(inhibitory concentration,IC5o)；蛋白质印迹法检测WP1066处理后舌癌细胞STAT-3及pSTAT-3表达；实时定量PCR法检测微RNA-21表达水平；用Matrigel基质生长实验和Transwell体外侵袭实验检测肿瘤细胞生长形成球形克隆、侵袭能力；蛋白质印迹法检测肿瘤细胞侵袭相关蛋白表达.荧光素酶报告基因实验验证STAT-3与微RNA-21调控关系.结果 MTT法结果:Tscca、Tca8113P160细胞WP1066的IC50分别为3.1和3.5 μmol/L;WP1066组STAT-3及pSTAT-3表达水平低于空白对照组；WP1066组微RNA-21表达水平低于空白对照组.WP1066组细胞生长形成球形克隆能力减弱,直径减小(Tscca:F=15.751,P=0.004；Tca8113P160:F=12.964,P=0.007)；通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数少于空白对照组(Tscca:F=1688.926,P=0.000；Tca8113 P160:F=327.528,P=0.000);基质金属蛋白酶2/9蛋白表达水平下调；金属蛋白酶抑制剂蛋白表达水平上调.荧光素酶报告基因实验证明微RNA-21是STAT-3的调控靶点.结论 抑制舌癌细胞中STAT-3活性可以下调微RNA-21表达并降低舌癌细胞的侵袭能力；为进一步探究STAT-3参与调控舌癌细胞侵袭转移能力的分子机制提供实验依据.
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低氧诱导活性氧和硫氧还蛋白1表达异常对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响
目的 探讨低氧条件下,活性氧(ROS)与硫氧还蛋白1(Trx-1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞系中的表达情况,及其对OSCC细胞侵袭能力的影响.方法 在常氧及低氧条件下培养人OSCC细胞系CAL33和HSC6细胞,2,7-二氯二氢荧光素二醋酸酯(DCFH-DA)法检测ROS水平,Western blot检测Trx-1表达水平,采用独立样本t检验方法进行统计分析.特异性抑制Trx-1后检测ROS的表达.Transwell细胞侵袭实验检测不同状态下CAL33细胞的侵袭能力变化,结果用单因素方差分析统计.结果 低氧条件下,CAL33和HSC6细胞的ROS在6 h出现峰值,分别是各自对照组的(1.52±0.08)、(1.81±0.11)倍,后逐渐下降;而Trx-1随低氧诱导时间表达持续上调(PCAL33=0.002,PHSC6=0.0001).特异性抑制Trx-1可显著上调CAL33和HSC6细胞的ROS表达至(2.78±0.26)、(7.29±0.83)倍,差异有统计学意义(t=13.4,P=0.0001).与常氧比较,低氧可促进OSCC细胞的侵袭能力(P=0.001);特异性抑制Trx-1可抑制低氧环境中OSCC细胞侵袭能力,且这一趋势可被乙酰半胱氨酸(NAC)逆转(F=137.66,P=0.0001).结论 低氧状态下,ROS与Trx-1的表达异常可促进OSCC的侵袭能力.特异性抑制Trx-1可通过激活ROS介导的信号通路抑制OSCC细胞侵袭.
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miR-362-5p靶向DKK1促进舌鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭
目的 检测miR-362-5p在人舌鳞状细胞癌(TSCC)组织及细胞系中的表达,探讨miR-362-5p对TSCC细胞增殖和侵袭能力的影响,及其可能的作用机制.方法 利用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TSCC组织及细胞系中miR-362-5p的表达水平;将miR-362-5p mimic、antagomiR-362-5p和阴性对照组分别转入人TSCC细胞SCC-9和UM1中,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)以及Transwell法检测转染后各组细胞增殖及侵袭能力的改变,蛋白印迹法(Western blot)以及TOP/FOP双荧光报告检测Wnt信号通路活性.两组间均数的比较采用Student′s t检验,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 相对于正常舌黏膜组织及细胞,TSCC组织和细胞系中miR-362-5p的表达水平显著上调(P<0.001).SCC-9和UM1细胞中转染antagomiR-362-5p或miR-362-5p mimic能显著抑制(tSCC-9=26.53,PSCC-9=0.0083;tUM1=24.45,PUM1=0.0094)或上调(tSCC-9=-257.87,PSCC-9=0.0008;tUM1=-270.44,PUM1=0.0007)miR-362-5p表达水平.下调miR-362-5p表达能降低SCC-9和UM1细胞的增殖(tSCC-9=32.44,PSCC-9=0.0009;tUM1=22.32,PUM1=0.0013)和侵袭能力(tSCC-9=39.55,PSCC-9=0.0008;tUM1=23.78,PUM1=0.0092),而上调其表达则可增强细胞的增殖(tSCC-9=-23.35,PSCC-9=0.0084;tUM1=-17.47,PUM1=0.0138)和侵袭能力(tSCC-9=-26.23,PSCC-9=0.0072;tUM1=-18.69,PUM1=0.0145).同时,miR-362-5p能够负性调控Dickkopf1(DKK1)的表达,增强Wnt/β-catenin信号通路.结论 TSCC组织及细胞系中miR-362-5p的表达上调,其可能通过抑制DKK1表达增强Wnt/β-catenin信号通路,促进TSCC细胞的增殖和侵袭.
关键词： 癌 鳞状细胞 舌 肿瘤侵润 miR-362-5p DKK1 Wnt/β-catenin信号通路 -
Wortmannin抑制PDK信号通路对人甲状腺滤泡癌细胞迁移侵袭能力的影响
目的 利用特异性PI3K抑制剂wortmannin抑制P13K信号通路,研究其对人甲状腺滤泡癌细胞CGTHW-1迁移和侵袭能力的影响,并初步探索其作用机制.方法 培养CGTHW-1细胞,用MTT法筛选wortmannin佳作用浓度及时间.将细胞分为实验组和对照组(分别在血清饥饿和含血清两种条件下培养).对照组细胞未给予任何处理,实验组细胞用wortmannin进行处理.通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别观察wortmannin对细胞迁移及侵袭能力的影响.利用FITC标记的鬼笔环肽进行微丝免疫荧光染色,观察在wortmannin作用下细胞的形态学变化.免疫细胞化学SP法及半定量RT-PCR法检测wortmannin对细胞Racl蛋白、mRNA表达的影响.结果 在含血清培养液培养条件下,经wortmannin处理后,划痕伤口愈合速度减慢,CGTHW-1细胞侵袭至小室下层细胞数(13.8±3.03个)明显低于对照组(41.6±6.95个,P<0.01);wortmannin显著降低Racl蛋白及mRNA的表达(P<0.05).而在血清饥饿条件下,两组细胞迁移均受抑制,侵袭细胞数组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 wortmannin能有效抑制人甲状腺癌细胞迁移侵袭,其作用机制可能是通过抑制PI3K下游分子Racl,从而引起细胞骨架重构.PI3K及Racl可能成为抑制甲状腺癌转移的关键性分子.
关键词： 甲状腺肿瘤 肿瘤侵润 肿瘤转移 Wortmannin -
基质金属蛋白酶2基因启动子的甲基化状态对子宫内膜癌侵袭力调控的分子机制
目的:探讨DNA甲基化对子宫内膜癌细胞株中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)基因表达的调控作用及DNA甲基化酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-aza-CdR)对子宫内膜癌侵袭能力的作用.方法:选取人子宫内膜癌细胞株Ishikawa和HEC-1A作为研究对象,采用亚硫酸氢盐修饰后的克隆测序法检测5-aza-CdR处理前后MMP-2启动子区CpG位点甲基化状态及其变化.用不同浓度的5-aza-CdR处理Ishikawa和HEC-1A细胞株后,利用实时定量PCR和Matrigel Invasion Transwell方法测定分析其mRNA水平表达和侵袭能力的变化.结果:在Ishikawa和HEC-1A细胞中检测到MMP-2基因启动子区域整体甲基化水平较低,但关键转录调控元件结合部位的CpG位点甲基化频率较高,在HEC-1A细胞中分别为80％和70％,在Ishikawa细胞中分别为60％和40％,5-aza-CdR作用后,其甲基化程度降低,HEC-1A细胞中分别为20％和10％,在Ishikawa细胞中完全去甲基化.不同浓度5-aza-CdR作用72 h后,各组细胞中MMP-2 mRNA表达水平、穿膜细胞数均明显上调,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MMP-2启动子区特异CpG位点的甲基化状态可能参与其转录水平表达的调控,5-aza-CdR可能通过上调MMP-2 mRNA表达促进子宫内膜癌细胞Ishikawa和HEC-1A的体外侵袭.
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组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭及与基质金属蛋白酶类的相关性研究
目的:探讨组织因子促进人类大肠癌细胞侵袭的机制,研究其与MMP-2和MMP-9的相关性.方法:获取转染正义/反义TFcDNA的人类大肠癌HT-29细胞系/LoVo细胞系裸鼠皮下种植瘤标本,应用Western blot和RTPCR技术,检测转染组和对照组肿瘤组织中MMP-2和MMP-9的蛋白和mRNA表达水平;同时采用明胶酶谱法检测转染反义LoVo细胞系培养上清中的MMP-2和MMP-9活性的变化.结果:与对照组相比较,转染正义TFcDNA的HT-29细胞系成瘤标本TF表达升高,其所对应的MMP-9和MMP-2蛋白水平和mRNA水平表达也明显升高;转染反义TFcDNA的LoVo细胞系成瘤标本中的TF,MMP-9和MMP-2蛋白和mRNA水平表达明显低于对照组,转染反义TFcDNA的LoVo细胞系培养上清液中的MMP-9和MMP-2活性较对照组低;MMP-9和MMP-2表达与组织因子表达具有相关性.结论:组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭,其部分机制可能与组织因子上调MMP-9和MMP-2的表达有关,组织因子可能是大肠癌细胞分泌MMPs的内在激动剂.
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WHO(2000)I级脑膜瘤切除程度术前预测参数探讨
目的:探讨WHO(2000)I级脑膜瘤术前MRI瘤-脑界面特征及与其相关的病理学表现和临床意义.方法:观察30个病例的术前MRI脑脊液-血管周围间隙特征和瘤周脑水肿程度、术中肿瘤-脑界面手术分离度(Ilden 分型)及术后相应部位脑组织病理学结果,对上述观察指标进行对照分析.结果:Ilden 分型与T2WI瘤周水肿级别(P＜0.05)、MRI脑脊液-血管周围间隙(P＜0.05)显著相关;Ilden分型是预测肿瘤脑侵袭的重要参数(P＜0.05);T2WI瘤周水肿级别与肿瘤脑侵袭之间存在显著差异(P＜0.05);MRI脑脊液-血管周围间隙不清晰则脑侵袭存在几率增加(P＜0.05).结论:术前依据瘤周水肿级别(MRI T2WI)、MRI脑脊液-血管周围间隙,可以预测瘤-脑手术分离度(Ilden分型)和肿瘤是否存在脑侵袭.
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显微手术治疗镰旁矢状窦旁巨大脑膜瘤3例报告
我院2007年4月至2008年9月收治3例镰旁矢状窦旁巨大脑膜瘤患者,采用显微外科手术切除效果良好,报告如下.例1女,45岁,因左侧肢体活动不利5年,被人发现意识不清5h入院.查体:嗜睡状,颅神经检查无异常,左侧肢体肌张力高,肌力Ⅳ级,病理征阳性.入院时头颅CT提示右顶叶混杂密度灶,周围低密度水肿带,基底池及三、四脑室消失,中线结构左移.入院后头颅增强MRI提示右侧额顶部上矢状窦旁脑膜瘤,大小约6.6 cm×6.5 cm×6.0 cm,肿瘤突破右顶骨达皮下,明显强化.入院1周在全麻下行右侧矢状窦旁开颅显微肿瘤切除术,术中见肿瘤大小为7cm×6cm×6cm,为实性,肿瘤基底附着于上矢状窦,血运丰富,全切肿瘤并去除骨瓣,术后病理为非典型性脑膜瘤,颅骨组织未见肿瘤侵润.术后3周痊愈出院,左侧肢体肌力Ⅳ级.
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Twist1基因对食管鳞癌迁移和侵袭的影响
目的 研究Twist1基因在食管鳞癌中的表达、临床病理意义及对食管鳞癌迁移和侵袭的影响.方法 选取30例行手术切除的食管鳞癌患者的食管鳞癌组织和癌旁正常组织标本,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot方法检测Twist1 mRNA和蛋白表达水平.以癌旁正常组织Twist1 mRNA表达水平为对照,检测三株食管鳞癌细胞株K70、K140、EC109的Twist1 mRNA相对表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系.选取食管鳞癌细胞株EC109分别采用细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验,分别转染Twist1小干扰RNA及对照双链无义RNA,比较两者之间的变化情况.结果 食管鳞癌组织中Twist1 mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(1.91 ± 0.93比0.54 ± 0.26),差异有统计学意义(P<0.01);三种食管鳞癌细胞株K70、K140、EC109中Twist1 mRNA相对表达水平明显高于癌旁正常组织(2.30 ± 0.34、1.78 ± 0.28和4.37 ± 0.25比1.00 ± 0.48),差异有统计学意义(P<0.05).食管鳞癌组织中Twist1蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织(1.35 ± 0.66比0.25 ± 0.05),差异有统计学意义(P<0.05).食管鳞癌组织Twist1 mRNA相对表达水平与淋巴结转移、浸润程度有相关性(P<0.05).分别转染Twist1小干扰RNA及对照双链无义RNA后食管鳞癌细胞株EC109中Twist1 mRNA表达水平分别为0.45 ± 0.16和1.00 ± 0.20,Twist1蛋白表达水平分别为0.24 ± 0.09和0.58 ± 0.10,两者比较差异均有统计学意义(P<0.05).细胞划痕实验结果表明,运用RAN干扰技术下调Twist1表达后,食管鳞癌细胞株EC109的36和72 h 迁移率明显低于对照双链无义 RNA[(32.6 ± 4.7)%比(16.2 ± 6.0)%和(71.9 ± 4.7)%比(53.2 ± 6.6)%],差异有统计学意义(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,转染Twist1小干扰RNA的EC109穿入小室膜底部的细胞总数较转染对照双链无义RNA明显减少(92.5 ± 8.1比32.7 ± 7.5),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Twist1基因可能在食管鳞癌中普遍异常高表达,其与癌组织浸润、淋巴结转移存在一定相关性,对食管鳞癌细胞迁移和侵袭可能有一定影响.
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微小RNA-138通过调控上皮间质转化抑制乳腺癌侵袭和迁移的机制研究
目的 探讨微小RNA(miR)-138通过调控上皮间质转化(EMT)影响乳腺癌细胞侵袭和迁移的分子机制.方法 2017年7月至2018年6月采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231转染miR阴性对照模拟物(miR-NC)和miR-138模拟物后miR-138表达量;MTT法检测乳腺癌细胞活性;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移距离和侵袭率.RT-PCR检测转染miR-138模拟物后EMT关键分子Vimentin、N-cadherin和E-cadherin mRNA表达量.结果 MCF-10A中miR-138表达水平明显高于MCF-7和MDA-MB-231(1.006±0.009比0.324±0.027和0.512±0.068),差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7和MDA-MB-231 miR-138表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).MCF-7和MDA-MB-231转染miR-138模拟物后第3和4天乳腺癌细胞活性明显低于转染miR-NC(MCF-7:0.514±0.052比0.593±0.061和0.643±0.074比0.784±0.081;MDA-MB-231:0.552±0.043比0.614±0.063和0.673±0.074比0.792±0.077),差异有统计学意义(P<0.05).MCF-7和MDA-MB-231转染miR-138模拟物后乳腺癌细胞迁移距离和侵袭率明显低于转染miR-NC(MCF-7:0.572±0.051比1.003±0.012和0.624±0.043比1.002±0.007,MDA-MB-231:0.472±0.051比1.003±0.095和0.573±0.044比1.004±0.091),差异有统计学意义(P<0.05).MCF-7和MDA-MB-231转染miR-138模拟物后Vimentin和N-cadherin mRNA表达量明显低于转染miR-NC,而E-cadherin mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-138在乳腺癌细胞中表达量降低;miR-138可以抑制乳腺癌细胞增殖,并通过调控EMT过程抑制细胞侵袭和迁移能力.
关键词： 乳腺肿瘤 RNA 上皮细胞-间充质细胞转换 肿瘤侵润 肿瘤转移 -
肌球蛋白重链-9在胃癌侵袭和转移中的作用
目的 探讨肌球蛋白重链-9(Myosin-9)在胃癌及癌旁正常组织中的表达及临床意义,分析其与胃癌侵袭和转移的关系.方法 回顾性分析91例行胃癌手术患者的临床资料,采用免疫组织化学方法检测Myosin-9和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,并分析Myosin-9表达强度的影响因素和Myosin-9与MMP-2的相关性.结果 胃癌组织中 Myosin-9 和 MMP-2 表达率明显高于癌旁正常组织[82.42%(75/91)比 36.26%(33/91)和71.43%(65/91)比31.87%(29/91)],差异有统计学意义(χ2=41.28和29.48,P<0.01).Myosin-9强表达与肿瘤分化程度、浸润深度和淋巴结转移程度有关(P<0.01或＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径、远处转移无关(P>0.05).胃癌组织中Myosin-9与MMP-2表达呈正相关(r=0.376,P<0.01).结论 Myosin-9在胃癌组织中存在过表达现象,其过表达可能增强胃癌细胞侵袭和转移能力.
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肿瘤侵及血管对肺癌患者运动心肺功能的影响
目的 探讨肿瘤侵及血管与肺癌患者运动心肺功能改变之间的相关性.方法 对405例肺癌患者(经CT或手术证实无血管受侵者112例,有血管受侵者293例)行运动心肺功能测定,主要观察指标为终止负荷运动时大运动负荷占预计值百分比(W%)、大千克摄氧量(VO_2/kg)、无氧阈(AT)、大氧脉搏实测值占预计值百分比(VO_2/HR%)、大通气量(V_E)、大呼吸储备(BR)、快呼吸频率(BF)和大呼气潮气量(VTex).结果 血管受侵患者W%、VO2/kg、AT、VO_2/HR%[分别为(73±18)%、(17±5)ml·min~(-1)·kg~(-1)、(51±14)%、(79±18)%)]明显低于无血管侵犯患者[分别为(86±20)%、(19±5)ml·min~(-1)·kg~(-1)、(55±14)%、(88±20)%,均P＜0.01],BF明显高于无血管受侵患者[(32.1±6.1)比(30.6±5.1)次/min,P＜0.05].将血管受侵患者按TNM分期、受侵血管数目、种类及其与肿瘤的关系等分别分组进行比较,发现受侵血管为1、2、≥3支的患者W%、VO_2/HR%均明显低于对照组(均P＜0.01),1支组和≥3支组AT明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);2支组和≥3支组VO_2/kg明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);≥3支组VO_2/kg明显低于1支组和2支组(P＜0.05或P＜0.01),VO_2/HR%明显低于1支组(P＜0.05),VTex低于对照组和1支组(P＜0.05).VO_2/HR%与受侵血管支数有相关件(r=0.220,P＜0.01).结论 有血管受侵的肺癌患者摄氧、运动能力、运动心功能降低,受累血管数目是影响患者运动心肺功能的主要原因.
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微小RNA-373对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制
目的 探讨微小RNA (miR)-373对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制.方法 80例乳腺癌患者癌组织及其对应的癌旁组织均取自于2010至2014年在郑州大学第一附属医院手术切取的标本.通过实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-373在乳腺癌患者癌组织及其对应的癌旁组织中的表达.细胞实验分3组:正常对照组、miR-373类似物组和miR-373抑制剂组.利用CCK-8实验、Transwell体外侵袭实验检测miR.373表达对乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.利用流式细胞仪检测miR-373表达对细胞凋亡的影响.结果 乳腺癌组织中miR-373的表达显著低于癌旁正常乳腺组织(0.21±0.09比0.98±0.23)(P ＜0.001);miR-373能抑制B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-6表达.miR-373类似物组细胞凋亡率显著高于正常对照组(18.29％±0.29％比4.91％±0.31％),细胞增殖率、侵袭能力、迁移能力均显著低于正常对照组[(0.69±0.11)比(1.25±0.12)(第5天)、(30.50±0.20)比(66.50±0.42)、(29.50±0.21)比(48.50±0.31),均P＜0.05].结论 miR-373表达对乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力有抑制作用,其机制可能是miR-373低表达促进Bcl-6上调从而促进乳腺癌细胞增殖增加其侵袭作用.
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脑胶质细胞瘤体内侵袭性的实验研究
目的 探讨胶质瘤的体内侵袭和转移特性。方法 利用体外转染有绿色荧光蛋白(GFP)基因的大鼠C6脑胶质瘤细胞移植模型，将携有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的pEGFP-N3质粒体外转染C6细胞，筛选能稳定表达GFP的瘤细胞克隆，并做流式细胞仪和电镜检测。将阳性转染和未转染瘤细胞以立体定向法植入SD大鼠脑实质内，建立大鼠移植瘤模型。4周后处死大鼠并作脑连续石蜡切片，相邻切片分别行苏木素-伊红（HE）及免疫组织化学染色和荧光显微镜（激发光波长为488 nm）检测。对移植瘤细胞行原代培养，以检测荧光基因在体内的保存情况。结果 阳性转染的C6瘤细胞的EGFP在大鼠脑内获得稳定表达，在荧光显微镜下较易于区分肿瘤与非肿瘤区，并能发现侵袭至远处的单个瘤细胞，其敏感性及特异性明显优于HE染色或免疫组化方法。结论 GFP基因体外转染C6胶质瘤细胞并行大鼠脑内移植，是一种较好的研究脑胶质瘤侵袭性的体内实验模型。
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缺氧诱导因子1α过表达对人前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响
目的 观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)能否增强人前列腺癌细胞的体外侵袭能力,并探讨其分子机制.方法 用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/ml G418筛选稳定表达HIF-1α的抗性克隆.免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测侵袭相关蛋白E-钙黏素、波形纤维蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织蛋白酶D(cathepsin D)及尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)的表达,Transwell验证细胞侵袭能力.结果 与未转染细胞LNCaP相比,转染细胞LNCaP/HIF1α中出现明显的HIF-1α蛋白条带,并激发出较强荧光,E-钙黏素表达缺失,而vimentin、MMP-2、cathepsin D及uPAR表达增加.Transwell试验进一步证实,LNCaP/HIF1α穿透Matrigel滤膜的细胞数比LNCaP细胞显著增多(4.6±0.4 vs 3.2±0.3,P＜0.05).结论 HIF-1α过表达能够诱导人前列腺癌LNCaP细胞的侵袭相关蛋白表达增多,进而显著增强其体外侵袭能力.
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小干扰RNA抑制胃癌细胞肝素酶表达及侵袭的实验研究
目的 利用RNA干扰(RNAi)技术封闭胃癌细胞系SGC7901肝素酶表达,观察其对肿瘤细胞侵袭能力的影响.方法 体外转录合成小干扰RNA(siRNA),经脂质体转染胃癌细胞系;结合逆转录(RT)-PCR,Western印迹检测类肝素酶mRNA及蛋白质表达;通过体外侵袭实验评价肝素酶RNAi后胃癌细胞系的侵袭能力变化.结果 肝素酶siRNA分子可以特异性地抑制SGC7901细胞肝素酶mRNA,抑制率达(70±6)%;肝素酶RNAi后SGC7901细胞的侵袭抑制率达(61±36)%.结论 靶向肝素酶基因的siRNA分子能特异性抑制其蛋白表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭能力.肝素酶是促进胃癌细胞侵袭转移的关键分子,并可为抑制胃癌侵袭转移提供新策略.
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A20诱导沉默对鼻咽癌细胞生物学行为的影响
目的 观察A20 基因表达下调对鼻咽癌细胞体内外增殖、侵袭及转移能力的影响.方法 筛选并建立Tet-on基因表达系统诱导A20沉默的鼻咽癌肝转移亚系5-8F-H3细胞系,实时荧光定量PCR、Western印迹检测干扰效率;CCK8法、平板克隆形成实验检测A20对5-8F-H3增殖能力的影响;流式细胞仪检测细胞周期;侵袭小室检测A20对5-8F-H3侵袭能力的影响;裸鼠皮下成瘤实验和体内转移实验检测经强力霉素(DOX)诱导A20基因表达沉默对5-8F-H3在体内增殖及转移能力的影响.结果 可诱导沉默 A20 的鼻咽癌细胞5-8F-H3/A20-shRNA 构建成功.5-8F-H3/A20-shRNA经DOX诱导后,A20基因mRNA及蛋白的表达均下调(均P＜0.01);CCK8法(F＝18.542,P＝0.003)、平板克隆形成实验(F ＝40.080,P ＜0.001)及流式细胞术检测实验(F ＝7.398,P ＝0.024)结果显示A20基因表达下调明显抑制5-8F-H3在体外增殖能力;侵袭小室检测结果显示A20基因表达下调抑制5-8F-H3在体外侵袭能力(F＝26.157,P＜0.001).裸鼠皮下成瘤实验和体内转移实验结果显示A20基因表达下调明显抑制5-8F-H3在裸鼠体内的成瘤和转移能力.结论 A20与鼻咽癌多种恶性生物学行为密切相关,有望成为鼻咽癌潜在治疗靶点.
