角质细胞生长因子及其辐射防护作用

成纤维细胞生长因子(Fibrobast Groth Factor,FGF)家族由一组在结构上相关的16种蛋白质组成，其中包括初发现的酸性FGF(aFGF,FGF-1)，碱性FGF(bFGF,FGF-2)，还包括一些原癌基因的产物，如int-2(FGF-3）、hst(FGF-4)、FGF-5和FGF-6，以及角质细胞生长因子(Keratinocyte Growth Factor,KGF,FGF-7）［1］、雄激素激活因子(AIGF，FGF-8）、神经角质激活因子(GAF，FGF-9）、成纤维细胞生长因子-10(FGF-10）和4种成纤维细胞生长因子类似因子(FHFs)(FDF-11～14)及近发现的FGF-15和FGF-16。 与其他大多数FGF具有很强的广谱促细胞分裂作用相比，KGF是一种对包括胃肠道在内的各种类型的上皮细胞具高度特异的强促分裂作用的细胞因子。KGF在0.1～1．0 nmol/L的浓度范围内其浓度与细胞DNA合成呈线性关系，小浓度时可使细胞DNA合成增加600倍［1］。 一、角质细胞生长因子及其分子结构 KGF是由Rubin等人在M426肺成纤维细胞中首先发现的，具有有丝分裂原的性质［1］。纯化的KGF蛋白是分子量为26～28 kD怕热怕酸的单体。此后相应的cDNA的克隆和测序表明，KGF属于FGF家族［2］。

角质细胞生长因子对上皮细胞损伤的防护作用

角质细胞生长因子(KGF)属于成纤维细胞生长因子家族,由成纤维细胞和其他来源的基质细胞合成分泌,可特异性地促进上皮细胞的增殖分化,在多种组织器官中发挥着重要功能,尤其是在上皮细胞损伤的修复中起重要作用.KGF防护作用的机制可能是通过调节促细胞增殖、抗氧化蛋白等相关基因的表达来实现的.

重组人角质细胞生长因子对放射性和放疗性口腔黏膜炎的防治作用

目的 评价重组人角质细胞生长因子(rhKGF)对口腔黏膜炎(OM)的预防和治疗作用.方法 以MTT法检测rhKGF对32D-KGFR细胞体外增殖的促进作用.大鼠头部经15.3 Gy 60Co辐射制备放射性OM模型,预防组在照射前3 div给予rhKGF 0.75,1.5和3 mg·kg-1或帕利非明1.5 mg·kg-1,每天1次,共3次；预防+治疗组在照射前3d及照射后第2天和第4天iv给予rhKGF 1.5 mg·kg-1,共5次.小鼠iv给予5-氟尿嘧啶50 mg· kg-1,每天1次,连续4d,制备化疗性OM模型,预防组在化疗开始前3 div给予rhKGF1.25,2.5,5 mg·kg-1或帕利非明2.5 mg·kg-1,每天1次,共3次；预防+治疗组在化疗开始前3d及末次化疗后第2天和第4天iv给予rhKGF 2.5 mg· kg-1,共5次.通过观察临床症状、进食量、体质量变化、死亡率和OM发生率以及组织形态变化评价对OM的预防和治疗作用.结果 rhKGF 6.25 ～ 100 μg·L-1可促进32D-KGFR细胞增殖反应.在放射性OM模型中,正常对照组、模型组、rhKGF 0.75,1.5和3 mg· kg-1预防组、预防+治疗组及帕利非明预防组大鼠OM发生率分别为0/12,12/12,8/12,6/12,5/12,5/12和5/12,rhKGF 1.5和3.0 mg·kg-1预防组、预防+治疗组和帕利非明预防组在放疗后第6天大鼠进食量显著高于模型组(P＜0.05),第6和12天时各给药组体质量均显著高于模型组(P＜0.05)；另外,各给药组OM症状积分均降低,出现时间延迟,病程缩短.在化疗模型中,正常对照组、模型组、rhKGF预防1.25,2.5,5 mg· kg-1组、预防+治疗组及帕利非明预防组小鼠OM发生率分别为0/16,16/16,10/16,8/16,5/16,10/16和6/16,各给药组在末次化疗后第3和6天能显著缓解化疗引起的进食量减少；与模型组比较,rhKGF和帕利非明预防组小鼠肠黏膜厚度增加,绒毛膜上皮细胞增加,杯状细胞饱满粗大,小肠隐窝深度可见,绒毛形态正常,尤以rhKGF 2.5 mg· kg-1预防组作用明显；rhKGF预防+治疗组的作用不及同剂量rhKGF预防组.结论 rhKGF可预防放射性或化疗所致OM.

重组人角质细胞生长因子的体内外作用研究

目的研究重组人角质细胞生长因子(K102)在体内和体外的生物活性.方法运用3T3 BALB/c细胞和大鼠CCl4肝纤维化模型对K102在体内体外的生物活性进行测定.结果体外生物活性检测:K102明显抑制成纤维细胞的生长,bFGF对K102有一定拮抗作用,且具有剂量依赖性;体内生物活性检测:治疗给药组血清ALT,AST和肝组织羟脯氨酸含量较CCl4模型组明显改善.病理组织学检查见K102大、小剂量组肝细胞脂肪变性和水样变性比较轻,汇管区纤维组织仅有轻微增生.结论 K102的抗肝纤维化作用可能是通过促进肝细胞增生、合成代谢,以及抑制成纤维细胞生长、减少纤维组织增生而产生的.

减毒沙门菌载体在应激性溃疡基因治疗中的研究现状

近年来基因疗法发展迅速，减毒沙门菌介导的真核表达载体防治应激性溃疡的基因治疗方法已经逐步从实验及基础研究过渡到临床试用阶段，理论和技术层次上日趋成熟。而基于低氧诱导因子1α与角质细胞生长因子防治应激性溃疡的研究现状一直缺乏整理与总结，该文整理了携带双基因的重组减毒沙门菌的实现情况及存在问题，为进一步研究提供帮助。

角质细胞生长因子在卵巢癌细胞迁移和侵袭中的作用

目的 研究角质细胞生长因子(KGF)在卵巢癌细胞系侵袭和迁移过程中的作用,进一步探讨其在卵巢癌转移和侵袭过程中的分子学机制.方法 选用人类卵巢癌细胞系HO-8910PM(高转移)及小鼠NIH3T3成纤维细胞系,采用细胞划痕实验和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)分别检测不同浓度KGF对卵巢癌细胞系迁移和增殖的影响,用WesternBlot和免疫荧光法研究KGF在活化的NIH3T3中的表达,并验证IL-1β、TGF-β1以及卵巢癌细胞系的条件培养基(CM)对其表达产生的活化和诱导作用.结果 细胞划痕实验结果显示,KGF对卵巢癌细胞系的迁移能力有促进作用,其中KGF 100 pmol/L组、β0 pmol/L组和300 pmol/L组与对照组相比,差异有高度统计学意义(P＜0.01).MTT实验显示,KGF对卵巢癌细胞系的增殖有促进作用,其中KGF 100 pmol/L组与对照组相比,差异有高度统计学意义(P＜0.01).Western Blot证实IL-1β、TGF-β1及CM对KGF在成纤维细胞上的表达有诱导作用,而免疫荧光验证了IL-1β、TGF-β1及CM对成纤维细胞的活化作用.结论 KGF对卵巢癌细胞系的增殖、迁移和侵袭有促进作用,而IL-1β、TGF-β1以及CM对成纤维细胞的活化及KGF在成纤维细胞上的表达有不同程度的诱导作用.

角质细胞生长因子对人龈上皮细胞在钛金属表面附着的影响

目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)对人龈上皮细胞在钛金属表面附着的影响效果.方法:取阻生牙拔除术患者的健康龈组织块,经过相关处理获取龈上皮细胞,将该细胞在纯钛片表面接种,在重组KGF浓度调配下处理,进而计数纯钛片表面附着的细胞数,测定纯钛片表面细胞的粘附力,比较接种后6 h、1 d、5 d、10 d、15 d时不同KGF浓度下纯钛片表面附着的龈上皮细胞数目,记录KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL在培养1 d、10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与平均荧光强度(AFI).结果:接种后同一时间点,随着KGF浓度升高,龈上皮细胞数目明显增多(P<0.05),同一KGF浓度下,随着接种时间延长,龈上皮细胞数目明显增多(P<0.05);KGF浓度1 ng/mL与5 ng/mL时,培养1 d与10 d时龈上皮细胞在纯钛片表面粘附力与AFI比较,差异均有统计学意义(P<0.05),培养10 d时更高.结论:随着KGF浓度升高、接种与培养时间延长,龈上皮细胞数目明显增加,而且附着力也会随着KGF浓度升高而升高,在时间-浓度变化中,AFI也呈现随之增高趋势,可见KGF对人龈上皮细胞在钛金属表面附着影响较大,需加强重视.

角质细胞生长因子在白血病小鼠异基因脐带血移植中的作用

目的 探讨角质细胞生长因子(KGF)在白血病小鼠异基因脐带血移植(UCBT)中的作用及机制.方法 C57BL/6胎鼠外周血作为脐带血移植物.BALB/c小鼠随机数字表法分为7组,每组12只.对照1组:单纯接种白血病；对照2组:全身辐射(TBI)前第4天(-4d)接种白血病,单纯TBI处理；对照3组:不接种白血病,TBI处理后输注2×106个脐带血总有核细胞数(TNC)；对照4组:不接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射磷酸盐缓冲液(PBS)连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植后第8天(+8 d)予输血小板支持；对照5组:TBI-4 d接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射PBS连用7d,TBI后输注2×106个脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持；实验1组:不接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射KGF 1 mg/kg连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持；实验2组:接种白血病,自移植-3d起每日皮下注射KGF 1 mg/kg连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持.以生存期、病理组织学变化、脾脏淋巴细胞亚群、胸腺输出功能为观察指标并作组间比较.结果 对照1组,12只小鼠全部死于白血病,小鼠生存时间为(11.1±1.5)d；对照2组,小鼠单纯TBI处理后12只全部死于造血衰竭,生存时间为(11.5±2.5)d；对照3组,5只(5/12)小鼠生存期超过100 d,7只小鼠20 d内死于内脏出血；对照5组,白血病小鼠脐带血移植后4只(4/12)生存期超过100 d；实验2组,白血病小鼠9只(9/12)生存期超过100d.实验2组与对照5组白血病小鼠生存时间比较差异有统计学意义(Log-rank检验,x2=4.996,P=0.0254).移植后对照4组小鼠脾脏T、NK和B细胞数分别为(9.32 ±0.48)×106、(1.59 ±0.11)×106、(18.74±2.01)×106个；实验1组小鼠脾脏T、NK和B细胞数分别为(13.20±1.14)×106、(1.75±0.12)×106、(20.36±0.86)×106个,实验1组T细胞、NK细胞数均高于对照4组(均P＜0.05).实验1组信号结合T细胞受体删除DNA环(sjTREC)水平明显高于对照4组[(228±24)拷贝/105脾细胞比(167±17)拷贝/105脾细胞,P =0.002].结论 足月胎鼠外周血富含造血干祖细胞.KGF输注减少小鼠异基因脐带血移植后白血病复发,其机制为促进胸腺输出功能恢复.

角质细胞生长因子噬菌体活性肽的构建及其对表皮细胞增殖的作用

目的 构建展示角质细胞生长因子(KGF)噬菌体活性肽,检测其促表皮细胞增殖的作用.方法 选择4个KGF序列,设计引物；用反转录-PCR法获得3个KGF序列(P1、P2和P4),直接合成1个KGF序列(P3)；将KGF序列亚克隆至噬菌粒pComb3中；用噬菌体展示技术,将KGF基因片段展示于噬菌体表面；用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测KGF噬菌体活性肽促表皮细胞增殖的作用,测定其在570 nm的吸光度(A)值,用免疫荧光法检测其细胞亲和力.结果 获得4种KGF基因,构建在噬菌粒pComb3中；通过噬菌体展示技术将其表达于噬菌体的表面.MTT检测的吸光度(A)值结果显示阴性对照组(0.293±0.017)与KGF对照组(0.520±0.043)及4种KGF噬菌体活性肽组(P1 ～ 4) (0.469±0.057、0.441±0.048、0.438±0.035、0.446±0.037)间差异均有统计学意义(均P＜0.01),免疫荧光检测结果显示KGF和4种KGF噬菌体活性肽与表皮细胞具有较好的亲和力.结论 构建展示的KGF噬菌体活性肽能够显著促进表皮细胞增殖.

小鼠角质细胞生长因子重组腺病毒载体的构建

目的 探讨构建表达小鼠角质细胞生长因子(KGF)基因重组腺病毒载体的方法.方法 提取小鼠肺组织RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA后,PCR扩增目的基因片段.将获得的KGF基因插入载体质粒pShuttle-CMV,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-KGF(pKGF).线性化pKGF后,转化入含AdEasy-1病毒骨架的BJ5183细菌中.筛选正确的同源重组质粒pAdEasy-1-pShuttle-CMV-KGF(pAd-KGF),转染HEK293细胞,产生病毒颗粒AdEasy-1-pShuttle-CMV-KGF(Ad-KGF).进一步大量扩增病毒,氯化铯梯度离心纯化,测定病毒滴度.制备病毒Ad-GFP为对照,显微镜下观察转染率.结果 ①经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定,证实pKGF构建成功;②限制性内切酶酶切确定穿梭质粒重组于病毒骨架;显微镜下观察HEK293细胞形态,证实病毒包装复制成功;③病毒滴度3.0×1010 pfu/ml,达到进一步体内、外实验要求.结论 成功构建了重组腺病毒Ad-KGF,为了解KGF在肺部疾病中的作用以及进一步的基因治疗肺纤维化方法奠定了基础.

角质细胞生长因子在体外对小鼠骨髓细胞及HL-60细胞的影响

角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)是一种主要由基质细胞产生的有丝分裂原.它主要对上皮源性细胞如角质细胞、胃肠道上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞、肝细胞、乳腺上皮细胞等起作用.为探讨KGF在体外对小鼠骨髓细胞、基质细胞以及白血病细胞的作用.我们观察了KGF对小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)、骨髓基质细胞及白血病HL-60细胞的影响.

116 角质细胞生长因子减轻一次辐射照射引起的口腔粘膜炎

低氧诱导因子-1α和角质细胞生长因子双基因重组减毒沙门菌菌株的构建及其在肠上皮细胞中的表达

目的 构建同时携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体的减毒沙门菌菌株(Ty21a-pIRES-HIF-IRES-KGF,TPHK),观察其在防治肠黏膜损伤方面潜在的应用前景.方法 采用RT-PCR法从低氧处理A549细胞扩增HIF-1α cDNA后连接到载体pIRES-SEQ的NheI和MluI酶切位点,构建单基因重组质粒pIRES-HIF.然后以质粒pIRES2-EGFP-KGF为模板扩增KGF基因并克隆到重组质粒pIRES-HIF的XbaI 和NotI酶切位点上,获得双基因重组质粒pIRES-HIF-IRES-KGF.采用电穿孔法将pIRES-HIF-IRES-KGF质粒转入减毒沙门菌Ty21a中,通过筛选获得TPHK.该菌株转染肠上皮细胞IEC-6后48 h,用ELISA法检测上清中HIF1α和KGF的表达水平.并采用MTT方法分析不同剂量表达产物对IEC-6细胞的作用.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实TPHK构建成功.TPHK转染正常肠上皮细胞IEC-6后,48 h取上清用ELISA法检测HIF和KGF的表达,结果表明6×105个细胞可表达(16.03±1.47)ng的HIF蛋白和(17.77±1.83)ng的KGF蛋白.MTT结果表明表达上清有明显刺激正常肠上皮细胞IEC-6增殖的活性(P＜0.05),加入20%表达上清时刺激活性达高峰.结论 成功构建了TPHK,其可有效转染肠上皮细胞IEC-6,表达上清可显著促进IEC-6细胞增殖.提示TPHK具有潜在的在肠黏膜损伤局部应用的前景.

稳定表达角质生长因子与缺氧诱导因子的大鼠骨髓间充质干细胞的制备

目的 制备角质生长因子( KGF)与缺氧诱导因子( HIF)修饰的大鼠骨髓间充质干细胞( MSCs) ,评价细胞因子表达效率及其活性. 方法 骨髓全细胞贴壁培养法分离培养大鼠骨髓MSCs,经免疫荧光法检测细胞表面标志物后,以KGF、HIF重组腺病毒感染,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测KGF、HIF的表达水平,成骨细胞增殖实验评价KGF、HIF的活性.结果 获得了可在体外连续传代、高表达CD44、CD133表面分子的骨髓MSCs;KGF、HIF细胞因子获得稳定表达,且在感染24 h即出现表达,随培养时间的延长表达量逐渐上升,至120 h开始下降;骨髓MSCs培养上清含量为50% ~100%时成骨细胞增殖水平明显提高.结论 成功制备可稳定表达KGF、HIF的大鼠骨髓MSCs,其表达的KGF、HIF因子含量高,可促进成骨细胞的增殖,具有良好的生物活性.

角质细胞生长因子对人卵巢癌细胞系CAOV3酪氨酸蛋白激酶活性及表达的影响

目的 观察角质细胞生长因子(KGF)对人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖及酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性及表达的影响.方法 培养人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3,用四甲基偶氮蓝(MTT)比色法测定不同浓度KGF对细胞增殖的影响;通过免疫沉淀法纯化蛋白并用TPK试剂盒测定TPK活性;免疫印迹法(Western-blot)测定TPK表达.结果 实验组CAOV3细胞增殖率、TPK活性及表达均大于对照组(P＜0.05).结论 KGF可以促使人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖,机制与其增强TPK活性及表达有关.

Survivin KGF的表达与子宫内膜异位症的关系研究

目的 研究凋亡抑制蛋白Survivin及角质细胞生长因子(Keratinocyte Growth Factor,KGF)在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者卵巢异位组织及子宫内膜中的表达,及其与EMs发生发展的关系.方法 应用免疫组织化学S-P法检测30例子宫内膜异位症患者的卵巢异位内膜、在位内膜及正常内膜中Survivin、KGF的表达水平.结果 Survivin在正常内膜、EMs在位内膜及异位内膜组织中的表达阳性率逐渐升高(10.00％,36.67％,66.67％,P＜0.01);Survivin的表达与EMs的临床分期相关(P＜0.05).KGF在正常内膜、EMs在位内膜以及卵巢巧囊组织中的表达阳性率逐渐升高(43.33％,70.00％,93.33％,P＜0.01);KGF表达与EMs临床分期无关(P＞0.05).EMs中Survivin与KGF密切相关(r=0.438).结论 Survivin、KGF与子宫内膜异位症的发生有关,二者在子宫内膜异位症的发生发展中密切相关,可能为子宫内膜异位症的发生发展提供一定的理论依据,为其治疗提供新的靶点.

马氏珠母贝外套膜组织细胞体外培养技术改进及角质细胞生长因子在细胞培养中的应用

背景:关于消化外套膜组织获得的细胞悬液是否能在体外有效地扩增形成珍珠囊以及终形成珍珠仍存在争议,且这方面研究不多.目的:建立一套有效的马氏珠母贝外套膜组织细胞体外分离及培养的技术和方法,同时探讨体外形成具有完整结构和分泌功能的珍珠囊并终生成优质珍珠的佳方法.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-08/12在广西中医学院基础医学院完成.材料:贝龄1.0～2.0岁马氏珠母贝由广西北海市营盘珍珠实业有限公司提供,自配改进的海水贝类平衡盐溶液(MWBSS);自制珍珠贝血清和珍珠贝体液;角质细胞生长因子为美国Sigma公司产品.方法:使用2.5 g/L胰蛋白酶消化马氏珠母贝外套膜组织,收获的细胞使用M199(含体积分数10%胎牛血清)培养基进行培养,并在其中加入10 μg/L的角质细胞生长因子、10%自制的珍珠贝体液和贝血清,持续培养30 d.主要观察指标:细胞生长特性和生长状态.结果:体外培养的珍珠外套膜上皮细胞增殖迅速,分泌功能旺盛,肌肉细胞增殖能力强,并终能包裹外套膜上皮细胞,形成结构较完整、分泌能力较强的珍珠囊.结论:使用改进的培养技术和培养体系中添加角质细胞生长因子在体外培养珍珠外套膜组织细胞,可获得生长状态和分泌功能均较好的珍珠囊.

荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮的制备、特性及其对表皮干细胞群生长的作用

目的:构建一种荷载有角质细胞生长因子且能控制释放的新型组织工程化皮肤.方法:实验于2006-03/12于中山大学附属第二医院干细胞研究中心及中山大学高分子研究所进行.①材料:角质细胞生长因子(CytolLAB公司),牛血清白蛋白(Amresco公司),聚乳酸-羟基乙酸共聚物(由中山大学高分子化学研究所合成,聚乳酸与聚羟基乙酸摩尔比为75:25,相对分子质量为50 000),脱细胞真皮(北京桀亚莱福生物技术有限公司).②方法:采用超声乳化-溶剂挥发及低温干燥方法,将角质细胞生长因子以牛血清白蛋白作联接包裹在聚乳酸-羟基乙酸共聚物内制成纳米微囊,根据公式计算微囊成球率、载药量及包封率;将微囊溶解于二氯甲烷中,进行体外释放实验检测不同时间牛血清白蛋白吸光度,作出牛血清白蛋白释放曲线;将角质细胞生长因子纳米微囊交联于脱细胞真皮表面,制成荷载角质细胞生长因子纳米微囊脱细胞真皮(KGF-ADM),在扫描电镜下观察微囊形态、分布及其与脱细胞真皮连接情况;采用Ⅰ型胶原酶复合胰蛋白酶消化的方法,从门诊健康患者无菌手术切除的包皮组织中获取表皮细胞单细胞悬液,经免疫荧光检测,证实其中含表皮干细胞,将表皮干细胞群分别接种于KGF-ADM及聚乳酸-羟基乙酸共聚物上,于恒温箱中培养3 d后,在扫描电镜下观察细胞形态、生长情况及其与材料连接情况.结果:①纳米微囊成球率为85%,载药量为17.3%,包封率为73.5%.②纳米微囊中牛血清白蛋白可以控制缓慢释放,其释放曲线显示初期释放速度较快(前5 d累计释放约40%),后进入缓慢释放期(30 d累计释放约75%).③扫描电镜检测显示纳米微囊形态规则,在KGF-ADM表面分布均匀,与KGF-ADM联接良好,部分分布于KGF-ADM深面;表皮干细胞群在KGF-ADM上生长活跃,细胞形态良好,部分形成克隆.结论:采用该方法可成功构建荷载角质细胞生长因子纳米微囊的新型组织工程化皮肤.

利用载有角质细胞生长因子微囊的组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损

背景：组织工程皮肤作为一项新兴技术拥有良好的应用前景。有研究表明，角质细胞生长因子可以促进表皮细胞增殖。目的：观察荷载角质细胞生长因子纳米微囊的新型组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损的效果和特点。方法：构建荷载角质细胞生长因子的脱细胞真皮基质复合物；将人表皮干细胞群和成纤维细胞分离、培养，并且进行鉴定；将表皮干细胞群接种于复合物之上，观察其生长状况；将荷载角质细胞生长因子纳米微囊的组织工程皮肤移植于裸鼠皮肤缺损处，将无角质细胞生长因子纳米微囊的组织工程皮肤作为空白组，将其自体皮肤移植修复缺损组作为对照组，于移植后2，4，6周时观察皮片挛缩及组织学愈合情况，并应用抗人角蛋白10及β1-整合素免疫荧光检测修复区表皮和真皮层细胞来源、分化及生长情况。结果与结论：表皮干细胞在复合物表面生长良好，黏贴紧密，可见有连接成片趋势的小圆形的表皮干细胞及多角形的终末表皮细胞，部分形成克隆团块。移植后第2，4，6周，荷载角质细胞生长因子纳米微囊组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损的结果均优于空白组及对照组，移植的皮肤边缘与邻近皮肤完全融合，但存在一定程度的挛缩。修复区组织工程皮肤的表皮细胞分层良好并能产生角质层，同时，移植后8，10周，组织工程皮肤切片免疫荧光染色可以鉴别出少量β1-整合素阳性细胞，均为表皮干细胞或短暂扩充细胞。结果证实，荷载角质细胞生长因子纳米胶囊的新型组织工程皮肤修复裸鼠皮肤缺损的效果较好，优于普通组织工程皮肤及自体全厚皮片移植修复。

角质细胞生长因子及氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中的信号通路

背景：毛囊干细胞的增殖分化受到自身基因及外来信号的共同作用，Wnt/β-catenin信号通路在毛囊毛发发育中起重要作用，但详细机制尚未明确。
　　目的：探讨在角质细胞生长因子及氯化锂干预下，Wnt/β-catenin信号通路在人毛囊干细胞向毛囊乳突细胞或表皮细胞定向分化中的作用及与其他信号分子的相互关系。
　　方法：获取毛囊隆突区干细胞进行培养，检测其生长曲线，观察1×106 L-1、1×107 L-1、1×108 L-1和1×109 L-1培养的毛囊干细胞在不同时间点的增殖效应；使用免疫荧光染色法对毛囊干细胞及其分化细胞进行鉴定。分别以0，0.5，1.5，10，25 mmol/L氯化锂及0，10，25，50，100μg/L角质细胞生长因子诱导毛囊干细胞分化，对比各组细胞的增殖效应，探索促毛囊干细胞分化的佳氯化锂及角质细胞生长因子浓度。使用RT-PCR检测未处理对照组、10 mmol/L氯化锂组和10μg/L角质细胞生长因子组干预后3，5，7，9 d细胞的β-catenin、APC、GSK-3β、Axin和Lef1的mRNA转录水平。
　　结果与结论：分离培养的毛囊干细胞在体外经多次传代后仍具有很强的增殖能力和多向分化潜能，随氯化锂浓度升高，细胞增殖效应减弱；而随角质细胞生长因子组质量浓度增高细胞增殖能力增强。含有氯化锂的K-SFM条件培养基中毛囊干细胞形态改变明显，各组间有明显差别，氯化锂>10 mmol/L时分化比例高，β-catenin表达量增高；而含有角质细胞生长因子K-SFM条件培养基中毛囊干细胞向表皮细胞分化，β-catenin变化不明显。提示氯化锂在促毛囊干细胞分化中，激活 Wnt/β-catenin 信号通路，抑制降解复合物重要成分GSK-3β的表达下降，促使β-catenin在细胞浆表达增加并转入核内，增加靶基因转录，促使毛囊干细胞向毛囊细胞方向分化。氯化锂>10 mmol/L是促毛囊干细胞分化的佳浓度，但增殖效应减弱。角质细胞生长因子可促进毛囊干细胞向表皮分化，可促进毛囊干细胞增殖和迁移，促进创面再上皮化及创面愈合。氯化锂和角质细胞生长因子促毛囊干细胞定向分化的作用机制可能为激活Wnt/β-catenin信号通路，促使β-catenin表达改变，从而激活Wnt信号通路中Lef介导相关靶基因的转录。