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敷胸膏对流感病毒肺炎大鼠肺组织JNK,MKK4表达的影响
目的:探讨清肺通络敷胸膏对流感病毒肺炎大鼠肺组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK),丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)表达的影响,并探讨其作用机制.方法:幼龄Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、敷胸膏高、中、低剂量组(21.0,10.5,5.25g·kg-1),每组10只.除正常组外,其余各组采用甲型流感病毒鼠肺适应株A/FM/47(H1N1)0.1 mL滴鼻建立流感病毒肺炎模型,造模成功后各治疗组给予不同剂量敷胸膏治疗5d.苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肺组织病理变化,免疫组化检测大鼠肺组织中JNK及MKK4的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)进一步检测肺组织中JNK及MKK4 mRNA表达水平.结果:HE染色结果提示,与模型组比较,敷胸膏高、中、低剂量组能明显改善流感病毒肺炎大鼠肺组织损伤程度,随剂量增大而逐渐增强.免疫组化与Resl-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组JNK,MKK4蛋白及mRNA表达显著增强(P＜0.05);与模型组比较,敷胸膏高、中、低剂量组JNK,MKK4蛋白及mRNA表达均显著减弱(P＜0.05).结论:敷胸膏对流感病毒肺炎大鼠的保护作用机制可能与下调MAPKs信号通路中JNK,MKK4的表达有关.
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骨髓间充质干细胞成骨分化研究进展
骨髓间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的干细胞，可作为种子细胞，修复和重建损伤或发生病变的多种组织器官，在再生医学领域中具有潜在的应用前景。在其向成骨方向的分化过程中，由多种通路、多种因子参与，其中包括细胞因子、生长因子和激素等。本文对骨髓基质干细胞的成骨分化进行了综述。
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尼古丁对PDLFs细胞MAPKs信号通路影响
目的 探讨尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)凋亡过程中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用及作用机制.方法 采用不同浓度的尼古丁(1、10和100μg/mL)作用于PDLFs细胞24h后,使用逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)测定JAK 1、JAK 2、MAPKK、MAPK、JNK、p38和ERK的基因表达水平；Western blot检测caspase-3蛋白的表达水平.结果 浓度分别为1、10和100 μg/mL的尼古丁作用于PDLFs细胞24h后,JAK 1转录水平表达量分别为(65.17±8.45)、( 106.17±22.22)和(115.50±8.12),JAK 2转录水平表达量分别为(103.00±13.13)、(118.17±13.17)、(159.00±13.74),MAPK转录水平表达量分别为(126.69±18.20)、(143.02±13.97)、(172.64±26.43),MAPKK转录水平表达量分别为(79.17±4.49)、(115.67±7.66)、(122.33±8.41),p 38转录水平表达量分别为(110.64±11.14)、(128.54±11.72)、(132.90±11.99),JNK转录水平表达量分别为(106.16±26.89)、(123.17±13.09)、(132.68±11.97),Caspase 3转录水平表达量分别为(131.52±19.85)、( 144.76±13.87)、(153.59±13.85),Caspase 3蛋白翻译水平表达量分别为(128.33±13.50)、(144.00±12.53)、(153.00±12.77),与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；随着尼古丁剂量的增加,这些基因表达均呈逐渐增高趋势；而ERK的表达水平则无明显变化.结论 尼古丁通过介导p 38-MAPK和JNK-MAPK通路诱导人PDLFs细胞凋亡,并导致凋亡执行蛋白Caspase3的表达增加.
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MAPKs信号通路在动脉粥样硬化发生发展中的调控作用
丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路是生物体内重要的信号传导通路,其主要参与调控细胞的增殖、生长、分化、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程.MAPKs信号通路在多种心血管疾病的病理过程中起着重要调控作用.动脉粥样硬化(athrosclerosis,AS)所致的各种急重症严重危害人类的健康,发病率呈逐年上升的趋势,但是动脉粥样硬化发生发展的分子机制尚不完全清楚.近年来,MAPKs信号通路在动脉粥样硬化(athrosclerosis,AS)的发生发展中的作用已成为是研究的热点.
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莫沙必利对阿司匹林致大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用
背景:研究显示促胃肠动力药物莫沙必利对胃黏膜损伤具有一定的保护作用.目的:研究不同剂量莫沙必利对阿司匹林致大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用及其机制.方法:将50只大鼠随机分为阴性对照组、单纯损伤组以及不同剂量莫沙必利干预组(0.25 mg/kg、0.50 mg/kg、0.75 mg/kg).干预组大鼠以不同剂量莫沙必利灌胃行预处理,以150 mg/kg阿司匹林灌胃制备急性胃黏膜损伤模型.实验第4d,处死大鼠.评估大鼠胃黏膜损伤指数和组织学变化,以免疫组化法检测Occludin蛋白分布,蛋白质印迹法检测Occludin、ZO-1以及磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化p38(p-p38)蛋白表达.结果:与单纯损伤组相比,各莫沙必利干预组胃黏膜损伤指数均明显降低(P＜0.05)；胃黏膜组织学明显改善；胃黏膜Occludin、ZO-1蛋白表达呈剂量依赖性升高(P＜0.05)；胃黏膜p-ERK、p-p38蛋白表达呈剂量依赖性降低(P＜0.05)；而胃黏膜p-JNK蛋白表达无明显差异.结论:莫沙必利对阿司匹林致大鼠急性胃黏膜损伤具有明显保护作用,其机制可能为降低MAPKs信号通路中ERK和p38蛋白磷酸化程度,并上调胃黏膜紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达,从而改善胃黏膜屏障的功能.
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经筋微创松解疗法对膝骨关节炎兔软骨细胞凋亡的抑制作用及机制
目的 观察经筋微创松解疗法对膝骨关节炎兔软骨细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 将30只健康白兔随机均分为正常组、模型组与治疗组.模型组和治疗组采用膝关节制动法制备关节炎动物模型.治疗组给予经筋微创松解疗法治疗4周,其余两组不做处理.耳缘静脉空气栓塞法处死实验动物,取其胫骨软骨组织及膝关节液.用TUNEL细胞凋亡检测法测算膝关节软骨细胞凋亡指数,用ELISA法检测各组膝关节液中白细胞介素1β(IL-1β)、转化生长因子β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),Western blotting技术检测膝关节软骨组织中氨基末端激酶(JNK)和细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达.结果 模型组膝关节软骨细胞凋亡指数及膝关节液中IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平,ERK、JNK蛋白相对表达量与对照组比较,P均<0.05;治疗组软骨细胞凋亡指数及膝关节液中IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平,ERK、JNK蛋白相对表达量与模型组比较,P均<0.05.结论 经筋微创松解疗法可抑制膝骨关节炎兔软骨细胞凋亡,其作用机制可能为降低关节液中炎性因子水平及软骨细胞MAPKs信号通路相关蛋白表达.
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茯苓-桂枝药对在MAPK信号通路下对急性心肌缺血大鼠的作用
目的 探讨茯苓-桂枝药对在MAPK信号通路下保护大鼠急性心肌缺血的作用机制,为临床应用提供科学依据.方法 将45只SPF大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(model)、茯苓组、桂枝组、茯苓桂枝组,通过结扎冠状动脉左前降支造成大鼠急性心肌缺血损伤模型,分别用药物进行干预,各组动物实验时缺血30min后,以心电图标准导联Ⅱ的ST段电位值变化为指标,观察各组对大鼠急性心肌缺血心电图的改善作用.大鼠断头取血,测定急性心肌缺血大鼠的血清肌酸酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平、超氧化物歧化酶(SOD)以及血清丙二醛水平.采用Western blotting法观察丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号通路细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)、C-jun氨基端激酶(C-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38MAPKs磷酸化水平的影响,探讨茯苓-桂枝药对在MAPK信号通路下对大鼠急性心肌缺血的作用.结果 茯苓桂枝配伍后对急性心肌缺血时ST段的提高有较强的抑制作用,与模型组比较有明显差异(P＜0.01);茯苓桂枝组能明显降低急性心肌缺血大鼠血清中CK-MB、LDH的含量和MDA活性以及升高SOD活性(P＜0.05或P＜ 0.01);经Western blot结果显示,茯苓桂枝可以有效抑制大鼠急性心肌缺血细胞损伤,其机制与MAPK通路有关.结论 茯苓桂枝配伍后抗急性心肌组织损伤的效果更为显著;3种丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)在瓜蒌薤白药对对抗急性心肌缺血中发挥不同的作用.
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隐丹参酮诱导人食管癌HCE-4细胞凋亡的机制
目的 探讨隐丹参酮对食管癌HCE-4细胞的药效和药理机制.方法 MTT比色法检测隐丹参酮对人食管癌HCE-4和TE-2细胞的杀伤作用.倒置显微镜观察隐丹参酮处理后HCE-4细胞形态学变化.Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测隐丹参酮对HCE-4细胞的诱导凋亡作用、活性氧水平及加入活性氧清除剂NAC后细胞凋亡情况.Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达量.结果 MTT比色法检测结果显示隐丹参酮对HCE-4和TE-2细胞均具有良好的杀伤作用.经隐丹参酮处理后,HCE-4细胞呈现细胞核固缩、细胞变圆、悬浮细胞增多的现象.Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测结果表明隐丹参酮可以诱导HCE-4细胞发生凋亡,增加细胞内活性氧的水平,预处理NAC后,隐丹参酮的诱导凋亡作用被抑制.Western blot检测结果显示促凋亡蛋白p-JNK、p-p38、Bad、Caspase-3及PARP表达量升高,抗凋亡蛋白p-ERK、p-AKT及Bcl-2表达量降低.结论 隐丹参酮对人食管癌HCE-4细胞具有良好的杀伤作用,其机制可能是隐丹参酮上调ROS的水平,调控MAPK和AKT信号途径,进而诱导食管癌HCE-4细胞发生凋亡.
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敲低LRP1基因对TNF-α诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响
目的 探讨大鼠软骨细胞膜蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)对炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠软骨细胞损伤的影响.方法 将慢病毒包装的LRP1-shRNA转染原代培养的软骨细胞.转染3d后使用ERK磷酸化抑制剂PD098059(10μmol/L)和P38磷酸化抑制剂SB203580(10μmol/L)分别预处理对照组和shLRP1组软骨细胞30 min,再以TNF-α(30 ng/mL)作用软骨细胞30 min,收集总蛋白行Western blot检测软骨细胞MAPKs通路蛋白和凋亡蛋白表达.收集经TNF-α(30 ng/mL)作用12h的软骨细胞培养液,采用ELISA法检测MMP-13表达水平.结果 经TNF-α作用后,shLRP1组软骨细胞MAPKs通路蛋白ERK、P38活性、MMP-13表达均较对照组明显提高,且可以被PD098059和SB203580所拮抗(均P＜0.05);凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达较对照组有明显提高,抑凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达较对照组明显降低(均P＜0.05).结论 在TNF-α诱导的大鼠软骨细胞损伤中,敲低LRP1表达可激活MAPK通路,上调MMP-13表达和促进细胞凋亡,LRP1有望成为骨关节炎治疗的靶点.
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丹皮酚抑制人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭及对MAPKs信号通路的影响
目的 探讨中药单体丹皮酚对人肺癌A549细胞系增殖、侵袭和迁移能力以及MAPKs信号通路的影响.方法 采用CCK-8法检测不同浓度丹皮酚对肺癌A549细胞系的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50).通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测丹皮酚对A549细胞迁移及侵袭能力的影响.酶联免疫吸附法(ELISA)检测丹皮酚处理24 h后培养上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平.Western blot法检测A549细胞内MAPKs信号通路中p-ERK、p-JNK及p-p38等关键蛋白表达水平的变化情况.结果 丹皮酚对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,对A549细胞的IC50为(54.68±3.59) μg·mL-1.丹皮酚以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移.ELISA检测发现丹皮酚可以抑制A549细胞分泌MMP-2、MMP-9蛋白.Western blot结果提示丹皮酚可抑制MAPKs信号通路中ERK通路磷酸化蛋白p-ERK的表达,而对p38、JNK通路的磷酸化水平无明显影响.结论 在一定浓度范围内,丹皮酚可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,下调分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表达,其机制可能与抑制MAPKs信号通路中的ERK通路有关.
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自噬反应对大鼠创伤性颅脑损伤后神经功能的影响及机制研究
目的 探讨自噬反应对大鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后神经功能修复的影响及丝裂素活化蛋白激酶家族(MAPKs)信号通路在其中的作用. 方法 健康雄性SD大鼠54只按随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组18只;后2组大鼠采用改良Feeney法建立TBI模型,假手术组大鼠仅开骨窗不予撞击.TBI+3-MA组大鼠于造模后30 min腹腔注射3-MA(5 mg/kg),其余2组大鼠腹腔注射等量生理盐水.造模后1、3、7d酶联免疫吸附法检测3组大鼠血清中S100B和神经元特异性烯醇化酶(NSE)蛋白的浓度,采用改良神经功能评分(mNSS)对大鼠进行运动、感觉和反射功能检查并测定脑组织含水量;造模后3 d Western blotting检测大鼠脑组织自噬相关因子微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关基因-1 (Beclin-1)以及c-jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK (p-JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表达. 结果 与假手术组比较,TBI组、TBI+3-MA组大鼠造模后1、3、7d血清神经损伤标志物S100B和NSE蛋白、mNSS评分、脑组织含水量升高,差异有统计学意义(P＜0.05).TBI+3-MA组造模后3、7 d S100B和NSE蛋白,造模后1、3、7 dmNSS评分、脑组织含水量均低于TBI组,差异有统计学意义(P＜0.05).其中造模后3d假手术组、TBI组、TBI+3-MA组大鼠mNSS评分分别为1.10±0.27、11.76±0.35、10.71±0.33;与假手术组比较,TBI组、TBI+3-MA组大鼠造模后3d脑组织LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白以及JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2 、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达上调,差异有统计学意义(P＜0.05).与TBI组比较,TBI+3-MA组大鼠造模后3d脑组织LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白,p-JNK和p-p38MAPK蛋白表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 抑制自噬反应能改善颅脑损伤后的神经功能,起到神经保护作用,其机制可能是通过抑制MAPKs家族中的JNK和p38MAPK信号传导通路来实现.
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芦荟苷通过调控MAPKs信号通路诱导胃癌细胞凋亡
目的 探讨芦荟苷对人胃癌MKN-28和HGC-27细胞凋亡的诱导作用及可能的分子机制.方法 胃癌MKN-28和HGC-27细胞用含10％胎牛血清和NEAA(HGC-27细胞)的1640完全培养基常规培养,不同浓度的芦荟苷处理胃癌MKN-28和HGC-27细胞特定的时间,CCK-8实验检测芦荟苷对MKN-28和HGC-27细胞活力的影响;DAPI染色观察凋亡细胞核的形态改变;AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关蛋白PARP和procaspase-3的表达及MAPKs信号通路p38,ERK及JNK的磷酸化水平;p38,ERK及JNK的特异性抑制剂处理细胞,WB检测抑制剂的对p38,ERK及JNK激活的抑制效果,DAPI染色观察抑制剂对胃癌细胞凋亡的影响.结果 芦荟苷浓度依赖性地抑制胃癌MKN-28和HGC-27细胞的活力,诱导胃癌细胞凋亡;芦荟苷处理胃癌细胞后,胞内JNK和p38的磷酸化水平明显增加,而ERK的磷酸化水平下降.特异性抑制剂阻断ERK活化,能够增强芦荟苷诱导的细胞凋亡,阻断p38和JNK的激活,能够部分逆转芦荟苷诱发的胃癌细胞凋亡.结论芦荟苷通过激活JNK和p38信号途径,抑制ERK信号途径诱导胃癌细胞凋亡.
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3,6-二羟黄酮降低白血病细胞HL-60抗氧化酶活性并影响MAPKs信号通路
目的 观察3,6-二羟黄酮对白血病细胞HL-60抗氧化酶活性及MAPKs信号通路的影响,探讨其抗肿瘤作用分子机制.方法 采用CASY-TT亚流式细胞分析技术测定3,6-二羟黄酮对白血病HL-60细胞存活率的影响;化学比色法测定3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞后,细胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活性变化;Western blot检测胞内ERK、p38MAPK及JNK蛋白磷酸化水平变化.结果 3,6-二羟黄酮显著降低HL-60细胞存活率,其作用呈剂量和时间依赖性;20 μmol/L 3,6-二羟黄酮作用于HL-60细胞,胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.05);Western blot检测结果表明,20 μmol/L 3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞2、8、24 h,P-ERK蛋白水平明显降低(P<0.01)、P-p38MAPK和P-JNK的蛋白水平则显著升高(P<0.01).结论 3,6-二羟黄酮可显著降低HL-60细胞内抗氧化酶活性,增加胞内氧化应激压力,并由此影响MAPKs信号通路,这可能是其诱导HL-60细胞凋亡和增殖抑制的重要分子机制.
