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FGF4在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用
目的 观察成纤维生长因4(FGF4)在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用.方法 取乳腺癌组织及癌旁正常组织各40例份,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA.培养正常乳腺细胞株MCF-10A、低转移乳腺癌细胞株T47D、高转移乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA,Western blotting法检测FGF4蛋白.收集T47D,利用pCDNA3.1-FGF4构建过表达FGF4的T47D稳定细胞株T47D-FGF4-oe,以只转染pCDNA3.1的细胞株T47D-NC作为作为阴性对照组;收集MDA-MB-231,利用RNA干扰技术敲除FGF4构建稳定表达FGF4-shRNA的细胞株MDA-MB-231-FGF4-si,以MDA-MB-231-NC作为阴性对照组;Westernblotting法检测FGF4蛋白,MTT实验及划痕实验检测细胞增殖、迁移能力.结果 乳腺癌组织中FGF4 mRNA表达高于癌旁组织(P＜0.05).CF-10A、T47D细胞FGF4 mRNA和蛋白灰度值均低于MDA-MB-231细胞,T47D细胞FGF4蛋白灰度值低于MDA-MB-231细胞(P均＜0.05).T47 D-FGF4-oe细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度高于T47D-NC细胞,划痕距离小于T47D-NC细胞(P均＜0.05).MDA-MB-231-FGF4-si细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度低于MDA-MB-231-NC细胞,划痕距离大于MDA-MB-231-NC细胞(P均＜0.05).结论 FGF4在乳腺癌中显著高表达,并有促进乳腺癌细胞株增殖及转移的作用.
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人DNMT3A基因慢病毒载体构建及其乳腺癌细胞MDA-MB-231稳定表达株的建立
目的 构建人类DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)蛋白过表达慢病毒载体并建立乳腺癌细胞MDA-MB-231稳定表达株.方法 从乳腺癌细胞MDA-MB-231中提取总RNA,逆转录出含DNMT3A的cDNA;以DNMT3A的cDNA为模板,根据其CDS序列设计含有EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶位点的引物序列,采用PCR法扩增出带有双酶切位点的目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到到慢病毒表达质粒pLVX-IRES-Hyg中,获得重组的pLVX-FLAG-DNMT3A表达载体.重组的pLVX-FLAG-DNMT3A表达载体通过与包装质粒共转染293T细胞,获得携带FLAG-DNMT3A的重组慢病毒.以慢病毒感染MDA-MB-231细胞,48 h后在培养基中加入1μg/μL的嘌呤霉素,筛选出稳定表达DNMT3A蛋白的细胞株,检测稳定株及野生型细胞DNMT3A蛋白及mRNA表达水平.结果 构建的重组质粒经菌落PCR、重组质粒双酶切、质粒PCR验证及测序比对鉴定正确.用病毒感染MDA-MB-231细胞,药物筛选后获得的过表达稳定株中,DNMT3A蛋白及mRNA表达水平分别为13.2±0.48、107.10±0.46,均高于野生型及空载对照.结论 成功构建了DNMT3A基因慢病毒表达载体pLVX-FLAG-DNMT3A,并在MDA-MB-231细胞中筛选出稳定表达DNMT3A的细胞株,为进一步探讨DNMT3A在乳腺癌中的作用提供了体外细胞系模型.
关键词： DNMT3a基因 慢病毒载体 MDA-MB-231细胞 乳腺癌 -
榄香烯乳对乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7凋亡的影响
目的 观察中成药榄香烯乳对乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7凋亡的影响.方法 榄香烯乳作用于MDA-MB-231及MCF-7细胞作为处理组,同时设立空白对照组；倒置显微镜观察细胞形态,结晶紫实验检测不同浓度榄香烯乳作用下的细胞生长速率,实时定量PCR检测MDA-MB-231细胞凋亡指标Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达.结果 与空白对照组比较,榄香烯乳达到一定浓度时,能够有效地抑制MDA-MB-231及MCF-7细胞的生长速率(P＜0.05),且呈剂量依赖性；与空白对照组比较,浓度为40 μg/mL时,细胞的形态呈现典型的凋亡改变；空白对照组MDA-MB-231细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达量(× 107拷贝量)分别为56.7±15.7、140.3±25.6、13.1±4.4,经榄香烯乳处理48 h后分别为812.2±222.6、327.8±50.1、5.7±1.5,与空白对照组比较,经榄香烯乳处理后Caspase-3、Caspase-8表达量升高(P均＜0.05),Caspase-9含量无明显变化(P＞0.05).结论 榄香烯乳可以有效抑制乳腺癌细胞生长的能力,并可诱导细胞凋亡.
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不同片段的NPM1-EGFP融合表达载体的构建和表达
目的 构建不同片段的NPM1与绿色荧光蛋白(EGFP)的真核融合表达质粒,检测其在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达和定位.方法 RT-PCR法从人乳腺癌MDA-MB-231细胞cDNA中扩增不同片段的NPM1,产物经电泳分离、切胶纯化后,分别采用Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ进行酶切,然后与同样酶切后的pEGFP-C3载体进行连接反应,将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,挑取克隆,提取质粒并酶切鉴定.将酶切及测序鉴定后的pEGFP/NPM1质粒采用脂质体介导后将其转入MDA-MB-231细胞中,通过Western blot技术检测其蛋白的表达.倒置荧光显微镜观察其亚细胞定位.结果 酶切鉴定和基因测序结果显示不同片段的pEGFP-NPM1融合表达质粒构建成功,并可在MDA-MB-231细胞内表达,倒置荧光显微镜下可以清晰显见融合蛋白的亚细胞定位.结论 NPM1及其不同结构域的真核重组质粒构建成功,在细胞中成功表达,并可以用于分析其亚细胞定位,从而为进一步研究NPM1在乳腺癌发生发展中的作用奠定基础.
关键词： 乳腺肿瘤 NPM1 质粒 MDA-MB-231细胞 定位 -
miRNA-138在TGF-β1诱导的乳腺癌上皮间质转化发生中的作用
目的:探讨miRNA-138在TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化(EMT)发生中的作用.方法:0.005 g/L TGF-β1刺激MDA-MB-231细胞48 h,以未刺激细胞作为空白对照,RT-PCR和Western blot检测MDA-MB-231细胞E-cadherin和vimentin mRNA、蛋白表达的变化,RT-PCR检测miRNA-138表达的变化.MDA-MB-231细胞转染100 nmol/L miRNA-138拟似物48 h,以转染100 nmol/L miRNA无关序列细胞、单纯转染脂质体细胞和空白细胞作为对照,RT-PCR检测miRNA-138表达的变化,RT-PCR和Western blot检测MDA-MB-231细胞E-cadherin和vimentin mRNA、蛋白表达的变化.0.005 g/L TGF-β1刺激同时转染100 nmol/L miRNA-138拟似物48 h,以0.005 g/L TGF-β1刺激同时转染100 nmol/L miRNA无关序列和空白细胞作为对照,RT-PCR和Western blot检测MDA-MB-231细胞E-cadherin和vimentin mRNA、蛋白表达的变化.结果:与空白对照组相比,0.005 g/L TGF-β1刺激MDA-MB-231细胞48 h可降低E-cadherin表达,提高vimentin表达,抑制miRNA-138表达(P<0.05).与其他3组相比,转染100 nmol/L miRNA-138拟似物48 h组MDA-MB-231细胞E-cadherin表达升高,而vimentin表达降低(P<0.05).与其他2组相比,miRNA-138表达增加可部分逆转TGF-β1刺激诱导的MDA-MB-231细胞EMT的发生.结论:miRNA-138参与TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞EMT的发生.
关键词： miRNA-138 TGF-β1 EMT MDA-MB-231细胞 乳腺癌 -
疏肝益肾方联合内分泌药物对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响
目的:探讨疏肝益肾方联合内分泌药物对激素依赖型乳腺癌患者人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖凋亡的影响.方法:选择确诊为激素依赖型乳腺癌患者作为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组和对照组.观察组给予疏肝益肾方联合内分泌药物治疗,对照组给予内分泌药物治疗.观察两组患者临床治疗效果及人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231的表达.结果:治疗后两组患者CA125、CA153水平较治疗前有明显升高(P＜0.05),且观察组明显优于对照组(P＜0.05);治疗后,对照组CD3+、CD4+、CD4 +/CD8+下降,CD8+上升,观察组CD3+、CD4+、CD4 +/CD8+升高,CD8+下降,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);两组患者治疗后MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖抑制作用有显著提高(P＜0.05),且观察组显著优于对照组(P＜0.05);两组患者治疗后细胞凋亡率明显上升(P＜0.05),且观察组显著优于对照组(P＜0.05);治疗后观察组1年生存率、2年生存率、中位疾病进展时间及转移后中位生存期均明显高于对照组(P＜0.05).结论:疏肝益肾方联合内分泌药物治疗激素依赖型乳腺癌疗效显著,能够抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和加快其凋亡.
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芦荟大黄素与顺铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞Bcl-2及Bcl-xL表达水平的影响
目的 探讨芦荟大黄素与顺铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞的Bcl-2及Bcl-xL表达水平的影响.方法 培养MDA-MB-231细胞,随机分为空白对照组、芦荟大黄素组、顺铂组和联合用药组.芦荟大黄素组给予30 mol/L芦荟大黄素处理,顺铂组给予12 mol/L顺铂处理,联合用药组给予30 mol/L芦荟大黄素+12 mol/L顺铂处理,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot检测Bcl-2及Bcl-xL蛋白表达.结果 联合用药组对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率为(68.48±8.75)％,高于芦荟大黄素组[(54.28±8.39)％]与顺铂组[(52.04±9.11)％],P<0.05;联合用药组G0/G1细胞比例为(87.91±9.10)％,高于芦荟大黄素组[(64.21±8.45)％]、顺铂组[(67.08±9.82)％]和空白对照组[(56.38±7.93)％],比较差异有统计学意义(P<0.05);芦荟大黄素组与顺铂组G0/G1(64.21±8.45、67.08±9.82)细胞比例均高于空白对照组(56.38±7.93),P<0.05.联合用药组细胞凋亡率为(17.38±3.20)％,高于芦荟大黄素组的(7.84±0.83)％、顺铂组的(6.90±1.10)％和空白对照组的(0.63±0.07)％,P<0.05;芦荟大黄素组与顺铂组细胞凋亡率均高于空白对照组(P<0.05).空白对照组Bcl-2和Bcl-xL蛋白相对表达量分别为1.02±0.16、1.01±0.17,均高于芦荟大黄素组(0.67±0.10、0.52±0.11)、顺铂组(0.70±0.11、0.50±0.09)和联合用药组(0.64±0.13、0.13±0.04),P<0.05;联合用药组Bcl-xL蛋白相对表达量低于芦荟大黄素组和顺铂组(P<0.05).联合用药组MDA-MB-231纤连蛋白和层粘连蛋白抑制率分别为28.10±4.10、30.01±9.82,高于芦荟大黄素组(13.28±3.10、14.28±6.72)和顺铂组(14.50±3.32、15.10±7.08),P<0.05.联合用药组MDA-MB-231细胞侵袭能力抑制率为(54.27±8.83)％,高于芦荟大黄素组的(28.10±8.22)％和顺铂组的(30.10±9.10)％,P<0.05.结论 芦荟大黄素与顺铂能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭,将细胞周期阻滞在G0/G1期,下调Bcl-2和Bcl-xL蛋白,两者联合作用增强.
关键词： 芦荟大黄素 顺铂 MDA-MB-231细胞 Bcl-2 Bcl-xl -
冬凌草甲素通过激活caspase途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡
目的 研究冬凌草甲素诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用原理及caspase途径在凋亡过程中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法,形态学观察,RT-PCR及流式细胞法.结果 冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性.形态学观察可见MDA-MB-231的增殖受明显抑制.冬凌草甲素可诱导细胞内抑制凋亡基因Bc1-xl表达量时间依赖性减少,促凋亡基因Bid表达量增加,caspase-3 的表达增加.40 μmol/L药物处理48 h后,流式法检测细胞凋亡率为75%.结论 冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡,这种作用可能是通过改变Bc1-xl/Bid的表达比率、激活caspase-3 而实现的.
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鞘氨醇激酶1参与依托泊苷抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞
目的 利用抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞中SK-1基因表达,结合依托泊苷对细胞增殖的影响,研究乳腺癌的治疗新方法.方法 将依托泊苷分别处理野生型及SK-1敲除型MDA-MB-231细胞,3H-TdR掺入法分析细胞增殖,Transwell法分析细胞迁移,Western印迹检测SK-1蛋白表达及细胞周期检验点相关信号因子的蛋白表达,RT-PCR检测细胞内SK-1的mRNA表达量.结果 依托泊苷在较高剂量时,MDA-MB-231细胞存活率明显下降,但依托泊苷却呈浓度依赖性促进乳腺癌细胞SK-1 mRNA及蛋白水平表达,将SK-1敲除,细胞迁移率下降,而且可以增强G1期各抑癌基因的激活或高表达,使细胞周期阻滞.结论 SK-1基因敲除有效增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.
关键词： 鞘氨醇激酶1 依托泊苷 MDA-MB-231细胞 细胞周期检验点 -
c-Met抑制剂PHA665752诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用
肝细胞生长因子(HGF)的特异性受体c-Met与乳腺癌的发生发展密切相关,其过度表达可以作为判断乳腺癌预后差的独立指标[1].本研究旨在观察PHA665752诱导乳腺癌细胞凋亡的作用.
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七氟醚对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制
目的:探究七氟醚与乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移的关系以及作用机制.方法:采用不同浓度七氟醚处理MDA-MB-231细胞6 h,分为对照组、1.7％给药组、3.4％给药组、5.1％给药组,划痕实验和Transwell小室法观察细胞的迁移、侵袭能力,采用Western印迹法检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)、MMP-9、钙黏蛋白E(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)的水平.结果:与对照组相比,七氟醚处理MDA-MB-231细胞迁移率和侵袭细胞数随着浓度的增加而降低(P<0.05).MDA-MB-231细胞经七氟醚干预后,细胞中MMP-2,MMP-9,E-cadherin,β-catenin蛋白水平显著降低(P<0.05),且随着浓度的增加逐渐降低;Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl作用于5.1％七氟醚干预6 h的细胞,细胞中β-catenin和E-cadherin蛋白水平明显增加,侵袭、迁移能力显著提高.结论:七氟醚可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响MMP-2,MMP-9蛋白水平,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移能力.该效应具有浓度依赖性,为乳腺癌的治疗提供新的理论基础.
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原花青素促进三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用机制研究
目的 研究原花青素(Procyanidins,PC)对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖及细胞凋亡的作用及其机制.方法 常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、 对照组和PC10、20、40、80、160、320μg/mL组.MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测FoxA1蛋白及抗凋亡蛋白bcl2、UCP2表达.结果 PC各剂量组均可显著抑制抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05);PC(10-160μg/mL)组剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),PC(40-320μg/mL)可以时间依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);PC320μg/mL组各时间点细胞抑制率与PC160μg/mL组差异无显著性(P>0.05);160μg/mL PC可以时间依赖性促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05);160μg/mL PC作用24 h后,FoxA1蛋白表达显著上升(P<0.05),同时bcl2及UCP2表达降低(P<0.05).结论 PC抑制MDA-MB-231细胞,促进MDA-MB-231细胞凋亡,升高其FoxA1表达,同时降低bcl2及UCP2表达,表明PC可能通过促进FoxA1表达发挥促进MDA-MB-231细胞凋亡的作用.
关键词： 原花青素 MDA-MB-231细胞 三阴乳腺癌 FoxA1细胞凋亡 -
长链非编码GATS表达干扰质粒构建抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭的研究
目的 探讨长链非编码GA TS对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 构建的人LncRNA-GATS-shRNA1 ～4慢病毒载体转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,qPCR筛选出干扰效率为50.0％和54.0％的sh1组和sh3组,MTT法和Transwell实验分别检测转染后细胞增殖和侵袭能力;流式细胞术检测转染sh1组慢病毒后细胞周期分布及凋亡变化.结果 测序证实,LncRNA-GA TS的shRNA寡聚核苷酸序列已被克隆到p LV-GA TS载体;转染MDA-MB-231细胞后,与阴性对照组比较,sh1组和sh3组的乳腺癌细胞增殖和侵袭能力均降低(P＜0.01),以sh1组更显著;sh1组细胞周期被阻滞于S期(P＜0.01);细胞凋亡率无明显变化(P＞0.05).结论 LncRNA-GATS可能下调乳腺癌细胞侵袭力,并通过抑制细胞周期进展降低细胞增殖能力.
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miR－193b 体外协同增强多柔比星对乳腺癌细胞的抗肿瘤效应
目的：研究微小RNA（ microRNA，miR）－193b是否能增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤效力及机制。方法：用real－time PCR方法检测乳腺癌患者及健康对照者血浆中的miR－193b表达水平。 MTT法检测miR－193b联合多柔比星对乳腺癌细胞系MDA－MB－231的杀伤效力。利用生物信息学、real－time PCR及Western blot 方法验证miR－193b是否调节乳腺癌细胞Mcl－1的表达。构建Mcl－1真核表达载体，MTT法检测Mcl－1表达载体转染对miR－193b联合多柔比星治疗乳腺癌疗效的影响。结果：乳腺癌患者血浆中miR－193b表达水平显著低于对照组。 miR－193b联合多柔比星治疗组对MDA－MB－231细胞的杀伤效力显著高于多柔比星单治疗组。 miR－193b转染后，MDA－MB－231细胞Mcl－1的mRNA及蛋白表达水平均下降。 miR－193b联合多柔比星在Mcl－1表达载体转染后对MDA－MB－231细胞的杀伤活性显著低于未转染Mcl－1表达载体的miR－193b联合多柔比星组。结论： miR－193b通过靶向于Mcl－1增强多柔比星对乳腺癌细胞的杀伤效力。
关键词： 微小RNA-193b Mcl-1 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 多柔比星 -
5-Aza-CdR对MDA-MB-231细胞PPAR-γ基因甲基化的影响
目的 研究去甲基化药物5-氮杂-2-脱氧胞嘧啶(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞MDA-MB-231凋亡及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)基因表达的影响. 方法 5-Aza-CdR作用MDA-MB-231细胞后,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡,实时荧光定量PCR(real-time fluorescentquantive PCR,qPCR)检测PPAR-γ mRNA的表达,甲基特异性PCR(methylmion specific PCR,MSP)检测PPAR-γ甲基化的改变. 结果 流式细胞结果表明,随着药物浓度增加,细胞处理48 h后,凋亡率增加,呈剂量依赖性.5、10、15和20 μmol/L组凋亡率分别为(14.1±2.3)％、(25.4±3.3)％、(32.7±2.8)％、(43.1±1.9)％,与对照组的(6.9±0.8)％相比差异有统计学意义(P＜0.05);qPCR结果显示,随着药物浓度增加,PPAR-γmRNA表达上调;MSP显示PPAR-γ甲基化水平降低. 结论 5-Aza-CdR能降低PPAR-γ甲基化状态,使PPAR-γ表达增加,促进MDA-MB-231细胞凋亡.PPAR-γ甲基化水平改变可能是引起MDA-MB-231细胞生物学改变的机制之一.
关键词： 5-aza-CdR MDA-MB-231细胞 PPAR-γ 甲基化 -
肿瘤抑制基因WWOX转染MDA-MB-231细胞系的实验研究
目的 探讨肿瘤抑制基因WWOX与乳腺癌疾病相关性,为进一步研究WWOX基因的作用机制及功能奠定基础.方法 构建真核表达载体pcDNA4.0/Myc-His-WWOX,并转染至MDA-MB-231细胞中,采用RT-PCR及Western blot方法,检测WWOX mRNA及融合蛋白在MDA-MB-231细胞中的表达.结果 测序结果显示,RT-PCR法获得的WWOX序列与GenBank中报道的一致.真核表达载体pcDNA4.0/Myc-His-WWOX转染MDA-M B-231细胞48 h后,从RT-PCR及Western blot结果中观察到WWOX基因的有效转录.结论 成功构建了肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体pcDNA4.0/Myc-His-WWOX,为进一步研究WWOX在乳腺癌发生和进展中的作用及其靶向基因治疗奠定了实验基础.
关键词： 肿瘤抑制基因 真核表达 MDA-MB-231细胞 -
能量可控陡脉冲对肿瘤细胞内钙离子浓度及膜电位的影响
背景与目的:前期研究表明,陡脉冲电场对肿瘤细胞具有明显的杀伤作用,但其确切机制尚不清楚.本文拟探讨不同剂量陡脉冲对细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和细胞膜电位的影响.方法:将乳腺癌细胞MDA-MB-231分为对照组和5个不同剂量能量可控陡脉冲(energy controllable steep pulses,ECSP)处理组,分别用荧光探针Fho-3/AM标记Ca2+、DiBAC4(3)标记细胞膜电位,应用激光共聚焦显微镜静态观察不同剂量ECSP处理后乳腺癌细胞内荧光探针的平均荧光强度,分析细胞内Ca2+浓度的变化以及细胞膜电位的改变.同时观察细胞胞外有或无钙离子时,ECSP对细胞内游离Ca2+浓度的影响.结果:静态观察发现在细胞受到能量较低电场刺激后,细胞外钙内流;当能量增大后,细胞内钙大量外流.实时动态观察发现在低能量的脉冲处理时,细胞内Ca2+的荧光强度和上升速率随脉冲电场强度的增加而增加;但当能量达到电压285 V、频率100 Hz时.荧光强度反而呈现明显的下降.在没有外Ca2+的情况下,细胞内Ca2+浓度的增加虽然与有外钙时相比显著下降,但在脉冲电场作用下在脉冲电场作用下仍缓慢上升.低剂量的ECSP可诱导细胞DiBAC4(3)的荧光强度增强,表明细胞发生去极化;但当剂量继续增加时,细胞DiBAC4(3)的荧光强度反而减弱,表明细胞发生超极化.结论:低能量陡脉冲可使细胞膜发生去极化,诱导细胞外钙离子内流:高能量陡脉冲可直接破坏细胞膜,使细胞膜发生超极化,诱导细胞内钙离子外流,导致肿瘤细胞发生坏死.
关键词： 陡脉冲 Ca2+浓度 膜电位 激光共聚焦显微镜 MDA-MB-231细胞 -
Celecoxib下调NF-kB信号通路促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究
背景与目的:Celecoxib可以抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,但具体的作用机制尚不明确.本研究探讨Celecoxib是否通过阻断NF-kB信号途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡.方法:RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达.MTT法检测Celecoxib、PGE2与Celecoxib联合应用对MDA-MB-231细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化.Westernblot法检测0、40、80、120 μmol/L Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h后细胞中Caspase-3、p65蛋白的表达变化.结果:RT-PCR检测显示MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达随着Celecoxib浓度的增加而逐渐降低.Celecoxib能够显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),但Celecoxib联合PGE2与单独应用Celecoxib对细胞增殖的影响差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示Celecoxib可使MDA-MB-231细胞阻滞在G0/G1期,并可诱发细胞凋亡.Western blot检测发现Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h,随着Celecoxib浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,P65蛋白表达下调.结论:Celecoxib可以通过下调P65蛋白的表达从而阻断NF-kB信号途径,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡.
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山慈菇-蜂房药对抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭转移的机理研究
目的 研究山慈菇-蜂房药对对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其作用机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测山慈菇-蜂房药对大鼠含药血清对细胞活力的影响,Transwell小室法测定其侵袭力,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因的表达.结果 山慈菇-蜂房药对组MDA-MB-231细胞体外生长杀伤率为35.86％;能明显抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力(P＜0.01),其抑制率为34.8％;MMP-9 mRNA明显降低,TIMP-1 mRNA明显升高,MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA值显著降低(P＜0.05,P＜ 0.01).结论 山慈菇-蜂房药对能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9mRNA表达,上调TIMP-1mRNA的表达,降低MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值有关.
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虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 用MTT比色法检测虎眼万年青总皂苷对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用；流式细胞术分析细胞凋亡与细胞周期变化；透射电镜观察细胞形态学变化.结果 虎眼万年青总皂苷对MDA-MB-231细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性；可诱导细胞发生凋亡,且凋亡率呈浓度依赖性,使细胞周期明显阻滞于G0/G1期；电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变.结论 虎眼万年青总皂苷可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与虎眼万年青总皂苷将癌细胞阻止于G0/G1期相关.
关键词： 虎眼万年青总皂苷 乳腺癌 凋亡 MDA-MB-231细胞
