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四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织ERK1/2,Akt,Bax表达的影响
目的:观察四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2),蛋白激酶B(Akt),细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的影响,探讨其保护神经细胞可能作用机制.方法:将55只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、四君子汤加减低、中、高剂量组(3.69,7.38,14.76 g·kg-1).采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,治疗7d后处死,取大鼠缺血侧脑组织,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2),磷酸化Akt(p-Akt),Bax蛋白含量.应用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)测定脑缺血再灌注后脑组织内ERK1/2,Akt,Bax mRNA的表达变化.结果:与假手术组比较,模型组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达显著下调(P＜0.01);Bax蛋白及mRNA表达显著上调(P＜0.01);与模型组比较,四君子汤加减低、中、高剂量组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达明显上调,Bax蛋白及mRNA表达明显下调,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:四君子汤加减可能通过上调p-ERK1/2,p-Akt,下调Bax蛋白表达发挥脑保护作用.
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银杏叶提取物对缺血-再灌流神经元损伤的保护作用及其信号转导机制
目的 研究银杏叶提取物(EGB761)对缺糖缺氧/复糖复氧神经元损伤的保护作用,并探讨其主要细胞内信号转导机制.方法 利用原代培养的皮层神经元,通过去除培养液中的糖和氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)模拟缺血缺氧,恢复糖氧供给模拟再灌流.通过免疫蛋白印迹法测定Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达.再灌流时加用银杏叶提取物(EGB761)观察其对神经元保护作用以及对Akt、p-Akt表达的调节作用.结果 缺糖缺氧/复糖复氧后神经元p-Akt表达明显下降,EGB761可剂量依赖地保护神经元活性,并可上调因缺糖缺氧/复糖复氧而降低的p-Akt蛋白的表达,但该作用不被Ly294002所阻断.结论 EGB761对培养的神经元缺糖缺氧/复糖复氧损伤有保护作用,该作用可能与非PI3K依赖的p-Akt信号转导通路激活有关.
关键词： 蛋白激酶B(Akt) 银杏叶提取物(EGb761) 神经元 -
SIRT1基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT信号通路的影响
目的 通过研究沉默信息调节因子1(SIRT1)基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT通路的作用,探讨骨关节炎关节软骨退变的可能机制.方法 将小鼠分为两组:SIRT1+/+小鼠骨关节炎模型组(A组,n=6);SIRT1-/-小鼠骨关节炎模型组(B 组,n=6).荧光定量聚合酶链反应检测SIRT1基因表达情况;HE染色、番红O-固绿双染色观察膝关节软骨形态结构改变,Mankin评分评价膝关节关节软骨退变,免疫组化染色检测膝关节软骨细胞中SIRT1、VEGF和AKT蛋白水平.结果 B组SIRT1 mRNA表达量为2.24417±1.316569,明显低于A组(P＜0.01).HE染色和番红O-固绿双染色结果显示,B组膝关节关节软骨退变明显,Mankin评分分值为9.8333±1.94079分,明显高于A组(P＜0.05),B组SIRT1、VEGF和AKT免疫组化染色积分分别为3.3333±1.96638、10.0000±2.44949和1.3333±1.21106,B组SIRT1蛋白表达与A组相比差异不显著(P＞ 0.05);B组VEGF蛋白表达明显高于A组(P ＜0.05);B组 AKT蛋白表达明显低于A组(P＜0.01).结论 SIRT1基因敲除可能通过激活VEGF/AKT通路加重骨关节炎关节软骨的退变,因此SIRT1基因可能对骨关节炎起到保护作用.
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冬虫夏草繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响
目的 探讨冬虫夏草Cordyceps sinensis繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响.方法 通过MTT法、平板克隆实验检测冬虫夏草繁育品对B16细胞增殖能力的影响;采用划痕实验、transwell小室实验检测其对B16细胞迁移能力的影响;通过黏附实验检测其对B16细胞黏附能力的影响;采用流式细胞仪检测其对B16细胞周期分布的影响;采用Western blotting法检测其对B16细胞中MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、CyclinD1、CDK2、CDK4、P21及p-Akt蛋白表达的影响.结果 冬虫夏草繁育品能够将B16细胞阻滞在G1/S期,从而显著抑制B16细胞的增殖,并显著降低B16细胞的迁移能力.同时可导致B16细胞MMP-9、MMP-2、Bcl-2、CyclinD1、CDK2、CDK4、p-Akt蛋白表达减少和Bax、P21蛋白表达增加.结论 冬虫夏草繁育品能显著抑制B16细胞的增殖及迁移能力,其作用机制可能与调控细胞周期相关蛋白、MMPs家族蛋白及p-Akt蛋白的表达有关.
关键词： 冬虫夏草 恶性黑色素瘤B16细胞 迁移 细胞周期 增殖 基质金属蛋白酶 蛋白激酶B(Akt) -
过表达含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶18基因抑制人骨肉瘤细胞的增殖与迁移
目的 探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶(ADAMTS)18基因对人骨肉瘤细胞增殖与迁移作用及其机制.方法 将ADAMTS18过表达载体和空载体分别转染143B和U-20S人骨肉瘤细胞,细胞计数试剂盒(CCK)-8和Tr-answell小室实验研究过表达ADAMTS18基因对143B和U-20S细胞增殖和迁移作用,蛋白质Western印迹实验检测ADAMTS18和蛋白激酶B(AKT)蛋白表达水平.结果 与空载体转染细胞株比较,过表达ADAMTS18基因可显著抑制143B和U-20S细胞增殖和迁移能力,并下调143B和U-20S细胞AKT蛋白水平.结论 ADAMTS18经下调AKT通路活性而抑制人骨肉瘤细胞恶性表型.
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PI3K/AKT信号通路与骨肉瘤组织中脂肪酸合成酶过表达的相关性
目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)与骨肉瘤组织中脂肪酸合成酶(FASN)过表达的相关性.方法 采用免疫组化方法及Western印迹法检测30例骨肉瘤组织及30例骨巨细胞瘤组织中AKT,FASN的表达,并分析AKT, FASN与骨肉瘤临床病理特征的关系及二者的相关性.结果 免疫组化结果显示,AKT在骨肉瘤中的阳性表达率为70%(21/30),显著高于骨巨细胞瘤中的表达〔26.66%(8/30),P<0.05〕.FASN在骨肉瘤中的阳性表达率为56.67%(17/30),显著高于骨巨细胞瘤中的表达〔20%(6/30),P<0.05〕.Western印迹结果显示,AKT在骨肉瘤组织中的相对表达量为(0.861±0.072),显著高于骨巨细胞瘤组织中的表达〔(0.127±0.008),P<0.05〕,FASN在骨肉瘤中的相对表达量为(0.827±0.059),显著高于骨巨细胞瘤组织中的表达〔(0.218±0.012),P<0.05〕.AKT的表达与软组织浸润及转移密切相关(P<0.05),FASN 的表达与软组织浸润相关(P<0.05).AKT,FASN的表达呈显著正相关(P<0.05).结论 AKT的表达与软组织浸润及转移密切相关,FASN的表达与软组织浸润相关,且均在骨肉瘤中表达上调,提示两种基因可能与骨肉瘤的发生发展有关.
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PI3K/Akt和AMPK信号通路在运动诱导的啮齿动物骨骼肌内GLUT4转位和表达中的作用
骨骼肌在葡萄糖稳态中扮演重要作用,葡萄糖转运体4(glucose transporter4,GLUT4)作为骨骼肌内主要的葡萄糖转运蛋白,其转位和表达的变化与胰岛素抵抗的发生密切相关.本文综述了近年来关于啮齿动物骨骼肌内GLUT4转位和表达的运动激活以及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路介导运动改善骨骼肌葡萄糖摄取的研究进展,旨在为全面了解和明确运动影响啮齿动物骨骼肌内GLUT4转位和表达的机制.
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Akt/GSK-3β信号通路和线粒体渗透性转换孔在吸入性麻醉药预处理对老年大鼠心肌缺血保护的研究
目的 Akt/GSK-3 β信号通路的激活参与了吸入麻醉药心肌保护预处理.在该研究中观察了老年和成年大鼠在异氟醚心肌保护预处理中的差异,包括Akt/GSK-3 β信号通路和线粒体渗透性转换孔在异氟醚预处理中的差异.方法 雄性Fisher 344大鼠按照各自的年龄,成年(3～5月)、老年(20～24月),随机分配到阴性对照组(SC)、缺血再灌注组(I/R)、异氟醚组(ISO)中. ISO组,大鼠接受30min 1.0 MAC的异氟醚预处理.I/R组,大鼠接受30min的心肌缺血.方案A中,大鼠接受2h再灌注,用来检测梗死面积.方案B中,大鼠接受10min再灌注,用Western来检测p-Akt,Akt,p-GSK-3 β,GSK-3 β的表达;并且用分光光度法分析组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)水平,作为反映线粒体渗透性转换孔(mPTP)开放的指标.结果 成年组大鼠,异氟醚预处理组(YISO+I/R)心肌梗死而积为29.9%4±1.9%.明显低于缺血再灌注组(YI/R.51.8%4±2.1%,P<0.001).而老年组大鼠,异氟醚预处理失去心肌保护作用(OISO+I/R=39.9%4±3.7%VS OI/R=46.9%4±2.5%,P>0.05).比较成年阴性对照组(YSC组)和成年缺血再灌注组(YI/R组).异氟醚预处理显著提高了成年异氟醚组(YISO组)和成年异氟醚+缺血再灌注组(YISO+I/R组)的Akt和GSK-3 β的磷酸化水平(P<0.05).但是老年组大鼠.Akt和GSK-3 β磷酸化水平已经在阴性对照组(OSC组)提高(对比YSC组).异氟醚预处理没有进一步提高老年异氟醚组(OISO组)和老年异氟醚+缺血再灌注组(OISO+I/R组)的Akt和GSK-3 β的磷酸化水平(P<0.05).同样,异氟醚预处理减少了成年组大鼠心肌组织中NAD+的减少,而异氟醚预处理失去了对老年组大鼠的NAD+流失保护作用.结论 老年大鼠失去异氟醚预处理心肌保护作用,失去进一步提高Akt、GSK-3β的磷酸化水平能力和失去关闭mPTP是其机理之一.
关键词： 吸人麻醉药预处理 异氟醚 老年 蛋白激酶B(Akt) 心肌保护 -
PI3K/Akt信号转导通路与胃癌关系的研究进展
真核生物对诸如生长因子受体、激素、细胞因子等刺激产生应答,激活细胞内不同信号传导通路,其中PI3K/Akt是与细胞增殖和细胞凋亡关系密切的信号传导通路之一.随着研究的不断深入,该通路在多种常见肿瘤的发生发展中凸现出日益重要的作用,并为肿瘤的治疗提供了新的靶点.
关键词： 磷脂酰肌醇3-激 酶(PI3K) 蛋白激酶B(Akt) 信号转导 肿瘤 胃癌 -
奥氮平对糖代谢的影响及其机制探讨
目的 探讨奥氮平对糖代谢的影响及其机制.方法 将20只C57BL/6J雄性小鼠随机分成研究组和对照组,研究组小鼠每天给予奥氮平(5 mg/kg)灌胃,对照组按10 ml/kg灌注溶解奥氮平的柠檬酸溶剂.每天称量体质量,每周测量进食量,实验第3周及第6周时各测定1次腹腔葡萄糖耐量,实验第6周后1天测定胰岛素耐量,并通过Westernblot方法检测肝脏蛋白Akt磷酸化水平.结果 实验3周起研究组小鼠摄食量显著高于对照组(P＜0.05),实验26 d起研究组小鼠体质量显著高于对照组(P＜0.05).实验6周时研究组小鼠空腹血糖显著高于对照组小鼠(P＜0.05),研究组小鼠腹腔葡萄糖耐量曲线下面积显著高于对照组(P＜0.05),此外胰岛素耐量实验也发现研究组小鼠胰岛素敏感性显著低于对照组(P＜0.05).研究组小鼠肝脏蛋白Akt磷酸化水平显著低于对照组(P＜0.05).结论 长期奥氮平给药可以导致小鼠体质量和摄食增加、糖耐量异常和胰岛素抵抗,而胰岛素抵抗是由肝脏组织胰岛素信号通路中的重要蛋白Akt磷酸化下调所介导.
关键词： 奥氮平 糖耐量 胰岛素抵抗 蛋白激酶B(Akt) -
Akt信号通路在紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应中的作用
目的:探讨Akt信号通路在紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应中的意义.方法:收集紫绀型和非紫绀型先天性心脏病患儿共50例,其中紫绀型26例(紫绀组),动脉血氧饱和度(SaO2)60％～89％；非紫绀型24例(非紫绀组),SaO2＞95％,均不伴肺动脉高压[肺动脉收缩压＜30 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)].心脏外科手术体外循环前留取右心耳组织,应用Western blot方法检测心肌组织蛋白激酶B(总Akt)和磷酸化蛋白激酶B(Ser473 P-Akt)表达水平,免疫组织化学技术检测心肌组织总Akt和Ser473 P-Akt蛋白表达部位与水平.结果:与非紫绀组相比,紫绀组患儿心肌组织Ser473 P-Akt蛋白表达水平明显增高(P＜0.01),而2组患儿总Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).紫绀组患儿心肌组织Ser473 P-Akt蛋白大部分表达在心肌细胞的胞质,胞核亦有微弱表达,而非紫绀组心肌细胞则无明显Ser473 P-Akt蛋白表达.2组患儿总Akt蛋白绝大部分也表达在心肌细胞的胞质,胞核亦有微弱表达,但表达部位和水平差异无统计学意义.紫绀组患儿心肌组织Ser473 P-Akt蛋白表达水平与患儿术前SaO2呈负相关(r=-0.771,P＜0.01).结论:Akt信号通路激活可能是紫绀型先天性心脏病患儿心肌慢性缺氧适应的重要信号调控机制之一.
关键词： 先天性心脏病 慢性缺氧 蛋白激酶B(Akt) 磷酸化蛋白激酶B -
卵巢癌细胞及组织中P38MAPK信号通路调控uPA蛋白的表达及临床意义
目的 探讨P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学法检测uPA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在49例卵巢癌组织中的表达,Western blot检测HO8910及HO-8910PM细胞系中uPA、P38MAPK蛋白的表达,特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后uPA蛋白表达水平的变化.结果 uPA、P38MAPK、ERK、AKT蛋白在卵巢癌组织中表达阳性率分别为61.22％、57.14％、53.06％、55.10％.uPA与p38MAPK蛋白表达呈正相关(r=0.8645,P=0.001),且与卵巢癌组织的临床病理分期、分化、转移程度有关(P均＜0.05),而与患者的年龄、组织学类型无明显相关(P＞0.05).ERK、AKT蛋白表达与卵巢癌淋巴结转移、大网膜转移有关(P均＜0.05),而与患者的年龄、组织类型、病理分期无明显关系(P＞0.05).HO-8910PM细胞系中uPA蛋白的表达水平明显高于HO8910,SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低uPA蛋白的表达,且随着SB203580浓度升高,uPA蛋白表达逐渐降低.P38MAPK及uPA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关(r=3.897,11.044,P=0.048,0.001).结论 卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;该通路的激活可上调uPA的表达,促进卵巢癌的恶性进展;P38MAPK信号通路和uPA可能在卵巢癌侵袭和转移的过程中发挥重要作用.P38MAPK和uPA蛋白有望成为卵巢癌预后评估的重要指标之一.
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非诺贝特缓解非酒精性脂肪性肝病的体外机制研究
目的 利用细胞模型研究非诺贝特在缓解非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用及其分子机制.方法 首先以0～0.9 mmol/L梯度浓度的油酸处理正常肝细胞LO2 48 h建立脂肪肝细胞模型;同时,以非诺贝特处理正常细胞或模型组细胞48 h,然后用CCK-8试剂盒测定细胞活力,用油红O染色观察细胞内脂滴形成或抑制情况,利用试剂盒检测细胞中的三酰甘油(TG)以及上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,蛋白质免疫印迹法检测细胞中蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、FSAN及Nrf2蛋白水平,并使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内的活性氧自由基(ROS)含量.结果 油酸浓度超过0.5 mmol/L后细胞活力显著降低,非诺贝特可抑制高浓度油酸对细胞的损伤.油酸处理后细胞中出现大量脂滴,细胞内TG含量以及上清液中的ALT、AST水平显著升高,给予非诺贝特处理后细胞中脂滴减少,TG、ALT和AST含量均显著降低.油酸处理后细胞中AKT、p-AKT、FSAN和Nrf2蛋白水平升高,给予非诺贝特可抑制上述蛋白水平的升高.同时,非诺贝特逆转了由油酸导致的细胞内ROS累积.结论 非诺贝特可以抑制油酸引起的脂肪积累,并缓解脂肪累积导致的细胞损伤,其机制是通过下调AKT/FSAN信号通路,从而降低ROS水平,进而减少ROS导致的细胞损伤.
关键词： 非酒精性脂肪性肝病 非诺贝特 蛋白激酶B(Akt) 活性氧自由基 -
ABT-263诱导A431细胞凋亡及其对AKT下游信号通路影响
目的 观察抗凋亡蛋白抑制剂ABT-263对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431细胞功能的影响,并探讨相关分子机制.方法 ①取对数生长期的人永生化表皮细胞(HaCaT细胞)与A431细胞提取总蛋白,采用蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)和BCL-XL的蛋白表达水平.②分别以浓度为50 μmol/L的ABT-263(抑制剂组)和二甲基亚砜(对照组)处理A431细胞,培养4和9h后,采用透射扫描电子显微镜(TEM)检测各组细胞的形态变化.③以剂量为0、10、25、40和50 μmol/L的ABT-263处理A431细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力.④以不同剂量的ABT-263处理A431细胞,采用蛋白印迹法检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、活化聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)ser473、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK3β)和磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)的蛋白相对表达水平.结果 A431细胞中的BCL-2和BCL-XL蛋白相对表达水平均高于HaCaT细胞(P＜0.01).TEM检查结果显示,抑制剂组A431细胞从正常的形态逐渐变化为凋亡的形态,表现为微绒毛消失,核染色质密度增高并凝聚在核膜周边,核仁裂解.10、25、40和50 μmol/L剂量组A431细胞的细胞活力均低于对照组(P＜0.05).10、30和50 μmol/L剂量组A431细胞的活化Caspase-3和活化PARP-1蛋白的相对表达水平均高于对照组(P＜0.05).10、25、40、50 μmol/L剂量组A431细胞的pAKT(ser473)和pGSK3β的蛋白相对表达水平均低于对照组(P＜0.05),γH2AX蛋白相对表达水平高于对照组(P＜0.05).A431细胞活力和pGSK3β蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而减少(P＜0.01),活化Caspase-3和γH2AX的蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而增加(P＜0.01),均呈剂量-效应关系.结论 ABT-263可诱导A431细胞发生线粒体途径的凋亡,并可诱导AKT/GSK3β信号通路失活,从而促进A431细胞凋亡,呈一定程度的剂量-效应关系.
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大鼠坐骨神经切断后相应脊髓节段中P-S473-AKT表达的变化
目的 探讨成年Wister大鼠在坐骨神经切断后P-S473-Akt于相应脊髓节段前角运动神经元内的表达变化.方法 选取健康成年雄性Wister大鼠50只,随机分为坐骨神经切断组和对照组,分别于术后1、2、4、6、8周5个时相处死后取其L4～L6脊髓,利用免疫组织化学技术检测P-S473-Akt在相应脊髓节段中的表达变化,并利用影像分析系统进行统计学分析.结果 在对照组中P-S473-Akt表达呈阴性,随着时间的变化无明显改变.坐骨神经切断组与对照组在5个时相中的变化:1周时两组比较差异无统计学意义;2周时坐骨神经切断组运动神经元胞体内P-S473-Akt有明显表达,4周时达到高峰,6～8周时逐渐下调,8周时仍可见细胞核内有少量表达.结论 坐骨神经切断可导致成年大鼠相应脊髓节段中前角运动神经元P-S473-Akt表达明显增加,可能对损伤的运动神经元发挥保护作用.
关键词： 脊髓 外周神经 损伤 蛋白激酶B(Akt) -
EPO对慢性缺氧心肌细胞线粒体生物合成的影响
目的 观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)在慢性缺氧条件下对心肌线粒体生物合成的影响及其可能的机制.方法 将H9c2心肌细胞株置入缺氧培养箱7 d(94％N2,5％ CO2,1％O2),建立H9c2心肌细胞株慢性缺氧模型；采用5、10、20 U/mL不同浓度的rhEPO(recombinant human erythropoietin；重组人促红细胞生成素)干预处理后,用荧光探针标记线粒体,观察线粒体数目的变化；RT-PCR技术检测线粒体DNA的相对拷贝数变化；Western blot技术检测Akt、eNOS及其磷酸化蛋白水平的变化.结果 rhEPO干预7d后线粒体数目及拷贝数增加(P＜0.05)；Akt、eNOS蛋白磷酸化水平增强(P＜0.05),Akt、eNOS总蛋白无明显变化(P＞0.05).结论 EPO增强了慢性缺氧心肌细胞的线粒体生物合成,Akt、eNOS可能是EPO增强线粒体生物合成的重要信号通路.
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Sestrin2(SESN2)通过激活蛋白激酶B促进肝癌细胞索拉非尼原发性抵抗
目的 探讨sestrin 2 (SESN2)在肝癌细胞索拉非尼原发性抵抗中的作用和机制.方法 实时定量PCR和Western blot法检测Bel-7404、SNU-398、HLE、HLF、Hep3B肝癌细胞系中SESN2 mRNA和蛋白水平,免疫组织化学染色检测肝癌组织中SESN2的表达.分别用(0、2、5、10、15、20、25) μmol/L索拉非尼处理上述肝癌细胞24h,采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖活性并计算索拉非尼半数抑制浓度(IC50),(0、2、4、6、8)μmoL/L索拉非尼刺激Bel-7404、SNU-398肝癌细胞24h,检测癌细胞SESN2 mRNA和蛋白水平;采用SESN2的特异性小干涉RNA(siSESN2)敲低Bel-7404、SNU-398肝癌细胞的SESN2水平,再分别用(0、8) μmol/L索拉非尼刺激24h,CCK-8法检测细胞增殖活性、流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测蛋白激酶B(A KT)、磷酸化AKT(p-AKT)水平.结果 与正常肝细胞和癌旁肝组织相比,肝癌细胞系和肝癌组织中SESN2水平升高,且癌细胞中SESN2水平与索拉非尼IC50呈正相关;索拉非尼刺激Bel-7404、SNU-398肝癌细胞后,癌细胞SESN2水平升高,AKT信号活化;敲低Bel-7404、SNU-398肝癌细胞的SESN2水平,可进一步抑制细胞增殖活性、促进细胞凋亡、抑制AKT磷酸化.结论 SESN2可通过激活AKT信号促进肝癌细胞索拉非尼原发性抵抗.
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敲低维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-I)抑制全反式维甲酸诱导的NB4急性早幼粒白血病细胞的分化
目的 探讨慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)敲低NB4急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-I)对全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化的影响及其机制.方法 将含有人RIG-I基因shRNA序列(RIG-I-shRNA)及含绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒感染NB4细胞,实时定量PCR (qRT-PCR)及Western blot法分别检测ATRA诱导前后NB4细胞RIG-I mRNA和蛋白水平;流式细胞术观察慢病毒感染效率和RIG-I-shRNA对ATRA诱导NB4细胞分化的影响;Western blot法检测敲低RIG-I水平后,ATRA处理对蛋白激酶B308位苏氨酸(AKT-Thr308)磷酸化的调控效应.结果 含RIG-I-shRNA序列的慢病毒可成功感染NB4细胞,下调ATRA诱导的RIG-I水平;敲低RIG-I后,明显抑制ATRA诱导NB4细胞分化,同时上调AKT-Thr308磷酸化水平.结论 敲低NB4细胞RIG-I蛋白可上调AKT-Thr308磷酸化水平抑制ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞分化.
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过表达海兔属Ras同源物I(ARHI)增加人SW480结肠癌细胞凋亡
目的 观察海兔属Ras同源物I(ARHI)对SW480人结肠癌细胞凋亡的影响.方法 采用pcDNA3.1-FLAG-ARHI质粒转染和G418筛选法建立稳定表达ARHI的SW480细胞,采用反转录PCR验证ARHI mRNA和蛋白的表达.流式细胞术检测过表达ARHI对结肠癌细胞凋亡的影响;Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、p53和Bcl-2的蛋白水平.结果 成功建立过表达ARHI的SW480细胞,过表达ARHI的SW480细胞凋亡率明显增加,Bcl-2和p-Akt蛋白水平明显降低、P53蛋白表达水平增加,而Akt蛋白水平无明显变化.结论 过表达ARHI通过抑制Akt水平增加SW480人结肠癌细胞凋亡.
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低强度脉冲超声促进人骨性关节炎软骨细胞合成细胞外基质
目的 探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人骨性关节炎(OA)软骨细胞的细胞外基质(ECM)的影响及相关作用机制.方法 取膝关节置换术后废弃软骨组织,进行软骨细胞分离、培养、鉴定;取第2代软骨细胞随机分为OA对照组、30 mW/cm2LIPUS处理的OA组、30 mW/cm2 LIPUS联合5μmol/L LY294002处理的OA组,除对照组外,其他组给予LIPUS刺激20 min/d×7d;采用实时定量PCR法检测细胞中2型胶原蛋白(Col2)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)mRNA的水平,Westem blot法检测细胞中Col2、aggrecan、MMP-13、Akt及磷酸化Akt (p-Akt)蛋白的表达.结果 与OA对照组相比,LIPUS处理的OA组细胞内Col2、aggrecan mRNA和蛋白水平均增高,MMP-13表达降低,p-Akt蛋白的表达显著增加,Akt的表达则与OA对照组无显著性差异;与LIPUS处理的OA组细胞相比,LIPUS联合LY294002处理的OA组细胞中Col2、aggrecan mRNA和蛋白表达均降低,MMP-13表达增高,p-Akt蛋白的表达显著降低,Akt的表达则与LIPUS处理的OA组无显著性差异.结论 LIPUS促进人OA软骨细胞合成细胞外基质,并抑制其降解.
关键词： 低强度脉冲超声 骨性关节炎 软骨细胞 蛋白激酶B(Akt) 细胞外基质
